新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植长期转归实验研究

[目的]观察和比较新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植后的长期转归情况,为同种异体骨软骨移植治疗关节软骨缺损进一步提供理论基础。[方法]建立兔膝关节软骨缺损模型,行新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨移植。在术后12个月和18个月,骨软骨移植物取材进行关节软骨蛋白多糖、软骨细胞活性检测和软骨细胞超微结构观察。[结果]新鲜和冷冻骨软骨移植物中蛋白多糖阿尔新蓝染色强度和存活软骨细胞比率术后均下降,且在各时间点新鲜移植组的结果优于冷冻移植组,有统计学差异(P0.05)。超微结构显示软骨细胞退行性改变。[结论]新鲜和深低温冷冻同种异体骨软骨在移植术后较长时间均出现严重退变,冷冻骨软骨移植物退变较严重,其作为关节软骨缺损治疗方法目前是不可行的。     

深低温保存同种异体动脉移植的实验研究

用日本大耳白兔作实验动物，切取股动脉３ｃｍ，分３组在不同时间进行同种异体移植，Ｉ组立即移植；Ⅱ组－３０℃保存后移植；Ⅲ组－１９６℃保存后移植。分别进行大体观察、组织学检查。结果表明：经过深低温冷藏的异体移植血管远期通畅率高于未经冷藏者，－３０℃保存１２周组远期通畅率最低。     

深低温冷存的吻合血管同种异体长骨移植的实验研究

目的：探讨深低温冷存的吻合血管异体长骨治疗大块骨缺损的效果。方法：32只兔随机分成3组：A组12只，用深低温冷存的吻合血管作异体骨移植；B组12只，深低温冷存的吻合血管异体移植术后4周用免疫抑制剂环孢素A（Cyclosporine A CsA);C组8只作新鲜的吻合血管异体骨移植。术后2、4、8、12周摄X线片，第3周取外周血栓测自发性淋巴母细胞生成率，第8周取外周血检测白细胞介素2（IL－2），并于12周通过灌注墨汁等检测吻合血管的通畅情况，并对移植骨进行组织学检测。结果：A、B2组术后12周两端可达骨性连接（愈合），而C组仅1例近端达骨连接且明显延迟。术后3周A、B2组自发性淋巴母细胞生成与未移植兔比值均＜2。术后8周外周血IL－2活性，C组最高，A组次之，B组最低，且任意2组之间均有显著性差异（P＜0．01）。术后12周，A、B2组血管通畅率无显著性差异（P＞0．05）。组织切片中可见移植骨与受区两端有骨小梁连接。结论：深低温冷存吻合血管异体长骨可修复大块骨缺损；深低温冷存和CsA可协同抑制吻合血管异体长骨移植的排斥反应。     

深低温冷冻同种异体气管游离移植的实验研究

目的　研究犬气管经液氮深低温冷冻削减抗原后 ,用于同种异体移植 (不用免疫抑制剂 )的可行性。　方法　实验犬 17只 ,通过纤维支气管镜检查、粘膜血流量的测定、病理学检查、血管造影以及存活率和通畅度的计算 ,分别研究以单侧胸头肌瓣和双侧胸骨舌骨肌 胸骨甲状肌联合瓣包裹自体移植气管、未冷冻以及冷冻 6周的同种异体移植气管术后的存活情况。　结果　冷冻 6周的同种异体气管移植后与自体移植的气管无明显差别 ,未见有单核细胞浸润 ,可长期存活 ,病理评分分别为 2 2 2± 0 37和 1 33± 0 2 8。未冷冻的同种异体气管移植后第 1周时 ,粘膜外观以及粘膜血流量与冷冻 6周的同种异体移植气管相同 ,但在第 2周时粘膜呈现灰黑色 ,粘膜血流量低于第 1周时的测定值。于术后 2～ 4周移植气管坏死。显微镜下见移植气管内有大量单核细胞浸润 ,病理评分为19 0 0± 0 72。　结论　气管经深低温冷冻后可以削减其抗原性 ,同种异体移植后不发生免疫排斥反应 ,移植气管能够长期存活     

