蛋白质组技术在胃癌相关标志物筛查中的应用

目的 建立胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，鉴定差异表达蛋白，从中发现有意义的胃癌相关标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离胃癌组织和正常胃组织总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质点，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）或MALDI-TOF-TOF-MS鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的胃组织双向凝胶电泳图谱；发现23个差异表达蛋白质，其中15个得到鉴定，在肿瘤组织中高表达的有10个，其余5个在肿瘤组织中低表达。结论 建立了胃癌组织和正常胃组织双向凝胶电泳图谱，并应用质谱技术鉴定了15个差异表达蛋白质。     

尿毒症患者血清蛋白质组份的双向凝胶电泳-飞行时间串联质谱分析研究

目的建立和比较尿毒症患者及正常人的血清蛋白质双向电泳图谱，寻找和鉴定尿毒症患者差异表达的血清蛋白质谱。方法以固相pH梯度（IPG）等电聚焦（IEF）为第一向和垂直十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向，分别对尿毒症患者和正常者血清蛋白质样品进行二维双向电泳，经银染显色和ImageMaster2D5、0软件分析凝胶图像，对有差异性表达的尿毒症者的蛋白质用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱进行鉴定。结果成功获得了重复性较好的双向电泳银染图谱。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了改变。将其中26个明显差异性表达的蛋白质点进行肽质指纹图谱和串联质谱分析，在International Protein Index（IPI）human数据库中检索，鉴定出其中20个蛋白。结论固相pH梯度双向凝胶电泳分离尿毒症患者血清总蛋白获得重复性较好的结果。尿毒症患者血清蛋白质表达谱发生了明显改变，基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱分析鉴定的结果为尿毒症蛋白质毒素的研究提供了依据。     

低分化胃癌患者血清中相关标志物的筛查和鉴定

目的 初步探讨蛋白质组技术在血清研究中的应用，建立低分化胃癌患者血清和健康者血清双向凝胶电泳图谱；筛查并鉴定低分化胃癌患者血清和健康者血清中的差异表达蛋白质，期望从中发现有意义的胃癌分子标志物。方法 采用双向凝胶电泳（2-DE）分离低分化胃癌患者血清和健康者血清总蛋白，银染显色，PDQuest软件分析，从中选取差异表达蛋白质，通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）鉴定差异表达的蛋白质。结果 获得重复性和分辨率较好的血清双向凝胶电泳图谱；鉴定得到6个仅在胃癌组血清中表达的蛋白质和4个仅在对照组血清中表达的蛋白质。结论 在低分化胃癌患者血清与健康者血清中存在差异表达蛋白质，利用蛋白质组学这一高通量的筛查技术可望从中发现与低分化胃癌相关的标志物。     

HBx蛋白诱发人肝细胞恶性表型的蛋白组学比较分析

目的探讨HBx蛋白对人肝细胞发生侵袭恶性表型的影响和作用机制。方法利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离稳定表达HBx基因的CCL13-HBx细胞系及转染空质粒的CCL13-pcDNA3.1细胞系的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,采用Image Master 2-DE Elite 4.01图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,MALDI-TOF-MS质谱仪得到相应的肽质指纹图谱后,搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。结果获得了背景清晰、分辨率高、重复性好的CCL13-HBx和CCL13-pcDNA3.1细胞总蛋白,图像分析识别差异蛋白质点共26个,通过质谱分析鉴定出14个非冗余的与细胞代谢、细胞周期及信号转导相关的差异表达蛋白质。结论建立了CCL13-HBx,CCL13-pcDNA3.1细胞系的2-DE图谱,鉴定了14个HBx诱发肝癌发生的相关蛋白质,为在蛋白质水平阐明HBx的诱发肝癌发生的机制提供了新线索。     

慢性间歇性缺氧大鼠肾脏组织蛋白质组表达变化的初步研究

目的 比较慢性间歇性缺氧（CIH）大鼠与正常大鼠肾脏组织蛋白质双向电泳图谱,寻找和鉴定CIH大鼠肾脏组织中的差异蛋白表达谱。 方法 以固相pH 梯度等电聚焦为第一向和垂直十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）为第二向,分别对正常对照大鼠（n=5）和CIH大鼠（n=5）肾脏组织蛋白质样品进行二维分离。二维电泳（2-DE）图谱经ImageMaster 2D Platinum 5.0软件分析,选取CIH组4个差异蛋白点,用基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）进行鉴定。 结果 通过对2-DE图谱蛋白斑点的匹配及对比分析,与CIH相关的差异表达蛋白斑点为112个。3个蛋白斑点经质谱鉴定为有意义的差异表达,下调的差异点1个,即线粒体ATP合成酶δ亚基;上调的差异点2个,分别为儿茶酚-O-甲基转移酶、脱嘌呤脱嘧啶核酸内切酶。 结论 初步鉴定了与大鼠肾脏组织CIH损伤相关的差异蛋白,其表达的变化可能通过多种途经影响肾脏功能,这为CIH导致肾功能损害的发病机制研究提供了新的思路。     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

