微波消融灭瘤联合瘤内接种树突状细胞诱导特异性抗肝癌免疫

目的 探讨微波消融(MWA)灭瘤联合瘤内接种树突状细胞(DCs)诱导特异性抗肝癌免疫的效能.方法 采用GM-CSF联合IL-4体外培养C57BL/6小鼠骨髓来源的DCs,于第6天收集使用.建立C57BL/6小鼠皮下Hepa1-6肝癌模型,随机分为对照组、瘤内接种DCs组(DC组)、肿瘤微波消融组(MWA组)及肿瘤微波消融+瘤内接种DCs组(MWA+DC组).免疫组织化学法检测肿瘤组织内CD4+和CD8+T细胞的浸润,MTT法检测小鼠脾脏细胞对Hepa1-6的特异性杀伤活性,观测各组小鼠肿瘤生长情况.结果 免疫组织化学法检测显示MWA+DC组肿瘤组织内有大量的CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润,显著高于其它组(P<0.05).MwA+DC组脾细胞对Hepa1-6细胞有特异性杀伤效能,在E/T=40和100时,MWA+DC组脾细胞对Hepa1-6细胞的特异性杀伤力显著高于对照组、DC组及MWA组(P<0.05).MWA+DC组小鼠肿瘤完全消退率显著高于其它各组(P<0.05).结论 MWA联合瘤内接种DCs可有效诱导机体产生特异性抗肝癌免疫,是预防MwA治疗后肝瘤复发的一种有效方法 .     

Tim-3在小鼠心脏移植受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化

目的 检测激活的T_H1类淋巴细胞标记分子"T淋巴细胞免疫球蛋白域及粘蛋白域蛋白-3(Tim-3)"在受者体内不同部位T淋巴细胞上表达的变化,探讨其与急性排斥反应的关系.方法 建立小鼠同基因和异基因心脏移植模型(简称:同基因组和异基因组);移植术后第3和第6天,分离和制备两组受者外周血、脾脏、引流淋巴结和移植心内淋巴细胞悬液,采用流式细胞仪检测Tim-3阳性细胞在CD4~+ 和CD8~+ T淋细胞中的比值.结果 两组受者术后外周血和脾脏内Tim-3~+/CD4~+以及Tim-3~+/CD8~+ 的比值比较,差异均无统计学意义(P>O.05).与同基因组比较,异基因组引流淋巴结内Tim-3~+/CD4~+ 比值轻度升高(P<0.05);但异基因组术后第6天与第3天比较,差异无统计学意义(P>0.05).与同基因组比较,移植心内Tim-3~+/CD4~+和TiM-3~+/CD8~+比值均显著升高(P<0.01);异基因组术后第6天与第3天比较.移植心TiM-3~+/CD4~+和Tim-3~+/CD8~+比值也显著升高(P<0.01).结论 小鼠异基因心脏移植受者引流淋巴结和移植心内T淋巴细胞上Tim-3的表达升高与急性排斥反应的进展动态相关.     

