雌二醇对人成骨肉瘤MG63细胞株护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节

目的观察17β-雌二醇(17β-E2)和ICI 182780对人成骨肉瘤MG63细胞株表达护骨素(OPG)、OPG配体(OPGL)及其相关因子[TRAIL、巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)、转化生长因子β(TGFβ)]的影响。方法用逆转录PCR(RT—PCR)法检测基因表达情况,用Western blot分析法检测蛋白表达情况。结果(1)17β—E2能上调MG63细胞中OPG及TGFβ的表达,下调OPGL、M—CSF及TRAIL的表达。(2)ICI 182780对被检测基因有不同的调节活性。结论雌激素缺乏可能导致成骨细胞中OPG、TGFβ的表达减少,而解除了对OPGL、M—CSF和TRAIL等细胞因子的抑制作用,使破骨细胞的数量和活性增加,骨吸收增强和骨量丢失,这可能是绝经后骨质疏松症的一个重要的发病机制;ICI 182780并非纯雌激素受体拮抗剂,而属于选择性雌激素受体调节剂。     

雌激素诱导MG63细胞MT1-MMP蛋白表达的信号转导通路

目的研究雌激素诱导MG63细胞膜型基质金属蛋白酶1(MT1MMP)蛋白表达相关的信号转导途径。方法培养的MG63细胞用雌激素受体阻断剂ICI182780孵育48h后,再用不同浓度的ICI182780、H89、H7、PD98059、SB203580、Genistein、PDTC和17βE2共同培养,以阻断核受体、蛋白激酶(PK)A、PKC、细胞外信号调节激酶(ERK)、p38MAPK、酪氨酸蛋白激酶(PTK)、核因子(NF)κB的信号转导。细胞被干预后,提取细胞蛋白,用免疫印迹法和免疫组化观察MT1MMP蛋白表达。结果免疫印迹显示,雌激素促进MT1MMP表达,NFκB、PTK被阻断后MT1MMP表达下调;免疫组化发现MT1MMP在胞浆和胞膜上均有表达,但胞核无表达。结论雌激素主要通过NFκB和PTK途径调控MG63细胞的MT1MMP表达。     

雌激素抑制内质网应激引起的血管内皮细胞凋亡及机制

目的通过建立人脐静脉内皮细胞(HUVEC)内质网应激(ERS)的细胞模型,研究雌激素抑制内质网应激引起的凋亡的信号传导机制,以探讨雌激素对心血管的保护机制。方法分别用10μmol/L的衣霉素(TM)或2 mmol/L的二硫苏糖醇(DTT)诱导HUVEC,建立内质网应激细胞模型,提前给予10-8mol/L的17-β雌二醇(E2)预处理1 h,用Western blot检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)判断模型是否建立成功,并探索E2对内质网应激的作用。检测内质网应激的三条主要信号通路蛋白的变化,上调最显著的为内质网应激最主要的信号通路。Western blot检测内质网应激凋亡蛋白C/EBP-同源蛋白(CHOP),Hochest染色检测细胞凋亡率,探索E2对内质网应激凋亡的作用。添加E2受体拮抗剂ICI182780(ERα、ERβ拮抗剂及GPER激动剂)和G15(GPER拮抗剂)后检测内质网应激最主要通路蛋白表达量的变化,探索雌激素受体在其抑制内质网应激中的作用。添加E2受体后信号通路阻断剂,检测雌激素抑制内质网应激的过程中活化其受体后激活的最主要受体后信号通路。结果 TM/DTT组GRP78的表达量显著上调,内质网应激三条信号通路中蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)信号通路上调最明显,而TM/DTT+E2组上调显著回复。TM/DTT组CHOP的表达量显著上调且细胞凋亡率显著增加,而TM/DTT+E2组上调明显回复,凋亡细胞减少。E2有显著抑制p-PERK/PERK上调的作用,而E2的保护作用可分别被ICI182780和G15阻断,同时添加ICI182780和G15时阻断作用最显著。分别添加信号通路阻断剂后,E2抑制pPERK/PERK上调的作用均减弱,其中以磷脂酰肌醇-3羟基激酶(PI3K)通路阻断剂的作用最显著。结论 E2可抑制TM/DTT诱导的HUVEC内质网应激。p-PERK/PERK通路可能为TM/DTT诱导的HUVEC内质网应激最主要的信号通路。E2可抑制过度内质网应激引起的细胞凋亡。E2受体在E2抑制内质网应激凋亡的作用中起重要作用。E2受体激活包括PI3K-蛋白激酶B(PKB/Akt)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38-丝裂原活化蛋白激酶(p38-MAPK)在内的信号通路快速起到抑制内质网应激的作用,其中PI3K-Akt通路可能为最主要的通路。雌激素通过抑制PERK信号通路引起的内质网应激凋亡,保护血管内皮细胞,其抑制内质网应激的机制主要为活化的雌激素受体激活PI3K/Akt通路。     