胃癌患者唾液蛋白质组学分析

目的 应用差异蛋白质组学方法筛选唾液中与胃癌相关的蛋白质分子.方法 采用双向凝胶电泳(2-DE)分离胃癌患者和正常人群唾液总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质;Western blot 验证蛋白质组学分析的结果.结果 通过两组人群唾液的双向凝胶电泳图谱分析发现15个差异蛋白质斑点,质谱鉴定出9种蛋白质,在胃癌患者唾液中高表达的有3个,其余6个在胃癌患者唾液中低表达.Western blot对表达增高的蛋白鸟嘌呤核苷酸解离抑制因子2(RhoGDI2)进行检测,结果与蛋白质组学分析结果一致.结论 蛋白质组学研究是筛选胃癌患者唾液中特异性标记物的有效手段.     

人胰腺导管腺癌组织及癌旁组织双向电泳图谱的差异分析

目的:探讨人胰腺导管腺癌组织和癌旁组织之间差异的表达蛋白。方法:利用双向凝胶电泳（2-DE）对8例胰腺导管腺癌组织和癌旁组织的总蛋白进行分离,并用质谱仪对两组间差异蛋白质点进行肽指纹谱和串联质谱鉴定。利用蛋白质印迹分析和免疫组化法检测差异蛋白在胰腺癌和癌旁组织的表达。结果:2-DE显示,肿瘤组织中有28个蛋白质点表达上调,17个表达下调。上述蛋白质点经质谱鉴定得到30个蛋白质,包括酶类、抗氧化蛋白、信号转导蛋白、钙结合蛋白、结构蛋白及分子伴侣等。Western blot和免疫组化结果显示差异表达蛋白annexin II在胰腺癌组织中表达上调,与2-DE结果一致。结论:以2-DE为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段。本实验所得的annexin II等差异表达蛋白可能成为潜在的诊断胰腺癌的分子标志或控制肿瘤生长的治疗靶点。     

几丁糖对人成纤维细胞蛋白质表达谱的影响

目的 观察几丁糖对人成纤维细胞蛋白质表达谱的影响.方法 取第5代人成纤维细胞,实验组用含1 g/L几丁糖的培养液作用24 h,对照组仪用培养液培养24 h.分别提取实验组和对照组的成纤维细胞总蛋白,用双向凝胶电泳进行分离,银染后进行图像分析,识别有表达差异的蛋白质点;用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术鉴定部分差异蛋白质点.结果 实验组和对照组有43个差异蛋白质点,其中17个点在实验组中表达上调,26个点在实验组中表达下调.经质谱分析,鉴定出6个已知蛋白,3个未知蛋白.已知蛋白分别与细胞凋亡、信号转导、细胞骨架及代谢等有关.结论 在几丁糖作用下,成纤维细胞的部分蛋白质表达发生变化.     

α-促黑素细胞激素在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用

目的 检测α-MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达和作用，为研究瘢痕疙瘩的形成机理提供新的理论依据。方法 将取自患者躯干部位的瘢痕疙瘩皮肤，用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，以细胞形态学鉴定成纤维细胞。应用免疫组织化学染色方法检测α-MSH在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达。并应用流式细胞仪从细胞生长及增殖特性方面分析α-MSH对瘢痕疙瘩成纤维细胞生长和增殖的影响。结果 α-MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达，浓度为10^-6mmol／L的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞生长、增殖。结论 α-MSH能够在瘢痕疙瘩成纤维细胞中得到高表达，瘢痕疙瘩成纤维细胞对α-MSH的反应性增强表明α-MSH可能在促进瘢痕疙瘩的形成中起着重要的作用。     

肝细胞性肝癌及门静脉癌栓差异表达蛋白质组分析及意义

目的 观察人肝细胞性肝癌(HCC)及门静脉癌栓(PVTT)组织蛋白质表达谱的改变,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子.方法 用双向凝胶电泳(2-DE)对3对HCC组织及PVTT组织的总蛋白质进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并用组化和荧光定量聚合酶链反应(PCR)进一步验证.结果 鉴定出10个差异表达蛋白,包括Ki-67、MTH-SP75、NM23等.对在M组织中表达显著增高的Ki-67,应用组化和荧光定量PCR检测出两组间存在差异并且在HCC组织中Ki-67的表达与PVTT呈正相关.结论 HCC转移与多种蛋白有关,其中Ki-67高表达可能在肝癌转移中起重要作用.     

