食管癌TIL两种分离诱导培养方式效果的比较

目的　寻求有效地从肿瘤手术标本中分离出较多的TIL前体细胞并保持高度增殖能力和抗瘤生物活性的方法。方法　利用文献介绍的直接分离诱导培养法和酶消化分离诱导培养法对食管癌手术标本进行TIL细胞分离 ,将分别获得的TIL前体细胞数 ,诱导培养增殖速度及抗癌细胞生物活性的效果等进行比较。结果　直接分离诱导培养法获得的前体TIL细胞数少 ,但诱导培养增殖的速度快。而酶消化分离诱导培养法 ,获得的前体TIL细胞数多 ,但诱导培养增殖的速度慢。两法分离诱导培养增殖的TIL抗肿瘤活性是一致的 ,经统计学处理无显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论　直接分离诱导培养法 ,操作简单 ,节省酶试剂 ,并能保持TIL的抗肿瘤生物活性 ,是一种较理想的TIL分离方法。     

用TIL细胞和rIL—2、IFN联合治疗恶性胸膜间皮瘤

胸膜间皮瘤较少见.目前尚缺乏有效疗法.手术、放、化疗结果常不满意.近年来,白细胞介素2(IL—2)、过继转移免疫疗法为许多放、化疗无效的中晚期癌症病人提供了新的治疗途径.目前已确认有几种淋巴细胞亚群可用于过继免疫治疗,其中杀伤活性最高的是肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL).本文探讨了这方面的工作并附1例报告.ILAK/IL—2疗法:LAK细胞是一种细胞毒性细胞,由IL—2激活,它能杀伤NK抵抗性肿瘤细胞,抗瘤谱广,其杀伤作用无主要组织相容性抗原(MHC)约束性,可杀伤同基因、同种异体乃至异种的肿瘤细胞.目前＊＊H细胞多用外周血淋巴细胞(PBL)制备,肿瘤引流淋巴结、骨髓、胸腺、肝、脾等的淋巴细胞,也可成为LAK细胞来源.但抽取大量     

三种肿瘤浸润淋巴细胞的体外增殖和抗瘤作用观察

肿瘤浸润淋巴细胞(简称TIL)在抗肿瘤中的主要作用比淋巴因子激活的杀伤细胞LAK强50～100倍,并有一定的靶细胞特异性。国内外在此方面的研究已成热点。本试验从临床手术标本中分离出肝癌、胃癌、肉瘤三种瘤组织的TIL,以1000u/mlL—2进行诱导培养,再与其自身癌靶细胞作抗瘤活性测定,结果报告如下。1 材料与方法1.1 实验对象 肝癌、胃癌、肉瘤各9例手术标本均经病理确诊,由本中心病区提供。1.2 TIL和瘤细胞的分离 取瘤组织用Hanks液洗涤,去掉坏死的周边组织剪成约0.5mm~3～1mm~3的小块,过20O目钢网。     

利用自体的人肝癌细胞系HCC-9724诱导特异性CTL

目的：用自体的人肝癌细胞系诱导对肝癌细胞具有特异性杀伤作用的T淋巴细胞。方法：分离肝癌患者外周血淋巴细胞(PBL)，在50U／ml IL-2存在下与经照射的自体肝癌细胞系共刺激，进行筛选性的混合淋巴细胞肿瘤细胞培养(MLTC)，直接免疫荧光法分析其细胞表型，^51Cr释放试验检测效应细胞的杀伤效应。结果：淋巴细胞明显增殖，细胞变大呈豆芽状。细胞毒性实验证明该细胞对HCC—9724有特异性杀伤作用，而对K562细胞没有杀伤作用。结论：利用同体肝癌细胞系HCC—9724作为刺激细胞反复诱导肝癌患者能产生肝癌特异性的CTL。推测在刺激及培养条件适宜时，人外周血中较少的CTL前体细胞(CTLp)是可能捕捉到的。     

自体TIL治疗恶性胸腔积液的临床疗效观察

目的　探讨自体肿瘤浸润淋巴细胞合并白细胞介素 2 (TIL/IL 2 )过继免疫疗法对恶性胸腔积液的临床疗效。方法　对 2 0 0 2年 6月—2 0 0 4年 3月的 10 7例恶性胸腔积液患者 ,行胸腔积液TIL体外扩增并自体回输 ,观察近期和远期疗效。结果　在可评价疗效的 10 4例患者中 ,70 .2 %完全缓解 (73 /10 4) ,2 2 .1%部分缓解 (2 3 /10 4) ,6.7%无效 (7/10 4) ,总有效率 92 .3 %。完全缓解的病例随访中均未见治疗侧胸腔积液复发。结论　自体TIL/IL 2过继免疫治疗恶性胸腔积液有良好的临床应用价值。     

