铜绿假单胞菌多重药物主动外排泵与抗生素耐药

铜绿假单胞菌是一种临床上很重要的条件致病菌。主要感染医院内免疫力低下患者 [1 ] 。铜绿假单胞菌常对多种常用抗生素耐药 ,所涉及耐药机制复杂 ,包括 :外膜低渗透、抗生素修饰酶的生成 (如 β-内酰胺酶 )、外膜孔蛋白缺失、生物膜形成、青霉素结合蛋白改变和主动外排泵系统。可表现为抗生素多重耐药 ,具有重要临床意义。1　铜绿假单胞菌主动外排泵系统1 .1　 四类主动外排泵系统及其调控　到目前为止共报道了四类铜绿假单胞菌的多药外排泵系统 ,但大量同源物已经完全基因组测序证实。大部分编码外排泵的基因组存在于细菌染色体中。较早报…     

多重耐药铜绿假单胞菌的主动外排机制

铜绿假单胞菌(PA)对多种抗菌药物都有不同程度的耐药,其耐药机制包括酶的产生、生物被膜的形成、外排泵的高表达和外膜孔蛋白表达的降低或缺失,其中多药外排泵能排出多种结构和功能不相关的抗菌药物,包括β-内酰胺类、氟喹诺酮类、大环内酯类、氨基糖苷类、四环素、氯霉素等,目前被认为是导致PA固有和获得性多重耐药的重要原因.     

泛耐药铜绿假单胞菌外排泵表型分析

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PAE)是一种常见的医院内获得性感染的重要条件致病菌[1].泛耐药铜绿假单胞菌(pandrug-resistant Pseudomonas aeruginosa,PDPAE),是指对头孢菌素类、碳青霉烯类、青霉素类、氟喹诺酮类和氨基糖苷类等5类以上抗菌药物全部耐药,但不包括多粘菌素及替加环素[2].随着广谱抗生素的广泛应用,住院时间的延长,免疫缺陷宿主的增加,抗生素的不合理使用,多重耐药甚至泛耐药铜绿假单胞菌明显增多,给临床抗感染治疗带来极大困难.为了解体外构建的泛耐药菌株与临床分离株在外排泵机制方面的差异,本研究通过次抑菌浓度诱导法[3]建立泛耐药模型,并进一步检测及分析外排泵表型.现将结果报告如下.     

临床铜绿假单胞菌多重耐药株外排泵机制研究

目的研究临床分离的多重耐药铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵的外膜蛋白OprM的表达及泵调节基因mexR突变情况。方法筛选铜绿假单胞菌多重耐药株13株和敏感菌株5株进行外膜蛋白SDS-PAGE分析,比较OprM的表达差异。聚合酶链反应(PCR)法扩增mexR基因,鉴定产物,测序。结果多重耐药菌株组OprM蛋白在相对分子量为49 kD处的各电泳条带较敏感菌株和质控菌株铜绿假单胞菌ATCC 27853的灰度明显增强,其光密度值多重耐药菌株组为157.79,敏感菌株组为132.03,两组比较,差异有显著性(t=19.345,P<0.01);多重耐药菌株mexR基因产物测序,除个别碱基插入外,以A-96→G,G-411→A,C-308→G,T-377→A 4个核苷酸点突变为主,后二者还导致了其编码的氨基酸发生改变,分别为Ala-103→Gly,Val-126→Glu。结论OprM表达增强提示MexA-MexB-OprM外排泵耐药机制参与多重耐药形成。多重耐药菌株的mexR基因均存在点突变,提示mexR基因突变引起MexA-MexB-OprM外排泵表达增强。     

主动外排泵在铜绿假单胞菌多药耐药机制中的作用实验研究

目的采用荧光定量RT-PCR的方法检测铜绿假单胞菌MexAB-Opr M、MexCD-OprJ、MexEF-OprN、MexXY-Opr M、MexGHI-OpmD 5种外排泵表达情况,探讨主动外排泵在多药耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)耐药机制中的作用。方法采用分子克隆技术,构建克隆载体pMD18-T-mexB、pMD18-T-mexD、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexY及pMD18-T-rpsL作为定量模板,建立标准曲线;采用荧光定量RT-PCR检测并分析30株MDRPA临床分离株外排基因mexB、mexD、mexF、mexH、mexY的mRNA表达。结果成功构建pMD18-T-mexB、pMD18-T-mexD、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexF、pMD18-T-mexY及pMD18-T-rpsL的标准曲线;在30株MDRPA中,16株高表达MexAB-Opr M(53.33%),7株高表达MexCD-OprJ(23.33%),8株高表达MexEF-OprN(26.67%),2株高表达MexGHI-OpmD(6.67%),3株高表达MexXY-Opr M(10.00%)。结论主动外排泵在多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制中起着重要作用。     