前列腺癌骨转移血清蛋白质组学研究

目的:应用蛋白质组学双向凝胶电泳和质谱技术筛选前列腺癌骨转移血清标志物。方法:收集前列腺癌伴骨转移、不伴骨转移各5例血清样本。血清样品用除白蛋白试剂盒除去血清中的白蛋白后进行双向凝胶电泳,ImageMaster 2D Platinum软件分析,有意义的差异蛋白质点行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定。结果:双向凝胶电泳显示,前列腺癌骨转移组血清蛋白中有15个斑点与前列腺癌无骨转移组有显著差异,前列腺癌骨转移患者血清中10个蛋白质表达水平显著增加,5个蛋白质表达水平显著下降。5个差异蛋白点进行胶内原位酶解,肽质量指纹图谱分析成功得到了3个蛋白质肽质量指纹图谱,并查询数据库初步鉴定了该3个蛋白质分别为锌α2糖蛋白、结合珠蛋白和载脂蛋白CⅢ。结论:双向凝胶电泳结合质谱鉴定是血清差异蛋白质组学研究的可靠平台和有力工具。所鉴定出的蛋白质与前列腺癌骨转移的发生、发展有关,可能是前列腺癌骨转移潜在的血清标志物。     

正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异蛋白组学研究

目的 应用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸离子电离飞行时间质谱(MAL-DI-TOF-MS)的蛋白组学方法,观察正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤的差异表达蛋白质.方法 收集7例脊髓室管膜瘤标本作为肿瘤组,4例尸解得到的脊髓室管膜标本作为对照组.提取各组标本的蛋白质,定量后进行IEF和SDS-PAGE双向电泳分离,得到的2-DE图谱经染色后,通过软件找到差异蛋白点并且使用MALDI-TOF-MS技术进行鉴定,部分差异蛋白质进行Western blot验证.结果 成功鉴定出50个有效的差异蛋白质点(其中肿瘤组较对照组上调24个,下调13个,仅在肿瘤组中表达10个,仅在对照组表达3个).Western blot实验证实了差异蛋白波形蛋白(Vimentin)、膜联蛋白Ⅰ(Annexin Ⅰ)和HSPA8在肿瘤组中的高表达.结论 应用2-DE串联MALDI-TOF-MS技术能够建立具有高分辨率及可重复性的正常脊髓室管膜与脊髓室管膜瘤2-DE图谱,并能有效鉴定差异蛋白质.其中的Vimentin、Annexin Ⅰ、HSPA8等蛋白可能与脊髓室管膜瘤的发病机制有关.     

应用蛋白质组学技术筛选Ⅰ期非小细胞肺癌的差异表达蛋白

目的 筛选和鉴定Ⅰ期非小细胞肺癌(NSCLC)的血清差异表达蛋白.方法 分别收集经手术、病理证实的6例Ⅰ期NSCLC患者、7例肺部良性疾病患者和15例健康体检者的血清,利用双向凝胶电泳(2-DE)和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对Ⅰ期NSCLC的差异表达蛋白进行分离、筛选和鉴定.结果 每一标本的3张2-DE图谱半均蛋白质点数约(323±11)个.共挖取51个差异蛋白质点,经MALDI-TOF-MS分析,成功鉴定出5种蛋白质,均为上调蛋白,分别为α1-酸性糖蛋白、C1酯酶抑制物、血管紧张素原、转铁蛋白及转甲状腺素蛋白A链.结论 应用蛋白质组学技术在Ⅰ期NSCLC血清中鉴定出5种差异表达蛋白,为开发NSCLC早期诊断标志物提供了重要的候选蛋白.     

人睾丸组织蛋白质组双向凝胶电泳技术的建立及其优化

目的 建立并优化人睾丸组织蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术,提高其分辨率及重复性.方法 利用固相pH梯度双向凝胶电泳技术进行分离,凝胶经银染显色后,用Melanie 4软件分析2-DE图谱.对样品处理、上样量,胶条的选择等步骤进行了一系列的优化.结果 优化后成功地获得了人睾丸组织分辨率高、重复性好的双向电泳图谱.结论 应用双向凝胶电泳技术建立了人睾丸组织蛋白质组图谱,为其及相关疾病的蛋白质组学的进一步研究奠定了基础.     

