肺癌组织细胞中CHFR基因表达水平及其启动子甲基化状态

目的：探讨CHFR（checkpoint with FHA and ring finger）基因表达水平及其启动子CpG岛甲基化状态与肺癌发生发展的关系。方法：实时定量PCR法检测CHFRmRNA在45例肺癌组织、23例癌旁组织与去甲基化剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理前后A549细胞株中的表达,同时用甲基化特异性PCR检测CHFR启动子CpG岛甲基化状态。结果：CHFRmRNA在癌旁组织中全部表达,在肺癌组织中表达缺失率为15．56％（7／45）,且表达量低于正常肺组织,F=9．156,P〈0．01;但在不同年龄、性别、肿瘤大小、恶性程度和肿瘤分类中的差异无统计学意义,P〉0．05。CHFR基因启动子在肺癌组织中发生甲基化的频率为22．22％（10／45）,在癌旁组织未发生甲基化,χ^2=5．992,P〈0．05。10例启动子区甲基化的肺癌标本中,7例同时伴有mRNA表达缺失。结论：CHFR启动子甲基化可在肺癌发生和发展中起一定作用。     

非小细胞肺癌RASSF1A启动子甲基化状态临床研究

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中RASSF1A启动子的甲基化状态及临床意义.方法 采用甲基化特异的PCR(MSP)检测150例NSCLC、34例癌旁正常组织和20例肺部良性病变中RASSF1A启动子甲基化状态.结果 150例NSCLC中58例发现RASSF1A启动子存在甲基化(38.7%),34例癌旁正常组织和20例肺部良性病变无一例发现RASSF1A启动子甲基化.RASSF1A启动子甲基化与年龄、性别、吸烟指数、组织类型、TNM临床分期均无关(P＞0.05),与开始吸烟年龄、肿瘤分化程度相关(P＜0.05).结论 RASSF1A启动子甲基化状态可以作为NSCLC诊断的一个候选分子标志.     

人肺癌细胞中TSLC1基因表达缺失与DNA甲基化的相关性研究

背景与目的TSLC1在多种肿瘤中表达下调或失活,其表达下调与DNA高甲基化有很大关系。本研究旨在探索TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失与其启动子区DNA甲基化的关系。方法采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测TSLC1在正常肺组织和3种肺癌细胞系(A549、NCI-H446和Calu-3)中的表达谱;运用亚硫酸氢盐修饰后测序(bisulfite sequencing)方法检测上述正常肺组织和肺癌细胞中TSLC1启动子区的甲基化状态;应用甲基化转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理上述细胞后,采用Real-time PCR方法检测处理前后TSLC1的表达变化。结果TSLC1在正常肺组织和A549细胞中表达,其启动子区DNA未发生甲基化;而在NCI-H446和Calu-3细胞中表达缺失,其启动子区DNA发生高甲基化,并且5-Aza-dC处理NCI-H446和Calu-3细胞后可促进TSLC1的表达。结论TSLC1在肺癌细胞中的表达缺失是由其启动子区的DNA高甲基化引起。     

非小细胞肺癌中ASC基因启动子甲基化的意义

目的 :探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中ASC基因启动子甲基化与患者临床特征之间的关系以及去甲基化试剂对肺癌细胞系中ASC基因甲基化状态的逆转。 方法 :应用甲基化特异性PCR(MSP)检测48例NSCLC患者肿瘤组织和3株肺癌细胞系中ASC基因的甲基化状态,RT-PCR检测去甲基化试剂诱导肺癌细胞系中甲基化ASC基因的重新表达。 结果 :NSCLC肿瘤组织和相对应的正常肺组中ASC基因启动子甲基化的发生率分别为49.7%和8.3%,二者之间有显著性差异(P<0.01)。重度吸烟患者的肿瘤组织中ASC基因启动子甲基化的发生率明显增高(P<0.05),早期的NSCLC(T1)中ASC基因启动子甲基化也有相对较高的发生率(P<0.05)。去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine)可使甲基化的ASC基因启动子发生逆转而获得重新表达。 结论 :ASC基因启动子的甲基化可能与吸烟引起的非小细胞肺癌有关,并可能是非小细胞肺癌发展过程中的一个早期事件,甲基化的ASC基因可以成为NSCLC治疗的靶点。     

肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化定量检测研究

背景与目的：APC基因编码的蛋白参与信号转导途径,大量研究证实APC启动子区的高甲基化在肿瘤的发生发展中起重要作用。本研究建立血浆APC基因实时荧光定量甲基化特异性基因扩增（methylation—specific PCR,MSP）检测方法,并对临床肺癌患者血浆进行检测,以确定该方法在肺癌诊断中的应用价值。方法：将APC基因启动子甲基化阳性肺癌细胞株NCI—H460细胞用有限稀释法获取单个集落形成的细胞,以经典的酚一氯仿法提取细胞DNA,并用MSP对APC基因甲基化进行验证,紫外分光光度计定量并以10倍稀释的浓度梯度依次投入到200μL健康人血浆中．得到模拟肺癌患者血浆,利用磁珠核酸提取方法从模拟肺癌及肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者血浆中提取DNA,对血浆DNA模板进行亚硫酸氢盐化学修饰;以模拟血浆样品作为标准品,采用外标准曲线法对各种血浆样品中APC甲基化进行定量分析。结果：所建立的实时荧光定量MSP检测方法的线性范围为1．5×10^2-1．5×10^5拷贝／mL。用该方法检测甲基化肿瘤细胞的DNA其最低检测限为1．5×10^2拷贝／mL。78例肺癌患者有40例组织中检测出APC基因甲基化阳性．其中的19例（47．5％）肺癌患者血浆中APC基因启动子甲基化阳性,APC甲基化浓度为1．67×10^2-6．78×10^3拷贝／mL,中位浓度为1．60×10^3拷贝／mL。38例组织阴性的肺癌患者、31例肺部良性疾病患者和23例健康者的血浆APC基因启动子甲基化均为阴性。结论：实时荧光定量MSP检测血浆APC基因甲基化在肺癌诊断方面具有潜在应用价值。     

非小细胞肺癌中FHIT基因异常甲基化对其蛋白、mRNA表达的影响

背景与目的 脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)是一种新的抑癌基因,其启动子甲基化在肿瘤的发生和发展过程中发挥重要作用.本研究的目的 是通过检测非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中抑癌基因FHIT启动子CpG岛异常甲基化和蛋白、转录表达情况及其相互关系,探讨FHIT基因在NSCLC发生发展中的作用.方法 应用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)、免疫印迹(Western Blot)及RT-PCR测定52例NSCLC组织及其癌旁正常组织(>5 cm)中FHIT的甲基化、蛋白表达和转录水平.结果 NSCLC癌组织中FHIT甲基化率为38.46%(20/52),在癌旁正常组织中FHIT甲基化率为7.6996(4/52),两者差异存在统计学意义(P<0.05);癌组织中FHIT蛋白表达率为28.8%(15/52),癌旁正常组织FHIT蛋白表达率为88.5%(46/52),两者差异存在统计学意义(P=0.000);FHIT mRNA在癌组织中表达率为51.9%(27/52),在癌旁正常组织中全部表达,且表达量明显高于癌组织(P=0.000).结论 在NSCLC中,FHIT基因启动子甲基化频率明显升高,其蛋白表达率明显下降,mRNA表达率下降,提示FHIT启动子甲基化在肺癌的发生和发展中起着一定作用,而且FHIT基因的甲基化与蛋白及mRNA的表达存在一定的关系.     

人乳腺癌细胞系RUNX3基因启动子甲基化状态研究

目的：探讨人乳腺癌细胞系中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态,并分析其与RUNX3基因表达的相关性。方法：运用甲基化特异性PCR（MSP）检测5种乳腺癌细胞系和一种人类正常乳腺细胞系中RUNX3启动子甲基化状态,运用RT-PCR和Western印迹检测这些细胞系中RUNX3基因mRNA和蛋白的表达。结果：在6种细胞系中,有两种（T47D、MCF7）呈高甲基化状态,并且这两种细胞系的RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。SKBR3中没有检测出RUNX3启动子区的甲基化,但RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。结论：乳腺癌细胞系中RUNX3基因由于启动子区甲基化而失活,但尚有其它失活机制存在,需进一步研究探讨。     

人乳腺癌细胞系RUNX3基因启动子甲基化状态研究

目的:探讨人乳腺癌细胞系中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态,并分析其与RUNX3基因表达的相关性。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测5种乳腺癌细胞系和一种人类正常乳腺细胞系中RUNX3启动子甲基化状态,运用RT-PCR和Western印迹检测这些细胞系中RUNX3基因mRNA和蛋白的表达。结果:在6种细胞系中,有两种(T47D、MCF7)呈高甲基化状态,并且这两种细胞系的RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。SKBR3中没有检测出RUNX3启动子区的甲基化,但RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。结论:乳腺癌细胞系中RUNX3基因由于启动子区甲基化而失活,但尚有其它失活机制存在,需进一步研究探讨。     

异常甲基化与肺癌

肺癌患者体内特定基因如抑癌基因启动子异常甲基化是癌症发生的早期分子事件.异常甲基化可导致相应的mRNA沉默或过表达,与肺癌发生、发展、疗效和预后密切相关,是潜在的分子标志物.特异基因的异常甲基化有望为肺癌个体化治疗提供依据.     