吻合血管的同种异体肋骨移植实验研究

为了探讨应用吻合血管的冷冻保存同种异体肋骨移植修复骨缺损的可能性。以１５％二甲基亚砜作为低温保护剂，采用两步冷冻步骤，对狗的含后肋间血管的肋骨段进行冷冻处理，在液氮中保存９６小时后，施行同种异体移植于髂嵴骨缺损区。术后４周内使用免疫抑制剂。对移植体进行免疫学（白细胞介素２、Ｔ细胞亚群）监测，ＥＣＴ扫描、血管造影和病理学分析。实验结果表明，同种异体移植肋骨段血循环丰富，骨细胞代谢活跃，未发生急性排斥反应，３个月达骨性愈合，取得了类似于吻合血管的自体骨移植效果。但对吻合血管的同种异体骨移植的愈合过程尚需进一步研究。     

深低温处理在同种异体移植中对组织免疫源性研究进展

组织移植是恢复先天、后天因素导致的畸形或组织缺损的有效方法,然而移植过程中存在许多影响因素,其中免疫排斥反应就是急需解决的难题之一.任何异体材料置入体内均会产生免疫反应,同种异体移植物的识别和排斥,是包括效应细胞和调节因子在内的多种细胞间复杂相互作用的结果[1],因此许多专家学者对于如何减少免疫排斥反应做了大量研究,其中深低温冷冻保存可对组织抗原性存在影响,现就此问题综述如下.     

直径2mm以下同种异体血管移植的实验研究

目的：探讨直径2mm以下同种异体血管移植的可行性。方法：随机选30只新西兰兔分成甲乙2组，每组15只。甲组移植低温贮存的同种异体股动脉15条，乙组采用移植自体动脉15条。结果：甲乙2组即刻通畅率分别为100％，术后5周～10个月内甲组通畅率86．1％，乙组为80％。2组组织学变化类似，无明显排异反应。结论：低温贮存的同种异体血管可做血管移植的代用品，而且取材方便，有一定的实用性。     

深低温冷藏骨组织存活时限的研究

目的研究储藏在液氮中的骨组织保持存活状态的时限，为吻合血管同种异体骨移植中供体的供给时机提供理论依据。方法对冷藏不同时段的骨组织进行光镜、电镜及琥珀酸脱氢酶(SDH)染色检查。结果冷藏4个月后的骨组织结构形态学正常，骨细胞SDH染色阳性．而冷藏6个月后的骨组织有线粒体肿胀的超微结构改变，骨细胞SDH染色阴性。结论存储于液氮中的骨组织维持存活状态的最佳时限为4个月。     

同种异体血管移植的实验研究与临床应用

选５０只Ｗｉｓｔａｒ鼠分成Ａ、Ｂ两组，每组２５只，Ａ组移植低温贮存的同种异体颈动脉３０条（其中５只行双侧颈动脉移植），Ｂ组移植自体颈动脉２５条．Ａ、Ｂ两组通畅率分别为９０％和９２％，两组组织学变化类似，无明显排异反应．作者用低温贮存的同种异体血管修复了６例７条血管，缺损血管平均长４．７５ｃｍ（１．０～１５．０ｃｍ），缺损血管平均外径２．０３ｍｍ，平均随访１９．６个月（１３～３６个月），５例良好，１例失败．     

吻合血管的同种异体骨、关节移植

吻合血管的同种异体骨体骨关节移植在治疗大段骨关节缺损有着较大的应用前景,也是目前修复重建外科、骨移植领域的研究重点。本就吻合血管的同种异体骨关节移植的抗原性、排斥反应、免疫抑制剂的作用,冷冻的影响等方面研究现状作一综述。     

不同时段缺血对大鼠骨及血管超微结构的影响

目的 探讨不同时段缺血对SD大鼠骨及血管超微结构的影响。方法 研究材料为SD大鼠骨及血管，进行冷藏缺血和常温缺血实验，缺血时间为1、2、3、4、5、6和8h。以15％DMSO为低温保护剂，采用两步冷冻步骤，标本冷冻预处理温度：骨及动脉为-55℃，静脉为-60℃。液氮保存1周，复温后进行透射电镜观察。结果 缺血8h，冷藏组血管内皮细胞轻度肿胀，胞浆线粒体嵴稀疏或破坏。骨组织与对照组无明显差别；常温组血管内皮细胞坏死增多，残留胞膜。骨细胞核呈固缩表现。结论 冷藏能明显延长骨及血管组织的缺血耐受时间，可获得最大部分生物活性的组织。     

The influence of bone allograft processing on osteoblast attachment and function.

