肿瘤相关成纤维细胞对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响

目的观察肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)对大肠癌LoVo细胞奥沙利铂化疗敏感性的影响,并探讨其可能的作用机制。方法取大肠癌患者癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立大肠癌LoVo细胞与CAFs或NFs共培养体系,奥沙利铂处理后CCK-8比色法检测LoVo细胞存活率,PI/Annexin V双染法检测细胞凋亡率;免疫印迹法(Western blotting)检测共培养体系中大肠癌细胞COX-2、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-cadherin、Vimentin、Fibronectin)表达的改变,ELISA法检测共培养体系中细胞上清液中前列腺素E_2(PGE_2)含量。结果 CAFs可提高奥沙利铂处理后LoVo细胞存活率,并降低细胞凋亡率;LoVo细胞与CAFs共培养后,细胞COX-2蛋白表达上调,细胞上清液中PGE_2含量显著增加,且细胞EMT标志物蛋白E-cadherin表达降低,Vimentin、Fibronectin蛋白表达上调。结论 CAFs可降低大肠癌LoVo细胞对奥沙利铂的敏感性,其机制可能是通过上调大肠癌细胞COX-2表达和PGE_2合成,继而诱导EMT。     

异丙酚对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响

目的观察异丙酚对人胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨可能的作用机制。方法体外培养HGC-27细胞,分为对照组和实验组,实验组用不同浓度(5、10、20μg/m L)异丙酚处理HGC-27细胞24 h,对照组加入等体积的培养基,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;Western blotting检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、Akt、p-Akt及p-GSK-3β的表达。结果与对照组比较,异丙酚可显著降低HGC-27细胞侵袭能力;异丙酚处理后,MMP-9表达下调;异丙酚可抑制p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达。结论异丙酚可降低人胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能与抑制Akt通路、下调MMP-9表达有关。     

肿瘤相关成纤维细胞对胃癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制研究

[目的]观察肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)对胃癌HGC-27细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。[方法]取胃癌患者癌组织及癌旁正常胃黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),建立胃癌HGC-27细胞与CAFs或NFs共培养体系,CCK-8比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变,免疫印迹法检测细胞上皮间质转化(EMT)标志物[E-钙粘素(E-cadherin)蛋白、波形蛋白(Vimentin)和纤维连接蛋白(Fibronectin)蛋白]、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。[结果]胃癌HGC-27细胞与CAFs共培养后其增殖和侵袭能力均较HGC-27细胞单独培养组或与NFs共培养组显著增强,且E-cadherin蛋白表达明显下调,同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达明显上调,MMP-9蛋白表达上调;STAT3总量未发生变化,p-STAT3表达上调。[结论]CAFs可促进胃癌细胞的侵袭能力,其机制可能是通过激活STAT3通路进而促进细胞EMT。     

miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及机制

目的探讨miR-215对胃癌细胞侵袭转移能力的影响及作用机制。方法通过RT-PCR检测miR-215在高转移胃癌细胞株NCIN87,BGC-823,RF-48及低转移细胞株HGC-27及MKN-28中的表达;Transwell迁移及侵袭实验检测miR-215抑制剂对胃癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western印迹检测miR-215抑制剂对胃癌细胞活化白细胞黏附分子(ALCAM),基质金属蛋白酶(MMP)-2,MMP-9,上皮细胞-间充质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏附素(E-cadherin),波形蛋白(Vimentin)表达量的影响。结果 RT-PCR结果证实miR-215在高转移胃癌细胞株中的表达高于低转移胃癌细胞中的表达,且miR-215在BGC-823细胞中的表达最高,因此选用BGC-823作为后续实验细胞株。miR-215抑制剂转染BGC-823细胞48 h后,发现下调miR-215表达能显著抑制BGC-823细胞迁移及侵袭能力,并能下调ALCAM,MMP-2,MMP-9及Vimentin表达,上调E-cadherin表达。结论miR-215低表达能显著抑制胃癌细胞BGC-823侵袭及转移能力,与下调MMPs及抑制EMT生成有关。     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