氟比洛芬酯对食管癌根治术后芬太尼病人自控静脉镇痛时细胞免疫功能的影响

目的 探讨氟比洛芬酯对食管癌根治术后芬太尼病人自控静脉镇痛(PCIA)时细胞免疫功能的影响.方法 择期行食管癌根治术的病人45例,ASA Ⅰ或Ⅱ级,年龄40～64岁,体重50～80 kg,随机分为3组(n=15),Ⅰ组:PCLA药物为芬太尼20μg/kg;Ⅱ组:PCIA药物为芬太尼10μg/kg+氟比洛芬酯2 mg/kg;Ⅲ组:氟比洛芬酯1 mg/kg静脉超前镇痛联合PCIA芬太尼10 μg/kg+氟比洛芬酯1 mg/kg.手术结束前10 min时静脉注射芬太尼0.05 mg并连接PCIA泵,3组PCLA泵中均加入氟哌利多2.5 mg,用生理盐水稀释为100 ml,输注速率2 ml/h,PCA剂量0.5 ml,锁定时间5 min.分别于术前30 min(T_0)、术后1、24、72 h(T1～3)时测定血浆去甲肾上腺素(NE)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(Cor)的浓度,采用流式细胞仪测定淋巴细胞CD3~+,CD4~+、CD8~+水平,计算CD4~+/ED8~+.记录术后48 h内有效按压次数.结果 Ⅲ组有效按压次数少于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05).与T0时比较,各组术后血浆NE、ACTH和Cor的浓度均升高,Ⅰ组和Ⅱ组,T1时、Ⅲ组T1,3时淋巴细胞CD3~+水平降低,Ⅰ组和Ⅱ组淋巴细胞CD4~+水平和CD4+/CD8~+均降低(P<0.05),淋巴细胞CD8~+水平差异无统计学意义,Ⅲ组淋巴细胞CD4~+、CD8~+水平和CD4~+/CD8~+差异无统计学意义(P>0.05);与Ⅰ组比较,Ⅱ组术后血浆ACTH浓度降低,淋巴细胞CD3~+水平升高,Ⅲ组术后血浆NE、ACTH和Cor浓度降低,T1,3时淋巴细胞CD3~+水平升高,T1,2时淋巴细胞CD4~+水平和CD4~+/CD8~+升高(P<0.05);与Ⅱ组比较,Ⅲ组术后血浆NE浓度降低,淋巴细胞CD4~+水平和CD4+/CD8~+升高(P<0.05).结论 氟比洛芬酯既可降低芬太尼PCIA用量,又可抑制术后应激反应,从而改善食管癌根治术后病人细胞免疫功能,且术前和术后联合应用氟比洛芬酯的效果更好.     

肠内和(或)肠外营养支持方式对胆管癌患者术后免疫功能的影响

目的探讨肠内营养(EN)和(或)肠外营养(PN)支持方式对胆管癌患者术后免疫功能的影响。方法将2014年11月至2017年6月期间来甘肃省人民医院普外科就诊的胆管癌患者按照纳入标准及剔除标准进行筛选并纳入研究,所有纳入研究的患者采用随机数字表法分为PN+EN联合治疗组(简称PN+EN组,n=26)及PN组(n=30)2组。纳入研究的患者手术后使用以代谢支持为基础的营养支持方式,于术前第1天(以下简称术前)、术后第1、3及7天时检测2组患者的免疫功能(包括CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+/CD8~+、IgM、IgG、IgA)并进行比较。结果 (1)2组患者的术前基线资料以及手术方式、手术时间、术中出血量及术后第1天NRS评分比较差异均无统计学意义(P0.05)。(2)2组患者细胞免疫指标比较:在PN+EN组,与术前比较,CD3~+、CD4~+和CD4~+/CD8~+均于术后第1天下降(P0.05),从第3天开始上升,至第7天时均高于术前(P0.05)。而在PN组,术后第3天时,CD3+和CD8+继续下降,至第7天时上升,但仍低于术前(P0.05);CD4+和CD4+/CD8+第3天时开始上升,至第7天时仍低于术前(P0.05)。2组患者术前及术后第1天的CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比较差异均无统计学意义(P0.05),术后第3天和术后第7天时PN+EN组患者的CD3~+、CD4~+、CD8~+及CD4~+/CD8~+均明显高于PN组(P0.05)。(3)2组患者体液免疫指标比较:在PN+EN组,与术前比较,从术后第1天开始IgG、IgA和IgM下降(P0.05),从第3天开始上升,至第7天时均高于术前(P0.05);在PN组,与术前比较,从术后第1天开始持续下降(P0.05),至第7天时IgA和IgM略有升高,但仍低于术前(P0.05)。2组患者术前及术后第1天的IgG、IgM和IgA比较差异均无统计学意义(P0.05),术后第3天和术后第7天时PN+EN组患者的IgG、IgM和IgA均明显高于PN组(P0.05)。结论胆管癌患者术后实施EN和PN联合支持治疗较单独实施PN更有助于患者免疫功能的恢复。     

小鼠胃癌模型的建立及T细胞免疫功能的变化

目的 通过多因素联合攻击法建立小鼠原发胃癌模型并检测其免疫功能水平的变化.方法 采用BALB/C小鼠以3-甲基胆蒽(3-MCA)挂线法联合N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)灌胃法诱导小鼠胃癌.于12周及20周取血及脾细胞检测其CD4~+CD25~+调节性T细胞(CD4~+CD25~+Treg Cells)及T细胞亚群,同时取胃标本行病理学检查,通过统计学方法分析结果.结果 多因素联合攻击法诱导率为37.5%(6/16),实验组小鼠(4.52±1.97)g体质量变化有所降低(P<0.05).脾白细胞计数(372±140)×10~9升高(P<0.05).外周血(8.07±6.62)%及脾(6.45±4.13)%CD4~+CD25~+Treg细胞比例均升高(P<0.05),脾CD4~+/CD8~+细胞比值(1.95±0.62)明显升高(P<0.05).结论 多因素联合攻击法为小鼠胃癌为小鼠胃癌模型建立提供了良好的模型.小鼠胃癌发展过程中CD4~+CD25~+Treg细胞呈高表达,且在肿瘤形成后免疫功能呈现免疫抑制状态.     