糖基化终末产物和磷酸化肌球蛋白轻链在糖尿病结肠动力障碍中的作用

背景:结肠动力障碍是糖尿病(DM)的常见并发症。糖基化终末产物(AGEs)在DM患者体内显著升高,然而其在DM结肠动力障碍中的作用尚未完全明确。目的:探讨AGEs和磷酸化肌球蛋白轻链(p-MLC)在DM结肠动力障碍中的作用。方法:将Sprague-Dawley大鼠随机分为DM组和正常对照组,以链脲菌素腹腔注射建立DM模型,8周后处死所有大鼠,取远端结肠组织。检测离体结肠肌条肌张力;以免疫组化染色检测结肠组织p-MLC表达;以蛋白质印迹法检测结肠组织p-MLC、总肌球蛋白轻链(t-MLC)表达。分离培养结肠平滑肌细胞(SMCs),以不同浓度、不同作用时间AGEs作用于SMCs,以蛋白质印迹法检测SMCs的p-MLC、t-MLC表达。结果:与正常对照组相比,DM组大鼠结肠平滑肌张力显著减弱[(0.89±0.09)g对(1.98±0.12)g,P0.05],DM组大鼠结肠组织pMLC/t-MLC/β-actin水平显著降低(0.98±0.10对1.61±0.12,P0.05)。SMCs经不同浓度、不同作用时间AGEs干预后,p-MLC/t-MLC/β-actin水平显著降低。结论:DM结肠动力障碍可能由AGEs抑制SMCs中MLC磷酸化所致。     

雌激素预防切除卵巢大鼠颅内动脉瘤破裂的效果及机制

目的探讨雌激素预防切除卵巢大鼠颅内动脉瘤破裂的效果及作用机制。方法 140只雌性Wistar大鼠随机分为赋形剂组、雌激素治疗组、雌激素+ER受体拮抗剂治疗组、ER-α受体激动剂治疗组、ER-β受体激动剂治疗组、一氧化氮(NO)合成抑制剂N-亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)治疗组、ER-β受体激动剂治疗+L-NAME治疗组,每组20只,均进行切除双侧卵巢+制作动脉瘤模型。醋酸去氧皮质酮(DOCA)-盐型诱导颅内动脉瘤小鼠形成的模型,各组分别于DOCA注射后第6天给予赋形剂二甲基亚砜(DMSO)、17-β-雌二醇、17-β-雌二醇联合ER拮抗剂、ER-α亚型激动剂(PPT)、ER-β亚型激动剂(DPN)、L-NAME、DPN联合L-NAME,大鼠出现动脉瘤破裂症状时处死,或给药持续至DOCA注射后第21天时处死。统计分析各组动脉瘤形成情况以及破裂的动脉瘤发生率和动脉瘤破裂率。结果雌激素治疗组破裂的动脉瘤发生率及动脉瘤破裂率显著低于赋形剂组和雌激素+ER拮抗剂组,ER-β受体激动剂组显著低于赋形剂组(P<0.05),ER-α受体激动剂组与赋形剂组比较无显著差异(P>0.05)。与赋形剂组比较,L-NAME组破裂的动脉瘤发生率及动脉瘤破裂率无统计学差异(P>0.05),ER-β受体激动剂+L-NAME组显著高于ER-β受体激动剂组(P<0.05)。结论雌激素能够预防切除卵巢大鼠颅内动脉瘤破裂,可能与雌激素刺激ER-β受体激活有关,且这种作用依赖于NO的产生。     

