大鼠局灶性脑缺血再灌流损伤时神经细胞凋亡及其调控基 …

目的 探讨脑缺血再灌流损伤时神经细胞凋亡及其调控基因ｂｃｌ－２的作用。方法 采用大鼠大脑中动脉（ＭＣＡ）阻断模型阻断血液２小时后再灌注,分别在不同再灌注时间将大鼠断头取脑,连续切片分别作ＨＥ、ＴＵＮＥＬ染色及ｂｃｌ－２蛋白免疫组化染色。结果（１）ＭＣＡ阻断后脑缺血周边区部分神经细胞发生凋亡,随着再灌注时间的延长,一定时程内凋亡细胞逐渐增多,２４小时达高峰,各组之间及与假手术组之间差异显著（Ｐ〈０．     

甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响

目的 研究甘露醇对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时神经细胞凋亡的影响。方法 采用大鼠大脑中动脉阻断（MCAO）模型，给予不同剂量甘露醇进行干预，用TUNEL染色标记大鼠神经细胞凋亡情况，按Swanson方法测量、计算梗死体积，并与未干预组及生理盐水对照组比较。结果 大、小剂量甘露醇均能减轻大鼠脑缺血再灌注后的神经细胞凋亡，并能阻止梗死体积的扩大。大、小剂量的效果之间无明显差异。结论 甘露醇的脑保护作用不完全与脱水降颅压有关，还可通过抑制神经细胞凋亡而发挥重要的脑保护作用。     

NO对实验性局灶脑缺血再灌流神经细胞凋亡影响的定量研究

目的 研究ＮＯ在局灶性脑缺血再灌流过程中对神经细胞的作用机制,特别是ＮＯ与细胞凋亡的关系。方法 利用流式细胞仪检测法,测定Ｎ－硝基－左旋－精氨酸（ＮＮＬＡ）干预后局灶性脑缺血鼠脑组织中神经细胞的凋情况。结果 在缺血再灌流期间过多或过少的ＮＯ均对缺血区凋亡峰有明显影响,小剂量ＮＮＬＡ减少神经细胞凋亡的发生率,大剂量ＮＮＬＡ增加神经细胞凋亡的发生率。结论 局灶性脑缺血的不同区域,包括正常及病变组织中的     

大鼠局灶性脑缺血时人参皂甙Rbl抑制细胞凋亡和调控凋亡基因的表达

目的 研究人参皂甙Rbl(Ginsenoside Rb1,GRb1)对大鼠脑缺血再灌注时神经细胞凋亡及神经细胞凋亡抑制蛋白(NAIP)、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨人参皂甙Rbl的神经保护作用机制.方法 阻塞Wistar大鼠大脑中动脉制备短暂性脑缺血模型,出现神经功能缺失症状的大鼠随机分为缺血组和GRb1组,GRb1组大鼠在再灌注后立即腹腔注射人参皂甙Rb1(40mg/kg).每组按不同的再灌注时间(3h、12h、1d、2d、3d、5d和10d,每时间点4只)分为7个亚组.分别用原位未端标记法和免疫组织化学方法观察凋亡细胞、神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)、Bcl-2和Bax的表达.结果 与缺血组相比,GRb1组的各亚组凋亡细胞数下降,但只在再灌注12h～3d时有显著差异;GRb1组的NAIP阳性细胞数在再灌注12h～10d时明显高于缺血组;GRb1组的Bcl-2阳性细胞数在再灌注12h～10d时显著上升,Bax阳性细胞数则在相同时间点下降.结论 人参皂甙Rbl通过促进NAIP、Bcl-2表达和抑制Bax表达发挥神经保护作用.     

