AngII对人脐动脉平滑肌细胞MMP-9、TIMP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨AngII对HUASMCMMP-9、TIMP-1mRNA基因表达的影响。方法(1)应用10-5mol/L 的AngII分别与HUASMC及在10-5mol/L 的Ox-LDL中刺激过的HUASMC共同培养0 ,6 ,12 ,24 ,36 ,48h后收集细胞。(2)应用不同浓度的AngII（10-7 ,10-6 ,10-5 ,10-4mol/L）分别与上述两种细胞,共同培养24h后收集细胞。(3)应用RT-PCR的方法检测细胞内MMP-9、TIMP-1的mRNA表达量。结果 在浓度为10-5mol/L 的AngII干预下,未刺激过的细胞MMP-9、TIMP-1的表达量12h时即明显呈时间依赖性升高和降低,36h达高峰（P<0.01）;刺激过的细胞,上述表达量在6h时开始发生明显改变,36h达高峰（P<0.01）;在不同浓度AngII刺激下,MMP-9、TIMP-1的表达量随着浓度的加大而升高和下降,10-5mol/L时达最高和最低（P<0.05）,进一步加大浓度表达量无明显变化（P>0.05）;不同时间和不同浓度作用时,刺激过的细胞MMP-9表达量高均于未刺激细胞（P<0.05）,TIMP-1表达量均低于未刺激细胞（P<0.05）。结论 在一定的浓度和时间范围内,AngII呈浓度和时间依赖性升高MMP-9和降低TIMP-1,影响动脉粥样硬化斑块的稳定性而导致急性冠脉综合症的形成,Ox-LDL可以加剧这种作用。     

白细胞介素17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响

目的：探讨白细胞介素17（IL-17）对大鼠肝星状细胞（HSCs）增殖及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）表达的影响及其与肝纤维化的关系。方法：采用Optiprep密度梯度离心法分离HSCs并进行鉴定、传代。采用免疫细胞化学法检测IL-17作用HSCs 72 h后α肌动蛋白（α-SMA）表达的影响。采用MTT法检测IL-17作用HSCs 24、48和72 h后细胞的增殖情况。采用RT-PCR法和ELISA法分别检测IL-17作用HSCs后MMP-9、TIMP-1 mRNA和蛋白表达的影响。结果：成功分离并培养HSCs,一定浓度的IL-17能促进HSCs α-SMA的表达并且促进HSCs增殖。IL-17能提高HSCs MMP-9和TIMP-1 mRNA和蛋白的分泌,呈浓度依赖性,且TIMP-1/MMP-9比值随IL-17浓度增加而递增。结论：IL-17不仅促进HSCs增殖,还能促进α-SMA、MMP-9和TIMP-1的表达,同时提高TIMP-1与MMP-9的比值,可能在肝纤维化中扮演重要角色。     

基质金属蛋白酶及其抑制剂在妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义

目的 探讨Ⅳ型胶原主要降解物MMP-2、MMP-9以及相应的组织抑制剂TIMP-1、TIMP-2在妊娠滋养细胞疾病的表达及相互调节作用.方法 采用免疫组化S-P法检测20例葡萄胎、17例侵蚀性葡萄胎、13例绒癌组织中MMP-2、MMP-9及其TIMP-1、TIMP-2的表达情况,另外选择20例正常早孕(<12周)绒毛组织做对照.结果 (1)MMP-2随着滋养细胞恶性程度的增加表达显著升高(P<0.001);(2)MMP-9在滋养细胞肿瘤中表达明显增强,同时TIMP-1的表达也相应增加,但表达强度较弱;(3)葡萄胎、侵葡、绒癌组织中TIMP-2的表达与正常早孕绒毛组织比较明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TIMP-2随着滋养细胞疾病恶性程度的增加表达明显减弱,MMPs/TIMP表达失衡,转向MMPs产生的活性,可能参与了滋养细胞疾病的发病过程.     