糖尿病冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道开放概率及蛋白表达的变化

目的研究糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙离子激活钾通道(BK通道)开放概率(NP0)及蛋白表达的影响,探讨糖尿病冠状动脉损伤的分子机制。方法采用链脲霉素腹腔内注射建立糖尿病大鼠动物模型,成功建立20只糖尿病大鼠动物模型作为糖尿病组;对照组(n=20)相应注射生理盐水。酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,单通道膜片钳实验技术记录大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流;采用Western blot实验方法测定大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道亚基的蛋白表达。结果在电极外液钙离子浓度为1μmol/L,刺激电位为0,20,40,60,80,100和120 mV条件下,糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0明显低于对照组(P<0.05)。如刺激电位为120 mV时,对照组和糖尿病组大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道NP0分别为1.210 5±0.048 1(n=5)和0.5217±0.1346(n=5);与对照组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达无差异(P>0.05),但β1亚基蛋白表达下降了63%(P<0.05)。结论糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道NP0降低可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因。     

雌二醇对人成骨细胞护骨素、护骨素配体及其相关因子的调节

目的 观察17β雌二醇(17β—E2)和雌激素受体拮抗剂IC1182780(ICI)对人成骨细胞(HOB)表达护骨素(OPG)、护骨素配体(OPGL)及其相关因子[肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体、巨噬细胞集落刺激因子(TRAIL、M-CSF)]的影响，探讨它们在骨转换过程中的重要作用。方法 接种人成骨细胞，再分别用不同浓度17β-E2和ICI干预，用RT-PCR法检测基因表达情况，用Western blot分析法检测蛋白表达情况。结果 (1)17β-E2能上调人成骨细胞中OPG的表达，下调OPGL、M-CSF及TRAIL的表达；(2)ICI对被检基因有不同的调节活性，与17β-E2合用时，表现出对后者的拮抗作用或协同作用。结论 雌激素缺乏时，成骨细胞中OPG的表达减少，而OPGL、M—CSF和TRAIL等细胞因子的表达增加，使破骨细胞的数量和活性增加，导致骨吸收增强和骨量丢失，这可能是绝经后骨质疏松症的重要的发病机制之一；ICI在对雌激素受体调节中，具有拮抗和激动的双重效应，属一种选择性雌激素受体调节剂。     

雌激素的抗衰老作用及其机制研究

目的 探讨雌激素抗人脐静脉内皮细胞(HUVEC)衰老的作用及其机制.方法 用60 μmol/L过氧化氢(H2O2)作用HUVEC 72 h产生诱导型细胞衰老模型,观察17β-雌二醇(E2)对内皮细胞衰老的干预作用.实验分空白组、H2O2刺激组、H202 E2组及H2O2 E2 ICI 182780组.用β-半乳糖苷酶染色检测细胞的衰老,同时检测细胞线粒体细胞色素C氧化酶的活性,检测细胞内ATP水平及活性氧(ROS)水平,透射电镜观察线粒体结构变化.结果 H2O2刺激组β-半乳糖苷酶染色阳性细胞比例增加,细胞衰老明显,同时线粒体细胞色素c氧化酶的活性下降,ATP水平下降,ROS水平增加,线粒体结构受损;而H2O2 E2组能明显减轻上述各种变化;H2O2 E2 ICI 182780组能明显阻断E2的各种保护作用.结论 E2具有抗血管内皮细胞衰老的作用,其作用机制是通过保护线粒体而实现的.     