1-甲基色氨酸对胰腺癌荷瘤鼠中调节性T细胞数量变化的影响

目的 观察1-甲基色氨酸(1-MT)对胰腺癌荷瘤鼠中调节性T细胞(Treg)数量变化的影响,比较树突状细胞(DC)疫苗与1-MT联合应用前后抗肿瘤作用的强弱.方法 建立小鼠胰腺癌模型;利用流式细胞术检测荷瘤鼠应用1-MT前后肿瘤组织周围引流淋巴结(TDLNs)及脾脏中CD4~+ CD25~+T细胞占CD4~+T比例;荧光定量聚合酶链反应(PCR)测量Foxp3在TDLNs及脾脏mRNA水平;利用肿瘤细胞裂解物冲击DC制备DC疫苗,并根据是否与1-MT联合应用分组(各组均为n=8);观测各组肿瘤体积的差异.结果 应用1-MT后,荷瘤鼠CD4~+ CD25~+ T细胞占CD~+T细胞的比例明显低于未应用组(TDLNs)分别为(16.01±2.21)%和(25.00±2.16)%(P<0.05);脾脏分别为(13.11±1.93)%和(22.14±2.33)%(P<0.05,P<0.01);应用1-MT组Foxp3 mRNA表达水平显著低于未应用组,应用1-MT组相对表达值:TDLNs0.947±0.216、脾细胞1.198±0.347,而未应用组分别为:1.927±0.256、1.798±0.237(P<0.05);1-MT+DC疫苗组肿瘤生长显著受到抑制,第36天肿瘤体积为(789.0±111.0)mm~3;显著小于DC疫苗组、1-MT组及对照组,肿瘤体积分别为:(1768.0±251.3)、(1854.0±192.1)、(1899.0±201.2)mm~3(P<0.01).结论 1-MT可以有效抑制胰腺癌荷瘤鼠癌组织周围引流淋巴结及脾脏CD4~+ CD25~+ Treg细胞的数量增加,从而增强DC疫苗抗肿瘤作用.     

腹腔热灌注化疗对结直肠癌患者细胞免疫功能的影响

观察腹腔热灌注化疗对结直肠癌患者术后细胞免疫功能的影响。选择2013年1月—2015年12月我院结直肠癌患者50例,随机分为实验组和对照组,每组各25例。对照组患者常规行开腹结直肠癌根治术,实验组在常规开腹根治术基础上行腹腔热灌注化疗。两组病例均在手术前1天、手术后第3、5、7天分别抽取静脉血,以流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+和NK细胞数量,并计算CD4~+/CD8~+比值。术后第3天两组患者外周血CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+及NK细胞活性较术前均明显下降(P0.05),实验组与对照组比较无明显差异(P0.05)。实验组术后第5天上述指标迅速恢复,至第7天接近术前水平,而对照组术后7 d内仍持续处于低水平。两组比较差异有统计学意义(P0.05)。腹腔热灌注化疗可以提高结直肠癌患者术后细胞免疫功能。     

早期肠内营养对重症急性胰腺炎患者血清CRP及T淋巴细胞亚群的影响

目的研究早期肠内营养(EEN)对重症急性胰腺炎(SAP)患者血清C反应蛋白(CRP)及T淋巴细胞亚群的影响。方法将45例SAP患者随机分为实验组(22例)和对照组(23例)。实验组给予EEN,对照组给予肠外营养(PN),待患者排气排便后给予EN(通常于入院后5～7 d)。于入院后第1、5、7、11天,检测两组患者血清CRP及T淋巴细胞亚群(CD3、CD4+、CD4+/CD8+值)。结果除3例排除实验,余42例SAP患者治愈。平均住院日及住院费用,实验组低于对照组(P<0.05)。两组间比较,血清CRP、T淋巴细胞亚群,在第1天的差异无统计学意义(P>0.05);第5、7、11天血清CRP水平,实验组低于对照组(P<0.05),T淋巴细胞亚群(CD3、CD4+、CD4+/CD8+值)水平实验组高于对照组(P<0.05)。结论给予EEN能更好地降低SAP患者急性反应期炎症反应,提高免疫功能。     

