雷公藤内酯醇衍生物对肝癌细胞增殖、凋亡的作用研究

目的研究新型雷公藤内酯醇（Triptolide,TPL）衍生物对正常肝细胞的毒性以及对肝癌细胞的增殖、凋 亡作用。方法通过对TPL 进行化学修饰,获得2 种新型衍生物：雷公藤内酯三醇（TP-3-OH）和丙烯酸雷公 藤甲素酯（TPO）。通过体外培养人胚胎肝细胞LO2 和肝癌细胞HepG2、Hep3B、SMMC-7721,分为DMSO 对 照组, TPL/TP-3-OH/TPO 低、中、高浓度组（25、50、100 nmol·L-1）。通过检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH） 的活性来评价TP-3-OH、TPO 对肝细胞的毒性;采用MTT 实验检测细胞增殖情况;采用流式细胞术及 Western Blot 法检测细胞凋亡及凋亡通路相关蛋白表达情况;采用划痕实验检测细胞迁移能力。结果与TPL 组比较,50、100 nmol·L-1 浓度条件下TP-3-OH、TPO 组的LO2 细胞培养上清中的LDH 活性明显降低（P＜ 0.05,P＜0.01）。与DMSO 对照组比较,TPO 中、高浓度（50、100 nmol·L-1）组的LO2 细胞增殖抑制率明显升 高（P＜0.05,P＜0.01）,TPO 低、中、高浓度（25、50、100 nmol·L-1）组的HepG2、Hep3B、SMMC-7721 肝癌 细胞增殖抑制率均明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;TPO 高浓度（100 nmol·L-1）组的LO2、HepG2 和SMMC-7721 细胞的早期、晚期细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05,P＜0.01）;TPO 中、高浓度（50、100 nmol·L-1）组SMMC- 7721、HepG2 细胞的cleaved-Caspase-3、cleaved-PARP 蛋白表达显著上调（P＜0.01）;TPO 中浓度（50 nmol·L-1） 组SMMC-7721 细胞的24 h 迁移率明显降低（P＜0.05）。结论经化学修饰获得的2 种新型TPL 衍生物对肝细 胞的毒性降低,其中TPO 具有抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。     

雷公藤内酯醇半合成衍生物对人结肠癌细胞系荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究

目的:观察和评价雷公藤内酯醇的半合成衍生物(MC002)对人结肠癌HCT-8小鼠模型的肿瘤抑制作用。方法:用BALB/C裸小鼠接种人结肠癌HCT-8瘤株造成小鼠肿瘤模型,以MC002对荷瘤小鼠的相对肿瘤增殖率、瘤重、抑瘤率为指标评价MC002对小鼠的抑瘤作用。结果:MC002各剂量组瘤体积明显小于模型对照组,瘤重均显著降低,在1.5mg.kg^-1、1.0mg·kg^-1给药10次后T/C%均小于40%(P<0.05),且具有量效关系。结论:MC002能有效抑制人结肠癌HCT-8荷瘤小鼠体内肿瘤生长。通过深入研究MC002有可能发展成为一种新型抗癌药。     

HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果雷公藤内酯醇在5~120μg/mL,线性关系良好(r=0.9981)。平均回收率96.5%(n=9)。RSD3%。结论本方法重现性好,灵敏度高。     

雷公藤内酯醇抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡作用初探

目的：初步探讨雷公藤内酯醇诱导人卵巢癌细胞株Caov-3细胞的凋亡作用及其分子机制。方法：采用MTT法检测雷公藤内酯醇对人卵巢癌细胞株Caov-3的生长抑制作用；用透射电镜观察细胞超微结构的变化；以AnnexinV—FITC标记法定量检测细胞凋亡；以蛋白印迹分析雷公藤内酯醇对Caspase3蛋白表达的影响。结果：雷公藤内酯醇能够抑制Caov-3细胞的增殖，且抑制率具有浓度和时间依赖性；雷公藤内酯醇处理Caov-3细胞后，光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞；Annexin V—FITC标记法的定量检测进一步证实了雷公藤内酯醇诱导细胞调亡的作用；蛋白印迹检测表明雷公藤内酯醇可使Caspase3表达变化。结论：雷公藤内酯醇对人Caov-3细胞系具有较强的直接抑制作用，可以诱导癌细胞凋亡，可能与其调节癌细胞Caspase-3蛋白活化有密切的关系。     

