汉黄芩苷通过上调SIRT1表达减轻糖尿病视网膜病变引起的细胞和组织损伤

目的探究汉黄芩苷对高糖诱导的人视网膜微血管内皮细胞（hRMECs）功能障碍的作用和对链脲佐菌素（STZ）诱导的大鼠糖尿病视网膜的损伤的影响及潜在的分子机制。方法hRMECs常规培养，实验分为对照组（5 mmol/L葡萄糖）、渗透对照组（5 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇）、高糖组（30 mmol/L葡萄糖）、给药组（30 mmol/L葡萄糖+10、20、30、40 μmol/L汉黄芩苷）。通过CCK-8与Transwell实验分别检测细胞增殖和迁移能力，小管形成与单层细胞膜通透性实验分别检测细胞成管能力和细胞膜通透性，ROS、NO、GSH-ST试剂盒检测细胞氧化应激水平，qRT-PCR和ELISA试剂盒分别检测IL-1β、IL-6的表达水平和含量，Western blot检测VEGF、HIF-1α和SIRT1蛋白表达。选取40只SPF级雄性SD大鼠，随机分为对照组（Sham组）、模型组（STZ组）、汉黄芩苷组（Wog组）和汉黄芩苷治疗组（STZ+Wog组），10只/组。模型组和汉黄芩苷治疗组腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸缓冲液（pH=4.5）溶解的STZ，剂量为60 mg/kg建立糖尿病大鼠模型，对照组与单独的汉黄芩苷组给予等剂量的柠檬酸缓冲液。糖尿病大鼠模型建立1周后给予汉黄芩苷治疗，对照组、模型组予等量生理盐水注射，连续6周。比较4组大鼠视网膜组织损伤、HIF-1-α、ROS、VEGF、TNF-α、IL-1β、IL-6水平以及sirt1蛋白表达情况。结果与对照组相比，高糖诱导hRMECs异常增殖和迁移，提高了hRMECs小管形成能力及细胞膜通透性（P＜0.05），同时高糖诱导的hRMECs炎症水平和氧化应激水平上升（P＜0.05）。而与高糖组相比，汉黄芩苷可浓度依赖性抑制高糖诱导的hRMECs细胞增殖、迁移、小管形成及细胞膜通透性的增加（P＜0.05），此外汉黄芩苷可降低高糖诱导的hRMECs的炎症和氧化应激水平（P＜0.05）。SIRT1在高糖诱导的hRMECs中低表达，30 μmol/L剂量汉黄芩苷处理后高糖诱导的低SIRT1表达部分恢复（P＜0.01），干扰SIRT1表达可逆转汉黄芩苷对高糖诱导hRMECs异常增殖、迁移、小管形成、细胞膜通透性、炎症及氧化应激的抑制作用。动物实验显示，与对照组相比，STZ组视网膜组织厚度增加（P＜0.05），而汉黄芩苷治疗后能缓解糖尿病引起的大鼠视网膜增厚（P＜0.05）。同时STZ处理提高了VEGF、HIF- 1α、IL-1β、IL-6和ROS的水平（P＜0.001），汉黄芩苷的处理降低了STZ诱导的大鼠视网膜损伤且上调了SIRT1的表达（P＜0.001）。结论汉黄芩苷通过上调SIRT1的表达缓解糖尿病视网膜病变引起的损伤。     

分化可控的人类鼻粘膜类器官模型的建立

目的建立分化程度可控、能够重现来源组织结构和功能的人类鼻粘膜类器官模型。方法采集手术切除的新鲜中鼻甲和鼻息肉组织，将消化过滤的鼻粘膜上皮细胞分为连续“扩增”培养组（EO组）及“扩增-分化”分段培养组（DO组）。分别在基于气液界面进行体外3D类器官培养，通过STR鉴定、电镜及免疫组化染色分别对两组鼻粘膜类器官的结构、细胞组成及纤毛功能进行鉴定。再通过PAS染色对DO组中分化后的鼻粘膜类器官分泌功能进行鉴定。结果整个培养期间，均能生长出直径逐渐增大的空泡状或实心球状3D类器官。培养第16天，DO组多为空泡状类器官，EO组多为实心球状类器官，DO组空泡数比例大于EO组（[21.67±8.57）% vs（54.67±13.26）%，P < 0.05]。将鼻粘膜类器官与来源组织同时进行STR检测，匹配度为100%。培养第21天，DO组鼻粘膜类器官扫描及透射电镜显示纤毛超微结构，而EO组多显示出短绒毛结构。免疫组化染色结果显示，呼吸区粘膜主要包含P63（基底细胞）、β-tubulin（纤毛柱状细胞）、MUC5AC（杯状细胞）。相比EO组，DO组类器官纤毛细胞数[(7.95± 1.81)% vs (27.04±5.91)%，P < 0.05]及杯状细胞数[(14.46±0.93)% vs (39.85±5.43)%，P < 0.05）占比更大，基底细胞占比差异无统计学意义（P > 0.05）。DO组中分化后的鼻粘膜类器官糖原染色呈阳性表达。结论本研究首次采用“扩增-分化”分段式培养法，培养出能够在体外长期稳定生长、高度拟似来源组织形态结构和功能（纤毛功能及分泌功能），且分化程度可控的鼻粘膜类器官。     

