云芝多糖增强巨噬细胞M-CSF的表达与分泌

为揭示云芝多糖作用与巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达与分泌的关系,采用活性测定、斑点杂交等方法,将云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦ表达及分泌的影响进行了探讨。结果显示,腹腔注射云芝多糖可以提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清中的Ｍ－ＣＳＦ活性,并使巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的含量增加;应用ｍ ＲＮＡ 合成抑制剂及蛋白合成抑制剂的研究发现,ａｃｔｉｎｏｍ ｙｃｉｎ Ｄ及ｃｙｃｌｏｈｅｘｉｍ ｉｄｅ均能阻断云芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞Ｍ－ＣＳＦｍ ＲＮＡ的诱导     

丹蓝仙硼疗氟胶囊对氟中毒大鼠骨保护蛋白配体和巨噬细胞集落刺激因子基因及其蛋白表达水平的影响

目的 研究丹蓝仙硼疗氟胶囊对饮水型氟中毒大鼠骨组织中骨保护蛋白配体(OPGL)和巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)mRNA及其蛋白质表达的影响.方法 以72只SD大鼠为研究对象,按体重均衡随机分为6组(组内雌雄各半):氟中毒组、高剂量药物干预组、中剂量药物干预组、低剂量药物干预组、对照组、硼砂治疗组.除对照组外,各实验组均饮用50 mg/L含氟水,复制氟中毒动物模型.各药物组应用中药丹蓝仙硼疗氟胶囊,高、中、低剂量药物干预组按大鼠每千克体质量每天分别给药0.8、0.4和0.2 g,阳性药物对照(硼砂)剂量为大鼠每千克体质量每天0.8 g.氟电极法检测尿氟、骨氟含量,HE切片观察骨骼病变,并测定骨小梁厚度、骨小梁密度及骨皮质厚度.应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学(EnVision法)染色,观察骨组织中OPGL和M-CSFmRNA及其蛋白表达的变化.结果 (1)氟中毒大鼠10/12发生氟斑牙;低剂量药物干预大鼠2/12发生氟斑牙.中、高剂量药物干预组,正常对照组及硼砂治疗组均无氟斑牙发生.氟中毒组骨氟尿氟明显高于对照组,高中剂量干预组及硼砂治疗组显著降低.(2)与对照组比较,氟中毒大鼠骨小梁厚度、骨皮质厚度及骨小梁密度均明显减少,而各药物组大鼠骨小梁厚度、骨皮质厚度及骨小梁密度均与对照组无明显差异.(3)与对照组比较,氟中毒大鼠骨组织OPGL、M-CSF mRNA表达均增高,差异有统计学意义(P＜0.05).与氟中毒组比较,高、中剂量药物干预组及硼砂治疗组OPGL mRNA表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05);高、中、低剂量药物干预组及硼砂治疗组M-CSFmRNA表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)与对照组比较,氟中毒大鼠OPGL蛋白表达增高,M-CSF蛋白表达降低;与氟中毒大鼠比较,高、中、低剂量药物干预组及硼砂治疗组OPGL蛋白表达降低,M-CSF蛋白表达有所升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 氟可能通过上调OPGL和M-CSFmRNA及其蛋白的共同表达而影响骨代谢;丹蓝仙硼疗氟胶囊能通过下调OPGL mRNA和M-CSF mRNA的表达影响骨重建.     

