补骨脂定对骨髓间充质干细胞向癌相关成纤维细胞分化的抑制作用

目的探讨不同来源的间充质干细胞(MSCs)在癌细胞诱导下分化成癌相关成纤维细胞(CAFs)的情况,观察补骨脂定对人骨髓间充质干细胞(h BMSCs)和人脐带间充质干细胞(h UCMSCs)向CAFs分化的影响。方法利用Transwell小室,建立h BMSCs和h UCMSCs与4种女性特发恶性肿瘤细胞(BT-549、HEC-1B、Hela和SK-OV-3)共培养模型。梯度浓度的补骨脂定处理h BMSCs和h UCMSCs后,用Compu Syn软件计算半数抑制浓度(IC50),后续用10μmol·L-1补骨脂定处理各组细胞。用细胞增殖毒性(CCK-8法)检测细胞的增殖活性;流式细胞术分析细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;用免疫印迹检测细胞中p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果补骨脂定对h BMSCs和h UCMSCs的IC50分别是477.34和364.83μmol·L-1;在10μmol·L-1浓度下,对两种细胞活性的抑制率分别为(3.77±1.65)%和(3.70±2.11)%,均小于5%。h BMSCs与4种癌细胞共培养后,h BMSCs中α-SMA表达阳性率上升,肿瘤细胞的增殖活性增强,其p-JAK2和p-STAT3的表达水平上升;补骨脂定能显著抑制共培养体系中的上述现象。在共培养体系中,h UCMSCs中α-SMA表达阳性率不变,癌细胞的增殖活性却受抑制,其p-JAK2和p-STAT3的表达下降;补骨脂定不影响h UCMSCs中α-SMA、p-JAK2和p-STAT3的表达,但能增强h UCMSCs对癌细胞活性的抑制作用。结论在Transwell共培养环境中,补骨脂定可抑制h BMSCs向CAFs分化,降低癌细胞恶性增殖活性。     

非病毒载体携带Cbfa1诱导成人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的研究

目的:观察核心结合因子a1(Cbfa1)对成人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)向成骨细胞定向分化的诱导作用。方法:经密度梯度离心法和贴壁筛选法获得hBMSCs。非病毒载体FuGene HD携带Cbfa1转染hBMSCs后7、14d,经Real-time PCR分析hBMSCs成骨细胞标志基因表达,包括Cbfa1、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OC)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原;培养1、2和3周,ALP染色、钙结节染色检测成骨分化。结果:培养的hBMSCs阳性表达CD73,阴性表达CD34。第3代细胞增殖曲线呈"S"形,符合对数生长曲线。Cbfa1转染hBMSCs表现出与成骨细胞相似的形态,成骨细胞标志基因ALP、OC、OPN和Ⅰ型胶原的表达均明显上调,ALP染色阳性,并且有明显的钙结节形成。结论:非病毒载体携带Cbfa1转染hBMSCs可诱导其向成骨细胞分化。     

人绒毛膜来源的间充质干细胞成骨成脂分化潜能

目的:探讨人绒毛膜来源的间充质干细胞(hCDMSC)体外生长特性和成骨成脂分化潜能,证实人绒毛膜来源的间充质干细胞作为组织工程种子细胞的可行性.方法:取胎盘组织基蜕膜面用胶原酶和胰蛋白酶法分离培养,通过传代扩增观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖曲线,体外向成骨、成脂诱导分化,茜素红和油红O染色鉴定细胞分化能力,RT-P...     

低氧激活自噬促进人间充质干细胞成骨分化的研究

目的 探讨低氧对人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成骨分化的效应及分子机制。方法 在正常氧压(20% O₂)和低氧(5% O₂)条件下培养hMSCs;采用成骨分化诱导液(BDM)诱导hMSCs成骨分化;利用茜素红染色法考察细胞钙沉积情况;通过Western blotting检测细胞自噬相关蛋白的表达水平以及MAPK、PI3K-AKT-mTOR信号通路的激活情况。结果 低氧条件下,hMSCs钙沉积较常氧条件增强;BDM诱导hMSCs成骨分化过程伴随着LC3表达增加,抑制细胞自噬可以明显减弱低氧促进的细胞钙沉积;低氧促进的细胞发生钙沉积伴随着MAPK以及PI3K-AKT-mTOR信号通路的失活;抑制MAPK以及PI3K-AKT-mTOR信号通路有利于细胞自噬发生,进而促进hMSCs钙沉积。结论 低氧下可以通过激活细胞自噬来促进hMSCs成骨分化,抑制MAPK以及PI3K-AKT-mTOR信号通路可以进一步促进细胞自噬的发生,从而协同促进hMSCs成骨分化。     