MDI301调节MMP-1、MMP-2、TIMP-1和前胶原蛋白的表达

目的:检测MDI301对正常细胞和高糖细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和I、III型前胶原蛋白表达的影响。探讨MDI301对糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗潜力。方法:采用Real time PCR检测人成纤维细胞中MMP-1、MMP-2和TIMP-1 mRNA的表达水平;ELISA方法检测细胞培养基中TIMP-1蛋白表达量;Western blot检测I型和III型前胶原蛋白表达水平。结果:MDI301能降低高糖细胞中MMP-1和MMP-2 mRNA的表达(P<0.05),增加TIMP-1 mRNA和细胞培养上清中TIMP-1蛋白的表达(P<0.05);同时还能增加高糖细胞中I和III型前胶原蛋白的表达量(P<0.05)。结论:MDI301可能会对糖尿病患者体内MMP-1、MMP-2、TIMP-1和I、III型前胶原蛋白的表达有相似的作用,使其有望用于糖尿病皮肤溃疡和足溃疡的治疗。     

卡维地洛对心肌梗死大鼠心肌基质金属蛋白酶及其组织抑制因子表达的影响

目的:明确卡维地洛对心肌梗死(心梗)后大鼠心肌基质金属蛋白酶(MMP)及其组织抑制因子表达的影响.方法:建立大鼠急性心梗模型,成模后用药组(n=12)予卡维地洛(10 mg·kg-1·d-1)灌胃,用药42 d.未用药组(n=12)予等量生理盐水灌胃.另设假手术组(n=9)为对照.检测各组大鼠心功能和血流动力学参数,酶谱法测定心室肌MMP-2、MMP-9活性,免疫组化和荧光定量PCR检测心室肌MMP-2、MMP-9、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-2)蛋白和mRNA表达以及TIMP-1、IL-1β、TNF-α mRNA表达.结果:与假手术组比较,心梗组左室舒张末压(LVEDP)升高、左室压最大上升速率( dp/dtmax)和最大下降速率(-dp/dtmax)均降低(P<0.01),MMP-2、MMP-9活性增强(P<0.01),MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白表达增多,MMP-2、MMP-9、TIMP-2、IL-1β mRNA升高(P<0.05),TIMP-1、TNF-α mRNA升高(P<0.01);与心梗未用药组比较,用药组LVEDP降低(P<0.01), dp/dtmax、-dp/dtmax升高(P<0.05),MMP-2、 MMP-9的活性降低(P<0.01).MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白和mRNA表达减少以及TIMP-1、IL-1β、TNF-α mRNA表达减少.结论:卡维地洛在显著降低MMP-2、MMP-9活性的同时也轻度降低了TIMPs表达;它还可以通过减少IL-1β和TNF-α基因表达,起到降低MMPs分泌的作用,从而预防和逆转心梗后心室重构,改善心功能.     

MMP-2/TIMP-2在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义

目的 探讨金属基质蛋白酶-明胶酶A(MMP-2)及其抑制剂(TIMP-2)在妊娠滋养细胞疾病发生、发展及预后中的作用.方法 采用原位杂交、免疫组化法分别从mRNA、蛋白质水平检测MMP-2/TIMP-2在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中的表达.结果 未恶性转化葡萄胎MMP-2低表达,TIMP-2高表达,恶性转化葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌中MMP-2表达逐渐增强,TIMP-2表达相反.妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄胎组相比,MMP-2、TIMP-2的表达均有显著性差异(P＜0.01,P＜0.001).结论 金属基质蛋白酶的激活与抑制比例失衡在妊娠滋养细胞疾病发展、浸润和转移中起重要作用.     

AngⅡ对人脐动脉平滑肌细胞MMP-9和TIMP-1 mRNA表达的影响

目的 探讨Ang Ⅱ对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)MMP-9,TIMP-1 mRNA基因表达的影响.方法 (1)应用10-5mol/L的Ang Ⅱ分别与HUASMC及在10-5mol/L的Ox-LDL中刺激过的HUASMC共同培养0,6,12,24,36,48 h后收集细胞.(2)应用不同浓度的Ang Ⅱ(10-7,10-6,10-5,10-4mol/L)分别与上述两种细胞,共同培养24 h后收集细胞.(3)应用RT-PCR的方法检测细胞内MMP-9,TIMP-1的mRNA表达量.结果 在浓度为10-5mol/L的Ang Ⅱ干预下,未刺激过的细胞MMP-9,TIMP-1的表达量12 h时即明显呈时间依赖性升高和降低,36 h达高峰(P<0.01);刺激过的细胞,上述表达量在6 h时开始发生明显改变,36 h达高峰(P<0.01);在不同浓度Ang Ⅱ刺激下,MMP-9,TIMP-1的表达量随着浓度的加大而升高和下降,10-5mol/L时达最高和最低(P<0.05),进一步加大浓度表达量无明显变化(P>0.05);不同时间和不同浓度作用时,刺激过的细胞MMP-9表达量均高于未刺激细胞(P<0.05),TIMP-1表达量均低于未刺激细胞(P<0.05).结论 在一定的浓度和时间范围内,Ang Ⅱ呈浓度和时间依赖性升高MMP-9和降低TIMP-1,影响动脉粥样硬化斑块的稳定性而导致急性冠脉综合征的形成,Ox-LDL可以加剧这种作用.     