敲低hnRNP H基因对子宫内膜癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨敲低核不均一性核糖核蛋白H(hnRNP H)基因对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭转移的影响。方法将hnRNP H siRNA转染至子宫内膜癌Ishikawa细胞,利用实时定量PCR、Western印迹方法检测(对照组、阴性对照组、siRNA组),确定siRNA沉默效率(hnRNP H mRNA、蛋白表达)、上皮间质转化(EMT)相关蛋白(E-钙黏着蛋白E-cadherin、神经型钙黏附蛋白N-cadherin)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7表达情况,划痕实验及Transwell检测细胞迁移能力的改变。结果对照组E-cadherin表达少,而转染组E-cadherin表达明显升高,有统计学差异(P<0.05);对照组N-cadherin、MMP-2及MMP-7表达显著高于转染组(P<0.05)。结论沉默hnRNP H基因能抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞上皮间质转化,有效抑制子宫内膜癌细胞转移和侵袭。     

重楼皂苷Ⅰ通过调节细胞自噬抑制胃癌细胞侵袭能力

目的探讨重楼皂苷Ⅰ对胃癌HGC-27细胞侵袭能力及自噬水平的影响。方法选择胃癌HGC-27细胞作为研究对象,用不同浓度的重楼皂苷Ⅰ(0、5、10、20μmol/L)在体外处理HGC-27细胞,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;蛋白质印迹法检测细胞上皮细胞间叶样表型转化(EMT)标志物如E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、自噬相关基因Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白、MMP-9蛋白表达情况。结果 Transwell侵袭实验结果显示,重楼皂苷Ⅰ处理后,随着药物浓度的升高,穿过Transwell小室基底膜的HGC-27细胞数逐渐减少;蛋白质印迹结果显示,重楼皂苷Ⅰ可促进HGC-27细胞EMT标志物蛋白E-cadherin的表达,同时抑制Vimentin、Fibronectin蛋白的表达,且抑制MMP-9蛋白表达;重楼皂苷Ⅰ也可促进自噬相关基因Atg5、LC3-Ⅱ和Beclin1蛋白的表达。结论重楼皂苷Ⅰ可抑制胃癌HGC-27细胞侵袭能力,其机制可能通过诱导HGC-27细胞自噬并抑制EMT。     

小干扰RNA沉默甲胎蛋白基因对HepG2细胞迁移及侵袭的影响

目的研究甲胎蛋白(AFP)对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭能力的影响及其机制。方法应用合成的靶向沉默AFP小干扰RNA(siRNA)转染肝癌HepG2细胞,分为空白对照、阴性对照组及AFP siRNA组,各组细胞干预48 h后,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和ELISA法检测细胞转染后的沉默效率,Transwell小室实验检测沉默AFP基因后HepG2细胞的侵袭、迁移能力,用Western blotting法观察沉默AFP基因的表达对上皮-间质转化(EMT)相关蛋白(N-cadherin、Vimentin和E-cadherin)、AKT和p-AKT蛋白表达的影响。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果转染沉默后,与空白对照组相比,AFP siRNA组中AFP mRNA的相对表达量明显降低(P 0.01),抑制率达86.440%,同时AFP siR NA组细胞上清液中AFP蛋白表达水平同样明显降低(P 0.01)。与空白对照组相比,AFP siRNA组的迁移细胞数和侵袭细胞数显著下降,差异具有统计学意义(P值均0.01)。沉默HepG2细胞中AFP基因的表达后,与空白对照组比较,AFP siRNA组EMT相关蛋白E-cadherin蛋白的表达水平升高(P 0.01),而N-cadherin及Vimentin表达水平均明显降低(P值均0.05),且PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT的表达水平明显降低(P 0.01)。结论沉默AFP可抑制肝癌细胞转移,基于HepG2细胞株的机制研究可能与阻断PI3K/Akt通路抑制EMT相关。     