人脐带间充质干细胞和大鼠激活态雪旺细胞联合培养的实验研究

目的:探讨体外分层共培养条件下大鼠激活态雪旺细胞对人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)生长及分化的影响。方法:分离、培养人脐带间充质干细胞和大鼠激活态雪旺细胞,通过Millicell小室实现两者体外共培养,根据共培养与否分为共培养组与对照组,通过巢蛋白(Nestin)、神经丝蛋白200(NF200)免疫荧光染色分析干细胞分化情况。结果:共培养组两种细胞在Millicell小室分层共培养条件下,hUCMSCs逐渐出现类似神经细胞的形态,对照组形态无明显变化。共培养组中hUCMSCs表达神经干细胞标志物Nestin,共培养1d后逐渐降低,而对照组仅低表达Nestin,共培养8h~7d,两组间差异有统计学意义(P<0.01);共培养组细胞共培养1d后hUCMSCs表达神经元标志物NF200,而对照组始终不表达NF200。结论:人脐带间充质干细胞有向神经细胞分化的能力,分层培养条件下大鼠激活态雪旺细胞可促进其神经方向分化。     

基于骨髓间充质干细胞与外泌体的胃癌研究进展

幽门螺杆菌(Helicobcter pylori,H.pylori)感染、胃癌干细胞及骨髓间充质干细胞(marrow mesenchymal stem cells,MSCs)是胃癌发生的主要因素.胃癌细胞与MSCs在胃癌微环境中相互作用,通过调节相关因子、信号通路、基因及蛋白的表达发挥促瘤作用.近年来研究发现外泌体是胃...     

Feridex标记胎盘来源的间充质干细胞分化为神经干细胞的实验研究

目的分离胎盘组织来源的间充质干细胞并诱导分化为神经干细胞,以期找到能成功标记神经干细胞的方法。方法将胎盘组织剪碎后消化、培养,加入神经干细胞诱导因子10ng/mL表皮生长因子（EGF）＋10ng/mL重组人碱性成纤维生长因子（bFGF）＋DMEM/F12,并分别添加相应浓度的血清,预诱导3d后加入DMEM/F12＋0.1μmol/L全反式维甲酸（RA）,10ng/mL胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）＋10ng/mL脑源性神经营养因子（BDNF）进行正式诱导7d。结果诱导10d后用Feridex标记诱导后的细胞,普鲁士蓝染色显示90%以上的干细胞胞质内出现细小的蓝色铁颗粒,Nestin染色显示阳性。结论胎盘来源的间充质干细胞能成功诱导为神经干细胞,且Feridex可成功标记诱导后的细胞。     

硝酸甘油促进人骨髓间质干细胞增殖分化实验研究

目的：探讨硝酸甘油（Nitroglycerin,NTG）对人骨髓间质干细胞（Human Bone Marrow—derived Mesenchymal StemCeHs,HBMSCs）的增殖及向成骨细胞分化的影响及其作用机制。方法：建立HBMSCs体外模型,诱导HBMSCs向成骨细胞分化。给予不同浓度的NTG,测定一氧化氮（NO）含量,考察不同浓度NTG对HBMSCs的NO生成的影响;用BrdU细胞增殖试剂盒测定反映细胞的增殖情况;测定细胞内碱性磷酸酶（ALP）活性与钙沉积量,反映不同浓度NTG对HBMSCs向成骨细胞分化的影响,探讨NO和ALP及钙沉积之间的关系;根据以上实验选出NTG最小有效浓度,再合用内皮型一氧化氮合酶（Endothelial nitric oxide synthase,eNOS）拮抗剂以及诱导型一氧化氮合酶（Induciable nitric oxide synthase,iNOS）拮抗荆探讨NTG作用于HBMSCs的机制是否与NOS有关。结果：NTG呈剂量依赖性的增加原代HBMSCs的增殖、NO含量、ALP活性及钙沉积量。NTG10μM对HBMSCs增殖及成骨型分化的诱导作用以及对HBMSCs的NO产量和NOS活性的影响不能被eNOS抑制剂L—NAME及iNOS拮抗剂1400w所阻滞。结论：NTG可通过NO途径促进HBMSCs的增殖及其向成骨细胞的分化,但其释放N0的效应并不依赖NOS。     