LDH释放试验监测细胞杀伤活性在过继免疫治疗中的应用

对12例恶性胸腹水患者进行肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL) rI-2 a-IFN的过继免疫治疗(AIT)。在治疗中用LDH法监测了用rIL-2诱导前后胸腹水中的TIL对自体肿瘤细胞的杀伤活性,并观察了杀伤活力与控制胸腹水疗效的关系,将结果报告如下。 1 材料与方法 1.1 病例选择:选择癌性胸腹水患者12例,其中男8例,女4例,年龄23～68岁。病理(细胞学或免疫组化)检查证实胸水或腹水中存在肿瘤细胞。其中弥漫性胸腹间皮瘤2例、腹膜间皮瘤1例、肠癌1例、肾癌肺转移1例、食管癌胸膜转移1例、肺癌6例(包括腺癌4例、鳞癌1例、低分化癌1例)。5例治疗     

猴头菌多糖和胸腺素对骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用

同基因骨髓移植55d后,受体小鼠免疫功能严重缺损,脾细胞产生IL—2的能力等细胞免疫功能明显低下。经连续腹腔注射猴头菌多糖和胸腺肽15d后,小鼠脾细胞产生IL—2的能力,对ConA刺激的增殖反应和混合淋巴细胞培养反应均显著增强:抗羊红细胞抗体(IgM)分泌细胞数明显增加。实验结果提示:猴头菌多糖和胸腺素合并使用能明显促进同基因骨髓移植小鼠免疫功能的早期恢复,且优于单独使用猴头菌多糖或胸腺素。     

CT晕征:评估黑色素瘤肺转移病人对过继细胞疗法反应的影像标志

目的晕征定义为围绕肺结节周围的磨玻璃密度区域。表现为晕征的肺转移结节主要见于血管丰富的肿瘤。本文对行自体肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)过继治疗的黑色素瘤     

重组结核分枝杆菌多表位肽的免疫原性研究

目的探讨纯化的重组结核分枝杆菌多表位肽激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型结核疫苗的设计打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的重组表达多表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定重组多表位肽的免疫原性。结果以刺激系数(SI)>3为界,多表位肽(10μmol)能刺激全部10例HLA-A*0201阳性(A2+)结核菌素阳性(PPD+)健康个体的PBMC发生增殖,SI为46.2±5.6;增殖反应明显高于单肽(平均SI为10.2±2.3)以及PPD(平均SI为15.6±3.6)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在多表位肽诱导的CTL细胞毒活性分析中以负载抗原肽(10μmol)的T2细胞作为靶细胞,多表位肽诱导的CTL作为效应细胞,多表位肽能诱导全部的10例A2+PPD+健康个体中CTL杀伤活性,平均活性分别为(86.2±9.6%),显著高于单肽[平均为(25.4±3.6)%]和PPD[平均为(22.6±2.8)%](P<0.01)。结论重组优化多表位肽在细胞水平具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性。     

猴头菌多糖促进同基因骨髓移植小鼠免疫功能重建

同基因骨髓移植55d后,受体小鼠免疫功能严重缺损,脾细胞产生IL—2的能力等细胞免疫功能明显低下。经腹腔连续注射猴头菌多糖15d后,小鼠脾细胞产生IL—2的能力,对ConA刺激的增殖反应和混合淋巴细胞反应均显著增强;抗羊红细胞抗体(IgM)分泌细胞数明显增加。实验结果提示:猴头菌多糖能明显促进同基因骨髓移植小鼠免疫功能的早期恢复。     

低剂量辐射对LAK/TIL培养扩增及抗肿瘤作用的实验研究

目的　为了解低剂量电离辐射对LAK/TIL细胞培养扩增及抗肿瘤作用的影响。方法　从荷瘤小鼠的脾脏制得LAK细胞 ,从荷Lewis肺癌小鼠瘤组织中分离得TIL细胞 ,给予不同剂量的X射线照射后培养。结果　低剂量电离辐射可增加LAK/TIL细胞的扩增量 ,降低细胞扩增过程死亡率 ,并增加细胞毒性。结论　低剂量电离辐射对生物活性细胞不仅有诱导扩增作用 ,同时亦降低扩增过程细胞死亡率。     