铜绿假单胞菌对抗菌药物交叉耐药的体外研究

目的体外建立铜绿假单胞菌(PAE)野生株PAEO1耐药菌株,探讨PAEO1对抗菌药物的交叉耐药性。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAEO1对敏感抗菌药物耐药,采用K-B纸片扩散法监测耐药菌株PAEO1对原敏感抗菌药物的敏感性变化。结果头孢哌酮/舒巴坦诱导PAEO1耐药后,PAEO1对亚胺培南/西司他丁、美罗培南、左氧氟沙星和氨曲南敏感性降低,差异有统计学意义(P<0.01);PAEOl经左氧氟沙星诱导耐药后,对环丙沙星,亚胺培南/西司他丁和美罗培南产生耐药,差异有统计学意义(P<0.01);PAEO1经阿米卡星诱导耐药后,对庆大霉素产生耐药,差异有统计学意义(P<0.01),对照组均未发现药敏改变。结论亚抑菌浓度的抗菌药物可诱导野生株PAEO1产生耐药,且所诱导耐药菌株在同类或非同类抗菌药物之间可产生交叉耐药。     

中药对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用研究

目的研究中药与常用抗生素的相互作用和对多重耐药铜绿假单胞菌(multi drug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)外排泵的作用。方法采用外排泵抑制剂联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)筛选外排泵阳性MDR-PA,并用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,q PCR)确认外排泵基因高表达菌株。检测10种常用中药对抗生素的作用和对外排泵阳性MDR-PA外排泵基因表达的影响。结果从34株MDR-PA中筛选到5株外排泵阳性菌,q PCR法检测到这5株菌外排泵基因的表达水平是野生型铜绿假单胞菌PAOl的2倍或2倍以上(P<0.05)。黄芩、金银花和夏枯草对环丙沙星有较强的拮抗作用,穿心莲和五倍子对庆大霉素的拮抗作用最强,穿心莲和夏枯草对美罗培南的协同作用最强。穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子具有促进外排泵基因表达的作用。结论中药穿心莲、金银花、夏枯草和五倍子可通过促进外排泵基因的表达拮抗抗生素的抗菌作用,临床抗感染治疗时需谨慎使用。     

粉防己碱提高铜绿假单胞菌对氧氟沙星敏感性的体外试验研究

目的研究粉防己碱作为主动外排泵抑制剂提高铜绿假单胞菌对氧氟沙星的敏感性效果。方法采用M-H琼脂稀释法筛选临床分离的铜绿假单胞菌,同时测定铜绿假单胞菌在与不同浓度的粉防己碱作用不同时间对氧氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)变化。结果 100、50、25、12.5、6.25μg/ml等5个不同浓度的粉防己碱在与耐药铜绿假单胞菌作用60、180min后,不同菌株原来对氧氟沙星的MIC值可以降低23～27倍。结论可以考虑将主动外排泵抑制剂粉防己碱作为一种治疗耐药铜绿假单胞菌辅助药物,增强铜绿假单胞菌对氧氟沙星的敏感性,从而提高抗菌药物疗效。     

铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与耐药的关系研究

目的研究铜绿假单胞菌对碳青酶烯类抗生素的耐药机制. 方法以亚胺培南为代表,应用逆转录(RT)-PCR方法并设置内参照,分别研究临床分离的铜绿假单胞菌亚胺培南耐药株和亚胺培南敏感株的主动外排系统MexAB-OprM中OprM的结构基因OprM的mRNA表达水平. 结果耐药组OprM的mRNA表达水平明显高于敏感组. 结论主动外排系统MexAB-OprM的表达水平增高或异常增多与铜绿假单胞菌对以亚胺培南为代表的碳青酶烯类抗生素耐药密切相关.     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。     