不同来源间充质干细胞定向诱导为神经样细胞的研究

目的:比较不同来源间充质干细胞(MSCs)在体外定向分化为神经样细胞的能力。方法:无菌获取不同来源的MSCs并进行分组。A组:胎儿真皮;B组:胎儿骨髓;C组:成人骨髓。倒置显微镜下观察各组细胞形态并检测其倍增时间。流式细胞术检测各组MSCs的细胞表型和细胞周期。全反式维甲酸(ATRA)诱导各组MSCs在体外分化为神经样细胞,倒置相差显微镜观察神经样细胞的形态,免疫组织化学法和Western blot检测神经元特异性标志—神经丝蛋白(NF)和星形胶质细胞特异性标志—胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:不同来源的MSCs具有相似的细胞形态、细胞表型和细胞周期,但是C组MSCs的增殖能力及体外传代能力低于A组和B组。不同来源、不同扩增代数的MSCs在诱导剂的作用下呈现典型的神经样细胞的形态,免疫组织化学显示,NF和GFAP均呈阳性反应。结论:不同来源的MSCs均可以在体外分化为神经样细胞,但不同发育阶段的MSCs体外分化为神经样细胞的能力存在差异。     

间充质干细胞注射液对大鼠膝骨关节炎的影响

目的 研究间充质干细胞注射液（MSCsI）对手术法诱导的大鼠膝骨关节炎的治疗作用。方法 自70只大鼠中随机取8只为假手术组,其余62只动物均进行右侧膝关节单侧手术造模。术后4周,进行X光检查并进行K-L评分,选择模型成功、状态良好的模型动物40只,根据K-L评分随机分为模型组、玻璃酸钠（阳性药,每关节腔0.5 mg玻璃酸钠注射液）组和MSCsI低、中、高剂量（每关节腔1.5×10⁵、5.0×10⁵、1.5×10⁶个细胞）组,每组8只。分组后次日开始,玻璃酸钠组每周1次,其余各组每2周1次,关节腔内注射给药,持续5周,假手术组与模型组给予等体积0.9%氯化钠溶液。使用X射线机检测大鼠膝关节病变;给药后记录大鼠行为学及痛阈变化;剖杀时记录关节软骨大体评分;试剂盒法检测血清中白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转化生长因子β（TGF-β）、II型胶原C端肽（CTX-Ⅱ）、前列腺素E₂（PGE₂）水平;取膝关节组织进行病理切片,HE染色、甲苯胺蓝染色观察组织损伤。结果 与模型组相比,MSCsI高剂量显著降低大鼠X光评分（P<0.05）、降低大鼠关节软骨大体观察评分（P<0.05）;给药4周后,MSCsI低、中、高剂量显著降低大鼠行为学评分（P<0.05、0.01）,中、高剂量显著升高大鼠痛阈值（P<0.01）;MSCsI低剂量显著降低血清中IL-1β水平、升高TGF-β水平（P<0.05）,中剂量显著降低血清中IL-1β、IL-6、CTX-Ⅱ水平、升高TGF-β水平（P<0.05、0.01）,高剂量显著降低血清中IL-1β、IL-6、CTX-Ⅱ、PGE₂水平、升高TGF-β水平（P<0.05、0.01）;HE染色结果显示,MSCsI各剂量能有效减轻模型大鼠组织病理学改变,滑膜、软骨及软骨下骨病变较轻;甲苯胺蓝染色显示,MSCsI各剂量可减小模型大鼠软骨基质损伤。结论 MSCsI每2周1次关节腔内注射对手术诱导的大鼠膝骨关节炎有明显的治疗作用。     