雷公藤氯内酯醇研究进展

雷公藤氯内酯醇是从雷公藤值物中分离得到的环氧二萜内酯化合物，足雷公藤中的主要活性物质，本文从生源、半合成、药理等三个方面对该化合物进行全面介绍。     

雷公藤内酯醇对结肠癌细胞COX-2和iNOS表达的抑制作用

 目的研究雷公藤内酯醇(TP)抑制结肠癌SW114细胞株环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物PGE2和NO的表达,探讨TP的抗肿瘤机制。方法不同浓度的TP作用于结肠癌细胞株24h,通过RT-PCR,Western印迹杂交,ELISA检测环氧化酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其产物,同时提取各组细胞蛋白质,TransAM测定核转录因子NF-κB活性。结果TP对结肠癌细胞株COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,而且也抑制SW114细胞的NF-κB活性,这些作用与剂量呈依赖关系。结论TP对SW114细胞COX-2和iNOS的表达及其产物PGE2和NO的合成有抑制作用,这种作用可能通过增强TP对核转录因子NF-κB活性的抑制作用而实现,揭示了TP抗肿瘤的部分依据。     

HPLC法检测雷公藤药材中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立测定雷公藤药材中雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤醇提物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：PhenomenexLunaC18（4．6mm×250mm,5m）;流动相：甲醇-水;梯度洗脱：0min（甲醇40％）-30min（甲醇50％）;流速1．0mL·min^-1;检测波长218nm;柱温：35℃。结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,25～400μg·ml^-1范围内有良好的线性关系,平均回收率为98．17％。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤药材中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

雷公藤内酯醇抑制卵巢癌细胞增殖并诱导凋亡作用初探

目的:初步探讨雷公藤内酯醇诱导人卵巢癌细胞株Caov-3细胞的凋亡作用及其分子机制。方法:采用MTT法检测雷公藤内酯醇对人卵巢癌细胞株Caov-3的生长抑制作用;用透射电镜观察细胞超微结构的变化;以AnnexinⅤ-FITC标记法定量检测细胞凋亡;以蛋白印迹分析雷公藤内酯醇对Caspase 3蛋白表达的影响。结果:雷公藤内酯醇能够抑制Caov-3细胞的增殖,且抑制率具有浓度和时间依赖性;雷公藤内酯醇处理Caov-3细胞后,光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞;AnnexinⅤ-FITC标记法的定量检测进一步证实了雷公藤内酯醇诱导细胞凋亡的作用;蛋白印迹检测表明雷公藤内酯醇可使Caspase 3表达变化。结论:雷公藤内酯醇对人Caov-3细胞系具有较强的直接抑制作用,可以诱导癌细胞凋亡,可能与其调节癌细胞Caspase-3蛋白活化有密切的关系。     

HPLC法检测雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的含量

目的：建立雷公藤超声提取物中测定雷公藤内酯醇含量的方法。方法：雷公藤超声提取物经中性氧化铝层析柱洗脱,采用HPLC法检测雷公藤内酯醇含量。色谱柱：大连江申公司C 18柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相：乙腈-水（25∶75）;检测波长：218nm;流速：1.0m l.min^-1;柱温：30℃;结果：雷公藤内酯醇与其他成分分离效果良好,线性范围为0.96-11.52μg/m l（r=0.9997）,平均回收率为97.82%。结论：该方法准确、灵敏,可作为雷公藤超声提取物中雷公藤内酯醇的定量分析方法。     

紫云金对雷公藤内酯醇引起静脉炎的作用

紫云金系紫草、白芷、冰片、银花等的醇提物,ig-紫云金2－4g/kg 对雷公藤内酯醇引起的小鼠尾静脉炎、大鼠足跖肿胀、小鼠耳廓水肿及疼痛反应均有显著的抑制作用。提示,紫云金对雷公藤内酯醇iv引起的静脉炎有防治作用。     