丹皮酚通过下调COX-2表达及PGE_2合成降低大肠癌细胞侵袭能力

目的观察丹皮酚对结肠癌LoVo细胞侵袭能力的影响,并探讨其是否通过下调环氧合酶-2(COX-2)表达及PGE_2合成发挥抗肿瘤作用。方法分别用0、30、60、120 mg/L的丹皮酚体外处理LoVo细24 h,Transwell小室法检测细胞侵袭能力;ELISA法检测细胞上清液中PGE2的含量;Western blotting检测COX-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、NF-κB/p65、IKKα和IκBα的表达。结果丹皮酚处理后,LoVo细胞侵袭能力降低,MMP-9表达下调;COX-2的表达及PGE2合成降低,NF-κB/p65表达下调。结论丹皮酚可能通过抑制NF-κB、COX-2表达、PGE2合成,下调MMP-9表达,降低LoVo细胞侵袭能力。     

miR-325-3p靶向CLDN1调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移

目的 探讨微小核糖核酸-325-3p(miR-325-3p)靶向紧密连接蛋白1(CLDN1)调控人肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的作用。方法 将对数生长期的人肝癌细胞株SMMC-7721分为四组：阴性对照组、上调组、下调组和正常组。荧光显微镜观察各组细胞转染效率;细胞计数试剂-8(CCK-8)法检测各组细胞增殖活性;侵袭小室(Transwell)实验检测各组细胞侵袭和迁移活性;实时-定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组细胞miR-325-3p、CLDN1、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)信使核糖核酸(mRNA)表达;免疫印迹法(WB)检测各组CLDN1、ERK1/2、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP-2蛋白表达及p-ERK1/2水平;双荧光素酶报告基因检测验证miR-325-3p对CLDN1的作用。结果 阴性对照组、上调组和下调组细胞转染效率分别为(91.38±16.21)%、(92.17±15.93)%...     

肿瘤相关成纤维细胞对大肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响

目的观察肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)对大肠癌LoVo细胞增殖和侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法从6例大肠癌患者癌组织及癌旁正常结肠黏膜组织分别分离培养CAFs和正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs),并鉴定CAFs,建立大肠癌LoVo细胞与CAFs或NFs共培养体系,CCK-8比色法检测细胞增殖,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变,免疫印迹法(Western blotting)检测细胞COX-2、MMP-9蛋白表达的改变,ELISA法检测细胞上清液中前列腺素E_2(PGE_2)的含量。结果成功分离CAFs,CAFs中成纤维细胞活化蛋白(fibroblast-activated protein,FAP)与平滑肌激动蛋白-α(α-smooth-muscle actin,α-SMA)表达较NFs细胞的表达量显著增加;LoVo细胞与CAFs共培养后其增殖和侵袭能力均较LoVo细胞单独培养或与NFs共培养组显著增强,且COX-2和MMP-9蛋白表达明显升高,细胞上清液中PGE_2含量显著增加。结论 CAFs可促进大肠癌细胞的增殖、提高其侵袭能力,其机制可能是通过上调大肠癌细胞COX-2表达和PGE_2含量。但CAFs如何调控大肠癌细胞COX-2/PGE_2表达有待进一步探讨。     