应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因

目的克隆维甲酸诱导的人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞分化相关基因。方法在全反式维甲酸诱导人肺腺癌ＧＬＣ８２细胞系分化的基础上,采用ｍＲＮＡ差异显示技术,对这个细胞系以全反式维甲酸诱导前及诱导后８小时、２４小时和４天的细胞基因表达差异情况进行分析。结果在全反式维甲酸诱导前后的细胞之间存在明显的基因表达差异。有些基因经维甲酸（ＲＡ）诱导后持续表达或瞬时表达,而有些基因经ＲＡ作用后表达水平降低或完全被抑制。经克隆筛选,获得了一些经全反式维甲酸诱导激活或抑制的差异表达基因片段,对其中的３个片段进行了序列分析和同源性比较。结论全反式维甲酸具有调控分化相关基因表达与否的重要作用,由ＲＡ诱导的肿瘤细胞再分化是一个多基因参与的过程     

肿瘤易感基因101在胃癌细胞中的表达及意义

目的　探讨肿瘤易感基因 10 1(TSG10 1)在不同胃癌细胞系中的表达及其意义。方法　采用巢式RT PCR、DNA重组技术和Westernblot等方法从mRNA和蛋白水平检测TSG10 1的表达。结果　在 7株胃癌细胞系中均有野生型TSG10 1表达 ,经测序分析无基因突变 ;此外 ,尚存在 1个 2 88bp的剪接变异体 ;在胃癌细胞系MKN4 5、SGC790 1及其耐药亚系SGC790 1/VCR和SGC790 1/ADR中 ,还发现 1个 874bp的剪接变异体 ;并发现野生型TSG10 1在SGC790 1/VCR和SGC790 1/ADR中的表达较亲本细胞SGC790 1增高。结论　TSG10 1及其剪接变异体的表达在胃癌细胞系中常见 ,野生型TSG10 1可能参与了胃癌多药耐药的发生。     

MAGE基因mRNA在肺癌细胞中的表达

目的　检测MAGE 1、 2、 3、 4基因在肺癌细胞及癌旁正常肺组织中mRNA的表达水平。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)方法对 3 5例肺癌患者肿瘤组织和癌旁正常肺组织进行MAGE 1、 2、 3、 4mRNA表达检测。结果　 3 5例肺癌肿瘤标本中MAGE 1、 2、 3、 4的阳性表达率分别为 2 2 .9% ( 8/3 5 )、62 .9% ( 2 2 /3 5 )、3 7.1% ( 13 /3 5 )、77.1% ( 2 7/3 5 ) ;四种基因至少有一种表达的几率是 85 .7% ( 3 0 /3 5 ) ;两种或两种以上同时表达几率是 71.4% ( 2 5 /3 5 )。癌旁正常肺组织四种基因均不表达。MAGE基因的表达在肺腺癌和鳞癌 ,在不同分期的非小细胞肺癌间无差异 ,并且与淋巴结转移与否无关 (P >0 .0 5 )。结论　MAGE 1、 2、 3、 4在肺癌组织中有较高比例的表达 ,癌旁正常肺组织中无表达。这提示MAGE抗原用于肺癌的主动免疫治疗具有良好的前景     

肺癌组织中耐药相关基因的表达水平及其临床意义

目的 探讨肺癌组织耐药相关基因产物的表达水平及其临床意义。方法 采用免疫组化法S－P对60例肺癌组织及30例癌旁肺组织中Pgp,MRP,GST-π，TopoⅡ进行检测。结果 肺癌组织中Pgp,MRP,GST- π，TopoⅡ表达阳性率分别为40．0％（24／60）、61．7％（37／60）、45．0％（27／60）、81．7％（49／60），均明显高于癌旁肺组织（P＜0．01），上述耐药相关基因表达阳性率与肺癌TNM分期、病理类型、细胞分化程度、淋巴结转移状态均无显著关系（P＞0．05）。结论 肺癌在癌变发生过程中其耐药相关基因均有不同程度的过度表达，联合检测这些基因的表达水平有助于指导化疗。     

