野生型p53基因对人肺癌细胞的生长抑制作用研究

ＧＬ细胞系是由人肺腺癌建立的癌细胞系，该细胞系ｐ５３基因第２４５密码子发生了Ｇ→Ｔ突变。我们将野生型（ｗｔ）及突变型（ｍｔ）ｐ５３基因分别导入ＧＬ癌细胞系中，对其细胞形态，生长速度，集落形成率以及裸鼠成瘤进行了研究。结果发现导入ｐ５３－ｗｔ后，细胞形态，生长速度，软琼脂生长情况并没有明显变化，但裸鼠成瘤试验发现导入ｐ５３－ｗｔ基因的ＧＬ癌细胞系，成瘤晚，生长速度明显减慢，其速度明显低于对照细胞系和导入ｐ５３－ｍｔ细胞系。而导入ｐ５３－ｍｔ细胞系，成瘤早，肿瘤生长速度明显加快。说明ｐ５３－ｗｔ基因可有效地抑制ＧＬ癌细胞的生长，而ｐ５３－ｍｔ基因则可促进ＧＬ癌细胞的生长。这一研究结果更进一步地证明了ｐ５３基因抗癌功能，对肺癌发生以及肺癌的防治都具有重要意义。     

p53基因在膀胱肿瘤中的研究进展

p53基因与膀胱肿瘤相关性研究很多,绝大多数研究认为p53的突变与膀胱肿瘤的发生有关。为对其做进一步深入研究,本文综述了近3年有关化学致癌物质引起p53基因突变机制、p53基因的分子生物学行为以及用于膀胱肿瘤基因治疗的最新研究进展。     

砷的致癌性与p53基因

本首先概念了砷致癌机制的研究进展，综合讨论了砷的致癌性，p53基因的作用机制和砷与p53基因关系等方面的研究进展，为进一步深入研究砷的致癌作用机制和临床合理有效使用砷制剂提供依据。     

酒精性股骨细胞凋亡及其p53等基因的表达

目的　探讨细胞凋亡抑癌基因 (p5 3)和细胞凋亡抑制基因 (Bcl 2 )基因在酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞凋亡中的作用。方法　家兔 6 0只 ,随机分为 2组。灌胃法建模 ,实验组给予含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给予等量生理盐水 ,1～ 6个月分批处死。原位末端标记法 (TUNEL法 )检测骨细胞凋亡 ,免疫组化检测 p5 3和Bcl 2基因表达。结果　第 2 ,3,6个月 ,实验组出现大量骨细胞凋亡 ,以软骨下区最为明显 ,骨细胞凋亡数明显高于对照组 (P <0 0 1) ;两组间骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数、p5 3基因阳性细胞数均有显著性差异 (P <0 0 1) ,实验组骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数与细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 75 ,P <0 0 1) ,实验组骨细胞 p5 3基因阳性细胞数与细胞凋亡指数呈明显正相关性 (r=0 6 8,P <0 0 1)。结论　酒精性ANFH中骨细胞存在明显凋亡现象 ,且受 p5 3基因上调与Bcl 2基因下调影响 ,p5 3与Bcl 2共同调节骨细胞凋亡。     

重组人p53腺病毒药物对人喉癌细胞的抑制实验

[目的]探索p53基因在喉癌基因治疗方面的可行性。[方法]以人喉癌细胞系Hep-2为实验对象,将重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)转染Hep-2细胞,体外实验观察重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)对Hep-2细胞生长的影响。[结果]各浓度重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)(1010、109、108、107)对Hep-2生长均有抑制。尤以1010明显。转染3d后,重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)诱导Hep-2细胞明显凋亡。[结论]重组人p53腺病毒药物(rAd/p53)对Hep-2细胞生长能有效抑制,能明显诱导其凋亡,为喉癌的治疗提供了临床前依据。     

硒对镉诱导的雄性SD大鼠肝细胞c-myc和p53蛋白表达及细胞凋亡的影响

目的 探讨不同剂量亚硒酸钠对氯化镉诱导的雄性SD大鼠肝细胞的凋亡率、c-Myc和P53蛋白表达的影响.方法 将65只健康SPF级SD雄性大鼠随机分为13组,分别设对照(生理盐水)组、氯化镉(5.0、10.0、20.0 μmol/kg)组及亚硒酸钠(2.5、5.0、10.0 μmol/kg)+氯化镉(5.0、10.0、20.0 μmol/kg)联合作用组,每组5只.氯化镉采用一次性腹腔注射染毒,亚硒酸钠采用一次性灌胃染毒.染毒后48 h,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法测定c-Myc和P53蛋白的表达量.结果 与相同剂量氯化镉组相比,亚硒酸钠剂量为2.5 μmol/kg时,全部联合作用组的大鼠肝细胞凋亡率、c-Myc和P53蛋白表达均降低(P＜0.05或P＜0.01);而亚硒酸钠剂量为5.0、10.0 μmol/kg时,部分联合作用组的大鼠肝细胞凋亡率、c-Myc和P53蛋白表达降低(P＜0.05或P＜0.01).大鼠细胞凋亡率与c-Myc、P53蛋白表达量均呈正相关(P＜0.01).结论 2.5 μmol/kg的亚硒酸钠对氯化镉所诱导的大鼠肝细胞的凋亡及c-Myc和P53蛋白表达的升高具有一定的拮抗作用.     