In order to assess the influence of eight different sterilisation and disinfection methods for bone allografts on adhesion, proliferation, and differentiation of human bone marrow stromal cells (BMSC), cells were grown in culture and then plated onto pieces of human bone allografts. Following processing methods were tested: autoclavation (AUT), low-temperature-plasma sterilisation of demineralised allografts (D-LTP), ethylene oxide sterilisation (EtO), fresh frozen bone (FFB), 80 degrees C-thermodisinfection (80 degrees C), gamma-irradiation (Gamma), chemical solvent disinfection (CSD), and Barrycidal-disinfection (BAR). The seeding efficiency was determined after one hour to detect the number of attached cells before mitosis started. The cell viability was determined after 3, 7, and 21 days. Tests to confirm the osteoblastic differentiation included histochemical alkaline phosphatase staining and RT-PCR for osteocalcin. Human BMSC showed greatest attachment affinities for D-LTP-, 80 degrees C-, and CSD-allografts, whereas less cells were found attached to AUT-, EtO-, FFB-, Gamma-, and BAR-probes. Cell viability assays at day 3 revealed highest proliferation rates within the FFB- and 80 degrees C-groups, whereas after 21 days most viable cells were found in D-LTP-, 80 degrees C-, CSD-, and Gamma-groups. BAR-treatment showed a considerably toxic effect and therefore was excluded from all further experiments. Highest AP-activity and gene expression of osteocalcin were detected in the D-LTP-group in comparison with all other groups. In summary, our results demonstrate that cell adhesion, final population, and function of BMSC are influenced by different disinfection and sterilisation methods. Therefore, processing-related alterations of BMSC-function may be important for the success of bone grafting. The experimental setup used in the present work may be useful for further optimisation of bone allograft processing.     

Novel surgical reconstruction of a mycotic abdominal aortic aneurysm using cryopreserved femoral arterial allograft from the NHS tissue bank: a new resource for UK vascular surgeons

The treatment of mycotic abdominal aortic aneurysms remains a significant surgical challenge associated with significant morbidity and mortality. In the following case report, we describe our successful management of a patient with a mycotic abdominal aortic aneurysm using two cryopreserved superficial femoral artery allografts (available from the UK NHS tissue bank) to create a Y-shaped allograft to permit immediate aortic reconstruction after surgical debridement. To our knowledge, this is the first time such a reconstruction has been reported in the literature.     

同种异体骨移植在骨肿瘤手术中的应用

目的：探讨同种异体骨移植在骨肿瘤手术中应用的范围、效果以及排异反应等问题.方法：1983年10月～2003年3月在骨肿瘤手术中使用异体骨移植120例。其中肿瘤刮除、异体松质骨移植102例；肿瘤刮除、异体大块皮质骨和松质骨移植12例；肿瘤段切除、异体股骨干移植2例；肿瘤段切除、异体半关节移植3例；肿瘤切除、大块异体骶骨移植l例：结果：120例中只有2例出现较轻的排异反应，表现为手术后切口渗出较多，3个月后停止渗出，切口愈合.其余病例均一期愈合.结论：同种异体骨在骨肿瘤手术中应用范围，一、效果好、很少出现排异反应,在骨缺损填充物中占有重要位置.     

吻合血管同种异体骨移植后存活状况研究

目的报道吻合血管同种异体骨移植术后不同时段存活状况。方法建立吻合血管同种异体股骨干移植动物模型，在术后不同时段进行活体解剖，观察血管的通畅度．并切取移植骨进行组织学、电镜及SDH染色检测。结果术后4周对照组血管基本完全闭塞，而实验组术后血管保持通畅。组织学检查显示对照组术后移植骨骨陷窝内骨细胞缺失，哈弗斯管内血管亦消失；而实验组术后骨陷窝内始终有骨细胞充填。电镜表现为对照组术后移植骨出现骨细胞核浓缩．核碎裂，直至骨陷窝内骨细胞丢失；实验组术后骨细胞超微结构正常、对照组术后2周．骨组织SDH染色已无蓝染的骨细胞，而实验组术后可见同心圆排列蓝染的骨细胞。结论在免疫调控下，吻合血管的同种异体骨移植术后供体始终保持活力状态。     

