纤维连接蛋白在不同类型肺癌细胞侵袭过程中的作用及机制

目的 观察和探讨纤维连接蛋白(FN)对不同类型肺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法 在FN包被的培养板和FN滤膜的Boyden浸润小室等体外侵袭模型中，比较小细胞肿癌细胞系054A和肺腺癌细胞系A549粘附及迁移能力的差别，并检测FN对肿瘤细胞增殖活性的影响。分别给予细胞抗α3整合素、抗α5整合素、抗β1整合素单抗预处理后，观察侵袭性的变化。结果 FN增强A549细胞粘附、迁移及增殖活性的作用明显大于054A细胞。这种作用在A549细胞能被抗α3、抗α5和抗β1单抗抑制，而在054A细胞能被抗α3和抗β1单抗抑制。结论 FN对不同类型肺癌细胞侵袭能力的影响不同，可能与细胞膜整合素受体的差异有关。     

环状RNA circ_MTHFD2对mircoRNA-124的调控在肺癌培美曲塞耐药中的作用

目的 探讨circ_MTHFD2调控microRNA 124（miR 124）的表达在肺癌培美曲塞耐药发生过程中的作用。方法 采用高浓度反复间歇诱导法建立肺癌培美曲塞耐药细胞株A549／PEM。通过瘤内注射建立培美曲塞耐药的裸鼠移植瘤模型;采用Lipofectamine脂质体法将miR-124模拟物、miR-124抑制剂及阴性对照转染至A549和A549／PEM细胞,并分为miR-124上调组、miR-124抑制组及阴性对照组;采用CCK-8 法和流式细胞术检测各组细胞的增殖及凋亡情况,比较各组细胞对培美曲塞的敏感性;采用实时荧光定量PCR（QPCR）和基因芯片检测miR 124和环状RNA的表达;通过测序技术检测耐药细胞及耐药裸鼠的肿瘤组织与对照组间环状RNA的表达,预测环状RNA上的miR-124结合位点。结果 亲本细胞A549和耐药细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为 （30.78±1.97）μmol／L和（913.53±14.1）μmol／L,最终获得耐药指数（RI）为29.69±1.49的培美曲塞耐药细胞,命名为A549／PEM。耐药细胞A549／PEM中miR 124的表达显著降低,相比A549细胞,下降约145.952倍;下调miR-124表达的A549细胞对培美曲塞敏感性降低,miR-124抑制组及阴性对照组细胞的IC50分别为（80.45±3.50）μmol／L和（9.94±1.90）μmol／L,差异有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞术检测显示miR 124表达上调可以显著诱导A549、A549／PEM细胞的凋亡;通过高通量测序提示在耐药的细胞及组织中环状RNA表达明显上调,表达量上调的circ_MTHFD2可与miR-124结合。结论 circ_MTHFD2可能通过调控miR-124的表达,参与肺癌培美曲塞耐药的发生发展。     

培美曲塞对不同miR-21表达水平人肺癌细胞凋亡影响的实验研究

目的 检测不同miR-21表达水平的人肺癌细胞对培美曲塞的药物敏感性,并探讨可能作用机制。方法 采用Annexin V-EGFP荧光染色法定性检测及流式细胞术定量检测培美曲塞对不同miR-21表达水平的A549人肺癌细胞凋亡诱导作用,级联酶底物显色法检测caspase-3的活化状态,蛋白免疫杂交法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、 Bax的表达水平变化。结果 20μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导高表达miR-21的A549人肺癌细胞（A549-21H0）和低表达miR-21的A549细胞（A549-21L0）的凋亡,且A549-21L0处于细胞凋亡晚期,而A549-21H0处于细胞凋亡早期。5μmol／L培美曲塞作用24h可以诱导65.3％的A549-21L0 细胞早期凋亡,仅诱导2.8％的A549-21H0细胞早期凋亡。5μmol／L培美曲塞作用6h即可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应超过2倍（P＜0.01）;在9h时活化效应最强,活化效应超过7倍（P＜0.01）;18h后活化效应超过6倍（P＜0.01）;至24h时活化效应仍在5倍以上（P＜0.01）。同样条件下,5μmol／L培美曲塞作用18h才引起A549-21H0细胞中caspase-3活化,与作用前相比活化效应接近3倍（P＜0.01）,至24h活化效应在4倍以上（P＜0.01）。5μmol／L培美曲塞作用于A549-21L0细胞9h即可引起Bax表达水平显著性升高和Bcl-2表达水平明显下降。结论 A549-21L0人肺癌细胞对培美曲塞诱导的细胞凋亡具有更高的敏感性。培美曲塞可引起A549-21L0细胞中caspase-3活化,并可通过调控Bax和Bcl-2表达水平诱导凋亡,这种效应具有一定的时间-效应关系。     