外排泵系统介导的铜绿假单胞菌多重耐药性研究

目的调查镇江地区临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性率,检测外排泵系统M exAB-OprM和M exXY-OprM的调控基因m exR和m exZ的表达情况。方法纸片扩散法(K-B法)测定其对12种常用抗菌药物的耐药性,用PCR扩增m exR和m exZ全长基因。结果药敏结果显示该菌对头孢类抗生素耐药情况严重,铜绿假单胞菌对复方新诺明、头孢唑林、头孢西丁完全耐药,对头孢他啶、头孢吡肟的耐药率在40.0%~60.0%之间。对亚胺培南、阿米卡星、美罗培南的耐药率达到40.0%。对左氧氟沙星、哌拉西林、头孢噻肟的耐药率均在60%以上。多重耐药率达75.0%。但98.0%的铜绿假单胞菌(71株)对多粘菌素B敏感。72株铜绿假单胞菌中91.0%(65株)同时表达m exR和m exZ基因,5.8%(4株)单独表达m exR基因,4.0%(3株)单独表达m exZ基因。结论m exR和m exZ基因与铜绿假单胞菌多重耐药密切相关。     

铜绿假单胞菌主动外排系统MexAB-OprM与碳青霉烯类药物耐药的关系研究

目的:探讨临床分离的铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM与其对碳青霉烯类药物耐药之间的关系,研究其耐药分子机理。方法:测定临床分离的铜绿假单胞菌对亚胺培南和美罗培南的体外抗菌活性,根据耐药情况,分为碳青霉烯类药物敏感组和碳青霉烯类药物耐药组;应用RT-PCR方法,研究两组菌株的主动外排系统MexAB-OprM中结构基因oprM的mRNA表达水平;用PCR法扩增两组菌株的泵调节基因mexR,对扩增产物进行DNA双向测序。结果:耐药组oprM的mRNA表达水平明显高于敏感组(P0.05);一株菌发现MexR第126位氨基酸突变(缬氨酸→谷氨酸),两株菌发现MexR第70位氨基酸突变(精氨酸→谷氨酰胺)。结论:山西医科大学第一医院临床分离铜绿假单胞菌的主动外排系统MexAB-OprM参与碳青霉烯类药物的耐药;MexAB-OprM高表达的分子机理可能与泵调节基因mexR的突变以及其他突变型有关。     

铜绿假单胞菌耐药机制研究现状

铜绿假单胞菌(PAE)属于非发酵革兰阴性菌,分布广泛,生存简单,是医院感染的主要条件致病菌之一,常常引起医院内免疫力低下患者的感染,据报道,铜绿假单胞菌性肺炎致死率＞30%,败血症患者的病死率高达80%～90%~([1]).铜绿假单胞菌对多种抗菌药物表现出固有(intrinsic)与获得性(acquired)多药耐药,一旦感染,临床治疗十分棘手.铜绿假单胞菌的耐药机制复杂,几乎具有目前所知道的细菌主要耐药机制.     

多药耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM主动外排系统的耐药作用

目的探讨MexAB-OprM主动外排系统(外排泵)在多药耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用。方法挑选临床分离的铜绿假单胞菌多药耐药菌株26株、敏感菌株15株及标准质控菌株(ATCC27853),用RT-PCR扩增其内膜转运蛋白mexB的结构基因mexB和内参照基因16S rRNA片段,根据mexB与16S rRNA扩增产物的电泳扫描比值,分析mexB mRNA的表达水平,判断MexAB-OprM的表达情况。结果 26株多药耐药菌株对14种常用抗菌药物全部耐药,耐药率为100%,15株敏感菌株对14种常用抗菌药物全部敏感;标准质控菌株、所有的敏感菌株和多药耐药菌株均检测出mexB mRNA基因;耐药菌株的mexB mRNA水平(2.41±1.10)显著高于敏感菌株(1.47±0.83)(P0.01)。结论 MexAB-OprM主动外排系统表达水平的增高与铜绿假单胞菌多药耐药的形成密切相关。     

多重耐药铜绿假单胞菌的耐药机制研究进展

铜绿假单胞菌(pseudomonas aeruginosa,PA)的耐药性是一个非常复杂的问题,往往是多种因素协同作用的结果。PA的耐药机制主要有产生灭活酶或修饰酶(主要包括β内酰胺酶、氨基糖苷类钝化酶等)、外膜存在主动外排系统、外膜通透性降低、药物作用靶点改变、细菌生物被膜形成。本文对多重耐药PA的耐药机制进行分析,为临床用药提供依据。     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌(PAE)是主要的医院感染条件致病菌,常常感染免疫力低下的患者,同时对多种抗菌药物耐药,多药耐药性是导致其治疗效果不理想的重要原因。产生抗菌药物灭活酶或钝化酶、改变药物的作用靶位、外膜通透性下降、主动外排系统过度表达、形成生物膜及外源耐药基因的获得,是铜绿假单胞菌耐药的主要机制。笔者对铜绿假单胞菌     