动脉粥样硬化小鼠主动脉平滑肌上瞬时受体电位通道-1-大电导钙离子激活钾通道信号复合体分子表达量的变化研究

目的:观察动脉粥样硬化(AS)小鼠主动脉平滑肌上瞬时受体电位通道-1-大电导钙离子激活钾通道(TRPC1-BK)信号复合体分子表达量的变化。方法:AS组采用载脂蛋白E基因缺陷(ApoE~(-/-))小鼠,对照组采用野生型C57BL/6J小鼠,每组10只,分别采用高脂饲料和普通饲料喂养10周,处死后分离主动脉血管平滑肌组织,提取总核糖核酸(RNA)及总蛋白。使用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹(Western blot)及免疫组化染色等方法检测并比较两组TRPC1、大电导钙离子激活钾通道α亚单位(BKα)及大电导钙离子激活钾通道β_1亚单位(BKβ_1)亚基信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达量的差异。结果:AS组AS模型建立成功。RT-PCR检测结果:与对照组比,AS组TRPC1的mRNA表达量增多(P0.05),BKα和BKβ_1亚基的mRNA表达量减少(P均0.01)。Western blot法检测结果:与对照组比,AS组TRPC1蛋白表达量增多(P0.05),BKα和BKβ_1蛋白表达量减少(P均0.01)。免疫组化染色检测结果:TRPC1蛋白表达量增多(P0.01),BKα蛋白表达量减少(P0.01),BKβ_1蛋白表达量减少(P0.05)。结论:AS组小鼠主动脉平滑肌组织中TRPC1-BK信号复合体的mRNA和蛋白表达量均受影响。推测TRPC1-BK信号复合体有可能成为治疗AS相关性血管疾病的一个新靶点。     

雌激素受体介导Genistein对内皮型一氧化氮合酶表达的诱导作用

目的 研究雌激素受体介导的基因组效应在Genistein促进内皮型一氧化氮合酶表达过程中的作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,在氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)干预内皮细胞的基础上,经雌激素受体拮抗剂ICI182780(1 μmol/L)或经基因转录阻断剂放线菌素D(5 mg/L)作用30 min后,再加入Genistein(100 nmol/L)作用24 h,实时定量PCR检测内皮型一氧化氮合酶mRNA表达,Western Blotting检测内皮型一氧化氮合酶蛋白的表达.结果 与空白对照组相比,氧化型低密度脂蛋白(100 mg/L)明显下调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05);Genistein明显上调内皮型一氧化氮合酶 mRNA和蛋白表达(P<0.05),而且Genistein对内皮型一氧化氮合酶的诱导作用被雌激素受体拮抗剂ICI182780和基因转录阻断剂放线菌素D明显抑制(P<0.05 ).结论 Genistein促进内皮型一氧化氮合酶的表达与雌激素受体介导的基因组效应密切相关.     

小窝蛋白-1在膜雌激素受体介导的内皮祖细胞增殖中的作用

目的 探讨微囊结构关键蛋白——小窝蛋白-1( caveolin-1,CAV-1)在膜雌激素受体介导的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPC)增殖中的作用.方法 培养的EPC分别用不同浓度( 10-9～10-6 mol/L)雌二醇-牛血清白蛋白复合物(E2-BSA)作用24h或10-8 mol/L E2-BSA作用不同时间,或加雌激素受体阻断剂ICI 182,780、环糊精(MβCD)以及CAV-1 siRNA处理,在DMDM培养基中培养的EPC(不加任何试剂)作为对照,使用3H-脱氧胸苷掺入法检测其对EPC增殖的影响.CAV-1 siRNA干扰的效果利用免疫印迹法检测CAV-1蛋白表达来验证.结果 10-8 mol/L E2-BSA作用24h促进EPC增殖作用最大(比对照组高了约87.5％),ICI 182,780可以抑制其增殖作用,表明膜雌激素受体介导的信号通路参与了雌激素对EPC的增殖作用.用环糊精破坏微囊结构以及使用CAV-1 siRNA下调CAV-1蛋白表达都可抑制EPC的增殖(分别比10-8 mol/L E2-BSA组低了18.6％和41.2％).结论 膜雌激素受体可以通过CAV-1促进EPC的增殖.     