黄芩汤体外诱导人结肠癌SW620细胞凋亡及其对凋亡相关因子表达的影响

目的：研究黄芩汤对人结肠癌SW620细胞凋亡的作用及其机制。方法：CCK-8和MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测Bcl-2、Bax蛋白表达;酶标免疫测定Caspase-3和Caspase-8的相对活性。结果：与对照组相比,不同浓度黄芩汤处理的细胞增殖抑制率显著增加（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率升高（P<0.05或P<0.01）,抑制细胞凋亡蛋白Bcl-2表达降低而促细胞凋亡蛋白Bax表达明显增高（P<0.05或P<0.01）,Caspase-3和Caspase-8活性增强（P<0.05或P<0.01）,并呈量效依赖关系。结论：黄芩汤能够有效的促进结肠癌SW620细胞凋亡,其机制可能与抑制Bcl-2表达而促进Bax表达并增强Caspase的活性有关。     

姜黄素对结肠癌SW-480细胞抗失巢凋亡的影响

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞抗失巢凋亡的影响。方法:采用不同浓度的姜黄素处理结肠癌SW-480细胞,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP切口末端标记法(TUNEL)法检测结肠癌细胞抗失巢凋亡,采用软琼脂集落形成试验检测细胞的生长增殖。结果:姜黄素能有效地抑制结肠癌SW-480细胞锚着不依赖性增殖,且呈浓度依赖性。结肠癌细胞经姜黄素处理后,可促进失巢凋亡且与时间和浓度相关。结论:姜黄素可有效地抑制结肠癌细胞锚着不依赖性增殖,其机制可能与促进失巢凋亡有关。     

克瘤丸对结肠癌细胞HT-29细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察克瘤丸对人结肠癌细胞生长的影响及其作用机制.方法 将4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml浓度克瘤丸作用于HT-29细胞24～48h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测克瘤丸对HT-29细胞增殖的影响,AnnexinV单染法检测克瘤丸对HT-29细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测细胞周期的分布情况. 结果 与对照组比较,浓度为4、2、1、0.5mg/ml克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率差异均有统计学意义(P＜0.01);4、2、1mg/ml浓度克瘤丸作用HT-29细胞48h,OD值、48h抑制率均明显优于0.25mg/ml及0.5mg/ml浓度克瘤丸(P＜0.01).与1mg/ml浓度比较,2mg/ml、4mg/ml组凋亡率差异有统计学意义(P＜0.05).4mg/ml时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区,与1mg/ml、2mg/ml组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 克瘤丸对人结肠癌细胞HT-29的增殖具有抑制作用并能够引起该细胞的凋亡.     

健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞的逆转作用

目的:探讨健脾解毒方对人结肠癌多药耐药细胞HCT8/V的逆转作用及其可能机制.方法:人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞常规培养,5％健脾解毒方药物血清作用48 h后,MTT法检测HCT8/V细胞对化疗药敏感性的影响,高效液相色谱法( HPLC)检测耐药细胞内长春新碱(VCR)药物浓度,流式细胞仪分析健脾解毒方对5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导的HCT8/V细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:健脾解毒方能增加HCT8/V细胞对VCR、顺铂(DDP)、5-Fu、吡柔比星(THP)4种化疗药物的敏感性,4种化疗药的IC50分别从( 191.08±18.18 )mg·L-1下降到(90.13±6.33 )mg·L-1;(290.79±28.38) mg·L-1下降到(22.16±1.82) mg·L-1;(23.12±1.99) mg·L-1下降到(9.88±0.86 )mg·L-1;(26.40±2.92) mg·L-1下降到(19.41±1.48) mg·L-1;健脾解毒方药物血清作用HCT8/V细胞48 h后细胞内VCR浓度明显增高(P＜0.01),且呈剂量依赖性.健脾解毒方能提高5-Fu诱导的HCT8/V细胞的凋亡率,使细胞阻滞于G1期.结论:健脾解毒方通过增加结肠癌多药耐药细胞内化疗药物浓度,抑制细胞增殖,诱导其凋亡,逆转HCT8/V细胞株的多药耐药性.     