半乳糖抗小鼠CD3单抗作为肝癌术后 免疫治疗载体的研究

目的 探讨利用放射性核素示踪技术研究半乳糖抗小鼠ＣＤ３单克隆抗体（Ｇａｌ－Ａｎｔ－ＣＤ３ＭｃＡｂ）作为原发性肝癌（ＰＬＣ）术后免疫治疗载体的可行性。方法 以半乳糖（Ｇａｌ）伪原料,制得２－亚氨基－２－甲氧乙基－１－硫代－β－Ｄ－半乳糖苷（ＩＭＥ）,与抗小鼠ＣＤ３单克隆抗体（Ａｎｔ－ＣＤ３ＭｃＡｂ）共价偶联制得（Ｇａｌ－Ａｎｔ－ＣＤ３ＭｃＡｂ,再用＾１３１Ｉ或＾１２５Ｉ标记Ｇａｌ－Ａｎｔ－ＣＤ３Ｍｃ     

树突状细胞体外产生特异性抗白血病免疫应答的研究

 目的探讨白血病患者外周血树突状细胞(DCs)在体外诱导抗白血病免疫反应.方法用急性早幼粒细胞白血病(M3)细胞株(HL-60)的肿瘤相关抗原(TAA)激活DCs,以粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及白介素-4(IL-4)联合刺激M3患者外周血DCs,在体外诱导自体混合T淋巴细胞增殖.分化为细胞毒性T细胞(CTL).结果该CL及其上清液对HL-60白血病细胞有高效、特异的杀伤作用,而对慢性粒细胞白血病细胞株(K 562)及肝癌细胞HepG2仅有微弱的杀伤作用.结论DCs能有效提呈肿瘤抗原并诱导出显著的杀伤白血病细胞的免疫反应,可望成为有效的肿瘤特异性免疫治疗新途径.     

树突状细胞诱导抗胃癌作用体外实验研究

目的 :研究负载患者自体胃癌抗原后的树突状细胞 (DC)在体外诱导的特异性细胞毒性淋巴细胞 (CTL)对胃癌细胞的杀伤效应。方法 :以组合酶消化法从胃癌手术标本中获取胃癌细胞 ,冻融制备胃癌抗原。GM -CSF、IL - 4体外诱导外周血单个核细胞 (PBMC)获得DC并负载胃癌抗原 ,继而以其刺激自体T淋巴细胞制备胃癌抗原特异性CTL ;用CytoTox 96 TM检测CTL对患者自身胃癌细胞体外杀伤效应。结果 :负载胃癌抗原DC诱导的特异性CTL对患者自身胃癌细胞的杀伤率达 88 17% ,显著高于淋巴因子激活的杀伤细胞 (LAK)细胞的杀伤率 ,P <0 0 5。且其对同种不同分化类型的胃癌细胞株MGC80 3、MNK2 8也有较高的杀伤效应 ,而对LOVO及HepG2 肿瘤细胞无显著杀伤作用 ,P<0 0 1。结论 :负载胃癌抗原的DC体外可诱导出高效而特异的抗胃癌效应 ,揭示以DC为中心的肿瘤生物治疗可望提高胃癌综合治疗水平     

Immunologic considerations of large volume radiotherapy.

There is clinical evidence that the immune response can increase or decrease cancer growth. 1) Cancer is increased in congenital immune deficiency states and in those given immuno-suppressants after renal transplantation; 2) there is a correlation between mononuclear cell infiltration and prognosis; 3) spontaneous regression occurs occasionally on an immunologic basis; 4) cancer specific antigens and antibodies can be demonstrated, and 5) immunotherapy can cause tumor regression. The cells that are responsible for the immune response are 1) families of thymic-derived lymphocytes, or T-cells, ("memory," "effector", "helper" or "suppressor" T-cells), and 2) bursal-derived lymphocytes, or B-cells, which on specific sensitization become either plasma cells that produce cytotoxic or blocking antibody or macrophages (A-cells) that process antigen, and may become "armed" with cytophilic antibody. The main effect of local radiotherapy is to destroy certain families of radiosensitive lymphocytes in the afferent, central and efferent components of the immune response. In Hodgkin's disease, extended field radiotherapy causes a prolonged decrease in the number of lymphocytes in the peripheral blood and a decrease in function of the cells, as determined by RNA and DNA synthesis after culture with mitogen, phytohemagglutinin. There is no correlation, however, with the values after treatment and recurrence of the disease. The effect of local radiotherapy to large volumes of tissues, on the incidence of new primary cancers, is uncertain but the majority of reports show that it is no effect.     