基于人消化道微生态体外模拟系统观察纳米二氧化钛对肠道菌群的影响

目的通过消化道微生态体外模拟系统探索纳米二氧化钛(titanium dioxide nanoparticles，TiO₂ NPs)对人源肠道菌群组成和结构的影响。方法对TiO₂ NPs进行粒径、形状、晶型和团聚程度的表征。通过模拟胃、小肠、结肠的液体环境和物理条件建立体外人消化道微生态模拟系统，并对模拟系统的稳定性进行评价。从人粪便中提取菌群，采用该模拟系统稳定培养，分别暴露于0、20、100、500 mg/L TiO₂ NPs中，收集染毒24 h后的菌液，通过16S rRNA测序技术分析TiO₂ NPs对人源肠道菌群组成和结构的影响，利用线性判别效应量分析(linear discriminant analysis effect size，LEfSe)筛选差异细菌，根据京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)数据库进行功能预测。结果TiO₂ NPs为球形粒径，直径(25.12±5.64) nm，晶体结构为锐钛矿，在超纯水中水合粒径为(609.43±60.35) nm，Zeta电位为(-8.33±0.22) mV。体外消化道模拟系统培养人源肠道菌群24 h后达到相对稳定状态，肠球菌(Enterococci)、大肠杆菌(Enterobacterium)和乳酸杆菌(Lactobacillus)计数可分别达到(1.60±0.85)×10⁷个、(5.60±0.82)×10⁷个和(2.70±1.32)×10⁷个。16S rRNA测序结果显示，与对照组相比，TiO₂ NPs染毒组(20、100和500 mg/L)在门、纲、目、科、属水平上，肠道菌群的物种数量和均匀度未受到明显影响，但部分菌种的相对丰度发生显著变化。TiO₂ NPs染毒组(20、100和500 mg/L)与对照组之间共筛选出42种不同的差异细菌(线性判别分析分数，linear discriminant analysis score，LDA score>3)，以肠杆菌属(Enterobacter)、拟杆菌科(Bacteroidaceae)、乳酸杆菌科(Lactobacillaceae)、双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)和梭菌属(Clostridium)等为代表。进一步的肠道菌群功能预测分析显示，TiO₂ NPs可能影响肠道菌群的氧化磷酸化、能量代谢、磷酸盐和磷酸盐代谢、甲烷代谢等代谢和功能(P < 0.05)。结论体外人消化道微生态模拟系统下，TiO₂ NPs可以显著改变人源肠道菌群的组成和结构，以肠杆菌属和益生菌为代表，并可能进而影响机体多种物质的代谢和功能。     

树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽联合树突状细胞体外刺激淋巴细胞功能评估

目的利用树突状细胞(dendritic cell，DC)作为抗原递呈载体，检测树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽在体外对淋巴细胞是否有刺激增殖、促进细胞因子分泌及促进对肿瘤细胞的杀伤功能。方法外周血树突状细胞和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer，CIK)分离及培养采用贴壁法; 采用CCK-8法检测淋巴细胞增殖功能; 酶联免疫斑点法检测淋巴细胞的细胞因子分泌功能; CCK-8法检测淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤功能。实验分为肿瘤多肽组(肽+DC-CIK)、DC-CIK组和单纯CIK组进行各项功能检测与比较。结果在白介素-2(interleukin-2，IL-2)存在时，3组细胞均增殖明显。肿瘤多肽组在第4天、第6天(第4天Z= -3.79, P < 0.001;第6天Z=-2.95, P < 0.01)时，450 nm光密度显著高于CIK组，在第4天时，450 nm光密度显著高于DC-CIK组(Z=-2.02, P < 0.05)。培养体系中无IL-2时，各组淋巴细胞均增殖缓慢，各时间点光密度差异无统计学意义。肿瘤多肽刺激组多种细胞因子产生量高于单纯CIK组, 其中白介素-4(interleukin-4，IL-4)(Z=-2.61, P < 0.01)、巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulation factor, GM-CSF)(Z=-3.85, P < 0.001)、干扰素-γ(interferon-γ, IFN-γ)(Z=-3.56, P < 0.001)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-ɑ, Z=-3.40, P < 0.001)的分泌量与单纯CIK组相比，差异均有统计学意义。肿瘤多肽刺激组与DC-CIK组相比，除IL-4分泌量差异有统计学意义外(Z=-2.15, P < 0.05)，其余各项细胞因子分泌量差异均无统计学意义。DC-CIK组与单纯CIK组相比，IFN-γ(Z=-2.44, P < 0.05)、TNF-ɑ(Z=-2.26, P < 0.05)和GM-CSF(Z=-3.73, P < 0.001)分泌量差异有统计学意义。肿瘤多肽组与DC-CIK组、单纯CIK组在18 h与24 h的杀伤效率虽然差异无统计学意义，但有高于其他两组的趋势。结论树突状细胞疫苗特异肿瘤多肽联合树突状细胞体外可提高CIK细胞的增殖活性，提高多个细胞因子的分泌量。     