氟比洛芬酯联合吗啡镇痛对胃癌患者T淋巴细胞亚群及自然杀伤细胞的影响

目的 观察氟比洛芬酯联合吗啡镇痛对胃癌根治术患者罔术期外周血T淋巴细胞亚群及自然杀伤(NK)细胞的影响.方法 40例择期全麻下行胃癌根治术患者随机分为氟比洛芬酯组(A组)和吗啡组(B组),每组20例,分别于术前0.5 h静注氟比洛芬酯或安慰药英脱利匹特,术后距第一次给药6 h再次静注氟比洛芬酯或英脱利匹特.两组患者术后均行患者自控静脉镇痛(PCIA).于麻醉前、手术开始后2 h、术后24、48、120 h五个时点用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)及NK细胞(CD3+CD6+CD56+).结果 与麻醉前比较,两组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和NK细胞在手术2 h、术后24、48 h均明显降低(P<0.05);术后120 h CD3+CD16+CD56+仍未恢复至麻醉前水平(P<0.05).与B组比较,A组CD3+、CD4+、CD4+/CD8+在术后24 h下降幅度较小(P<0.05),而NK细胞则在手术2 h和术后24 h下降幅度较小(P<0.05).结论 胃癌根治术患者围术期用氟比洛芬酯联合吗啡镇痛较单用吗啡镇痛对T淋巴细胞亚群和NK细胞有保护作用.     

腹腔镜辅助与开腹进展期胃癌根治术对机体免疫功能影响的比较

目的:腹腔镜辅助下与开腹行进展期胃癌根治术对机体免疫功能的影响.方法:将94例进展期胃癌患者按意愿分为腹腔镜组(n=47)与开腹组(n=47),测定2组术前及术后第3、7、14天患者血清IL-6、CRP、IgG、IgM、IgA、CD3+、CD4+,CD8+,CD4+/CD8+、人类白细胞抗原Ⅱ型(HLA-DR)、中性粒细胞(PMN)的数量.结果:2组术后第3天免疫球蛋白较术前均降低(P<0.05),开腹组术后第7天免疫球蛋白较术前低(P<0.05),腹腔镜组术后第7天免疫球蛋白较术前比较差异无统计学意义(P>0.05),除术后第3、7天IgM腹腔镜组高于开腹组(P<0.05),2组间IgA、IgG术后差异无统计学意义(P>0.05);2组术后第3、7天2组IL-6、CRP较术前明显升高(P<0.01),开腹组升高较腹腔镜组更明显(P<0.01);术后第3、7、14天腹腔镜组HLA-DR较术前明显升高(P<0.01),2组间差异有统计学意义(P<0.01,表5);2组术后第3天PMN较术前明显升高(P<0.01);2组外周血CD3+、CD4+,CD4+/CD8+术后第7、14天较术前均明显下降(P<0.01),术后腹腔镜组明显高于开腹组(P<0.01),且腹腔镜组较早恢复正常.结论:与开腹手术相比,腹腔镜手术对机体术后的免疫功能影响小,术后恢复快.     

重组人生长激素对大鼠肠缺血再灌注后肠壁组织T淋巴细胞亚群和浆细胞的影响

目的　探讨肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素(rhGH )对肠道免疫屏障中肠黏膜及固有层内T淋巴细胞亚群和浆细胞的影响。方法　将60只Wistar大鼠雌雄各半随机分为实验组和对照组,按实验天数(2、4、6d)又各分为3组,每组10只,以肠缺血再灌注模型造成肠道屏障功能损害的病理现象,实验组给与rhGH (每日1.3 3U/kg体重) ,观察回肠末端黏膜固有层内CD8+、CD4+、CD3 +T淋巴细胞数及IgA浆细胞的数量变化。结果　(1)实验组CD8+、CD4+、CD3 +T及IgA浆细胞第6天与第2、4天比较数量显著增多,差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。(2 )实验组与对照组第6天,CD8+、CD4+T及IgA浆细胞的数量实验组均高于对照组,差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。(3 )CD4+/CD8+比值第2天两组差异有统计学意义(P <0 .0 5 )。结论　肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素能够调节肠黏膜的免疫屏障,其作用时间在第6天可能最明显     