沉默HIF-1α调控MAPK/ERK信号通路抑制NSCLC转移的分析

目的探讨HIF-1α在体内及体外对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞转移的影响及其作用机制。 方法采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HIF-1α在癌旁正常组织、肺鳞癌组织(LUSC)、肺腺癌组织(LUAD)、A549细胞和HEB细胞中的表达量。上调HIF-1α表达后,通过MTT、细胞侵袭和Western blot实验检测过表达HIF-1α对A549细胞增殖、侵袭和EMT的影响。下调HIF-1α表达后,Western blot检测A549细胞ERK和p-ERK蛋白的表达量。THBQ激活MAPK/ERK通路后,分析A549细胞增殖、侵袭和EMT能力。将细胞株植入裸鼠体内,构建移植瘤模型,最后测量裸鼠移植瘤的体积和重量。 结果HIF-1α在NSCLC组织的表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.05)。A549细胞中HIF-1α表达水平明显高于HEB细胞(P<0.01),过能够促进A549细胞的增殖和侵袭,N-cadherin蛋白表达量明显上升,E-cadherin蛋白表达量明显下降。下调HIF-1α能够抑制A549细胞内MAPK/ERK通路,且抑制了A549细胞的增殖、侵袭和EMT。下调HIF-1α使裸鼠移植瘤的重量和体积明显减小。 结论沉默HIF-1α通过MAPK/ERK信号通路在体内及体外抑制NSCLC转移。     

miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制探讨

目的 探讨miR-21在大肠癌细胞迁移和侵袭中的作用及机制.方法 取大肠癌SW480细胞培养、传代,分为两组.观察组转染miR-21 mimics,对照组加入同浓度的miRNA mimics negative control.采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-21的表达情况,采用Transwell小室检测细胞的迁移和侵袭能力,Western blot法检测上皮一间质转化(EMT)相关蛋白表达情况.结果 转染组miR-21的表达量、细胞的迁移和侵袭能力均明显高于对照组(P均＜0.05);细胞中紧密连接蛋白(ZO-1)和上皮钙黏蛋白(E-cad)的表达明显降低、神经钙黏蛋白(N-cad)和转录因子Slug的表达明显升高,第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白(PTEN)表达明显降低、而磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达明显升高(P均＜0.05).结论 miR-21可促进人大肠癌细胞发生EMT发生细胞迁移和侵袭,其机制为下调PTEN蛋白表达、激活P13K/Akt,促进EMT.     

慢病毒介导的SUMO1P3基因表达对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及EMT的影响

目的探讨小泛素样修饰物基因(SUMO)1P3基因siRNA慢病毒对胃癌细胞侵袭、迁移、黏附能力及上皮细胞间质转化(EMT)的影响。方法将人胃癌BGC-823细胞分为空白组、NC组(转染阴性对照慢病毒载体)和si-SUMO1P3组(转染SUMO1P3基因的siRNA慢病毒载体)。Western印迹检测SUMO1P3下调效果及EMT相关E-钙黏蛋白(cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-SMA蛋白表达。噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力及黏附能力;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力。结果 si-SUMO1P3的组SUMO1P3蛋白表达明显低于空白组(P<0.05)。si-SUMO1P3组BGC-823细胞24～72 h细胞活力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组在接种的30 min和60 min细胞黏附能力均明显低于空白组(P<0.05);si-SUMO1P3组细胞侵袭能力、迁移能力均显著低于空白组,E-cadherin蛋白表达显著高于空白组,Vimentin和α-SMA蛋白显著表达低于空白组(P<0.05)。结论抑制SUMO1P3基因表达可能通过阻碍EMT降低胃癌细胞侵袭、迁移和黏附能力。     

慢病毒介导SOX4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究慢病毒介导的性别决定区Y框蛋白(SOX)4表达下调对乳腺癌细胞生长及迁移能力影响。方法以乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,用含有SOX4 siRNA的重组慢病毒和阴性对照慢病毒感染MCF-7细胞,qRT-PCR和Western印迹方法检测细胞中SOX4表达变化。噻唑蓝(MTT)方法测定增殖变化,碘化丙啶(PI)单染法测定细胞周期分布变化,Transwell小室检测侵袭和迁移能力变化,Western印迹检测细胞中细胞周期蛋白(Cyclin)D1、波形蛋白(Vimentin)、基质金属蛋白酶(MMP)-9、上皮性钙黏附素(E-cadherin)、MMP-2、p21蛋白表达水平。结果 SOX4 siRNA重组慢病毒感染可以抑制乳腺癌细胞中SOX4基因的表达和转录。敲减SOX4后的乳腺癌细胞的增殖能力显著降低,细胞G0/G1期比例显著升高,细胞侵袭和迁移能力显著下降,细胞中CyclinD1蛋白表达水平显著降低,p21蛋白表达水平显著升高,MMP-2、MMP-9、Vimentin蛋白表达水平显著下降,E-cadherin蛋白表达水平显著升高(均P0.05)。阴性对照慢病毒感染对MCF-7细胞中SOX4表达水平没有影响(均P0.05),并且对细胞增殖、周期分布、侵袭、迁移水平和细胞中CyclinD1、p21、MMP-2、MMP-9、Vimentin、E-cadherin蛋白表达水平均没有影响。结论敲减SOX4可以抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移,并将乳腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期。     