PTEN及mTOR在人肺腺癌培美曲塞耐药株A549/PEM中的表达

目的:应用高浓度反复间歇法建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株A549/PEM,探讨PTEN、mTOR在人肺腺癌亲本株A549及培美曲塞诱导人肺腺癌耐药株A549/PEM中的表达变化.方法:采用终浓度为500ng/ml的培美曲塞反复间歇冲击建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株A549/PEM,MTT法检测细胞耐药性.RT-PCR、Western blot分别检测PTEN、mTOR在A549及A549/PEM细胞的mRNA及蛋白表达变化.结果:A549/PEM耐药指数为26.87±1.81,较亲本株A549升高约27倍.RT-PCR检测mRNA表达示A549/PEM的PTEN及mTOR基因表达与A549相比均表达上调(P=0.023;P ＜0.01);Western blot检测蛋白表达示A549/PEM的PTEN及mTOR蛋白表达与A549相比均表达上调(P＜0.01;P =0.04).结论:高浓度反复间歇法可成功建立人肺腺癌A549培美曲塞耐药细胞株模型;PTEN、mTOR表达变化可能与培美曲塞获得性耐药相关.     

吉非替尼与培美曲塞对人肺腺癌细胞 SPC - A1 生长及细胞周期的作用

目的：探索培美曲塞与表皮生长因子酪氨酸激酶抑制剂（EGFR—TKIs）吉非替尼联合应用对人肺腺癌细胞SPC—A1生长的影响,探索二者序贯用药是否比单药更有效,并从细胞周期角度分析其可能的细胞学机制。方法：RT—PCR法检测人肺腺癌细胞SPC—A1中EGFRmRNA表达,Westernblot法检测SPC—A1细胞中EGFR蛋白表达,四甲基偶氮唑盐[3-（4,5-dimethylthiazol-2-y1）-2,5-diphenyl—tetrazoliumbro—mide,M1Tr]显色分光光度法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。分别观察培美曲塞与吉非替尼单独、同时及间隔24小时序贯作用。结果：SPC—A1细胞中有EGFRmRNA和蛋白的表达,且其表达量为过表达。吉非替尼和培美曲塞分别在0．1pmol/L-1umoL／L和109-10-1g/L浓度范围内明显抑制SPC—A1细胞生长,呈浓度依赖性,IC50分别为：61．2nml/L（吉非替尼）和16．2ug/ml（培美曲塞）,二者在IC50下抑制作用呈时间依赖性,96h时达最大抑制。二者联合作用于细胞时对生长的影响与二者加药的次序有关,跟单药组相比,先用培美曲塞后用吉非替尼组对抑制细胞生长有明显增强作用（P〈0．05）,同时给药或先用吉非替尼后用培美曲塞组对抑制细胞生长无显著增强作用（P〉0．05）。细胞周期研究显示：吉非替尼和培美曲塞作用于不同的细胞周期,分别将SPC—A1细胞阻滞于G,期（G0／G1）和S期,先用吉非替尼后用培美曲塞组G1（G0／G1）期细胞显著增多,G2期（G2／M）细胞显著减少（P〈0．05）。同时用药组G1期（G0／G1）和s期细胞比例无显著变化,G2期（G2／M）细胞显著增多（P〈0．05）。先用培美曲塞后用吉非替尼组G1期（G0／G1）细胞显著减少,s期细胞比例无显著变化,G2期（G2／M）细胞显著增多（P〈0．05）。结论：吉非替尼和培美曲塞都能抑制SPC—A1细胞生长,二者联合作用对细胞生长的影响与给药次序有关,先用吉非替尼后用培美曲塞对抑制细胞生长无显著增强作用,而先用培美曲塞后用EGFR—TKIs则表现有明显的协同性,且这种关系可能与它们对细胞周期的影响相关。     

培美曲塞和吉非替尼不同时序应用对人肺腺癌细胞的作用和机制

目的 探讨培美曲塞与吉非替尼不同时序应用对肺腺癌细胞A549和PC-9生长及凋亡的影响, 并阐述其可能机制。方法 MTT法检测各组细胞的增殖抑制情况,流式细胞仪检测各组细胞凋亡及细胞周期分布,Western印迹法检测对EGFR下游信号通路及TS酶蛋白水平表达的影响。结果 培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼对PC-9和A549细胞增殖抑制率及凋亡率较单药组均提高（P<0.05）,培美曲塞可以提高EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平,而吉非替尼表现为抑制作用, 同时吉非替尼降低TS酶表达。培美曲塞序贯吉非替尼,培美曲塞同步联合吉非替尼抑制EGFR、AKT 、ERK磷酸化水平较单药更强。吉非替尼主要将PC-9、A549细胞阻滞在G0/G1期;培美曲塞主要将细胞阻滞在S期。培美曲塞序贯吉非替尼、培美曲塞同步联合吉非替尼较其他组G2/M期细胞比例提高（P<0.05）。结论 培美曲赛序贯吉非替尼、培美曲赛同步联合吉非替尼在PC-9、A549细胞中均起到协同增效作用,且培美曲赛序贯吉非替尼协同作用更为显著,可能主要与培美曲赛诱导EGFR、AKT 、ERK磷酸化及吉非替尼降低TS酶作用有关。     

