氨基酸浓度对昆明小鼠胚胎体外发育的影响

目的探讨培养液中氨基酸成分对植入前昆明小白鼠胚胎发育的影响,摸索植入前胚胎体外培养氨基酸的最佳浓度.方法从超排昆明小鼠输卵管中取出的630枚受精卵均分为7组,分别在经添加不同浓度Eagle‘s氨基酸的去牛血清白蛋白KSOM培养液(mKSOM、mKSOM 1/16AA、mKSOM 1/8AA、mKSOM 1/4AA、mKSOM 1/2AA、mKSOM AA、mKSOM 2AA)中培养,对比观察各组胚胎体外发育的过程.用卡方检验分析添加各浓度氨基酸的培养液培养效率的差别,并将8细胞发育率和囊胚发育率分别与相应的氨基酸浓度进行曲线拟合分析.结果与未添加氨基酸组对比,添加氨基酸组胚胎发育率高,8细胞胚和囊胚的形成率与培养液中氨基酸的浓度关系均符合三次模型,在氨基酸为 1/2浓度时8细胞胚和囊胚的形成率均达到最高.结论氨基酸对胚胎的体外发育有促进作用,但含有高浓度氨基酸的培养液培养效果反而有所下降,可能是由于高浓度的氨基酸影响胚胎的代谢和渗透压的改变,且氨基酸分解及胚胎代谢所产生的铵对胚胎有毒性作用.     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的 Whitten氏培养液对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎分别进行体外培养 ,研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含 0 .0 1%、0 .5 %、1.0 %、1.5 %、2 .0 %、3.0 %、5 .0 %、10 .0 %乙醇的 Whitten氏培养液对 2细胞胚胎进行培养 ,观察研究小鼠 2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含 1%和 3%乙醇的 Whit-ten氏培养液分别对小鼠 2细胞、4细胞、8细胞和桑椹期胚胎进行培养。结果 :含低浓度乙醇 (1%以下 )的培养液对外细胞胚胎和桑椹胚的囊胚形成有促进作用 ,而在 2细胞和 4细胞胚胎…     

乙醇对小鼠胚胎体外发育影响的研究

用含不同浓度乙醇的Whitten氏培养液对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎分别进行体外培养，研究乙醇对小鼠不同发育时期胚胎体外发育的影响。首先利用含0、0．1％、0．5％、1．0％、1．5％、2．0％、3．0％、5．0％、10．0％乙醇的Whitten氏培养液对2细胞胚胎进行培养，观察研究小鼠2细胞胚胎对培养液中乙醇浓度的耐受极限。然后再用含1％和3％乙醇的Whitten氏培养液分别对小鼠2细胞、4细胞、8细胞和桑葚期胚胎进行培养。结果：含低浓度乙醇（1％以下）的培养液对8细胞胚胎和桑葚胚的囊胚形成有促进作用，而在2细胞和4细胞胚胎中则影响不明显。含高浓度乙醇（≥3％）的培养液则对各期胚胎有不同程度的抑制作用，但随着胚胎发育其对乙醇的耐受力将逐渐增强。     

胰岛素对ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究ICR小鼠胚胎体外培养时,添加胰岛素的作用、浓度及所需阶段．方法用添加不同浓度胰岛素的mKSOM培养基对小鼠胚胎进行体外培养及选择最适浓度对不同阶段鼠胚进行体外培养,观察囊胚发育率和囊胚细胞数的变化．结果所有添加胰岛素的浓度组,囊胚发育率均高于对照组,其中0．005μg／mL和0．05μg／mL浓度组囊胚细胞数显著高于对照组和其他各浓度组．2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素囊胚率显著高于对照组和其他实验组．结论在ICR小鼠胚胎体外培养时添加胰岛素能够促进胚胎发育;胰岛素浓度增至μg／mL对在ICR小鼠胚胎无毒性作用;在ICR小鼠胚胎体外培养的适宜胰岛素浓度为0．005μG／mL和0．05μG／mL;2-细胞至4-细胞、4-细胞至桑椹胚前添加胰岛素更加重要．     

