活血止痛汤对椎间盘退变大鼠髓核细胞IRE1α/JNK通路的影响

目的:探讨活血止痛汤对椎间盘退变大鼠IRE1α/JNK信号通路及髓核细胞凋亡的影响.方法:构建椎间盘退变大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、活血止痛汤低、中、高(1.75 g生药/kg、2.50 g生药/kg、 5.00 g生药/kg)剂量组和阳性对照组(尼美舒利分散片,0.18 mg/kg)每组10只,另取10...     

椎间盘髓核细胞表型的研究进展

髓核细胞特异性表型是识别髓核细胞和研究其生物学行为的基础,同时也是基因干预、细胞移植等生物学修复椎间盘退变的前提。髓核细胞兼有软骨细胞和脊索细胞的表型特点,而特定基因的转录和表达调控又广泛受到椎间盘局部微环境以及椎间盘退行性变的影响。部分髓核细胞亚群还具有祖细胞的生物学特性并表达特定的表型。对髓核细胞表型的研究有助于推动椎间盘退变生物学治疗的进展。     

杆状病毒介导的GFP转染与退变的兔椎间盘髓核细胞

目的:检测杆状病毒转染正常与退变的椎间盘髓核细胞的效率以及杆状病毒介导的GFP基因(Ac/CMV/GFP)在正常与退变细胞中的表达水平。方法:取新西兰大白兔的髓核细胞进行离体培养,第1组:健康幼兔;第2组:椎间盘退变模型兔;第3组:椎间盘发生自然退变的成年兔。以200MOI杆状病毒介导的绿色荧光蛋白(GFP)转染离体培养的细胞,于第48h采用流式细胞仪检测转染效率,同时采用HPIAS2000图像分析软件半定量分析外源性GFP基因的表达水平。结果:3组细胞被转染的百分率分别为84.4±3.4,82.9±5.7,81.8±5.5(P>0.05)。外源性基因表达荧光蛋白的光密度值分别为0.0054±0.0029,0.0052±0.0032,0.0056±0.0031(P>0.05)。结论:杆状病毒转染椎间盘髓核细胞的效率与椎间盘退变程度无关,杆状病毒介导的外源性基因能在正常与退变的髓核细胞中高水平的表达。     

山竹醇介导JAK2/STAT3信号通路发挥抗骨肉瘤作用

目的 探究山竹醇对骨肉瘤细胞活力、细胞周期分布和凋亡的影响及对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响并探究其作用机制。方法 采用CCK-8实验检测山竹醇对骨肉瘤细胞活力的影响;流式细胞术分析山竹醇对骨肉瘤细胞凋亡率及细胞周期分布的影响;构建裸鼠皮下骨肉瘤模型,检测山竹醇腹腔注射对裸鼠皮下骨肉瘤生长的影响;RNA测序分析检测山竹醇处理骨肉瘤细胞后改变的基因;Western blot法检测山竹醇对骨肉瘤细胞及肿瘤组织中JAK2/STAT3信号通路的影响。结果 CCK-8法检测结果表明,山竹醇能时间、浓度依耐性的抑制骨肉瘤U2OS细胞活力;流式细胞术检测结果表明,山竹醇能诱导U2OS细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞于S期。并且,山竹醇能抑制裸鼠皮下骨肉瘤的生长。基因富集分析结果表明,山竹醇处理的骨肉瘤细胞中JAK/STAT信号通路显著富集。Western blot法检测结果表明,山竹醇处理骨肉瘤细胞及骨肉瘤组织中p-JAK2、p-STAT3、Bcl-xl水平明显降低,而Bax表达水平显著升高。结论 山竹醇能可在体内体外发挥抗骨肉瘤作用,可能与其抑制骨肉瘤中JAK2/STAT3信号通路活性有关。     

蟛蜞菊内酯通过抑制JAK2/STAT3信号通路诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的 探讨蟛蜞菊内酯对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及作用机制.方法 不同浓度蟛蜞菊内酯(0、5、10、20、40μmol/L)作用于A549细胞12、24、48 h,M T T检测细胞的增殖情况.将细胞分为对照组,甲氨蝶呤组(2μg/mL甲氨蝶呤),蟛蜞菊内酯组(20μmol/L蟛蜞菊内酯).流式细胞术检测细胞凋亡和...     