脂肪颗粒组织在不同低温条件下冻存后活力分析及移植成活率测定

目的探讨脂肪颗粒组织冻存后的活力及移植成活率。方法在-16℃、-80℃及-196℃条件下，经相应的低温保护剂处理，冻存脂肪颗粒组织，分别于2、4、8周复温后研磨，测定其活力与移植成活率，于移植后7周切取移植物，测量其体积，行苏丹3染色。结果-196℃组及-80℃组较好保持了脂肪细胞活力，冻存8周后活力分别达冻存前的70％和60％，各时间点比较差异无统计学意义（P=0．964，P=0．199）；而-16℃组冻存2周后活力已不到50％，各时间点比较差异有统计学意义（P=0．001），随时间延长表现为进行性下降趋势。-196℃组及-80℃组移植成活率与新鲜脂肪移植成活率相比差异无统计学意义，-16℃组移植成活率与新鲜脂肪移植成活率比较差异有统计学意义（P=0．000）；-16℃组移植物以炎性反应为主，几乎无成活脂肪细胞，其余各组均可见大量成活脂肪细胞。结论-196℃及-80℃条件下短期内（8周）冻存脂肪颗粒具有可行性，适用于临床移植需求。-16℃条件下冻存的脂肪颗粒活力明显降低，移植后虽可维持一定体积，但有可能仅起到一种软组织填充物的作用，在此温度下冻存的脂肪颗粒应用于临床注射无可行性。     

同种异体与异种骨移植免疫反应的比较研究

目的比较分析同种异体与异种骨移植后的免疫反应,观察IL-4和IL-10对免疫反应的影响。方法取C57BL/6小鼠和新西兰兔作为同种异体和异种骨供体,分别制成新鲜骨和冻干骨。于股后肌袋内分别植入新鲜同种异体、新鲜异种、新鲜异种(给予IL-4和IL-10治疗)、冻干同种异体及冻干异种骨。结果在植入新鲜骨的各组中,新鲜异种组早期细胞刺激反应较新鲜同种组强(P< 0.05)。1周时新鲜异种组CD4 T细胞亚群和CD4/CD8比值与新鲜同种组间差异无显著性,但2周时明显低于新鲜同种组。细胞因子检测显示,新鲜异种组的IL-2分泌较新鲜同种组多(P< 0.05),而且IFN-γ分泌少,IL-4分泌多(P<0.05)。组织学检查发现,新鲜异种组细胞浸润多,且以单核、巨噬细胞为主。与新鲜异种组相比,用IL-4和IL-10治疗后明显抑制了骨抗原二次刺激引起的细胞增殖(P<0.01);早期IFN-γ分泌增加,2周时IFN-γ和IL-4分泌均明显减少(P<0.05);组织学检查显示,注射IL-4和IL-10后植骨处局部炎细胞浸润减少,诱导成骨增多。而在植入冻干骨的各组中,冻干异种组的细胞刺激反应始终比冻干同种组强(P<0.05),而且其CD4 和CD8 T细胞亚群及IL-2分泌均高于同种异体组(P<0.05)。结论新鲜异种骨移植早期排斥反应强、后期弱,早期以Th2反应为主,而同种异体骨移植免疫排斥以Th1反     

自体与同种异体骨移植修复四肢长骨骨缺损的对比研究

目的比较自体与同种异体骨移植修复四肢长骨骨缺损的临床效果。方法回顾性分析132例异体骨和97例自体骨修复重建四肢长骨骨缺损患者的临床治疗资料,比较两种方法愈合时间、骨性愈合评分（按Jorgenson标准）、并发症发生率及植骨失败率。结果异体骨重建组132例,4例因感染致植骨失败需行病灶清除灌洗加自体骨移植,10例发生局部排斥反应,其余118例患者术后骨缺损获得良好修复,愈合时间（17．6±1．9）周。骨性愈合评分2．7±0．5。自体骨重建组97例,9例出现供区疼痛、切口感染及局部皮肤麻木等供区并发症,骨缺损均获得良好修复,愈合时间（17．4±23）周,骨性愈合评分2．84±0.3。两组之间在愈合时间、并发症发生率以及愈合评分方面的差异无统计学意义（P〉0．05）;在植骨失败率方面的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论运用同种异体骨和自体骨移植重建四肢长骨骨缺损,均能获得满意结果且疗效相似。异体骨移植术后感染致植骨失败以及排斥反应发生率较高,而自体骨移植则多表现为供区的并发症。