不同浓度表皮生长因子对小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响

目的:研究不同浓度表皮生长因子(ep iderm al growth factor,EGF)对ICR小鼠2-细胞胚胎体外发育的影响。方法:在mKSOM培养液中添加不同浓度(0.1,1.0,10和100 ng/m l)的EGF对小鼠2-细胞胚胎进行体外培养72 h、96 h,观察囊胚发育率、孵化率和胚胎细胞数的变化。结果:实验组加入四种不同浓度EGF胚胎培养72 h后,其囊胚率分别为93.8%、92.4%、91.8%、91.2%;96 h后其孵出率分别为61.1%、61.8%、63.0%、60.1%,均显著高于对照组(79.9%、43.1%,P<0.05),囊胚细胞数分别为73.1±13.4、73.8±7.0、74.3±12.2、77.6±8.2,与对照组(72.1±6.9)比较,差异无显著性(P>0.05);四个实验组间差异亦无显著性(P>0.05)。结论:EGF浓度在0.1,1.0,10和100 ng/m l范围内可提高体外培养鼠胚的囊胚率与孵出率;胚囊细胞数无变化;不同浓度EGF对早期鼠胚未见有毒性作用。     

胰岛素对不同时期ICR小鼠胚胎体外发育的影响

目的研究胰岛素对不同时期小鼠胚胎体外发育的影响.方法收集1-细胞、2-细胞、4-细胞及桑椹胚期鼠胚,分别在含0（对照组）、0.005、0.05、0.5、5、10μg/mL胰岛素的KSOM中培养.结果在1-细胞及2-细胞阶段添加系列浓度时,0.005μg/mL及0.05μg/mL胰岛素组不仅提高囊胚率、孵化率,而且提高囊胚细胞数.4-细胞阶段添加系列浓度时0.05μg/ml胰岛素组能够提高囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数;而至桑椹胚阶段再添加系列浓度胰岛素时,囊胚率、孵化率以及囊胚细胞数均无统计学意义（P〉0.05）.结论在ICR小鼠胚胎体外培养时适宜的胰岛素浓度为0.05μg/mL;桑椹胚之前添加胰岛素对小鼠胚胎发育是必要的.在一定发育阶段内,随着胚胎的生长对胰岛素的需求也相应增加.     

表皮生长因子对小鼠早期胚胎体外发育影响的研究

目的：探讨表皮生长因子对小鼠植入前胚胎体外发育的影响。方法：用添加不同浓度EGF(epidermal growth factor)的CZB培养液对小鼠早胚进行体外培养,观察囊胚发育率和胚胎细胞数的变化。结果：HCG(human chorionic gonadotropin)注射后138h,0．1ng／ml EGF添加组扩张囊胚率、孵化囊胚率显著高于其他各组。100．0ng／ml EGF添加组扩张囊胚率和孵化囊胚率显著低于其余各组,且囊胚细胞死亡较多。结论：EGF通过刺激囊胚期细胞分化而促进胚胎体外发育。但高浓度EGF抑制胚胎体外发育并使早期胚胎受损。     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的 囊胚发育率低和发育迟缓是继“2-细胞阻滞”解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题。本实验通过对KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成。方法 采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果。结果 在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用。结论 通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育。     

KSOM培养基营养成分调整对小鼠植入前期胚体外发育的影响

目的囊胚发育率低和发育迟缓是继““2-细胞阻滞““解决后小鼠胚胎体外培养中面临的两大问题.本实验通过对 KSOM培养基营养成分的调整,观察对胚胎发育的影响,优化培养基的构成.方法采用微滴培养法培养昆明小鼠单细胞胚胎,以胚胎发育到囊胚的比例、孵出比例以及注射hCG后120 h囊胚全细胞数作为判断培养效果的标准,比较 KSOM在葡萄糖、牛血清白蛋白、氨基酸3种营养物质不同浓度下对小鼠植入前胚体外培养的效果.结果在未加氨基酸时葡萄糖、牛血清白蛋白的变化对注射hCG后120 h囊胚形成率、囊胚全细胞数影响不大,添加氨基酸后,囊胚发育速度提高,部分孵出和全部孵出比例提高,囊胚全细胞数增大明显,且葡萄糖、牛血清白蛋白与氨基酸对囊胚的发育有共同促进的作用.结论通过添加适量的氨基酸、葡萄糖、BSA改良KSOM培养基能很好的促进小鼠植入前胚体外发育.     