胰岛素对结肠平滑肌细胞增殖及其表达干细胞因子的影响

目的:探讨胰岛素(Ins)对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)增殖及其表达干细胞因子(SCF)的影响.方法:酶解法结合机械刮除法分离培养SD大鼠结肠SMCs,α-actin免疫荧光鉴定.将SMC随机分为Ins剂量组(0、2.5、5、20、40、80mg/L)与时间组(0、8、16、24 h),观察Ins作用下SMCs的增殖...     

高糖对大鼠结肠平滑肌细胞表达内源性胰岛素样生长因子1的影响

目的:探讨高糖对大鼠结肠平滑肌细胞(SMCs)表达内源性胰岛素样生长因子1(IGF-1)的影响.方法:酶解法分离培养SD大鼠结肠SMCs,α-actin免疫荧光鉴定,然后将大鼠结肠SMCs随机给予葡萄糖不同浓度(5.5mmol/L和25mmol/L)组及甘露醇对照组(5.5mmol/L葡萄糖+19.5mmol/L甘露醇)刺激,CCK8实验检测SMCs增殖情况;流式细胞术检测SMCs细胞周期;ELISA检测培养液上清中IGF-1的含量;Western blot、Real-time PCR法检测SMCs合成内源性IGF-1的表达变化.结果:高糖(25mmol/L)抑制大鼠结肠SMCs的增殖,在24h与正常糖浓度间差异最大(0.494±0.003vs0.597±0.044,P<0.05);高糖使约90%的结肠SMCs停滞在G1期(90.850%±0.706%vs55.202%±3.807%,P<0.05),进入S期的SMCs明显减少(3.622%±0.156%vs30.780%±3.808%,P<0.05);高糖环境中,结肠SMCs合成分泌的IGF-1减少(208.000ng/L±31.443ng/Lvs265.750ng/L±26.538ng/L,P<0.05),SMCs表达内源性的IGF-1 mRNA和蛋白也均减少(2.037±0.196vs2.257±0.273;0.247±0.045vs0.906±0.103,P<0.05).结论:高糖抑制大鼠结肠SMCs增殖,使SMCs内源性IGF-1表达减少.     

17β-雌二醇对血管平滑肌细胞CD36表达和胆固醇蓄积的影响

目的探讨17β-雌二醇对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)CD36表达的影响及其对肌源性泡沫化细胞产生的作用。方法组织贴块法培养小鼠原代主动脉SMCs;免疫荧光染色观察VSMCs上CD36的表达;17β-雌二醇(1nM～1μM)干预细胞6h～36h,Real-time PCR和Western blot分别检测CD36 mRNA和蛋白的表达变化;酶荧光化学法定量检测17β-雌二醇对ox-LDL诱导的VSMCs内胆固醇蓄积的含量改变。结果 CD36存在于小鼠VSMCs上。17β-雌二醇以浓度依赖和时间依赖方式抑制VSMCs上CD36 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),减少ox-LDL诱导的VSMC来源的泡沫细胞内胆固醇酯的蓄积(P<0.05)。非选择性雌激素受体拮抗剂ICI182,780阻断17β-雌二醇对CD36的下调作用及其对胆固醇酯蓄积的影响。结论 17β-雌二醇以雌激素受体依赖的方式,抑制VSMCs上CD36的表达,减轻VSMCs内胆固醇酯蓄积,抑制VSMCs源性的泡沫细胞的形成。     