主动外排在铜绿假单胞菌耐药中的作用研究

目的 观察外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对铜绿假单胞菌耐药水平的影响,并扩增外排泵蛋白编码基因.以探讨细胞膜主动外排作用与铜绿假单胞菌耐药的关系.方法 用琼脂二倍稀释法测定150株铜绿假单胞菌对四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素,头孢噻肟、亚胺培南和美罗培南的最低抑菌浓度(MIC),并观察在含5 mg/L CCCP存在条件下MIC值的变化;用PCR法扩增外排泵编码基因oprM、mexB和mexR.结果 150株铜绿假单胞菌中,有56.0%的菌株外排泵表型试验阳性,以四环素、氯霉素、环丙沙星、庆大霉素、头孢噻肟、亚胺培南和美罗培南作为底物,分别有17、6、12、29、35、18、31株菌在5 mg/L CCCP的条件下MIC值降低≥4倍,其中有56.0%的菌株同时对2种的药物有明显的外排作用;主动外排机制不仅存在耐药菌株,而且也存在于敏感菌株,但CCCP对耐药菌株的影响更大;oprM、mexB和mexR外排泵基因普遍存在于铜绿假单胞菌中.结论 主动外排作用是铜绿假单胞菌多药耐药的重要原因之一,主动外排泵抑制剂在体外能降低多种抗菌药物对铜绿假单胞菌的MIC,外排泵抑制剂在克服细菌的耐药性方面有一定的应用前景.     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌也称绿脓杆菌,为非发酵糖类的革兰阴性杆菌,专性需氧,最适生长温度为25~30℃,生存能力与抵抗力极强,在干燥物体表面可存活数10d。铜绿假单胞菌是人体内的正常菌群,在健康人皮肤、呼吸道等部位均可存在,为条件致病菌,也是院内感染的重要致病菌之一。其多重耐药性日趋严重,给临床抗感染治疗带来了极大困难。本文旨在通过对铜绿假单胞菌的耐药特点、耐药机制及防治策略进行简要阐述,为院内感染监控和临床抗菌药物的选择提供依据。     

ICU多重耐药铜绿假单胞菌外排泵基因表达分子流行趋势及其危险因素

目的探讨ICU患者中多重耐药铜绿假单胞菌(MDRPA)多药物外排泵基因Mex AB-Opr M、Mex CD-Opr J、MexEF-Opr N表达的分子流行趋势及其危险因素。方法收集2012年4月-2014年2月本院ICU病房收治的56例确诊感染MDRPA患者的痰、血或创面分泌物标本,分离培养MDRPA菌共56株,应用聚合酶链式反应(PCR)及实时荧光定量PCR(real-time PCR)等方法分析上述标本中3种外排泵基因表达的情况。结果 56株MDRPA菌中,Mex ABOpr M、Mex CD-Opr J及Mex EF-Opr N阳性菌株数分别为55(98.2%)、10(17.9%)和23(41.1%);Mex AB-Opr M、MexCD-Opr J及Mex EF-Opr N阳性菌株中高表达者分别为23例(23/55)、4例(4/10)和14例(14/23);Logistic回归分析显示,碳青酶烯类抗生素应用、留置深静脉导管及糖皮质激素应用超过1周是Mex AB-Opr M、Mex CD-Opr J及Mex EFOpr N高表达的独立危险因素。结论多重耐药铜绿假单胞菌多药物外排泵基因Mex AB-Opr M阳性率较高,其高表达与碳青酶烯类抗生素应用、留置深静脉导管及激素应用超过1周有关。     

铜绿假单胞菌耐药机制研究新进展

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,P.a)广泛存在于自然环境如土壤、水和人体的皮肤、呼吸道、消化道等部位,在特定条件下成为条件致病菌,在医院的感染中尤为多见。随着医学技术的进步,慢、重症得到有效诊治的同时,铜绿假单胞菌耐药机制的研究也在不断受到关注,所以本文就目前铜绿假单胞菌耐药机制研究新进展进行了分析,对于研究进行了归纳,并给出了总结。