10个基因的启动子CpG岛甲基化状态与乳腺癌细胞对5-氟尿嘧啶敏感性的关系

目的 探讨10个基因的启动子CpG岛甲基化状态与乳腺癌细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的关系,确定与乳腺癌细胞株5-Fu敏感性相关的启动子CpG岛类基因.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测Bcap-37、T47D和ZR-75-30乳腺癌细胞株对5-Fu的敏感性.应用甲基化特异性PCR(MSP)方法,检测3株对5-Fu敏感性有差异的乳腺癌细胞株中BAG1、C110RF31、CBR1、CBR4、GJA1、FOXL2、IGFBP6、P4HA1、SRI和TYM基因的启动子CpG岛甲基化状态,并用实时定量PCR的方法检测PKSS21、LOX、IGFBP6、ABCC8和CHFR基因的稳定态mRNA表达的水平.结果 IGFBP6和FOXL2基因在对5-Fu敏感和耐药的乳腺癌细胞株中的甲基化状态有差异.除CHFR基因以外,PRSS21、LOX、IGFBP6和ABCC8基因的表达水平与启动子CpG岛甲基化状态有关,处于甲基化状态时表达水平低,而在处于去甲基化状态时表达水平高.结论 在敏感和耐药乳腺癌细胞株中存在甲基化状态差异的基因为IGFBP6和FOXL2基因,这为进一步开展DNA甲基化标志在乳腺癌化疗耐药中的应用研究提供了依据.     

肺癌组织中错配修复基因hMLH1 启动子甲基化状态分析

目的 探讨肺癌组织中错配修复基因ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及其与蛋白表达的关系。方法 用ＨｐａⅡ酶切ＰＣＲ及ＳＰ免疫组织化学方法,分析５０例肺癌标本ｈＭＬＨ１启动子甲基化状态及蛋白表达。结果 ｈＭＬＨ１启动子甲基化有１６例,占３２．０％（１６／５０）。ｈＭＬＨ１启动甲基化与性别、吸烟状态及临床病理无明显的相关性。ｈＭＬＨ１蛋白表达阴性的１４例中,１１例有甲基化（７８．６％）;而３２例蛋白表达阳性者中,只有５例甲基化（１５．６％）。结论 ｈＭＬＨ１启动子区在肺癌组织中有中等频率的甲基化,是ｈＭＬＨ１蛋白表达降低的主要原因之一。     

肺鳞癌、腺癌中p14 ARF基因启动子区甲基化及蛋白表达的研究

背景与目的 p14^ARF基因是新近发现的抑癌基因，其异常表达与多种人类肿瘤发生有关，启动子区异常甲基化作为p14^ARF基因失活的重要形式可能参与了肿瘤的发生。本研究通过检测肺鳞癌、腺癌中p14^ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达，探讨p14^ARF启动子区甲基化与肺癌的关系。方法 通过免疫组织化学（IHC）、甲基化特异性PCR（MSP）和相关限制性内切酶PCR（RF-PCR）方法，检测40例肺鳞癌、腺癌组织中p14^ARF启动子区甲基化状态和蛋白表达水平。结果 癌组织及癌旁正常组织中p14^ARF启动子区甲基化阳性率分别为17．5％（7／40）和2．5％（1／40）（P-0．025）。RE-PCR检测结果相同。癌组织及癌旁正常组织中p14^ARF蛋白阳性率分别为70．0％（28／40）和95．0％（38／40）（P-0．003）。p14^ARF基因启动子区甲基化和蛋白表达均与肿瘤分期、组织类型、分化程度、淋巴结转移等临床病理特征无明显关系（P＜0．05）。p14^ARF启动子区甲基化与蛋白表达呈负相关（r=-0．56，P=0．001）。结论 启动子区甲基化是p14^ARF基因失活的重要机制。p14^ARF启动子区异常甲基化可能参与了非小细胞肺癌的发生，是肺癌发生过程的早期事件。     

循环肿瘤细胞在肺癌中的研究

循环肿瘤细胞(CTC)是存在于外周血中的肿瘤细胞,在肺癌复发及转移过程中有重要作用.随着目前对CTC的研究及靶向治疗的不断深入,发现CTC可作为一种“液态”肿瘤组织指导临床治疗,对肺癌临床分期有一定指导意义,并对预后判断具有重要价值.