体外受精时程和胚胎培养方式对小鼠早期胚胎发育潜能的影响

目的 探讨体外受精时程、培养基体积以及单胚胎或多胚胎培养对小鼠早期胚胎发育潜能的影响。方法 根据体外受精时间长短的不同，将受精时程分为2组，一组精子和卵子共孵育的时间为2h（A组），另一组精子和卵子共孵育的时间为18h（B组）；根据培养基体积及培养胚胎数目的不同，将胚胎培养方式分为6组：100μl培养基＋1枚胚胎（组1），100μl培养基＋3枚胚胎（组2），50μl培养基＋1枚胚胎（组3），50μl培养基＋3枚胚胎（组4），20μl培养基＋1枚胚胎（组5），20μl培养基＋3枚胚胎（组6）。结果 ①A组的优质胚胎率和囊胚形成率均明显高于B组（P〈0.05）；②组6的优质胚胎率和囊胚形成率显著高于组1、组2和组3（P〈0.01），组4的囊胚形成率明显高于组1和组2（P〈0.05），组5的囊胚形成率明显高于组1、组2和组3（分别为P〈0.01，P〈0.05）。结论 缩短受精时间、减少培养基体积以及多胚胎群体培养有利于小鼠早期胚胎的发育。     

序贯培养对小白鼠胚胎体外发育的影响

目的:探索序贯培养技术对小白鼠胚胎体外发育的影响。方法:将 2 -细胞期的小鼠胚胎随机分为序贯培养组与传统培养组进行培养 ,观察分析两组的 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率。结果:序贯培养组 8-细胞期胚胎形成率、桑椹期胚胎形成率及囊胚形成率分别为 70 .5 %、6 8.2 %、6 5 .9% ,传统培养组分别为 4 5 .7%、4 5 .7%、34.3%。两组比较 ,序贯培养组高于传统培养组 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 :采用适当的培养液进行序贯培养 ,更适合小白鼠胚胎的体外发育     

卵泡发育速度对胚胎发育及体外受精-胚胎移植结局的影响

目的探讨促排卵过程中卵泡发育速度与卵母细胞质量间的相关性。方法154名患者共159个体外受精-胚胎移植（IVF-ET）周期,按卵泡发育速度（v,mm／d）的分布分为A组（v〈1）、B组（1≤v≤1．59）、C组（v〉1．59）,比较各组卵母细胞成熟度指标。结果A、B、C3组卵细胞成熟率分别为89．56％、92．45％和94．76％,优质胚胎率分别为40．85％、36．37％和37．11％,妊娠率分别为42．1％、43．1％和35．3％,卵母细胞成熟率C组高于A、B组。优质胚胎率A组高于B、C两组,但组间差异均无显著性（P〉0．05）,而妊娠率A、B两组明显高于C组,且B、C两组间差异有显著性（P〈0．05）。结论促排卵过程中卵泡的生长速度应控制在一个最佳的范围内,因其与卵子质量和后期优质胚胎率及妊娠结局密切相关,且卵泡发育速度又可作为衡量卵泡发育潜能的一项重要指标。     

两种硫辛酸对映体对胚胎体外发育的影响

目的：探讨(R)-硫辛酸和(S)-硫辛酸对胚胎体外发育的影响。方法解冻复苏卵裂期胚胎,分别在含不同浓度(R)-硫辛酸和(S)-硫辛酸的GⅡ培养基微滴中培养,观察各组的桑胚率、致密化率、囊胚率和优质囊胚率。结果硫辛酸可提高胚胎体外发育率,(R)-硫辛酸浓度10×10-9 mol/m3组桑胚率、致密化率、囊胚率和优质囊胚率分别达到了59.2%,55.1%,49.0%和54.2%,均高于其他浓度组（P<0.01）。(R)-硫辛酸浓度10×10-9 mol/m3组的桑胚率、致密化率和优质胚胎率均高于(S)-硫辛酸10×10-9 mol/m3组（P<0.05）。结论硫辛酸对胚胎体外发育具有促进作用,特别是对桑胚率和囊胚率具有显著的影响。(R)-硫辛酸10×10-9 mol/m3组的效果最好。     