塞来昔布干预对人胃癌细胞E-钙黏蛋白和基质金属蛋白酶-2表达的影响

目的探讨COX-2与E-cadherin、MMP-2之间的相互关系及其参与胃癌细胞侵袭迁移的可能机制。方法应用塞来昔布(celecoxib)对体外培养的人胃癌细胞SGC7901进行干预,采用实时荧光定量反转录PCR检测COX-2、E-cadherin、MMP-2 mRNA的表达;运用免疫荧光标记法结合激光共聚焦荧光显微镜分析E-cadherin的蛋白表达量;应用Transwell法检测细胞侵袭及迁移能力的变化。结果塞来昔布明显抑制体外培养的人胃癌细胞SGC-7901中COX-2 mRNA的表达,E-cadherin mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性升高,MMP-2 mRNA的表达随着COX-2的表达下降而呈浓度与时间依赖性降低。塞来昔布30μmol/L干预人胃癌细胞SGC7901 24、36、48 h后,激光共聚焦荧光显微镜检测E-cadherin的蛋白表达量明显升高。塞来昔布干预组细胞穿过Transwell小室的细胞数明显少于对照组。结论 COX-2特异性抑制剂塞来昔布通过抑制COX-2的表达,上调E-cadherin的表达,下调MMP-2的表达,抑制体外培养的胃癌细胞SGC7901的侵袭迁移能力。     

GSK-3β通过调节 Snail 参与 Fas 诱导的EMT过程

目的：探讨ERK、GSK3β和Snail在Fas诱导的EMT中的作用。方法选用结肠癌SW480细胞及胃癌AGS细胞作为研究对象,使用U0126以阻断其ERK/MAPK通路的激活,稳定转染GSK3βS9A以抑制其GSK3βSer9位点的磷酸化及信号转导,稳定转染Snail shRNA以抑制其Snail活性,并对接受上述处理的细胞分别给予低剂量FasL刺激后,再利用侵袭试验、免疫荧光、免疫印迹、RT-PCR、qRT-PCR、免疫共沉淀及荧光素酶报告基因等方式检测细胞的形态、功能变化。结果 Fas信号通路的激活可抑制E-cadherin的转录表达,且这一过程依赖于ERK/MAPK通路。通过转染稳定敲除Snail表达后,Fas对E-cadherin的转录抑制作用显著减弱。在细胞内过表达突变型GSK3βS9A可显著降低Fas通路激活后Snail的表达上调水平、E-cadherin的转录抑制水平及细胞的侵袭能力增加程度。免疫共沉淀提示, GSK3β与ERK、Snail在细胞核存在相互作用。结论在消化道肿瘤细胞中,Fas诱导EMT的调控机制包括ERK/MAPK通路的激活、ERK对GSK3β的磷酸化（Ser9位点）失活、GSK3β失活导致的Snail表达上调及核易位,以及Snail作用下的E-cadherin转录水平下调。     

Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及MMP-2、MMP-9表达的影响

目的探讨Twist对膀胱癌细胞迁移、侵袭及基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9表达的影响。方法用qRT-PCR和Western印迹法分别检测膀胱癌5637、T24、BIU-87细胞和正常膀胱SVHUC-1细胞中Twist mRNA和蛋白水平,筛选表达水平最高的T24细胞,在T24细胞中转染shRNA Twist、shRNA对照命名为sh-Twist组和sh-NC组,并以不做处理的T24细胞为Con组,用qRT-PCR和Western印迹法测定各组细胞中Twist mRNA和蛋白水平,Transwell小室测定细胞侵袭和迁移,Western印迹测定各组细胞中上皮间质转化(EMT)相关蛋白波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)和侵袭迁移相关蛋白MMP-2、MMP-9表达水平。结果与正常膀胱SVHUC-1细胞比较,Twist在膀胱癌细胞中转录和表达水平均明显升高(P0.05)。sh-Twist组Twist mRNA和蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组Twist mRNA和蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平均明显低于Con组(P0.05),sh-NC组细胞迁移数目、侵袭数目及MMP-2、MMP-9蛋白水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。sh-Twist组E-cadherin蛋白水平与Con组相比明显升高(P0.05),Vimentin蛋白水平与Con组相比明显下降(P0.05),而sh-NC组Vimentin、E-cadherin水平与Con组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论 Twist敲低能够降低膀胱癌细胞侵袭和迁移能力,抑制膀胱癌细胞EMT。     

核转录因子CDX2抑制胃癌细胞迁移、侵袭与逆转上皮-间质转化有关

背景:尾型同源盒转录因子2(CDX2)是一种肠上皮细胞特异性核转录因子,正常胃黏膜组织不表达CDX2,而肠化生、异型增生和胃癌组织中存在CDX2异位表达。近年研究发现CDX2在胃癌中起抑癌基因作用。上皮-间质转化(EMT)与恶性肿瘤的侵袭、转移密切相关。目的:探讨CDX2对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响与EMT的关系。方法:分别将CDX2过表达质粒和干扰质粒转染入低表达和高表达CDX2的人胃癌细胞株MKN-45和AGS中,以划痕试验检测各组细胞迁移能力,Transwell小室细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力,蛋白质印迹法检测EMT标记物表达。结果:过表达CDX2能显著抑制MKN-45细胞的迁移、侵袭能力,并上调上皮标记物E-cadherin表达,下调间质标记物vimentin表达(P0.05);而沉默CDX2表达能显著增强AGS细胞的迁移、侵袭能力,下调E-cadherin表达,上调vimentin表达(P0.05)。结论:CDX2表达水平改变可影响胃癌细胞的迁移、侵袭能力,并参与EMT的调控,其对胃癌细胞迁移、侵袭的抑制作用可能与逆转EMT有关,具体分子机制有待深入研究。     

SEPT9基因在人肝细胞癌侵袭转移中的作用

目的研究SEPT9基因对人肝癌细胞侵袭转移的影响。方法通过westernblot法筛选SEPT9蛋白高表达肝癌细胞系,慢病毒转染沉默后检测细胞SEPT9蛋白表达量,通过EdU染色检测sh-SEPT9对肝癌细胞增殖的影响;Transwell和划痕实验检测沉默SEPT9表达后肝癌细胞的侵袭能力和迁移能力;westernblot分析沉默SEPT9表达对肝癌细胞HIF-1α、Ki67、PCNA、MMP-9、VEGF、Vimentin, N-cadherin、E-cadherin蛋白表达影响。结果 westernblot显示SEPT9蛋白在肝癌HepG2细胞存在高表达,慢病毒转然能够获得稳定遗传的HepG2-SEPT9-shRNA细胞系,sh-SEPT9转然后,EdU染色显示HepG2细胞增殖受到明显抑制(P0.05),细胞的侵袭能力和迁移能力显著降低(P0.05);HepG2细胞Ki67、PCNA、Vimentin、N-cadherin、HIF-1α、MMP-9及VEGF表达量明显降低,E-cadherin的蛋白水平明显上升(P0.05)。结论 SEPT9基因通过增强肝癌HepG2细胞的EMT机制,促进肝癌HepG2细胞的侵袭转移。