多中心网状组织细胞增生症1例

A 65-year-old woman developed erythema, papules and nodules over the body. Some nodules of her auricles and hands like string beads. Besides, she suffered from symmetrical swelling and pain of multiple joints, morning stiffness with deformity of joints; She had elevated erythrocyte sedimentation rate and C reactive protein levels; Her rheumatoid factor and antinuclear antibody were positive; Joints destruction was found with X-ray imaging; Skin pathology showed Dermal infiltrate of abundant histiocytes, part of them with a ground-glass appearance; A CD68 immunohistochemical stain was positive and the cells were negative for S100, CD1a. These findings were diagnostic evidences of multicentric reticulohistiocytosis (MRH). The patient received high-dose of glucocorticoids combinated with immunosuppressive agents, and achieved a satisfactory effect. MRH was a rare multisystem disease characterized by papulonodular mucocutaneous and destructive arthritis, and its pathogeny was not yet completely understood. The typical lesions of MRH were hard papules or nodules that usually occured on the hands, face and arms. Classic coral bead appearance from periungual cutaneous nodules that were characteristic of MRH. MRH was an inflammatory joint disease, affecting almost all the appendicular joints and characterized by joint multiple, symmetrical, destructive, progressive disability. Joints destruction of the distal interphalangeal joints was a unique feature of MRH. In addition to skin and joints, it could also involve other systems. There were no diagnostic laboratory markers for MRH. Laboratory examinations had often been found to be non-specific. Imageological examination mainly showed bone and joint destruction. Skin biopsy was the best test to diagnose MRH, the typical histopathological findings included an infiltrate with histiocytes and multinucleated giant cells with a ground-glass appearing in eosinophilic cytoplasm, and the immunohistochemical stain was positive for CD68. The diagnosis was typically made based on the clinical presentation, supportive radiographic findings and skin biopsy. MRH was easily possible to mistake for other more common autoimmune conditions, such as rheumatoid arthritis, psoriatic arthritis, osteoarthritis, and dermatomyositis, but the distinctive clinical, radiographic, and histologic features could aid in differentiating these diseases. MRH could mimic other rheumatic diseases, besides, it could also coexist with cancer or other autoimmune disorders. There was no standardized treatment for MRH. However, Nonsteroidal anti-inflammatory drugs, glucocorticoid, Immunosuppressant, biologic medications, and bisphosphonates had been used with varying degrees of curative effect. Treatment with glucocorticoid combined with immunosuppressants were effective for rash and arthritis, early use of them should be strongly considered, and refractory cases could be treated with biological agents. By reporting a MRH case and reviewing literature, this paper aims to help the clinicians improve the understanding of this rare disease, and suggests that when one diagnosis cannot explain the whole picture of the disease, and further evidence should be sought to confirm the diagnosis.     