肿瘤抗原触发M-CSF和IFN-γ联合基因转染的巨噬细胞抗肿瘤转移作用的研究

目的本研究探讨了肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因联合转染的巨噬细胞对黑色素瘤实验性肺转移的治疗作用及其免疫机理。方法将联合基因转染的巨噬细胞经尾静脉回输治疗黑色素瘤实验性肺转移小鼠，经治疗后于荷瘤后第１７天处死小鼠，计数荷瘤小鼠的肺部转移结节数并观察其长期存活期，用５１Ｃｒ４小时释放法检测体外诱导的ＣＴＬ活性，采用未配对计量资料的ｔ检验处理数据。结果联合基因转染后治疗组的小鼠长期存活率为１６％，加用肿瘤抗原触发后的治疗组有３３％的小鼠长期存活。小鼠脾细胞经体外诱导的ＣＴＬ对野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的杀伤活性，在经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ联合基因转染巨噬细胞治疗的荷瘤小鼠最高，与用未经抗原触发的联合基因转染巨噬细胞治疗组差异有显著性（Ｐ＜０．０５）。结论体外经肿瘤抗原触发的Ｍ－ＣＳＦ、ＩＦＮ－γ联合基因转染的巨噬细胞过继回输疗法是肿瘤特别是转移性肿瘤的一种有效免疫治疗手段，机体的ＣＴＬ在该疗法的抗肿瘤作用中可能发挥了重要的作用。     

小鼠腹腔巨噬细胞A型清道夫受体的研究

目的:研究A型清道夫受体在摄取氧化型低密度脂蛋白中的作用。方法:选用离体A型清道夫受体基因敲除和基因未敲除小鼠腹腔巨噬细胞作为实验对象,通过比较两组细胞对氧化型低密度脂蛋白结合和摄取的差异,来分析A型清道夫受体在摄取氧化型低密度脂蛋白中的作用。结果:基因敲除组小鼠腹腔巨噬细胞对氧化型低密度脂蛋白的摄取较基因未敲除组少35.8%,对氧化型低密度脂蛋白的降解较基因未敲除组少42%。结论:A型清道夫受体在摄取氧化型低密度脂蛋白中不占主导地位,有大约70%的氧化型低密度脂蛋白可能通过非A型清道夫受体途径被摄取。     

粒-巨噬细胞集落刺激因子与绿色荧光蛋白融合基因慢病毒载体构建

目的：构建粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与绿色荧光蛋白（GFP）融合基因慢病毒载体。 方法： 采用RT-PCR方法获得GM-CSF全外显子片段, 使之克隆到带GFP慢病毒表达载体质粒 FUGW中，经限制性酶切、PCR扩增和测序鉴定重组载体。在脂质体介导下将慢病毒包装系统的包装结构基因pCMV.△8.9、包膜基因VSVG、目的基因FUGW-GM-CSF导入病毒包装细胞293T，荧光显微镜检测基因的表达，包装成病毒后，收集病毒上清，浓缩，鉴定。用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测转染FUGW-GM-CSF细胞上清液 GM-CSF表达水平，电子显微镜观察293T细胞中的慢病毒。 结果： 限制性内切酶酶切和DNA测序分析证实RT-PCR获得的GM-CSF/PCR产物与GenBank中的数据完全吻合; GM-CSF准确克隆入FUGW的多克隆位点。慢病毒的3种质粒可高效转染入293T细胞，荧光显微镜下观察可见大量绿色荧光。转染 FUGW-GM-CSF包装细胞上清液 GM-CSF酶联反应阳性。电子显微镜下见慢病毒颗粒位于293T细胞胞浆的内质网中。 结论： 成功构建了GM-CSF与GFP融合基因慢病毒载体，为诱导DC提供了适合的稳定转染的载体。     

腺病毒介导M-CSF和IFN-γ基因联合转染对巨噬细胞抗原提呈功能的影响

研究观察了Ｍ－ＣＳＦ和ＩＦＮ－γ基因转染的巨噬细胞（Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ，Ｍφ）的体外抗原提呈能力，并对其机制进行了初步探讨，结果表明，ＩＦＮ－γ基因转染及Ｍ－ＣＳＦ／ＩＦＮ－γ联合基因转染的Ｍφ抗原提呈功能显著增强，联合基因转染组优于单基因转染组（Ｐ＜０．０５），Ｍφ表面Ｉａ、Ｂ７－１、ＩＣＡＭ－１的表达水平有不同程度的提高，这些细胞表面相关分子的高表达可能与其抗原提呈能力增加有关。混合淋巴细胞反应结果提示，当用５倍于Ｍφ量的肿瘤细胞制备的肿瘤抗原触发４ｈ，Ｔ淋巴细胞的增殖能力最强，该结果为过继回输肿瘤抗原体外触发的基因转染的Ｍφ治疗肿瘤提供了实验依据。     