应用小鼠体外全胚胎培养方法研究多氯联苯同系物PCB153对胚胎发育的影响

目的探讨多氯联苯同系物PCB153对胚胎生长发育的影响及其作用机制.方法于体外将孕8.5d小鼠胚胎置入不同浓度PCB153,应用植入后全胚胎培养技术研究PCB153对胚胎生长发育的影响;透射电镜观察PCB153对卵黄囊的损害.结果PCB153对胚胎发育具有明显影响且呈剂量-效应关系.0.10ng/ml组除卵黄囊循环稍差外,其余指标与对照组一致或差异不显著(P＞0.05);1.00ng/ml组明显影响卵黄囊循环、头长、颅臀长、体节数、中脑、后脑、翻转、鳃弓和上下颌突等指标,与对照组比较P＜0.05;10.00ng/ml组,各指标进一步降低(P＜0.01),胚胎致畸率升高并出现死亡;电镜发现,PCB153处理的各实验组卵黄囊超微结构遭到不同程度破坏.结论PCB153使胚胎发育迟缓、具有发育毒性和致畸性,作用的敏感部位主要是卵黄囊、头长、颅臀长、中脑和鳃弓;卵黄囊的超微结构损害与PCB153致胚胎发育异常有关.     

转录因子Bach1在小鼠胚胎发育时期的生物信息学分析

目的 研究转录因子Bach1在小鼠胚胎发育时期的表达情况并对其表达和调控机制进行生物信息学分析。方法 获取小鼠胚胎发育不同时期的转录组数据[来自Gene Expression Omnibus（GEO）数据库GSE92634],使用权重基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）方法进行分析。利用来自10个小鼠胚胎样品的8 933个基因构建17个共表达模块,并对含有Bach1特定模块的共表达基因进行Gene Ontology（GO）功能富集分析。结果 转录因子Bach1被鉴定为重要的时空监管中枢基因,其与Bach1在小鼠胚胎中共表达的基因与胚胎发育、血管发育密切相关,包括Vegfb、Tcf15、Znf622和Fam105b等,提示Bach1可能在小鼠胚胎发育和血管发育中起重要作用。小鼠胚胎发育过程中Bach1与Vegfb基因从胚胎E5.5到E7.5天表达趋势基本一致,用小鼠胚胎发育的另一个转录组数据库（GSE120963）分析发现Bach1与Vegfb基因表达趋势类似。Bach1在人胚胎干细胞Tcf15、Znf622和Fam105b基因启动子或增强子区具有较高的富集,可能直接调控这些基因的转录。分析与Bach1共表达基因的GO富集发现,Bach1与Wnt信号通路、蛋白修饰和翻译、染色质重塑、DNA损伤反应、细胞周期调节、泛素化修饰等密切相关。结论 通过生物信息学分析发现,Bach1在小鼠胚胎发育中可能起重要作用,并与血管发育密切相关。     

葡萄糖在小鼠胚胎2-细胞晚期诱导活性氧增多抑制胚胎体外发育

目的:测定葡萄糖培养早期胚胎体外发育各阶段的活性氧(ROS)水平,探讨葡萄糖对小鼠早期胚胎体外发育产生阻滞作用的机制。方法:通过在改良的CZB (m-CZB) 培养液中添加不同浓度（分别为0、5、10、15、20、25、30 mmol/L）的葡萄糖培养小鼠早期胚胎,根据其体外发育的不同阶段,用分子探针氢化乙啶(hydroethidine,HE)和紫外分光光度法分别检测小鼠胚胎内、外ROS含量。结果:葡萄糖浓度达到15 mmol/L时囊胚发育率开始出现明显下降(P<0.05),相同浓度培养的小鼠胚胎在2-细胞晚期阶段胚胎内部超氧阴离子(O2-·)和培养液中过氧化氢(H2O2)含量均明显升高(P<0.05),而发育其他阶段胚胎内部的O2-·与对照组(0 mmol/L葡萄糖组)比较均无统计学差异(P>0.05)。结论:高浓度葡萄糖可能在2-细胞晚期阶段诱导ROS增多,致使小鼠早期胚胎体外发育受阻。     

红外线对小鼠胚胎发育的影响

目的 研究不同波段红外线对小鼠胚胎的作用.方法 采用不同波段的红外线对孕鼠照射并与对照组比较的方法,观察了受孕母鼠的体重变化,活胎率,吸收胎率,以及胎鼠的身长、尾长、体重等指标.结果 红外线照射各组孕鼠的体重、胎鼠的体重、身长、尾长都有增加.中波红外线组与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论 :红外线特别是中波红外线能促进胚胎的生长.