不同麻醉方法对胃癌患者围术期T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨不同麻醉方法对胃癌患者围术期T淋巴细胞亚群的影响。方法 36例择期胃癌根治术患者,随机分为硬膜外阻滞组（I组）、全麻组（Ⅱ组）和硬膜外阻滞复合全麻组（Ⅲ组）,每组12例,分别于诱导前、术毕及术后1、3、5、7d取外周静脉血2ml,采用APAAP法测定T淋巴细胞亚群的变化。结果 与诱导前相比,术毕、术后第1、3d各组CD3^ 、CD4^ 、CD8^ 、及CD4^ /CD8^ 均明显下降（P＜0．05）;术后第5d,Ⅲ组各指标恢复（P＞0．05）;术后第7d,Ⅰ、Ⅱ组各指标恢复（P＞0．05）。Ⅲ组CD3^ 、CD4^ 及CD4^ /CD8^于术后第5d明显高于Ⅰ、Ⅱ组（P＜0．05）。结论 硬膜外复合全麻能减轻围术期应激反应及麻醉药物对T淋巴细胞亚群的抑制,有利于胸腹部肿瘤病人免疫功能的及早恢复。     

早期肠内营养联合锦红汤对急性重症胰腺炎患者免疫功能影响

目的:探讨早期肠内营养联合锦红汤对急性重症胰腺炎(SAP)患者免疫功能的影响。方法:选取2016年3月2018年9月本院收治的60例SAP患者,随机分为肠外营养(PN)组、肠内营养(EN)组、锦红汤+EN组三组,每组20例;分别测定治疗前及治疗后3天和8天的血浆炎症介质肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-乳酸和淋巴细胞、CD3^+、CD4^+、CD8^+水平。结果:三组治疗后血浆各炎症介质均较治疗前明显改善(P<0.05),D乳酸水平较治疗前明显升高(P<0.05)。EN组治疗后3天及8天血浆IL-6、TNF-α均较PN组显著降低(P<0.05),锦红汤+EN组治疗后3天和8天血浆IL-6、TNF-α亦均较PN组和EN组显著降低(P<0.05)。治疗后3天三组D-乳酸水平无明显差异(P>0.05),治疗后8天,EN组D-乳酸较PN组明显降低,锦红汤+EN组较EN组明显降低(P<0.05)。治疗后3天三组淋巴细胞、CD3^+、CD4^+、CD8^+、CD4^+/CD8^+无明显差异(P>0.05)。治疗后8天,EN组和锦红汤+EN组淋巴细胞、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均较PN组显著升高(P<0.05)。CD8^+较PN组降低(P<0.05),锦红汤+EN组的淋巴细胞、CD3^+、CD4^+、CD4^+/CD8^+均较PN组显著升高,CD8^+较PN组降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:早期肠内营养联合锦红汤能降低SAP患者血浆中炎性介质的水平,降低肠黏膜通透性,改善患者的免疫功能,快速促进患者康复。     

移植物中不同种类和数量的细胞对异基因外周血造血干细胞移植后急性GVHD的影响

目的 探讨移植物中单个核细胞(MNC),CD34+细胞,T淋巴细胞(包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+和CD4+CD25+),CD3 CD16+CD56+自然杀伤(NK)细胞,以及树突状细胞(DC)Ⅰ和Ⅱ型(DC1和DC2)的数量对人类白细胞抗原(HLA)相合的同胞异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)后急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 选择65例接受HLA相合的同胞allo-PBSCT的患者进入研究.采用流式细胞术检测移植物中MNC,CD34+细胞,T淋巴细胞(CD3+、CD3+CD4+及CD3+CD8+)的数量,对其中31例患者进一步检测CD4+CD25+T淋巴细胞、CD3-CD16'C+D56+NK细胞及DC的数量.按患者的每公斤体重计算出输注的移植物中以上各细胞的数量.并根据上述细胞数量的中位数分别将患者分为高数量组(>中位数)和低数量组(≤中位数),比较各高数量和低数量组aGVHD的发生情况.结果 CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞高数量组和相应低数量组相比,Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率增加,但差异无统计学意义(P值分别为0.089和0.098);CD4+CD25+T淋巴细胞高数量组Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率显著低于相应低数量组(P<0.05);DC1高数量组总的aGVHD累积发生率显著高于相应低数量组(P<0.05),Ⅱ～Ⅳ度aGVHD累积发生率亦明显高于相应低数量组,但差异无统计学意义(P=0.069).MNC、CD34+细胞、CD3+T淋巴细胞、CD3-CD16+CD56+NK细胞及DC2高数量组与相应低数量组比较,总的及Ⅱ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率差异均无统计学意义(P>0.05).结论 移植物中高数量的DCl增加总的aGVHD的累积发生率;而高数量的CD4+CD25+T淋巴细胞则减少Ⅲ～Ⅳ度aGVHD的累积发生率.     