低剂量辐射对脐血的免疫刺激作用

目的：探讨低剂量辐射对脐血T淋巴细胞膜分子表达，IL－2分泌及LAK细胞体外抗肿瘤活性的影响。方法：新鲜分离的脐血淋巴细胞及LAK前体细胞接受低剂量γ射线照射，分别用直接免疫荧光标记流式细胞术，MTT法及3H-TdR释放实验检测T淋巴细胞膜分子的表达，IL－2分泌的LAK体外杀伤肿瘤靶细胞（K562，HL－60）活性。结果：（1）62mGyγ射线照射后，脐血淋巴细胞CD3，TCR／CD3复合物，CD4，CD8分子表达显著上调，且均在4－24h，人随时间推移而逐步增强，CD4／CD8比值无显著性变化；（2）62mGy γ射线照射后，脐血单个核细胞上清IL－2活性随培养时间推多逐渐增强，不同时间点比较差异均有显著性（P＜0．05）；（3）脐血LAK细胞对K562和HL－60的杀伤活性与成人外周血相比差异无显著性（P＞0．05），接受低剂量辐射的脐血LAK细胞对K562和HL－60的细胞毒性显著高于非照射组（P＜0．01），结论：低剂量辐射可促进脐血T淋巴细胞的成熟，活化和信号的转导及IL－2的分泌，增强脐血LAK杀伤肿瘤靶细胞的细胞毒活性，从而可能在脐血移植中加速免疫功能重建，增强移植物抗白血病效应。     

基于细胞表面特异识别的荧光标记小分子抗体的鉴定及其应用

 目的 建立基于细胞表面特异性识别的荧光标记小分子抗体的鉴定方法并应用于食管癌外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)检测。方法 本研究前期利用噬菌体技术高通量筛选富集到单链噬菌体抗体NFC 20b和NFC 70a,标记荧光后,观察在斑马鱼体内与食管癌细胞的聚集示踪,并用于检测食管癌患者的外周血CTCs;同时通过高通量蛋白组芯片对抗原蛋白表达谱进行分析。结果 荧光小分子抗体NFC 20b和NFC 70a于不同时间点,在斑马鱼的背主动脉、尾动脉和尾静脉中均能观察到抗体分布,与空白组和阴性抗体组相比,两抗体与移植瘤结合荧光更强;用蛋白芯片筛选抗原蛋白表达谱,初步确定NFC 20b结合的抗原蛋白为细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)。结论 荧光标记的小分子抗体可以通过血液循环分布到斑马鱼的卵黄囊,并能与移植瘤有明显的聚集结合效应,可以用于检测食管癌患者外周血CTCs;利用蛋白芯片技术可以辅助鉴定抗体所结合的抗原种类。     

Induction of interleukin-1β by mouse mammary tumor irradiation promotes triple negative breast cancer cells invasion and metastasis development

Purpose: Radiotherapy increases the level of inflammatory cytokines, some of which are known to promote metastasis. In a mouse model of triple negative breast cancer (TNBC), we determined whether irradiation of the mammary tumor increases the level of key cytokines and favors the development of lung metastases.

Materials and methods: D2A1 TNBC cells were implanted in the mammary glands of a Balb/c mouse and then 7 days old tumors were irradiated (4?×?6?Gy). The cytokines IL-1β, IL-4, IL-6, IL-10, IL-17 and MIP-2 were quantified in plasma before, midway and after irradiation. The effect of tumor irradiation on the invasion of cancer cells, the number of circulating tumor cells (CTC) and lung metastases were also measured.

Results: TNBC tumor irradiation significantly increased the plasma level of IL-1β, which was associated with a greater number of CTC (3.5-fold) and lung metastases (2.3-fold), compared to sham-irradiated animals. Enhancement of D2A1 cell invasion in mammary gland was associated with an increase of the matrix metalloproteinases-2 and -9 activity (MMP-2, -9). The ability of IL-1β to stimulate the invasiveness of irradiated D2A1 cells was confirmed by in vitro invasion chamber assays.

Conclusion: Irradiation targeting a D2A1 tumor and its microenvironment increased the level of the inflammatory cytokine IL-1β and was associated with the promotion of cancer cell invasion and lung metastasis development.