人脂肪间充质干细胞的致瘤性研究

【摘要】目的 研究人脂肪间充质干细胞是否具有致瘤性,为其临床应用提供安全性依据。方法 96只裸鼠分为空白对照组、阳性对照组和脂肪间充质干细胞组,每组32只,雌雄各半。将传代第5代的人脂肪间充质干细胞接种至裸鼠皮下,分别于注射后3 d、1个月、3个月、6个月对动物进行解剖检查,观察其肿瘤形成情况;同时用软琼脂克隆形成实验观察人脂肪间充质干细胞形成集落的能力。结果 裸鼠体内致瘤实验中,脂肪间充质干细胞组和空白对照组动物大体解剖学观察和病理组织学检查均未见异常。软琼脂克隆形成实验显示人脂肪间充质干细胞未表现出在阻力介质中的克隆生长能力。结论 短期传代后的人脂肪间充质干细胞不具致瘤性,有一定安全性。     

人骨髓间充质干细胞体外分离培养及其生物学特性

目的探讨人骨髓来源MSCs的分离、培养和生物学特性,为骨组织工程提供种子细胞。方法从捐赠者髂骨穿刺收取骨髓细胞,采用密度梯度离心和贴壁培养法进行培养和纯化BMSCs,取生长良好的P3或P4代BMSCs进行检测：①MTT法测定细胞增殖和生长曲线分析;②流式细胞仪检测BMSCs细胞表面抗原标记和细胞增殖周期;③免疫荧光分析细胞骨架;④细胞染色体核型分析;⑤成骨细胞诱导分化及检测。结果①利用密度梯度离心和贴壁筛选的方法分离人BMSCs,经传代后细胞形态呈梭形,均匀一致。②MTT法测定细胞增殖和生长曲线分析结果显示BMSCs在传代后经历潜伏期、对数生长期和平台期。③流式细胞仪检测显示所获得的BMSCs表面抗原标记高度一致。④BMSCs细胞周期检测结果为G0＋G1期91.3%、G2期4.1%和S期4.6%。⑤微管微丝免疫荧光染色结果显示,培养的BMSCs具有良好的细胞骨架系统。⑥第7代的BMSCs染色体检测结果显示,被测标本有正常染色体数目（2n=46,XY）,且未见染色体异常。⑦成骨诱导后,Von kossa和茜素红染色均呈阳性。结论从人骨髓中能分离出高度一致的BMSCs,这些细胞具有正常细胞骨架结构以及正常的人类染色体数目和形态,具有向成骨细胞分化能力,可作为骨组织工程的种子细胞。     

脐带间充质干细胞对脐血单个核细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察在低浓度血清培养下脐带间充质干细胞（UC—MSCs）对脐血单个核细胞（MNC）的增殖和凋亡的影响。方法：利用密度梯度法分离脐血单个核细胞，接种于脐带MSC建立的饲养层培养，通过计数细胞、半固体培养和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡，以评价脐带MSC的支持造血功能和抗凋亡作用。结果：脐带间充质干细胞组单个核细胞总数及集落形成细胞（CFC）显著高于单培养组（P〈0．01），且单个核细胞凋亡率低于单培养组（P〈0．01）。结论：体外证实脐带MSC具有促进造血和抗凋亡作用。     

间充质干细胞治疗移植物抗宿主病的研究进展

目前,激素类药物是治疗急性移植物抗宿主病（aGVHD）的标准首选药物。aGVHD的二线治疗药物有巴利昔单抗、甲氨蝶呤（MTX）、芦可替尼等。抗胸腺细胞球蛋白（ATG）、间充质干细胞（MSCs）、粪菌移植等在治疗移植物抗宿主病（GVHD）方面也有应用。近年来,不少基础以及临床研究将MSCs应用在异基因造血干细胞移植后GVHD的预防和治疗方面。MSCs可通过细胞间接触而释放免疫调节因子来实现免疫抑制功能。可溶性因子、氧浓度、toll样受体配体（TLR）、MSCs注射剂量、免疫抑制剂的采用和温度控制等因素影响了MSCs在GVHD中的治疗效果,但具体机制有待进一步研究。大多数研究显示MSCs治疗对急性和慢性GVHD均有益处,但由于缺乏大规模的随机对照试验,这一结果仍有待证实。对目前治疗GVHD的主要方法进行总结,着重于前沿技术MSCs的临床研究和作用机制,并且对进一步发展新的治疗策略提出相应观点。     