腺病毒介导野生型p53基因转染对人胃癌细胞系的作用

目的　观察野生型p5 3基因 (wtp5 3 )对体外培养人胃癌细胞系生长的抑制作用 ,探讨野生型p5 3基因在胃癌基因治疗中的重要意义。方法　以携带有野生型p5 3基因的复制缺陷型腺病毒 (pAd -p5 3 )为载体 ,转染有p5 3基因突变的人胃癌细胞系BGC -790 1。应用生化染色 ,检测外源基因的转染效率 ;应用免疫组化、原位杂交等方法检测外源基因的表达效果 ;应用细胞计数、MTT法检测pAd -p5 3转染对胃癌细胞生长的抑制效果 ;应用流式细胞仪检测细胞周期。结果　当腺病毒在 10 0MOI以上效靶比转染人胃癌细胞系时 ,转染效率达 10 0 %。转染 3d以后 ,胃癌细胞中突变性p5 3蛋白表达开始减少 ,野生型p5 3mRNA的表达开始增多 ,BGC -790 1细胞生长受到明显抑制 ,流式细胞仪检测显示G0 /G1期细胞数增加 (未转染组 5 6 47% ,转染pAd -p5 3组 79 40 % ,P<0 0 5 ) ,S期细胞数减少 (未转染组 3 0 80 % ,转染pAd -p5 3组 13 81% ,P <0 0 1)。结论　腺病毒介导的野生型p5 3基因体外转染人胃癌细胞 ,可有效抑制胃癌细胞的生长 ,可能成为胃癌基因治疗的手段之一。     

硒对氟所致细胞凋亡及p53基因的影响

目的 研究硒对慢性氟中毒大鼠肝肾细胞凋亡及相关基因的影响。方法 对饮高氟水(100mg／L)及高氟加不同浓度硒饲料(2．3mg／kg)大鼠饲喂4个月后，取其肝肾组织进行透射电镜形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞术观察各组细胞凋亡情况，同时检测肝肾细胞凋亡的相关基因p53。结果 与对照组相比，高氟及氟加硒组．肝肾细胞凋亡率及p53显著增加，氟加硒组肝肾细胞凋亡率明显低于单纯加氟组。结论 高氟可诱导细胞凋亡，硒可拮抗氟引起的细胞凋亡，且p53参与了细胞凋亡的调控。     

紫杉醇对p53基因不同表达型人肺腺癌细胞株的生长抑制作用

目的评价紫杉醇对p53基因不同表达型肺癌细胞株的生长抑制作用。方法分别以体外药物敏感试验（MTT法）、流式细胞术观察紫杉醇相同作用浓度处理肺癌细胞株（H1299为p53缺失型,H322为p53变异型,A549为p53野生型）后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化。结果紫杉醇对H1299、H322及A549细胞毒性呈时间依赖性（P〈0．05）;紫杉醇对H322和A549的IC50（48．07&#177;26．12nmol／L,9．8&#177;2．45nmol／L）明显低于对H1299的IC50（110．6&#177;38．7nmol／L,P〈0．05）。紧杉醇相同作用时间及相同浓度（作用时间48h、浓度10nmol／L）下．H322和A549G2／M期的阻滞明显多于H1299（P〈0．05）,H1299多阻滞于G0／G1期。H322的细胞凋亡也明显多于H1299（P〈0．05）。结论紫杉醇对D53基因不同表达型人肺腺癌细胞株均有生长抑制作用,但对变异型及野生型p53表达型细胞株的抑制作用明显高于p53缺失型的细胞株.     

083 砷的致癌性与p53基因

本文首先概述了砷致癌机制的研究进展，综合讨论了砷的致癌性、p53基因的作用机制和砷与p53基因关系等方面的研究进展，为进一步深入研究砷的致癌作用机制和临床合理有效使用砷制剂提供依据。     