KIM-1在TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用

目的探讨肾脏损伤因子(KIM)-1在转化生长因子(TGF)-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达中的作用。方法用TGF-β1刺激处理大鼠肾小管上皮细胞NRK52E,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平。在NRK52E中转染KIM-1 siRNA,给予TGF-β1刺激后,qRT-PCR和Western印迹法分别测定细胞中KIM-1 mR-NA和蛋白水平。Western印迹法检测细胞中上皮间质转化(EMT)标志蛋白上皮钙黏附素(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)和纤维化因子结缔组织生长因子(CTGF)、1型胶原酶(Col1)、3型胶原酶(Col3)的表达。结果对照组+TGF-β1细胞中KIM-1 mRNA和蛋白水平明显高于对照组(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中KIM-1表达水平显著低于对照组+TGF-β1,差异具有统计学意义(P<0. 05)。干扰组+TGF-β1细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,α-SMA表达水平降低,纤维化因子CTGF、Col1、Col3的表达也降低,与对照组+TGF-β1比较差异具有统计学意义(P<0. 05)。结论敲低KIM-1可以减少TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化因子表达,抑制肾小管上皮细胞EMT。     

瘦素对大鼠气道平滑肌β_2肾上腺素能受体表达的影响

目的观察瘦素(LP)对大鼠气道平滑肌细胞β2肾上腺素能受体(β2-AR)表达的影响,探讨LP参与哮喘发病的机制。方法组织贴块法原代培养大鼠气道平滑肌细胞(ASMCs),随机分为空白对照组(A组),LP 50 ng/L组(B组),LP 100 ng/L组(C组),LP 200 ng/L组(D组)及LP拮抗剂组(LP 200 ng/L+LP拮抗剂200 ng/L)(E组)分别干预24 h,采用Western印迹法及实时荧光半定量RT-PCR测瘦素受体(Ob-R)及β2-AR的表达。结果与A组相比,B、C、D组Ob-R表达明显升高,而β2-AR表达下降,证实LP可以上调Ob-R的表达并抑制β2-AR的表达;E组Ob-R表达较B、C、D组下降(P<0.05),与A组相比(P>0.05);E组β2-AR表达较B、C、D组升高(P<0.05),与A组相比(P>0.05)。结论 LP呈浓度依赖抑制大鼠气道平滑肌细胞β2-AR的表达。     

雌激素和他莫昔芬对大鼠动脉血管平滑肌细胞雌激素受体及表型蛋白的影响

目的 探讨雌激素(E2)和他莫昔芬(TAM)对血管平滑肌细胞(VSMC)雌激素受体(ERs)及表型蛋白的影响.方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMC,应用浓度为10-9、10-8和10-7 mmol/L的17β-雌二醇和浓度为10-8、10-7和10-6 mmol/L的TAM作用于VSMC 24 h.RT-PCR法检测实验后VSMC ERα、ERβ、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN) mRNA表达情况.     