大鼠局灶性脑缺血再灌流后Caspase-3激活与神经元凋亡的关系

目的探讨Caspase-3与局灶性脑缺血后神经元凋亡的关系。方法局灶性脑缺血再灌流大鼠模型,按再灌流时间不同随机分为5组。用半定量RT-PCR观察了脑缺血后不同时程Caspase-3mRNA表达及四肽荧光底物法检测Caspase-3蛋白酶活性;用TUNEL方法检测不同时程细胞凋亡。结果脑缺血2h再灌流2h组Caspase-3mRNA水干即已升高(P＜0.05)),蛋白酶活性轻度升高,再灌流6h后两者均明显升高(P＜0.05);脑缺血再灌流后不同时程细胞凋亡具有与Caspase-3相似的变化趋势。结论提示脑缺血后细胞凋亡的发生与Caspase-3的激活有关。     

质粒pLXSN介导人bcl-2 cDNA抑制局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡

目的　研究质粒 pLXSN介导bcl 2基因在局灶性脑缺血中的脑保护作用。 方法　 5 4只雄性大鼠随机分为生理盐水组、空质粒组和bcl 2组 ,每组 18只。分别于皮质区两部位注射生理盐水、质粒 pLXSN、pLXSN bcl 2 ,并于注射后 2 4h采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血 2 4h模型。采用TTC染色、免疫组织化学方法、原位细胞凋亡检测、流式细胞仪检测各组大鼠脑梗死状况、bcl 2蛋白表达和细胞凋亡。结果　 (1)标尺测量各组注射点 1、2处及两者中点处冠状轴上脑梗死内缘距大脑纵裂距离 ,生理盐水组分别为 (2 70± 0 36 )mm、(2 5 2± 0 2 7)mm、(2 33± 0 16 )mm ;空质粒组分别为 (2 83± 0 4 7)mm、(2 5 9± 0 6 7)mm、(2 6 3± 0 38)mm ;bcl 2组分别为 (4 2 2± 0 80 )mm、(4 77± 0 74 )mm、(3 5 7± 1 4 9)mm。于注射点 1、2处 ,与生理盐水组和空质粒组比较 ,bcl 2组的脑梗死内缘距中线距离显著增大 (P <0 0 1) ;于两注射点中点处脑梗死内缘距中线距离 3组差异无显著意义。 (2 )显微图像分析系统、免疫组化检测注射处缺血半暗带bcl 2阳性细胞面积百分比 ,生理盐水组为 0 93%± 0 2 6 %、空质粒组为 0 95 %± 0 37%、bcl 2组为 1 95 %± 0 6 5 % ,与前两组比较 ,bcl 2组注射处缺血半暗     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞的凋亡

本实验用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注大鼠模型64只,分脑缺血90min再灌注0.5、6h、1、3、14d组,放线菌酮处理组及对照组。观察脑缺血后再灌注不同时间凋亡细胞的发生情况及其与梗塞体积、神经功能缺损积分间的关系,以及蛋白质合成抑制刺的干预作用;细胞凋亡通过Tunel染色及电镜检测。结果发现脑缺血90min再灌注0.5h开始出现凋亡细胞,24h达高峰,持续2周;梗塞灶的形成较凋亡细胞出现晚,但24h同时达到高峰,随着时间延长,凋亡细胞数减少,梗塞体积无明显变化;蛋白质合成抑制剂放线菌酮可以减少缺血后梗塞体积及凋亡细胞。     

流式细胞仪检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后细胞凋亡的研究

本研究采用流式细胞仪（ＦＣＭ）检测大鼠局灶性脑缺血再灌流后凋亡细胞ＤＮＡ断裂百分率。结果表明：随再灌流时间的增加，ＤＮＡ断裂百分率逐渐增加，再灌流１ｄ时达高峰，再灌流３～７ｄ逐渐下降。结果提示：细胞凋亡在局灶性脑缺血再灌流损伤中呈动态过程且系神经细胞死亡的重要形式。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血神经细胞凋亡及Bcl—2、Bax的影响

目的 研究不同时程的亚低温对大鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型的神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax的影响。方法 利用MCAO模型,缺血3小时后再灌注。缺血后即刻分别进行不同时程（0．5、1、3小时）的亚低温治疗,再灌注后24小时取脑切片作TUNEL染色及Bcl-2、Bax免疫组化染色。结果 （1）亚低温1、3小时组的凋亡细胞、Bax细胞数与对照组比较均明显降低（P＜0．05,P＜0．01）。（2）亚低温3小时组的Bcl－2细胞阳性率与对照组相比明显增加（P＜0．05）。（3）凋亡细胞阳性率与Bcl-2／Bax比值呈负相关关系（r＝－0．9759,P＜0．01）。结论 缺血性脑损伤的病理过程与细胞凋亡有关,Bcl-2／Bax比值能决定细胞凋亡的发生。亚低温能增强Bcl－2并降低Bax基因的表达,有抑制细胞凋亡的作用,是保护缺血神经元的重要方法之一。     