TNF-α和IFN-γ对Hep-2喉癌细胞MMPs表达的调节作用

目的:研究喉癌Hep-2细胞系中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2和MT1-MMP的表达及TNF-α和IFN-γ对MMPs表达的调节作用.方法:分别在细胞生长的不同时期收集细胞,采用半定量RT-PCR方法,分析Hep-2细胞MMP-2、MMP-9、MT1-MMP和TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达水平.结果:细胞接种后24 hMMP-2和MMP-9的mRNA水平最高.Hep-2细胞在第2、3天MT1-MMP mRNA的表达水平最高,细胞表达相对恒定的TIMP-1而细胞内TIMP-2 mRNA的表达水平比TIMP-1高2倍.TNF-α可增强Hep-2细胞的MMP-2 mRNA的表达, IFN-γ可抑制MMP-2的表达. 两种因子联合应用时其作用可相互抵消.MT-MMP和TIMP-1对TNF-α和IFN-γ的调节不敏感.TIMP-2 mRNA的水平可被TNF-α抑制1倍,而IFN-γ能够增强TIMP-2 mRNA的水平.结论:细胞因子对MMPs的转录有调节作用,IFN-γ能够降低MMP-2、MMP-9的表达,可成为一种很有价值的喉癌辅助治疗药物.     

心室减负荷对缺血性心力衰竭MMPs/TIMPs的影响

目的 通过大鼠缺血性心力衰竭心脏减负荷模型,探讨心室减负荷对缺血性心力衰竭心脏MMPs -TIMPs 表达的影响。方法 通过结扎冠状动脉前降支的方法,形成缺血性心力衰竭模型,随机分为两组,即减负荷组(n = 14)与心力衰竭组 (n=10),前者通过异位心脏移植的方法形成左心室减负荷模型;后者不进行心脏移植,另外8只大鼠作为空白对照组。2周后,测量左心室收缩压(LVSP)、左心室舒张末压(LVEDP)及最大压力上升及下降速度(±dP/dtmax)。用Western blot法、RT-PCR检测MMP-1、MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2、TIMP-3,以及TIMP-1/MMP-1的比值和 TIMP-3/MMP-9、TIMP-2/MMP-2比值和 TIMP-3/MMP-9 比值。结果 与对照组比较,心力衰竭组中的 MMP-1、MMP-2和MMP-9 基因表达明显增加;与心力衰竭组比较,在减负荷后,减负荷组的 MMP-2和MMP-9 基因表达水平下降明显,差异有统计学意义(P<0.05),TIMP-2 和 TIMP-3 的基因表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与心力衰竭组比较,TIMP-1/MMP-1的比值和 TIMP-3/MMP-9 均有明显升高 (P＜0.05);TIMP-2/MMP-2 的比值升高更为明显 (P＜0.01)。与心力衰竭组比较,减负荷组的 MMP-9 和 MMP-2 的蛋白表达水平下降(P＜0.05),TIMP-1和TIMP-3 蛋白表达水平上升(P＜0.05)。结论 MMPs-TIMPs轴在心脏减负荷后心室重塑过程中发挥重要作用。对大鼠缺血性心肌病进行减负荷可以下调MMP-1、MMP-2和MMP-9,上调TIMP-1和TIMP-3,从而提高TIMPs 与 MMPs 之比;在检测心脏细胞外基质方面,TIMPs/MMPs 的比值较单个MMP 或 TIMP更加敏感。     

IL-1β对人分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9及TIMP-3蛋白的影响

目的初步研究白介素-1β(IL-1β)对离体培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及其特异性组织抑制物-3(TIMP-3)的影响。方法原代培养人分泌中期子宫内膜细胞,利用粘附式细胞仪570型,采用间接免疫荧光法检测IL-1β对内膜细胞分泌MMP-9和TIMP-3的影响。结果(1)MMP-9:空白对照组为1491.38±68.95,50U/ml组为1592.40±47.57,100U/ml组为1702.63±75.31,500U/ml组为1994.49±52.98,1000U/ml组为2347.58±45.87。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌MMP-9表达量呈浓度依赖性显著升高(P<0.05);(2)TIMP-3:空白对照组为1643.31±61.29,50U/ml组为1597.27±49.07,100U/ml组为1443.93±81.23,500U/ml组为1343.28±54.80,1000U/ml组为1157.85±47.95。随着IL-1β的浓度增加,原代培养的分泌中期子宫内膜细胞分泌TIMP-3表达量呈浓度依赖性显著下降(P<0.05)。结论IL-1β通过促进MMP-9分泌,抑制TIMP-3分泌,使细胞外基质降解,有利于绒毛滋养层细胞侵入。     