牡荆苷对骨髓间充质干细胞成脂分化的影响简

目的 探讨牡荆苷对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响.方法 采用细胞的增殖检测（MTT）法检测骨髓间充质干细胞生存率,油红O染色检测细胞成脂分化,实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα） mRNA表达.结果 牡荆苷浓度在1～50 μmol/L范围内对骨髓间充质干细胞生存率无显著影响;牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化及PPARγ和C/EBPαmRNA表达.结论 牡荆苷可抑制骨髓间充质干细胞成脂分化,其作用机制可能与抑制PPARγ和C/EBPα基因表达有关.     

丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的:探讨丹参注射液在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的作用。方法:采用差速贴壁法体外分离培养大鼠MSCs,流式细胞仪检测其表面标志,经碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)预诱导24h,采用含丹参注射液的无血清L-DMEM培养液诱导MSCs,倒置显微镜下观察细胞形态的变化,免疫荧光细胞化学检测巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF-M)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果:体外培养的大鼠MSCs表达CD29、CD44、CD105、CD166。丹参注射液诱导后MSCs胞体收缩,突起伸出,较密的部分神经元拉成网状,免疫细胞化学显示巢蛋白、NSE、NF-M表达阳性,阳性率分别为(58.68±4.50)%、(61.23±5.72)%、(63.47±6.38)%,GFAP阳性细胞率(1.47±0.23)%。结论:丹参注射液在体外可以将大鼠MSCs诱导分化为神经元样细胞。     

骨髓基质细胞对移植肌腱在骨隧道内愈合作用的影响

目的:研究骨髓基质细胞对移植肌腱在骨隧道内愈合方式的影响。方法:采用兔膝关节自体半腱肌重建前交叉韧带悬吊固定模型,实验分为空白对照组、胶原海绵组和骨髓基质细胞(MSCs)组,MSCs组在骨隧道内植入骨髓基质细胞。分别于手术后4、8和12周采取组织,采用HE、Masson染色,观察骨隧道和肌腱移植物间的界面组织学特殊变化,分析腱骨愈合信息。结果:4周时MSCs组腱骨间充满结缔组织,空白对照组和胶原海绵组腱骨间有少量结缔组织;8周MSCs组形成Sharpey’s纤维,空白对照组合胶原海绵组无Sharpey’s纤维出现;12周时MSCs组形成大量Sharpey’s纤维,在移植肌腱和骨隧道之间有纤维软骨,矿化软骨形成,空白对照组和胶原海绵组出现Sharpey’s纤维,无矿化软骨形成。结论:MSCs对移植肌腱在骨隧道内的愈合起明显的促进作用,可以缩短腱骨愈合时间。     

脐带间充质干细胞减轻哮喘小鼠气道炎症的研究

目的研究脐带间充质干细胞对鸡卵清蛋白诱导的哮喘小鼠模型气道炎症的抑制作用。方法将48只6⁸周龄雌性BALB/c小鼠随机分为四组,单纯哮喘组(OVA组),干细胞治疗组(MSC组),地塞米松治疗组(DM组)及生理盐水对照组(NS组)。23 d后,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数总细胞数、嗜酸粒细胞数;取肺组织行病理切片HE染色观察气道周围炎细胞浸润情况。同时免疫组织化学法观察IL-17蛋白在各组小鼠肺组织中的表达。结果同其他各组相比,单纯哮喘组肺泡灌洗液和肺组织中有大量炎性细胞浸润,而地塞米松治疗组、干细胞治疗组气道炎细胞浸润明显减轻(P<0.05),两个治疗组之间无明显差异(P>0.10)。与此结果相一致,MSC组、DM组中,炎性因子IL-17表达较OVA组明显减少(P<0.05),而DM组IL-17表达与MSC组相比无明显差异(P>0.10)。结论脐带间充质干细胞能够明显抑制鸡卵清蛋白诱导的哮喘小鼠气道炎症。