JAK/STAT信号通路在动脉粥样硬化中的作用

动脉粥样硬化(AS)是一种慢性炎症疾病,包含血管细胞和炎症细胞之间复杂的相互作用.酪氨酸激酶/信号转导子和转录激活子(JAK/STAT)信号通路是多种细胞因子和生长因子在细胞内传递信号的共同途径,参与机体免疫反应、血管细胞迁移增殖和凋亡等多种生物学活动.文章对目前JAK/STAT信号通路在AS发生和发展中的作用进行了综述.     

JAK/STAT通路在脓毒症中作用研究进展

脓毒症是多种疾病在发生发展过程中所表现出来的一种共同的病理生理过程。主要由感染性因素引起,如革兰阳性菌、革兰阴性菌、真菌、病毒等致病微生物侵入所致。这些感染因素迅速激活机体非特异性免疫系统,活化的非特异性免疫细胞合成并释放大量促炎细胞因子如肿瘤坏死因子     

NIPA2通过JAK/STAT信号通路对高糖诱导的成骨细胞凋亡的调控作用及其机制

目的：探讨普瑞德-威利/安格曼综合征区域蛋白2（NIPA2）对高糖诱导的成骨细胞凋亡的影响,阐明其作用机制。方法：将成骨细胞MC3T3-E1采用26 nmol·L^-1高糖处理24 h,将细胞分为HG+si-con组（转染si-con）、HG+si-NIPA2组（转染si-NIPA2）、HG+si-NIPA2+DMSO组（转染si-NIPA2后再用DMSO处理）和HG+si-NIPA2+AG490组（转染si-NIPA2后再用AG490处理）,另设对照组。采用脂质体法转染MC3T3-E1细胞,再用26 nmol·L^-1高糖处理;采用qRT-PCR法检测MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中NIPA2、P21、Cleavedcaspase-3、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达水平,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：与对照组比较,HG组MC3T3-E1细胞中NIPA2 mRNA和蛋白表达水平均明显降低（P<0.01）。敲减NIPA2后,与HG+si-con组比较,HG+si-NIPA2组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,MC3T3-E1细胞在48和72 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,JAK/STAT信号通路相关蛋白p-JAK2和p-STAT3的表达水平明显升高（P<0.01）。与HG+si-NIPA2+DMSO组比较,HG+si-NIPA2+AG490组MC3T3-E1细胞中NIPA2蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,P21和Cleaved caspase-3蛋白表达水平明显降低（P<0.01）,在48和72 h时细胞增殖活性明显升高（P<0.01）,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）。结论：NIPA2对高糖诱导的成骨细胞增殖和凋亡具有调控作用,其调控机制与JAK/STAT信号通路有关。     

穿心莲内酯对TBHP诱导的椎间盘髓核细胞凋亡的作用及机制研究

目的：探讨穿心莲内酯（andrographolide,ANDRO）对叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,TBHP）诱导的椎间盘髓核细胞（nucleus pulposus cells,NPC）凋亡的作用及其机制。方法：用TBHP诱导NPC建立细胞模型。将NPC分为5组：对照组、模型组（100μmol/L TBHP）、ANDRO低剂量组（100μmol/L TBHP+9μmol/L ANDRO）、ANDRO中剂量组（100μmol/L TBHP+18μmol/L ANDRO）和ANDRO高剂量组（100μmol/L TBHP+36μmol/L ANDRO）。流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,ELISA试剂盒检测氧化应激相关指标超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-PX）和过氧化氢酶（catalase,CAT）水平,JC-1探针法检测线粒体膜电位,Western blot检测动力相关蛋白1(dynam...     