牙周病患者治疗前后血清hs-CRP、TNF-α和M-CSF检测的临床意义

目的:探讨了牙周病患者治疗前后血清hs-CRP、TNF-α和M-CSF水平的变化及意义.方法:应用放免法和免疫比浊法对38例牙周病患者进行了治疗前后血清hs-CRP、TNF-α和M-CSF水平变化的观察,并与35名正常健康人作比较.结果:牙周病患者在治疗前血清hs-CRP、TNF-α和M-CSF水平非常显著地高于正常人组(P＜0.01)经系统治疗后3个月,则与正常人比较无显著性差异(P＞0.05).结论: 检测牙周病患者血清hs-CRP、TNF-α和M-CSF水平的变化对探讨其发病机理、预防和指导用药均有重要价值.     

冠心病患者血清hs-CRP和M-CSF检测的临床意义

目的：探讨了冠心病患者血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）和巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）检测的临床意义。方法：应用免疫比浊法测定hs-CRP、放免法测定M-CSF,对71例冠心病患者进行了测定,其中稳定型心绞痛35例,不稳定型心绞痛21例,急性心肌梗死15例,进行了血清hs-CRP和M-CSF水平的测定,并以35名正常健康人作比较。结果：冠心病患者血清hs-CRP和M-CSF水平明显地高于正常人组（P〈0．01）,急性心肌梗死组和不稳定型心绞痛组又高于稳定型心绞痛组（P〈0．05）,冠心病组血清hs-CRP、M-CSF水平与冠状动脉狭窄程度无明显的相关性（P〉0．05）。结论：血清hs-CRP、M-CSF水平的变化与冠心病的发生、发展有关,但与冠状动脉狭窄程度无关。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子治疗肺泡蛋白沉积症1例

收集1例肺泡蛋白沉积症(pulmonary alveolar proteinosis,PAP)患者临床资料并相关文献复习.患者因气短4个月,加重1个月入院,行纤维支气管镜活检.经过碘酸雪夫(Periodic acid-Schiff,PAS)染色阳性明确诊断为PAP,在经2次全肺灌洗治疗,病情反复后给予皮下注射粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子,病情得到改善,提示对特发性PAP患者皮下注射粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子是一种可行的治疗方法.     

罗格列酮对ox-LDL诱导的系膜细胞Lox-1表达的影响及其抗氧化作用的研究

目的:观察罗格列酮对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的系膜细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（Lox-1）表达及其抗氧化作用。 方法:培养大鼠系膜细胞，分为空白对照组、ox-LDL组、罗格列酮组和罗格列酮+ox-LDL组，培养24 h后,用RT-PCR检测系膜细胞Lox-1 mRNA表达情况，用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。 结果:系膜细胞中有Lox-1表达，ox-LDL诱导后表达增加，并导致系膜细胞SOD活性下降和MDA含量明显高于（分别为SOD：15.250±0.083，MDA：2.270±0.004）对照组（分别为SOD：19.950±0.079，MDA：1.250±0.002），P<0.05。罗格列酮可明显降低ox-LDL诱导引起Lox-1表达水平，P<0.05，同时也使SOD活性增加（20.060±0.082）和MDA含量（1.360±0.003）降低。 结论:罗格列酮可能通过抑制ox-LDL的受体Lox-1的表达及由其引起的氧化应激，从而减轻ox-LDL对肾脏的损伤。     