基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞凋亡及转移能力的影响

背景与目的 基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是一个重要的细胞外基质降解酶,与肿瘤的发生发展生长密切相关。本研究初步探讨MMP-9反义寡核苷酸（MMP-9ASODN）对人肺腺癌细胞A549凋亡及转移能力的影响。方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN对A549细胞周期和凋亡比率的影响;MTT比色法和划痕迁移试验观察MMP-9ASODN对A549细胞体外黏附以及迁移的影响。结果 MMP-9ASODN对A549细胞存活率抑制呈浓度和时间依赖性,MMP-9ASODN浓度为600nmol/L、作用48h时抑制作用最明显;与对照组相比,转染MMP-9ASODN的A549细胞凋亡百分比明显升高（P〈0.01）,而黏附力及迁移细胞数显著降低（P〈0.01）。结论 MMP-9ASODN在体外能够显著降低A549细胞的黏附及迁移能力,有效地抑制肺癌A549细胞的增殖,同时促进其凋亡。     

地塞米松预处理人肺腺癌 A549 细胞对顺铂抗肿瘤活性的影响

目的：探讨地塞米松（dexamethasone,DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后,对化疗药物顺铂（cispla—tin,DDP）抗肿瘤活性的影响。方法：以不同浓度（500、1000nmol／L）DEX预先作用于人肺腺癌A549细胞12h后,再用不同浓度（1．25、2．5、5u/ml）DDP处理。流式细胞术测定细胞凋亡,细胞计数观察细胞生长密度、形态。结果：DEX对A549细胞增殖有抑制作用。DDP能够明显抑制A549细胞增殖,促进其凋亡。DEX预处理后DDP干预A549细胞的增殖抑制作用较单一用DDP增强,且随着DEX浓度的增加,其对化疗药物DDP凋亡抑制作用的影响增强。结论：DEX预处理对顺铂诱导的人肺腺癌A549细胞的凋亡具有明显的促进作用,能增强DDP的抗肿瘤活性。     

PTEN、PIK3CA在培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988中的表达及其意义的初步探讨

目的 探索胰腺癌细胞株Patu8988对培美曲塞产生获得性耐药的机制,分析PTEN、PIK3CA在获得耐药前后mRNA及蛋白水平变化及其对细胞迁移及侵袭能力的影响。方法 通过RT-PCR及Western blot技术分别检测正常胰腺癌细胞株Patu8988及培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988中PTEN及PIK3CA的mRNA及其蛋白产物表达水平变化。应用迁移及侵袭实验分别检测正常胰腺癌细胞株和耐药的胰腺癌细胞株不同生物学行为。结果 RT-PCR发现与正常胰腺癌细胞株Patu8988相比,培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988中,PTEN和PIK3CA在mRNA水平表达均显著增高;Western blot发现培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988中PTEN、PIK3CA在蛋白水平同样表达升高,PTEN和PIK3CA在耐药的胰腺癌细胞株中的表达较正常胰腺癌细胞株分别上升89%和76%;迁移及侵袭实验的结果显示,培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988迁移及侵袭能力较正常胰腺癌细胞株Patu8988均显著下降(P＜0.05)。结论 PTEN、PIK3CA在对培美曲塞耐药的胰腺癌细胞株Patu8988中表达均异常升高,而同时高表达PTEN和PIK3CA的胰腺癌耐药细胞株的迁移及侵袭能力较正常胰腺癌细胞株显著降低,提示PTEN和PIK3CA共同参与胰腺癌细胞对培美曲塞产生获得性耐药过程,且有可能改变细胞的生物学行为。     

CCL7过表达促进肺癌细胞A549的增殖和侵袭

目的:通过上调CCL7的表达,观察其对肺癌细胞A549增殖、迁移及侵袭等生物学功能的影响,探讨CCL7在肺癌转移中发挥的作用。方法:慢病毒包装CCL7过表达载体感染A549细胞系,分别进行MTT、划痕实验和Transwell小室细胞侵袭实验。结果:MTT实验显示CCL7过表达促进了A549细胞增殖(P<0.01)。划痕实验表明CCL7过表达可以促进A549细胞迁移（P<0.01）。同时Transwell小室侵袭实验证实过表达CCL7的A549细胞具有更强的侵袭能力（P<0.05）。结论:CCL7的过表达可以促进肺癌细胞系A549的增殖、迁移和侵袭,对CCL7的进一步研究可以为肺癌基础研究及诊断治疗提供新的方向。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。