β2-肾上腺素受体表达水平与支气管哮喘气道重塑的关系

目的通过观察β2-肾上腺素受体(β2-adenergic receptor,β2-AR)在支气管哮喘(简称哮喘)模型小鼠气道壁组织表达水平的变化,探讨β2-AR表达水平与气道重塑的关系及观察应用β2-受体激动剂对小鼠气道重塑的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠分为3组,每组10只,分别为对照组(DZ)、哮喘模型组(MX)和特布他林组(TB)。采用0.2%卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)溶液腹腔注射致敏及2.5%OVA溶液雾化吸入激发的方法制作小鼠哮喘气道重塑模型,同时给予β2-受体激动剂(特布他林)干预,最后一次激发24h内处死小鼠,取其肺组织,对肺组织切片进行HE染色,以医学图像分析软件测量支气管基底膜周径(Pbm)、总气道壁面积(Wat)和平滑肌面积(Wam),同时采用免疫组织化学法,应用上述图像分析软件检测气道壁组织β2-AR的积分光密度值(IOD)。结果①各组小鼠总气道壁面积/支气管基底膜周径(Wat/Pbm):MX组(25.37±4.25)与DZ组(12.89±1.71)、TB组(15.98±2.58)相比较,气道壁显著增厚(P<0.01),TB组与DZ组相比较,气道壁厚度无明显差别(P>0.05);各组小鼠平滑肌面积/支气管基底膜周径(Wam/Pbm):MX组(7.58±2.16)与DZ组(2.55±0.72)、TB组(3.54±1.63)相比,气道平滑肌增厚(P<0.05),TB组与DZ组相比气道平滑肌厚度无明显差别(P>0.05)。②各组小鼠气道壁β2-AR表达的IOD值:与DZ组(24.90±2.42)相比较,MX组(19.88±1.94)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平显著降低(P<0.01),同时TB组(22.10±1.08)小鼠气道壁组织β2-AR的表达水平也显著低于对照组小鼠(P<0.01)。结论①应用β2-受体激动剂可通过抑制气道平滑肌增殖,减轻小鼠哮喘气道壁增厚,干预气道重塑;②哮喘发生气道重塑时,小鼠气道壁组织β2-AR表达明显下调,同时应用-受体激动剂(特布他林)可下调小鼠气道壁组织-AR的表达。     

雌激素通过α受体亚型途径促进内皮祖细胞增殖和迁移的研究

目的观察1 7β雌二醇(雌二醇)及其选择性雌激素α受体激动剂(PPT)、β受体激动剂(DPN)对内皮祖细胞(EPC)增殖和迁移能力的影响。方法将培养的EPC分别加入不同浓度雌二醇、PPT、DPN(分别为1×10~(-10)、1×10~(-9)、1×10~(-8)、1×10~(-7)mol/L)进行培养后,分为雌二醇组、PPT组、DPN组和对照组。采用异硫氰酸荧光素标记荆豆凝集素I、DiI标记乙酰化低密度脂蛋白双染及CD1 33免疫荧光鉴定。并进行细胞增殖能力分析、EPC计数和流式细胞技术检测EPC细胞周期,Transwell技术检测EPC迁移能力的影响。结果与对照组比较,雌二醇组、PPT组吸光度值、细胞周期细胞比例、EPC迁移数目明显升高(P<0.05);与DPN组比较,雌二醇组和PPT组吸光度值、细胞周期细胞比例、EPC迁移数目明显升高(P<0.05);与DPN组(2.21±0.99)×10~5个EPC比较,雌二醇组(2.83±0.29)×10~5个和PPT组(2.56±0.11)×10~6个明显增多(P<0.05)。结论雌二醇主要通过α受体亚型途径刺激EPC的增殖和迁移。     

糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的影响

目的 探讨糖尿病对冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(BK通道)的影响变化,阐明糖尿病冠状动脉损伤的分子机制.方法 采用链脲霉素腹腔内注射建立大鼠糖尿病动物模型,酶消化法分离冠状动脉平滑肌细胞,全细胞膜片钳实验技术和Western blot分别记录和测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流和亚基的表达;采用荧光测定方法测定正常和糖尿病大鼠冠状动脉平滑肌细胞内钙离子浓度.结果 当刺激电压＞100 mV时,糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度明显低于正常冠状动脉平滑肌细胞BK通道电流密度(P＜0.05),在刺激电压为150 mV时,电流密度分别为(275±40)pA/pF(n=8)和(70±10)pA/pF(n=6);与正常组比较,糖尿病组BK通道α亚基蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),但β1亚基蛋白表达较低(P＜0.05);正常组和糖尿病组冠状动脉平滑肌细胞内钙离于浓度分别为(92±7)nmol/L(n=5)和(151±18)nmol/L(n=6),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道β1亚基表达下调、BK通道电流密度下降及细胞内钙离子浓度升高可能是糖尿病冠状动脉功能损伤的重要原因.