大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除途径的影响

本文应用同位素双标记示踪方法、巨噬细胞功能测定和斑点杂交力法,观察了大槐合剂对实验性高胆固醇血症大鼠LDL清除的受体途径和非受体途径(单核巨噬细胞系统)的影响。与造型组比较,大槐合剂组LDL经受体途径和非受体途径的部分清除率(FCR)均显著增加(P<0.01,P<0.05),非受体途径的第二指数曲线半衰期(t1/2)明显缩短(P<0.05)。单核巨噬细胞系统吞噬功能显著增强,吞噬指数(K,K’)和校正吞噬指数(α)显著增加(P<0.001,P<0.001,P<0.05),半量清除时间(t1/2)显著缩短(P<0.001)。肝胞液LDL受体mRNA表达的相对水平显著增加(P<0.05)。结果提示:大槐合剂可同时促进受体和非受体途径清除LDL的作用。为通过刺激单核巨噬细胞系统功能以治疗纯合子家族性高胆固醇血症(FH)的可能性提供依据。     

氧化低密度脂蛋白自身抗体与冠心病的关系

目的:探讨氧化低密度脂蛋白自身抗体(ox-LDL Ab)与冠心病及低密度脂蛋白(LDL)的关系。方法:提取血清,用ELISA方法测定ox-LDL Ab滴度。结果:冠心病患者ox-LDL Ab滴度明显高于正常对照组(P<0 05);ox-LDL Ab与LDL直线相关(r=0.3338,P<0.05)。结论:ox-LDL Ab与冠心病有明显相关性,自身免疫反应可能参与动脉粥样硬化的形成。     

Ultrastructural effects of granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) and macrophage colony stimulating factor (M-CSF) on rat neutrophils and monocytes

Human granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) and macrophage colony stimulating factor (M-CSF) were administered intravenously to rats, and their effects on neutrophils and monocytes were examined by electron microscopy. G-CSF increased the number of cytoplasmic granules in neutrophils. It also enhanced maturation of the nuclear shape in the neutrophils, while chromatin condensation and peroxidase distribution remained immature. M-CSF induced proliferation of monocytes in peripheral blood and bone marrow, but did not affect morphology or distribution of peroxidase reactivity. This study was presented at the 25th Annual Meeting of the Clinical Electron Microscopy Society of Japan, Matsumoto, September 28–30, 1993.     

巨噬细胞集落刺激因子及其受体mRNA在人卵泡颗粒细胞和胎盘及子宫内膜中的表达

目的： 观察巨噬细胞集落刺激因子（MCSF）及其受体（MCSFR）在人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞中的表达情况，进一步了解它们在生殖生理中的作用。方法： 收集人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞标本。采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）及原位逆转录-聚合酶链式反应（in situ RT-PCR）技术观察MCSF及MCSFR mRNA的表达情况。结果： 在人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞中，RT-PCR显示有MCSF及MCSFR的表达，原位RT-PCR也进一步证实了这一点,并定位于细胞浆。结论： MCSF可能参与了人卵泡颗粒细胞、胎盘及子宫内膜细胞生长、发育的调节，在生殖生理过程中可能起一定的作用。     

丹参素对氧化低密度脂蛋白致血管平滑肌细胞增殖的影响和机制

目的： 探讨丹参素(DSS)对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）致血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响和机制。方法： 采用反复贴块法培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养成功后,采用第3-10代细胞应用于实验。分4组：对照组,ox-LDL(50 mg/L)组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（50 mg/L）组,ox-LDL(50 mg/L)+DSS（100 mg/L）组;用单个核细胞直接细胞毒性测定(MTT)法检测吸光度(A值),观察DSS对ox-LDL致VSMCs增殖的影响;RT-PCR法观察丹参素对血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）表达的影响。结果：丹参素可明显降低ox-LDL 引起的A值升高,丹参素可降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平的升高。结论：丹参素可对抗ox-LDL致血管平滑肌细胞的增殖,其可能通过降低ox-LDL引起的PDGF-BB表达水平升高而发挥作用。     

氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞移动抑制因子的表达

目的:探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对人巨噬细胞分泌巨噬细胞移动抑制因子(MIF)的影响。方法:体外培养巨噬细胞株28SC,在其培养基中加入终浓度为150mg/L的氧化型低密度脂蛋白进行时间效应实验,37℃共育后,分别于0h、3h、6h、12h、24h、36h收集细胞和培养介质;在其培养基中分别加入终浓度为0mg/L、15mg/L、30mg/L、75mg/L、150mg/L、300mg/L的氧化型低密度脂蛋白进行剂量效应实验,37℃共育24h后收集细胞和培养介质。采用RT-PCR和ELISA分别测定MIFmRNA和蛋白表达水平。结果:氧化型低密度脂蛋白可诱导培养巨噬细胞分泌MIFmRNA和蛋白,并呈时间和剂量依赖性增加。结论:MIF可能参与氧化型低密度脂蛋白所致的动脉粥样硬化进程。     

轻度氧化LDL在动脉粥样硬化早期病变中的作用

本文发现轻度氧化ＬＤＬ（ｍｍ－ＬＤＬ）可促进ＨＬ６０细胞与牛主动脉内皮细胞粘附，其作用程度与氧化修饰ＬＤＬ（Ｏｘ－ＬＤＬ）无明显差异。还发现ｍｍ－ＬＤＬ可明显提高巨噬细胞、平滑肌细胞中胆固醇酯的蓄积，但程度低于Ｏｘ－ＬＤＬ的作用。细胞上ＬＤＬ受体活性及基因表达可随细胞与ｍｍ－ＬＤＬ或Ｏｘ－ＬＤＬ孵育时间延长表现出下行性调节，从另一侧面证明细胞内存在脂质蓄积。     

胱抑素C对氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的： 研究胱抑素C（cystatin C）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人血管平滑肌细胞（VSMC）的作用，以探讨cystatin C在心血管疾病中的生物学特性。方法：利用ox-LDL诱导人VSMC，MTT法检测ox-LDL诱导时间及浓度对细胞存活率的影响，确定ox-LDL最佳诱导浓度和时间，将对数生长期的人VSMC随机分成正常细胞组、pCDNA3.1-cystatin C转染组、ox-LDL诱导组以及ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组，检测各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、三磷酸腺苷（ATP）生成量以及caspase-3活性变化，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法测定各组凋亡相关基因bax、bcl-2和Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组与ox-LDL诱导组比较，LDH、ROS生成量和caspase-3表达量明显降低，差异有统计学意义（P<0.01）；ATP生成量显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）。RT-PCR和Western blotting法测定显示ox-LDL诱导组促凋亡基因bax及Bax蛋白表达增加、抗凋亡基因bcl-2和Bcl-2蛋白表达减少，ox-LDL＋pCDNA3.1-cystatin C转染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Cystatin C抑制ox-LDL诱导的VSMC凋亡，其机制可能与其上调Bcl-2及下调Bax表达有关。     

低密度脂蛋白免疫复合物对单核细胞来源巨噬细胞胆固醇代谢和细胞因子分泌的影响

目的：探讨低密度脂蛋白免疫复合物（LDL-IC）对单核细胞来源巨噬细胞胆固醇代谢和细胞因子分泌的影响。 方法： 用胆固醇酶联法测定细胞内胆固醇含量，ELISA法检测培养上清TNFα和IL-1β水平。 结果： LDL-IC组细胞内胆固醇含量及上清TNFα、IL-1β水平均明显高于LDL、IgG-IC及阴性对照组。 结论： LDL-IC可以显著增加细胞内胆固醇含量与培养上清TNFα和IL-1β的水平，提示LDL-IC能通过干扰细胞脂质代谢及细胞因子分泌而在AS中起重要作用。