瘦素对早孕绒毛滋养细胞分泌CXCR4及MMP9的影响

目的 研究瘦素对早孕绒毛滋养细胞分泌趋化因子受体4(CXCR4)及金属基质蛋白酶-9 (MMP9) 的调节作用.方法 分离、培养早孕期绒毛滋养细胞,添加不同浓度的瘦素,培养24h后,RT-PCR法检测滋养细胞中CXCR4及MMP9 mRNA表达水平.结果 添加了瘦素的滋养细胞表达CXCR4及MMP9 mRNA的量较空白对照组极显著增加(P＜0.01).结论 瘦素能增强滋养细胞分泌CXCR4及MMP9的能力.瘦素可能在孕早期参与了胎盘形成等病理生理过程.     

阿司匹林调节小鼠腹腔巨噬细胞MMP-2/9和TIMP-1基因的表达及分泌

目的研究阿司匹林对小鼠腹腔巨噬细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2/9和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）基因表达及分泌的影响。方法培养的小鼠腹腔巨噬细胞用阿司匹林处理后,用RT-PCR方法检测MMP-2/9和TIMP-1mRNA表达,用ELISA方法测定培养上清液中MMP-2/9和TIMP-1的含量。结果小鼠腹腔巨噬细胞经用阿司匹林12.5～50μg/ml处理24h后,MMP-2/9mRNA表达及分泌至培养上清液中的含量明显降低,MMP-2的降低百分率分别为18.6%～86.8%和37.7%～53.3%,MMP-9的降低百分率分别为32.1%～78.3%和6.5%～14.3%;而TIMP-1mRNA的表达及分泌却显著提高,其增加百分率分别为60.5%～110.9%和94.4%～80.6%。结论阿司匹林可抑制MMP-2/9的基因表达及分泌,同时还可增加TIMP-1的基因表达及分泌,这一效应对增加动脉粥样硬化斑块的稳定性和预防心血管事件的发生具有有利的作用。     

动脉粥样硬化患者血液中基质金属蛋白酶-9及其抑制物-1的基因表达

目的通过检测动脉粥样硬化（AS）患者血液中基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）的基因表达水平,探讨AS发生的分子机制及预测因子。方法 AS患者120例为动脉硬化组,72例正常体检者为对照组。用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测其血液中MMP-9和TIMP-1 mRNA表达水平。结果 MMP-9和TIMP-1的RT-PCR产物序列与GenBank上人MMP-9 mRNA和TIMP-1基因片段完全一致。动脉硬化组的MMP-9基因表达水平高于对照组MMP-9基因表达水平,但差异无统计学意义（P〉0.05）。动脉硬化组的TIMP-1基因表达水平低于对照组TIMP-1基因表达水平,差异有统计学意义（P〈0.05）。MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值,动脉硬化组高于对照组,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 AS患者TIMP-1基因表达水平的降低与MMP-9/TIMP-1基因表达定量比值升高可能是AS发生的分子机制之一,二者一起可以作为AS发生的预测因子。     

Modulation of Matrix Metalloproteinase and TIMP-1 Expression by TGF-β1 in Cultured Human RPE Cells

In order to investigate the effects of TGF-β1 on the expression of MMP-2, -9 and TIMP1 in human retinal pigment epithelial (RPE) cells, the third-sixth passage cultured RPE cells were treated with TGF-β~ at different concentrations (0.01, 0. 1, 1.0, 10 ng/mL), the expression of MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA was detected by semi-quantitative RT-PCR assays. MMP-2, -9 and TIMP-1 mRNA were expressed in the cultured RPE cells. The values of MMP-2/β-actin in the cells treated with 0.1, 1.0, 10 ng/mL TGF-β1 were 1.04±0.04, 1.07±0.02 and 1.11±0.03, respectively, significantly higher than in the control group (0. 96±0.03, P＜0. 05-0. 01). The expression of MMP-2 mRNA could be up-regulated by TGF-β1, in a dose-dependent manner. The expression of MMP-9 mRNA in the cultured RPE cells was slightly up-regulated by various TGF-β1 concentrations treatment. The values of TIMP-1/β-actin in the cells treated with 0.01 and 0. 1 ng/mL TGF-β1 were 0. 85±0.01 and 0.97 ± 0.02 respectively, significantly lower than in the control group (1.07±0.04, P＜0.01), indicating that the expression of TIMP-1 mRNA was down-regulated by TGF-β1 at low concentrations. But along with the increase of TGF-β1 concentrations (1.0 and 10 ng/mL), the expression of TIMP-1 mRNA was slightly up-regulated, not significantly different from that in the control group (P＞0.05). It was concluded that TGF-β1 might play an important role in the up-regulation of the expression of MMP-2 in RPE cells and result in a directional shift in the balance between MMP and TIMP. This may be facilitated for RPE cells to migrate in the pathogenesis of vitreoretinopathy.     