p53蛋白在联苯胺接触人群和膀胱癌患者血清中的表达

目的研究职业性联苯胺接触者和膀胱癌患者突变型p53蛋白的表达。方法用免疫PCR法测定职业性联苯胺接触人群和膀胱癌患者血中突变型p53蛋白,用巴氏分级法对尿脱落细胞进行分级。结果随着联苯胺接触强度指数的增高,人群突变型p53蛋白的阳性率不断增加,膀胱癌患者组突变型p53蛋白的阳性率(83.3%)高于接触强度指数1组(33.3%)。PCR扩增条带经扫描积分后,膀胱癌患者组和接触强度指数2组的平均扫描积分(24016.11±2979.99、12960.79±903.27)高于1组(9231.58±1140.74),差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。在联苯胺接触人群的各组中以巴氏分级作为组内分层因素,接触强度指数2组中,巴氏2、3级层PCR扩增条带平均扫描积分(12960.79±903.27、13612.78±1697.38)高于1级层(9231.58±1140.74),差异有统计学意义(P<0.05)。接触强度指数3组中,巴氏3级层的突变型p53蛋白的阳性率(46.9%)高于1级层(33.3%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论在联苯胺接触强度较低的范围内,随着接触强度的增加,接触工人血清中p53突变蛋白的阳性表达不但更频繁,而且更加强烈;但接触强度超过了这个范围,工人血中p53突变蛋白的阳性率以及表达量将不再随着接触强度的上升而增高,而尿脱落细胞病变程度在联苯胺接触强度较高的情况下与p53基因突变率     

环境致癌剂与p53基因突变

p5 3基因是至今为止发现的与人类肿瘤相关性最高的基因。它不仅作为抑癌基因发挥作用 ,还参与细胞周期调控、DNA损伤与修复、基因转录及细胞凋亡等多个过程。肿瘤病因学的研究表明 ,6 0 %～ 90 %的人类肿瘤是由环境中的化学致癌物引起。环境中的化学致癌物或前致癌物可以造成p5 3基因突变及蛋白表达的改变 ,且p5 3的突变形式也随着致癌物和肿瘤的类型不同而具有特征性的差异 ,相关研究已成为近年来肿瘤分子生物学的热点。本文综述了苯并 [a]芘、烟草、亚硝胺、黄曲霉毒素和氯乙烯等几种环境中存在的主要化学致癌物质的致癌效应以及对p5 3基因和P5 3蛋白的影响。     

食管癌P53基因第5外显子突变分析

目的　分析不同地区食管癌组织中 p5 3基因第 5外显子的突变谱。 方法　采用PCR扩增产物纯化后直接DNA序列测定技术对陕西省西安市 4 2例和河南省林州市 4 3例食管癌标本 p5 3基因第 5外显子突变情况进行检测。结果　西安和林州市食管癌标本中 p5 3基因第 5外显子突变率分别为 14 3% (6 /42 )和 18 6 % (9/43) ,两地突变率比较差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。西安 6个突变位点中 4个为点突变 ,2个为缺失突变 ;林州 10个突变位点中9个为点突变 ,1个为插入突变。西安市有 4例突变发生在 12 6～ 12 8位点 ,林州市仅有 2例发生在该区域 (2 /10 ) ,但两者相比差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。结论　西安市食管癌 p5 3基因第 5外显子的突变位点相对集中 ,林州市突变位点比较分散 ,可能与该地区多种危险因素的暴露有关。     

p53基因突变与中心型非小细胞肺癌支气管镜下肿瘤形态的关系

目的　了解p5 3基因突变与原发性中心型非小细胞肺癌支气管镜下肿瘤形态的关系。方法　对 86例中心型非小细胞肺癌手术切除标本用S -P法检测p5 3蛋白表达情况。结果　鳞癌 6 3例、腺癌 11例、腺鳞癌 12例 ,支气管镜下支气管腔内肿瘤周围黏膜无改变者 (Ⅰ型 ) 33例 (38.37% )、肿瘤周围黏膜出现充血、水肿、粗糙等改变者 (Ⅱ型 ) 5 3例 (6 1.6 3% )。支气管镜下Ⅰ型和Ⅱ型病人的p5 3蛋白阳性表达率分别为 2 4 .2 4 %和 6 7.92 % (χ2 =15 .5 3,P<0 .0 1)。结论　p5 3蛋白表达与中心型非小细胞肺癌支气管腔内肿瘤是否累及周围黏膜有关 ,即p5 3蛋白阳性表达者支气管腔内肿瘤多已累及周围黏膜 ,病变相对较晚。     

多西他赛联合野生型p53对Hela细胞的抑制作用

目的 探讨多西他赛单用及与野生型p53基因联合应用对宫颈癌Hela细胞的抑制作用.方法 Hela细胞分两组培养,p53转染实验组(p53-Hela组)和空白对照组(Hela组),野生型p53基因表达用逆转录-多聚酶链反应鉴定.多西他赛作用于p53-Hela细胞及Hela细胞,24小时与48小时后形态学观察并使用活细胞计数试剂盒检测吸光度值OD450,计算细胞抑制率.结果 用逆转录-多聚酶链反应法检测到p53-Hela细胞的p53 mRNA表达,与对照组Hela细胞的p53 mRNA表达相比,差异有统计学意义(t=-17.504,P<0.01).多西他赛对p53-Hela及Hela细胞作用时,不同时间都有抑制作用(Fp53-Hela=53.500,P<0.01;FHela=430.225,P<0.01),该抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性.结论 多西他赛单独应用时可对宫颈癌Hela细胞产生抑制作用,与野生型p53基因联用时,其药物抑制作用增强.     