腹腔镜胆囊切除术对机体免疫功能的影响

目的：比较腹腔镜与开腹胆囊切除术对机体免疫功能的影响。方法：随机将有胆囊切除手术指征的80例患者分为2组,腹腔镜胆囊切除组（laparoscopic cholecystectomy,LC组）和开腹胆囊切除组（open cholecystectomy,OC组）各40例,测定并比较手术前后IgG、IgM、IgA,补体C3、C4水平及CD3^＋（T细胞总数）、CD4^＋（T辅助/诱导细胞）和CD8^＋的数量。结果：两组IgM、IgA、C4手术前后均无明显变化,两组间差异无统计学意义。LC组术后1d IgG、C3较术前有所下降,术后3d恢复至术前水平;OC组术后1d IgG、C3明显低于术前水平,术后5d恢复至术前水平;组间比较,OC组术后IgG、C3下降明显。LC组T淋巴细胞亚群手术前后差异无统计学意义,OC组术后1d CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋与术前比较明显降低,术后5d恢复至术前水平;组间比较,术后1d、3d OC组CD3^＋、CD4^＋、CD8^＋均明显低于LC组。结论：腹腔镜手术对机体的免疫功能影响小,术后恢复快。     

重组人生长激素对大鼠肠道缺血再灌注后肠壁组织T淋巴细胞亚群和浆细胞凋亡的影响

目的探讨肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素（rhGH）对肠道免疫屏障中肠黏膜及固有层内T淋巴细胞亚群和浆细胞凋亡的影响。方法将60只Wistar大鼠雌雄各半随机分为实验组和对照组，按实验天数又各分为3组，每组10只，以肠缺血再灌注模型造成肠道屏障功能损害的病理现象，实验组给予rhGH每日（1．33U／kg体重），采用免疫组织化学双染法观察回肠末端黏膜固有层内CD8^＋、CD4^＋、CD3^＋T淋巴细胞数及IgA浆细胞的凋亡数量变化。结果（1）对照组CD3^＋T淋巴细胞及IgA浆细胞的凋亡数量第6天明显高于第2、4天。差异有统计学意义（P〈0．01）。（2）实验组CD8^＋、CD4^＋T淋巴细胞的凋亡数量第6天明显低于第4天，差异有统计学意义（P〈0．01）。（3）实验组与对照组相比第2、4、6天IgA浆细胞的凋亡数量均明显减少。差异有统计学意义（P〈0．01）。实验组与对照组相比大鼠第2天CD8^＋、CD4^＋、CD3^＋T淋巴细胞的凋亡数量均减少，差异有统计学意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论肠道屏障功能损害时应用重组人生长激素能够减少肠道免疫细胞的凋亡数量，对IgA浆细胞作用最明显。可能的作用时间在第6天。     