IL-17A对成骨细胞系MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响及其作用机制

目的 检测IL-17A对MC3T3-E1细胞中明胶酶表达的影响,并探讨其作用机制。方法 采用小鼠重组细胞因子IL-17A作用于MC3T3-E1细胞,通过Real-time PCR和ELISA分别检测MMP-2及MMP-9在mRNA水平及蛋白水平上的表达情况;通过免疫荧光和Western Blot检测NF-κB的磷酸化水平的变化,并通过使用NF-κB阻断剂检测其在MMP-9表达中的影响。结果 IL-17A在mRNA水平及蛋白水平上均上调MMP-9的表达(P＜0.01),然而对MMP-2的表达无明显影响;IL-17A促进转录因子NF-κB的磷酸化水平(P＜0.01);阻断NFκB的活性可减弱IL-17A对MMP-9的上调作用(P＜0.05);IL-17A对MC3T3-E1细胞中TIMP-1及TIMP-2的表达没有影响。结论 IL-17A可以通过激活NF-κB促进MC3T3-E1细胞分泌MMP-9。     

脂多糖对血管平滑肌细胞表达MMP-2、9及TIMP-1、2的影响

目的 探讨脂多糖(1ipopolysaccharides，LPS)对培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)表达基质金属蛋白酶2、9(matrix metalloproteinase-2，-9；MMP-2，MMP-9)及其组织抑制因子1、2(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases-1，-2；TIMP-1，TIMP-2)的影响。方法 贴块法进行血管平滑肌细胞培养，细胞免疫化学检测基质金属蛋白酶及其抑制剂的蛋白表达，原位分子杂交分析MMP-9 mRNA表达。结果 LPS是MMP-9的强诱导物。可在蛋白及mRNA水平诱导MMP-9的表达，同时LPS可诱导TIMP-1的表达，作用较对MMP-9减弱。LPS对二者诱导作用强度与LPS的浓度及作用时间呈正相关。LPS降低TIMP-2的表达，其表达与LPS的浓度及作用时间呈负相关。LPS对MMP-2的表达没有明显作用。结论 LPS诱导平滑肌细胞MMP-9、TIMP-1表达的同时可降低TIMP-2的表达，其作用呈浓度时间依赖性，在动脉粥样硬化发病过程中可能起一定作用。     

多西环素对大鼠体外循环后肺内MMP-9和TIMP-1活性和基因表达的影响

目的：探讨多西环素对大鼠体外循环后肺内基质金属蛋白酶-９和组织基质金属蛋白酶抑制剂-1活性和基因表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠３６只随机分为对照组（A组）、体外循环组（B组）和治疗组（C组）,分别于手术结束时（T1）和手术结束后6小时（T2）收集支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织标本。Western-blot法测定BALF中MMP-9和TIMP-1的蛋白活性,RT-PCR法测定肺组织MMP-9和TIMP-1mRNA的表达。结果：治疗组大鼠肺组织水肿减轻,BALF的中性粒细胞减少;CPB组BALF中MMP-9活性明显升高,CPB后6小时表达最强,治疗组MMP-9活性较CPB组有明显下降,TIMP-1的活性在CPB组和治疗组于CPB结束后呈较弱的增强趋势,两组间相同时间点的表达差异不明显;CPB组和治疗组MMP-9mRNA表达增强,但治疗组MMP-9mRNA的表达在相应时间点较治疗组下降;TIMP-1mRNA在治疗组表达增强,且T２时间点显著增强;MMP-9/TIMP-1mRNA在CPB组和治疗组均有显著增大,但治疗组中T2时间点组MMP-9/TIMP-1mRNA比值较CPB组明显下降。结论：CPB可以引起大鼠术后肺内MMP-9的活性和基因表达增强,导致术后早期肺内MMP-9/TIMP-1mRNA表达失衡,多西环素可以抑制CPB后大鼠肺组织内MMP-9蛋白水平和mRNA的表达,还可能上调TIMP-1的表达而间接抑制MMP-9mRNA表达,改善MMP-9/TIMP-1的比例失衡。