鼻咽癌p53蛋白与生物学行为及p53基因突变和EB病毒感染的相关研究

目的　探讨鼻咽癌 (NPC)中p5 3蛋白表达情况及其与临床生物学行为、p5 3基因突变、EB病毒感染的的关系。方法　采用免疫组化检测p5 3蛋白 ,聚合酶链反应 -单链构像多态性 (PCR -SSCP)技术检测p5 3突变 ,聚合酶链反应 (PCR)检测EBV。结果　 43例NPC中p5 3蛋白总的阳性表达率为 76 7%( 3 3 / 43 ) ,临床Ⅲ、Ⅳ期中p5 3阳性率为 80 6%( 2 5 / 3 1)明显高于临床Ⅰ、Ⅱ期66 6%( 8/ 12 ) (P <0 0 5 ) ,且表达强度随肿瘤分期而增加 ;NPC伴颈淋巴结转移患者p5 3表达阳性率 88 9%( 2 2 / 2 6) ,明显高于不伴颈淋巴结转移患者p5 3表达阳性率 5 3 5 %( 11/ 17) (P <0 0 1) ;NPC组织中p5 3基因突变率为 4 7%( 2 / 43 ) ,鼻咽炎症组织中无突变 ;EBV阳性率为 93 %( 4 0 / 43 )。结论　NPC组织中p5 3蛋白表达与p5 3基因突变无关 ,与EB病毒的感染有关。p5 3阳性易发生颈淋巴结转移 ,随着NPC病程的发展p5 3的阳性表达率及表达强度均增加     

膀胱移行细胞癌组织中Survivin、Bcl-2、p53的表达及临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）组织中Survivin、Bel-2、p53的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链酶卵白素-过氧化物酶复合物（sP）方法，检测78例BTCC组织中Survivin、Bel-2、p53的表达，并与15例正常膀胱黏膜组织进行对照研究。结果78例BTCC组织中，Survivin的阳性率为65．4%，Bel-2阳性率为55．1%，p53阳性率为48．7％，而正常膀胱黏膜组织中未见Survivin、p53阳性表达。Survivin、Bcl_2表达与BTCC的病理分级和临床分期显著相关（P〈0．05）。根据Spearman相关分析表明Survivin与Bcl-2、p53表达呈正相关（P〈0．05）。结论Survivin和Bcl-2的高表达提示膀胱癌预后不良，Sttrvivin在BTCC组织中的表达与Bcl-2、p53的异常表达密切相关。     

PCR-SSCP技术检测矽肺合并肺癌癌组织p53基因突变的研究

用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析法对３６例矽肺患者的石蜡包埋的原发性肺癌组织ｐ５３基因第５、７、８外显子进行了检测，检出突变１５例。突变在第５、７、８外显子上都有发生，但以第８外显子上发现的阳性突变最多。对肿瘤类型和ｐ５３基因突变的关系进行了分析，发现矽肺病例肺腺癌ｐ５３基因阳性突变率最高，为５３．９％，高于普通型肺癌（３３．０％）。进一步对其中１例样本进行核苷酸序列直接测定，结果显示第５外显子非突变热点区的第１４４位密码子核苷酸由ＣＡＧ突变为ＡＡＧ，氨基酸由谷氨酰胺突变为赖氨酸，以上结果与非职业肺癌明显不同，提示ｐ５３基因突变在矽肺病例肺癌发生中起着重要作用，可能与矽尘作业环境中含有的某些化学致癌物有关。     

膀胱移行细胞癌组织中Survivin、Bcl-2、P53的表达及临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌(BTCC)组织中Survivin、Bcl-2、p53的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学链酶卵白素-过氧化物酶复合物(SP)方法,检测78例BTCC组织中Survivin、Bcl-2、p53的表达,并与15例正常膀胱黏膜组织进行对照研究。结果78例BTCC组织中,Survivin的阳性率为65．4％,Bcl-2阳性率为55．1％,p53阳性牢为48．7％,而正常膀胱黏膜组织中未见Survivin、p53阳性表达。Survivin、Bcl-2表达与BTCC的病理分级和临床分期显著相关(P< 0．05)。根据Spearman相关分析表明Survivin与Bcl-2、p53表达呈正相关(P<0．05)。结论Survivin和Bcl-2的高表达提示膀胱癌预后不良,Survivin在BTCC组织中的表达与Bcl-2、p53的异常表达密切相关。