白细胞介素-1β诱导人椎间盘髓核细胞凋亡

目的：探讨人正常椎间盘髓核细胞的培养方法以及白细胞介素-1β（IL-1β）对人椎间盘髓核细胞凋亡的作用。方法：取特发性脊柱侧弯患者腰椎间盘髓核组织,用胰酶、胶原酶序贯消化法消化细胞,并用甲苯胺蓝、番红-O染色和Ⅱ型胶原免疫组化分别检测糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型胶原表达,分别用20μg/L和200μg/L重组人IL-1β刺激髓核细胞24 h,检测其凋亡率。结果：用酶消化法可成功分离培养人椎间盘髓核细胞,检测所培养细胞可表达糖胺多糖、蛋白多糖和Ⅱ型胶原,IL-1β20μg/L组中细胞凋亡率（8.46%）和IL-1β200μg/L组（19.00%）分别为空白对照组（2.86%）的2.95倍和6.63倍（P〈0.05）,IL-1β200μg/L组是IL-1β20μg/L组的2.24倍（P〈0.05）。结论：用酶消化法可成功培养人椎间盘髓核细胞,IL-1β可以诱导椎间盘髓核细胞凋亡,并且随着浓度升高凋亡率增加,提示炎症因子IL-1β在退变椎间盘细胞凋亡中起了重要的作用。     

髓核细胞表型对干细胞治疗椎间盘退变的意义

椎间盘退变导致的下腰痛是社会的主要负担之一,而卧床休息、理疗、抗炎药物治疗及手术治疗等传统治疗方法仅能在短期或一定程度上缓解椎间盘退变给患者带来的痛苦,并不能使患者的生活质量得到显著改善。目前,细胞移植对于椎间盘退行性疾病的治疗有较好的前景,且能更好地衡量功能恢复的效果。其中,了解移植细胞能否产生健康髓核组织至关重要。髓核细胞的表型是独特的,它由一组能反映其生理功能的特征性标志物的表达构成。未来,髓核细胞及其祖细胞的独特生理功能的表型标记将对干细胞治疗椎间盘退变具有重要意义。     

柚皮苷通过Fas膜受体通路调控髓核细胞凋亡的机制研究

[目的]观察中药骨碎补单体柚皮苷（Naringin）对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的影响,为治疗椎间盘退变提供理论依据。[方法]对体外培养的人退变椎间盘髓核细胞利用番红O染色和甲苯胺蓝染色进行鉴定,并对P3代细胞分别用柚皮苷0 g/mL （对照组）、柚皮苷20 g/mL、柚皮苷40 g/mL、柚皮苷80 g/mL的培养基培养人髓核细胞48 h,噻唑蓝（MTT）法选择其抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡的最佳浓度,并用流式细胞仪测定各组细胞凋亡率。实时定量聚合酶链锁反应（qRT-PCR）检测Fas、FasL、Caspase-8基因表达。蛋白免疫印迹法（Western-blot）检测Fas蛋白表达。[结果]MTT法和流式细胞检测均测定20 g/mL柚皮苷为抑制髓核细胞凋亡的最佳浓度（P<0.05）。qRT-PCR检测20 g/mL柚皮苷能够抑制Fas、FasL、Caspase-8 mRNA表达（P<0.05）。Western-blot检测显示20 g/mL柚皮苷能够抑制Fas、FasL、Caspase-8蛋白表达。[结论]柚皮苷可能通过调控Fas/Fasl死亡受体凋亡通路抑制人退变椎间盘髓核细胞凋亡。     

JAK/STAT信号转导通路在器官纤维化中的作用及研究进展

器官纤维化是以胶原纤维大量沉积为特点的病理改变,但目前纤维化治疗仍存在很大挑战。JAK/STAT通路作为细胞内信号转导通路,产生了多种生物学效应。研究显示,JAK/STAT通路参与器官纤维化的进展,特别是JAK/STAT3这一通路与多个器官纤维化密切相关,而阻断JAK/STAT通路可阻止成纤维细胞增殖活化,抑制纤维化进程。本文就JAK/STAT在皮肤、肺脏、肝脏和肾脏等器官纤维化中的作用机制进行综述,并探讨JAK抑制剂成为治疗纤维化新靶点的可能性。     

桦木酸通过调控JAK2/STAT3信号通路对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及其机制

目的:探讨桦木酸(BA)通过介导Janus激酶2(JAK2)/信号转导与转录激活因子(STAT3)信号通路对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法:骨髓瘤U266细胞给予不同浓度(0、20、40、60、80、100、120和160μmol·L-1)BA作为不同浓度BA组,同时设置空白组(不加入BA且无细...     