大鼠局灶性脑缺血时细胞凋亡与c-fos表达

目的：研究凋亡细胞在脑缺血及再灌注后的时空表达方式及原癌基因ｃ－ｆｏｓ的表达,以期探讨脑缺血时ｃ－ｆｏｓ表达与细胞凋亡的关系。方法：用线栓法建立局灶性脑缺血再灌注模型,ＤＮＡ缺口末端标记法原位检测细胞凋亡,免疫组化检测ｃ－ｆｏｓ的表达。结果：缺血侧鼠脑凋亡细胞数随再灌注时间延长而增多,凋亡细胞主要分布于额顶叶皮层与纹状体,以梗死灶边缘区密度最高。正常组、假手术组未见ｃ－ｆｏｓ表达,缺血及再灌注各组     

Mg^2＋对脑缺血再灌注损伤保护作用的研究

目的 探讨镁离子对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 用线栓法建立脑缺血再灌注模型,观察Ｍｇ＾２＋对脑缺血再灌注损伤的保护作用及对肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和细胞粘附分子（ＩＣＡＭ）表达的影响。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子的表达与神经元凋亡的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后凋亡诱导因子(AIF)的表达变化及与细胞凋亡的关系.方法 将Wistar大鼠分为假手术组(6只)和模型组(30只).模型组大鼠采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,假手术组大鼠插线较模型组浅,不造成大脑中动脉闭塞.观察假手术组及模型组缺血再灌注后6 h、24 h、48 h、72 h和7 d缺血半暗带AIF的表达,同时利用TUNEL法观察对应区域细胞凋亡的动态变化规律.结果模型组脑缺血再灌注6 h在缺血半暗带区AIF阳性细胞显著增加,再灌注48 h达到高峰[(130.47±11.32)个];各时相点均可见细胞凋亡,凋亡细胞数以再灌注48 h最多f(118.53±11.67)个];各组问比较差异均有统计学意义(JP<0.05).结论 局灶性脑缺血再灌注可致AIF表达增加.并引起细胞凋亡.     

神经调节素在脑缺血再灌注损伤中的抗炎作用机制研究

目的研究神经调节素-1β（NRG-1β）对小鼠脑缺血再灌注损伤后炎症反应的抑制作用和机制。方法应用线栓法建立小鼠大脑中动脉闭塞再灌注（MCAO／R）模型,经颈内动脉微量注射NRG．1B（2μg／kg）干预治疗,氯化三苯基四氮唑（TTC）染色观察脑梗死体积,免疫荧光染色检测神经细胞凋亡,免疫组织化学检测酪氨酸激酶受体（ErbB-4）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。结果脑缺血再灌注损伤后,神经细胞凋亡数量明显增多,并诱导ErbB-4和胶质细胞MMP-9表达增强。应用NRG-1β干预治疗后,缺血脑组织梗死体积和细胞凋亡数量较对照组显著减小,ErbB-4受体表达增强,而胶质细胞MMP-9表达下调（P〈0．05）。结论NRG—1β可能通过下调脑缺血再灌注损伤诱导的胶质细胞MMP-9表达和抑制细胞凋亡,而发挥其抗炎作用。     

葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆障碍保护作用及其机制的研究

目的 探讨葛根素对大鼠全脑缺血再灌注后学习记忆能力的影响及其机制。方法 采用四血管阻断法建立SD大鼠全脑缺血再灌注损伤模型，暗回避反应法测定学习记忆能力，并应用免疫组织化学法、原位末端标记法，检测大鼠全脑缺血再灌注海马CA，区的bcl-2阳性细胞数、凋亡细胞数的动态变化。结果 (1)与再灌注组相比，葛根素组大鼠潜伏期明显延长；(2)脑缺血再灌注后，海马CA1区bcl-2蛋白的表达随再灌注时间不同而变化，缺血20min后再灌注24h达高峰，葛根素组bcl2蛋白的表达于相应的时间点明显增多；(3)脑缺血再灌注后海马CA1区神经元凋亡损伤在再灌注72h损伤最重，葛根素组可减少相应时点神经细胞凋亡数。结论 葛根素对全脑缺血再灌注后大鼠学习记忆能力具有明显的改善作用，其作用机制可能与通过上调bcl-2基因表达从而抑制或延迟脑缺血再灌注后细胞凋亡有关。     