粉防己碱对人结肠癌细胞增殖的影响

目的 :观察粉防己碱对人结肠癌细胞 H T2 9增殖的影响 ,并初步探讨其作用机制。方法 :采用流式细胞仪分析细胞周期变化 ,并测定细胞内游离钙离子浓度水平 ;MTT比色法测定细胞增殖情况。结果 :2～ 10 μg/m L 的粉防己碱 (Tet)能明显抑制 HT2 9细胞的增殖 (P<0 .0 5 ) ,其半数抑制浓度 (IC5 0 )约为 8μg/m L。 8μg/m L 的 Tet可以使细胞内游离钙离子浓度 (〔Ca2 +〕i)水平明显降低 (P<0 .0 1)。不同浓度的 Tet可使 HT2 9细胞 C1 期或 G2 + M期明显增加 ,S期细胞明显减少 (P<0 .0 1)。结论 :粉防己碱通过抑制钙离子信号传递途径 ,使细胞周期进行受阻 ,可能是其抑制 HT2 9细胞增殖的一个主要机制。     

肠复康诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡的机制

目的探讨肠复康诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡的机制。方法建立人结肠癌HT-29癌细胞株裸小鼠皮下移植瘤模型,用电子天平测量移植瘤的质量,苏木精伊红(HE)染色计数凋亡细胞数,免疫组化染色结合图像分析系统半定量检测移植瘤细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax、半胱天冬酶3(caspase-3)的积分光密度(IOD),同时计算Bcl-2/Bax IOD比值,并使用逐步引入剔出模型进行单因素和多因素线性回归分析。结果与模型组比,肠复康组和西药组均使移植瘤瘤体质量量明显减轻(P<0.05或0.01),凋亡细胞数明显增多(P均<0.01),同时能显著增高瘤细胞iNOS、Bax及caspase-3蛋白的含量(P<0.05或0.01),显著降低瘤细胞Bcl-2/Bax比值(P<0.05或0.01);单因素回归分析显示,瘤细胞iNOS、Bcl-2、Bax及caspase-3含量和Bcl-2/Bax比值与移植瘤凋亡细胞数有关;多因素回归分析显示,移植瘤凋亡细胞数与瘤体质量呈明显负相关(r=-0.775,P<0.01),瘤细胞iNOS及Bax蛋白含量与移植瘤凋亡细胞数呈明显正相关(r=0.771,P<0.01,r=0.763,P<0.01)。结论肠复康能诱导人结肠癌HT-29裸小鼠移植瘤细胞凋亡,其机制之一可能是促进NO的生成,通过线粒体凋亡途径激活caspase-3,导致瘤细胞凋亡。     

中药复方脏毒清体外诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的影响

目的:探讨中药复方脏毒清对人结肠癌SW480细胞的促凋亡作用及机制。方法:体外培养人结肠癌细胞株SW480,用不同质量浓度的脏毒清(0.05,0.10,0.15,0.20,0.25 g·m L-1)进行干预12,24,36,48 h后,采用MTT法检测细胞增殖抑制率。用不同质量浓度脏毒清(0.10,0.15,0.20 g·m L-1)作用SW480细胞24 h后,另设空白组,采用用荧光染色技术和流式细胞仪检测细胞凋亡率,分光光度法测定半胱天冬酶-3(Caspase-3),Caspase-9的酶活性,Western blot技术检测凋亡蛋白Bax,Bcl-2蛋白的表达情况。结果:MTT结果显示脏毒清对其有明显的增殖抑制作用,并呈现时间和剂量依赖性;与空白组比较,脏毒清0.10,0.15,0.20 g·m L-1组能明显诱导SW480细胞凋亡,Caspase-3及Caspase-9酶活性明显升高,促凋亡蛋白Bax表达明显升高,抗凋亡蛋白Bal-2表达明显降低,均具有统计学意义(P0.01)。结论:脏毒清具有促进人结肠癌SW480细胞凋亡的作用,并通过线粒体凋亡途径发挥作用。