Mfn2通过抑制内质网应激减轻椎间盘退变大鼠髓核细胞凋亡

目的 研究Mfn2对椎间盘退变大鼠髓核细胞内质网应激及细胞凋亡的作用及机制。方法 离体培养正常大鼠NP细胞为control组,离体培养椎间盘退变大鼠NP细胞分为model组、OE-Mfn2组、OE-NC组及4-PBA组。Western blot法检测Mfn2、PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bcl-2、Bax、caspase-3的蛋白水平;qRT-PCR检测Mfn2、PERK、eIF2α、ATF4mRNA水平;免疫共沉淀实验验证Mfn2与PERK互作关系;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 Mfn2可特异性结合PERK;与model组比较,OE-Mfn2组Mfn2、Bcl-2水平及细胞活力增加(P＜0.05),PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、ATF4、CHOP、GRP78、Bax、caspase-3水平及凋亡率降低(P＜0.05)。结论 Mfn2可通过降低ERS抑制椎间盘退变大鼠NP细胞凋亡。     

Nrf2/Keap1/ARE信号通路和髓核细胞自噬的研究进展

近年来,核因子E2相关因子2(Nrf2)/Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1/抗氧化应答元件信号通路和细胞自噬之间的相互作用机制成为国内外的研究热点之一。泛素结合蛋白p62介导的自噬诱导对Nrf2活化、消除线粒体功能障碍和氧化应激至关重要。椎间盘退变是各种脊柱退行性疾病的病理基础,在退变的椎间盘中可以观察到不同水平的髓核细胞自噬。炎症、营养缺乏、低氧、压力和高糖等因素均能诱导髓核细胞自噬,但自噬在椎间盘退变中的确切作用尚存在争议。     

脂联素通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及细胞外基质退变

目的：探讨脂联素（adiponectin,APN）对氧化应激下大鼠髓核细胞凋亡和细胞外基质（extracellular matrix,ECM）退变的保护作用及相关机制。方法：原代培养SD大鼠髓核细胞,CCK?8法检测细胞活力,以确定APN的最适保护浓度。将细胞分为对照组、H2O2组、APN+H2O2组及Compound C+APN+H2O2组,流式细胞术检测凋亡率,Western blot检测Bcl?2、Bax、Cleaved Caspase?3、基质金属蛋白酶?13（matrix metalloproteinase?13,MMP?13）及带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶?5（a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs?5,ADAMTS?5）等蛋白的表达,RT?PCR检测Ⅱ型胶原（collagen type Ⅱ alpha 1 chain,COL2A1）、蛋白聚糖（aggrecan,ACAN）的mRNA水平,Western blot评估5′?单磷酸腺苷活化蛋白激酶（adenosine 5′?monophosphate?activated protein kinase,AMPK）和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）的磷酸化水平。结果：1 μg/mL APN对200 μmol/L H2O2所致的细胞毒性起最佳拮抗作用。APN预处理显著抑制H2O2诱导的髓核细胞凋亡。相应地,Bax/Bcl?2比值及Cleaved Caspase?3 表达的增加也被APN抑制。尽管对ADAMTS?5无明显抑制作用,APN降低了H2O2诱导的MMP?13的表达。此外,H2O2对COL2A1及ACAN转录的抑制作用也被APN显著缓解。APN还促进AMPK磷酸化并抑制mTOR磷酸化,而AMPK抑制剂Compound C显著减轻了APN对mTOR磷酸化的抑制作用。APN对凋亡、分解代谢的抑制作用及其对合成代谢的促进作用也均被Compound C逆转。结论：APN通过AMPK/mTOR通路抑制H2O2诱导的大鼠髓核细胞凋亡及ECM退变。