蛋白质组学方法分析PRL-3功能相关蛋白

目的 蛋白质组学方法分析转染肝再生磷酸酶-3(PRL-3)后结肠癌细胞LoVo的蛋白表达改变.方法 构建绿色荧光蛋白载体PAcGFP-C3-PRL-3并转染至结肠癌细胞LoVo中,获得稳定表达GFP-PRL-3的结肠癌细胞LoVo-PRL-3.Western blot检测转染后细胞的PRL-3表达.采用双向凝胶电泳(2-DE)分离LoVo-PRL-3细胞及转染空载体PAcGFP-C3的LoVo-Control细胞总蛋白,从中选取差异表达蛋白质点,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(MALD I-TOF-TOF-MS)鉴定差异表达的蛋白质.结果 Western blot结果显示PRL-3在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而未检测到在LoVo-Control细胞中表达.通过双向凝胶电泳图谱分析发现20个差异蛋白质斑点,质谱成功鉴定出17种蛋白.与LoVo-Control细胞比较,10种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中高表达,而7种蛋白在LoVo-PRL-3细胞中表达降低.结论 成功鉴定出PRL-3功能相关蛋白,为进一步研究PRL-3促进结直肠癌转移机制奠定基础.     

胃癌基因表达谱和蛋白质表达谱的分析研究

目的从转录组水平和蛋白质组水平寻找胃癌组织与正常胃组织间的差异表达基因和蛋白。方法应用含有14592个已知基因及表达序列标签的cDNA表达谱芯片获取基因表达谱信息．50％以上样本中Cy3／Cy5荧光强度比大于或等于2和小于或等于0．5的基因分别为在胃癌中表达上调或下调的基因。采用双向凝胶电泳（2-DE）分离32例经手术切除的胃癌患者的胃癌组织和正常胃组织总蛋白．对差异表达蛋白质点利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI—TOF—MS）进行分析．获取肽质量指纹图谱（PMF）。同时搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质。结果与正常组织相比．胃癌组织中差异表达基因共有387个,其中表达上调的有149个基因．上调超过3倍的有29个基因：表达下调的有238个基因．其中下调超过5倍的有21个基因。在蛋白质水平鉴定了15个差异表达蛋白．在肿瘤组织中高表达的有10个．其余5个在肿瘤组织中低表达。胃癌中过表达的基凶与蛋白产物主要与细胞骨架运动、细胞增殖及信号传导有关．表达下调的则主要与细胞免疫防御、毒理代谢有关。结论从转录组水平和蛋白质组水平对胃癌基因表达谱进行分析．不仅有助于从分子水平全方位理解胃癌的发病机制及生物学特性．同时也有助于进一步发现新的胃癌相关标志物和基因治疗的靶点。     

双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用

目的 :探讨双向凝胶电泳和质谱技术在睾丸蛋白表达研究中的应用。　方法 :用双向凝胶电泳分离成年雄性ICR小鼠睾丸总蛋白 ;从胶上切下 2个蛋白点 ,经胶内原位酶解后 ,用质谱仪测得其肽质量指纹谱 ;再通过数据库检索鉴定蛋白质。　结果 :从胶上切下的 2个蛋白点数据库检索结果是小鼠血清白蛋白和蛋白质二硫化物异构酶。　结论 :用双向凝胶电泳分离睾丸蛋白样品取得了很高的分辨率 ,质谱技术鉴定蛋白快速方便 ,可用于从蛋白质组水平上研究睾丸表达的蛋白     

结肠腺癌与腺瘤的蛋白质组表达差异

目的 通过比较结肠腺癌与结肠腺瘤组织的蛋白质组表达差异,寻找结肠腺癌相关的蛋白质,筛选结肠癌早期诊断的分子标志物.方法 应用蛋白质组学技术,对8例结肠腺癌组织和8例结肠腺瘤组织进行胶内差异双向电泳(2-D),选择差异表达超过2倍的蛋白点进行MALDI-TOF/TOF质谱分析和生物学信息分析.结果 成功建立结肠腺癌和结肠腺瘤的双向凝胶电泳图谱,结肠腺癌和腺瘤组织凝胶电泳图谱中平均蛋白质斑点数分别为3289和2986,其中表达差异超过2倍的斑点共有31个,质谱分析和数据库检索共鉴定出18个蛋白质,包括keratin 8、S100A6、protein disulfide isomerase等.结论 蛋白质组学可提示结肠腺癌与腺瘤组织间的蛋白质表达差异,而对相关差异表达蛋白的研究有可能为结肠癌的早期诊断和治疗提供新的分子标记物.