大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织STAT3变化的免疫组织化学研究

目的 探讨信号转导和转录激活子（ＳＴＡＴ）３在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的表达及其与缺血性神经细胞损伤的关系方法 用ＡＢＣ免疫组化方法观察大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织中的ＳＴＡＴ３蛋白免疫反应阳性细胞分布。结果 正常和假手术大鼠脑内以及脑缺血后的非缺血半球脑组织中未发现有ＳＴＡＴ３免疫反应阳性细胞,脑缺血再灌注损伤后１２小时在栓塞侧梗死区可见少量ＳＴＡＴ３免疫阳性细胞,２４小时后阳性细胞显著增多达高峰,在缺血侧纹状体和缺血皮质周边区表达最明显,１周后梗死周边区少数神经细胞仍有阳性表达。差异有显著意义（Ｐ〈０．０１）。结论 ＳＴＡＴ３活化及超量表达可能介导了缺血神经细胞信号转导过程,并参与了脑缺血神经细胞损伤与修复的病理生理过程。     

鼠脑缺血性损伤程度与缺血时间的关系研究

目的 探讨大脑中动脉（ＭＣＡ）闭塞时因侧不同部位的病理演变特。研究一损伤程度与缺血时间的。方法 利用线栓法ＭＣＡ闭塞模型,采用ＨＥ染色,光镜电镜观察ＭＣＡ闭塞不同时相点缺血侧基底节区、皮质和海马的损伤特征,并直接对坏死和暗神经元计数,运用对数方程作出脑损伤程度－缺血时间关系曲线,运算ＥＴ５０值。结果 因３０分钟坏死神经元首先出现在缺血侧基底节区,以后逐渐扩展到皮质,至缺血２４小时后,缺血中心逐步出     

润坦注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元凋亡的影响

目的研究润坦对局灶性脑缺血再灌注的神经保护效应.方法制备线栓法大脑中动脉闭塞再灌注模型,干预组每天给予润坦3 mg/kg,对照组给予等量生理盐水,每日对大鼠神经功能缺损进行评分,于再灌注12 h、24 h、48 h和5 d处死动物,切片作TUNEL原位凋亡检测.结果润坦可以显著改善术后第2 d大鼠的神经功能缺损(P＜0.05),降低致死率,减少再灌注24 h以后的细胞凋亡数目(P＜0.05).结论润坦可以抑制大鼠脑缺血再灌注后神经元凋亡,对急性期脑梗死可能有神经保护效应.     

星形胶质细胞凋亡和脑缺血

星形胶质细胞是脑组织中存在最多的细胞,不仅为神经元提供代谢和营养支持,而且在保护神经元存活、调节突触功能以及神经再生和神经修复中起至关重要的作用[1,2]。一旦星形胶质细胞的功能受损,就会影响神经元的存活。细胞凋亡是程序性细胞死亡的典型形式,有一系列明显的形态学和     

亚低温对大鼠短暂全脑缺血后神经元凋亡的影响

目的 探讨亚低温对大鼠脑缺血后神经元凋亡的影响，揭示亚低温的部分神经保护机制。方法 采用“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法来建立大鼠短暂性全脑缺血模型。用神经元尼氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元损害情况；原位细胞凋亡检测法（TUNEL染色）及电镜观察脑缺血后CA1区神经元凋亡情况。结果 与假手术组、低温缺血组相比，常温缺血组海马CA1区神经元缺失明显（P＜0．01）。常温及低温缺血组海马CA1区均存在神经元凋亡，但低温缺血组海马CA1区凋亡神经元数明显少于缺血组（P＜0．01）。结论 经“双侧颈总动脉阻断＋全身低血压”方法建立的大鼠短暂全脑缺血模型证实了亚低温的脑保护作用。全脑缺血后的迟发性神经元死亡很可能经由凋亡途径，而亚低温可通过抑制缺血性神经元凋亡而发挥一定的神经保护作用。