黄芪多糖对分泌白细胞介素12树突细胞亚群的免疫调控效应与机制

目的 观察黄芪多糖(APS)对分泌IL-12树突细胞(DC)亚群CD11chighCD45RBlowDC功能的影响.方法磁珠分选技术获得BALB/c小鼠脾脏CD11chighCD45RBlowDC和CD4+T淋巴细胞.在CD11 chighCD45RBlowDC中加入不同浓度APS(50、100、200μg/mL)处理,以不加APS的细胞作为对照,应用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12水平,流式细胞仪检测细胞表面分子CD40、CD80、CD86、I-A/E及Toll样受体4(TLR4)的表达.将CD4+T淋巴细胞分为正常对照组(未行任何处理)、未刺激组(加入未经APS处理的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC与CD4+T淋巴细胞混合培养)、高浓度APS刺激+抗体1组(加入经200μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养)和高浓度APS刺激+抗体2组(加入经200 μg/mL APS处理后的CD11chighCD45RBlowDC、IL-12同型对照抗体与CD4+T淋巴细胞混合培养).采用噻唑蓝法测定CD4+T淋巴细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞培养液中IL-4和γ干扰素水平.对数据行多组间单因素方差分析.结果与未加APS刺激相比,3种浓度APS均显著增强CD11chighCD45RBlowDC表面分子CD40、CD80、I-A/E及TLR4表达及IL-12分泌,其中IL-12分泌呈APS浓度依赖性;CD86表达无明显变化.高浓度APS刺激组CD4+T淋巴细胞增殖能力高于未刺激组(F=13.438,P＜0.05);高浓度APS刺激组细胞γ干扰素水平为(2784±137)pg/mL,高于未刺激组[(1952±101)pg/mL,F=12.177,P＜0.05];高浓度APS刺激组细胞IL-4水平为(172±20)pg/mL,明显低于未刺激组[(193±19)pg/mL,F=11.963,P＜0.05].高浓度APS刺激+抗体1组前述3项指标表达水平较未刺激组明显改善,高浓度APS刺激+抗体2组前述3项指标表达水平与高浓度APS刺激组接近.结论 APS能够通过促进CD11chighCD45RBlowDC中IL-12的表达,诱导CD4+T淋巴细胞向Th1型反应分化,通过激活CD11chighCD45RBlowDC增强免疫活性.

Abstract：

Objective To investigate immunomodulatory effect of Astragalus polysaccharides (APS) on IL-12-secreting dendritic cell (DC) subset CD11chigh CD45RBlow DC. Methods Spleen CD11chighCD45RBlow DC and CD4 +T lymphocytes in BALB/c mice were purified by magnetic beads sorting,and were treated with 0 (as control), 50, 100, 200 μg/mL APS. Immunofluorescence staining and flow cytometry were used to determine expressions of CD11chighCD45RBlow DC surface molecules, including CD40,CD80, CD86, I-A/E, and Toll-like receptor (TLR) 4. IL-12 level in CD11chighCD45RBlow DC culture supernatant was determined by ELISA. The CD4+ T lymphocytes were divided into: normal control group,non-stimulation group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with APS-unstimulated CD11 chigh CD45RBlow DC ) ,high-dose APS stimulation group (CD4+T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11ch'ghCD45RBlow DC) , high-dose APS stimulation + antibody 1 group ( CD4 + T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chighCD45RBlow DC and IL-12 antibody), high-dose APS stimulation +antibody 2 group (CD4 +T lymphocytes cocultured with 200 μg/mL APS-stimulated CD11chigh CD45RBlow DC and IL-12 antibody isotype). Proliferation ability of CD4 + T lymphocytes was determined with MTT method.IL-4 level as well as IFN-γ level in CD4 + T lymphocyte culture supernatant was determined by flow cytometry. Data were processed with one-way analysis of variance. Results Compared with those in control, the expressions of CD 11 chigh CD45 RBlow DC surface molecules ( except for CD86 ) on CD 11 chigh CD45RBlow DC surface, as well as IL-12-secreting level with dose-dependence were increased in cells stimulated with 50,100, 200 μg/mL APS. Proliferation ability of CD4 +T lymphocytes in high-dose APS stimulation group was higher as compared with that in non-stimulation group ( F = 13. 438, P ＜0.05). IFN-γlevel in high-dose APS stimulation group [(2784 ± 137 ) pg/mL] was higher than that in non-stimulation group [(1952 ±101 ) pg/mL, F = 12. 177, P ＜0.05]. IL-4 level in high-dose APS stimulation group was (172 t 20) pg/mL,which was lower than that in non-stimulation group [( 193 ± 19) pg/mL, F = 11.963, P ＜0.05]. Proliferation ability of CD4+ T lymphocytes, IFN-γ level, and IL-4 level in high-dose APS stimulation + antibody 1 group were all ameliorated when compared with those in non-stimulation group; while levels of the 3 indexes in high-dose APS stimulation + antibody 2 group were similar to those in high-dose APS stimulation group.Conclusions APS can activate IL-12-producing CD11 chighCD45RBlowDC, and further induce the activation of immune function of T lymphocyte with shifting of Th2 to Th1 in vitro. APS can enhance the immune response via promoting the phenotypic and functional maturation of CD11 chighCD45RBlow DC.