高血糖诱导肝星状细胞5-羟色胺降解在2型糖尿病致肝脏炎症和纤维化时的作用

目的探讨5-羟色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT)在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)引起肝脏炎症及纤维化时的作用。方法雄性C57BL/6J小鼠，通过高脂饲料喂养结合腹腔注射链脲佐菌素，建立T2DM模型；将已形成高血糖的小鼠继续用高脂饲料喂养9周或同时用5-HT_2A受体(5-HT 2A receptor，5-HT_2AR)拮抗剂盐酸沙格雷酯(sarpogrelate hydrochloride，SH)及5-HT合成抑制剂卡比多巴(carbidopa，CDP)分别或联合给药进行治疗。细胞实验用人肝星状细胞(hepatic stellate cells，HSCs)株LX-2，高浓度葡萄糖刺激或同时用SH、CDP或单胺氧化酶A(monoamine oxidase A，MAO-A)抑制剂氯吉兰(clorgyline，CGL)处理细胞，观察高糖诱导LX-2细胞肌成纤维细胞化时5-HT的作用。用苏木精-伊红(hematoxylin & eosin，HE)及马松(Masson)染色法检测肝组织切片病理变化，免疫组织化学及Western blot分析蛋白表达，ELISA或酶试剂法检测生化指标，荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)含量。结果T2DM小鼠肝脏的5-HT_2AR、5-HT合成酶和MAO-A表达上调，且5-HT含量升高。SH和CDP治疗在降低肝脏5-HT含量及下调MAO-A表达的同时，可有效地改善肝脏病变：不仅改善肝功能及肝脂肪变性，还明显抑制肝脏ROS(H₂O₂)含量升高，改善氧化应激，并抑制转化生长因子β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)的产生，以及炎症和纤维化的发生，且SH和CDP的作用呈协同效应。LX-2细胞研究表明，高糖可上调5-HT_2AR、5-HT合成酶和MAO-A表达，升高细胞内5-HT含量，使细胞的ROS产生增多及肌成纤维细胞化，从而增加TGF-β1合成及炎症和纤维化因子的产生。通过SH拮抗5-HT_2AR，高糖作用被明显抑制；通过CGL抑制线粒体5-HT降解，高糖作用被强烈抑制。SH还可抑制高糖诱导的5-HT合成酶及MAO-A表达上调。结论高糖诱导HSCs肌成纤维细胞化和TGF-β1产生，从而导致T2DM小鼠肝脏炎症及纤维化损伤，其病理机制可能是诱导了5-HT_2AR表达上调，5-HT合成及降解增加，使线粒体的ROS产生增多，其中，5-HT_2AR的作用是参与了对5-HT合成酶和MAO-A表达的调控。     

乙型肝炎病毒在不同丙氨酸氨基转移酶状态下对Th17、Treg细胞及其比率的影响

目的探讨不同载量的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)在不同丙氨酸氨基转移酶(alanine aminetransferase, ALT) 状态下对慢性乙型肝炎患者辅助性T淋巴细胞17 (helper T lymphocytes 17, Th17)、调节性T淋巴细胞(regulatory T lymphocyte, Treg)及其比率的影响。方法分析兰州大学第一医院确诊为慢性乙型肝炎的患者336例，采用化学发光免疫分析仪检测乙肝抗原抗体，采用生化分析仪检测肝功能，采用荧光定量PCR分析仪检测被测者的病毒载量，采用流式细胞分析仪检测Th17、Treg细胞及其比率，其中ALT正常的乙肝患者111例(ALT < 40 U/L)，ALT≥正常上限且 < 2倍增高的慢性乙肝患者108例(40 U/L≤ALT < 80 U/L)，ALT≥正常上限2倍增高的慢性乙肝患者117例(ALT≥80 U/L)，并且按病毒载量分为低复制组(HBV DNA < 4.0 lg copies/mL)，中复制组(4.0 lg copies/mL≤HBV DNA < 6.0 lg copies/mL)，高复制组(HBV DNA≥6.0 lg copies/mL)。采用Dunnett T3方差分析在不同ALT状态下，不同载量的乙型肝炎病毒对慢性乙型肝炎患者Th17、Treg细胞及其比率的影响。对ALT≥正常上限2倍增高的乙型肝炎患者进行抗病毒治疗24周，观察治疗前后病毒学及Th17、Treg细胞及其比率的变化。结果在ALT正常组及ALT≥正常上限且 < 2倍增高的慢性乙肝组中不同载量的乙型肝炎病毒对Th17、Treg细胞及其比率的影响差异无统计学意义，而在ALT≥正常上限2倍增高的慢性乙肝患者组中，随着病毒载量的增加，Th17(低复制组3.18%±0.79%、中复制组3.78%±0.92%、高复制组4.57%±1.15%)、Treg细胞(低复制组5.52%±1.58%、中复制组5.89%±1.84%、高复制组6.37%±2.35%) 及其比率Th17/Treg (低复制组0.57±0.25、中复制组0.65±0.29、高复制组0.73±0.36) 均明显增高(P < 0.05)。恩替卡韦治疗24周后，患者HBV DNA明显下降，Th17(3.89%±1.02% vs. 2.06%±0.46%)、Treg细胞(6.02%±2.03% vs. 5.06%±1.25%)及其比率(0.65±0.28 vs. 0.41±0.14)均明显下降(P < 0.05)。结论在不同ALT状态下HBV对Th17、Treg细胞及其比率的影响不同，可以从免疫学的角度阐明HBV对机体的影响，进一步理解以ALT分组抗病毒治疗的意义，从而有助于临床治疗。     

低氧环境可体外促进人诱导多能干细胞分化为拟胚体

目的探讨人诱导多能干细胞向拟胚体分化过程中，生理性低氧环境在拟胚体悬浮和贴壁阶段的影响及其相关机制。方法本研究中拟胚体悬浮阶段分为悬浮常氧组（21% O₂）和悬浮低氧组（5% O₂），贴壁阶段分为贴壁常氧组（21% O₂）、贴壁低氧组（5% O₂）、贴壁低氧组+HIF-1α抑制剂Echinomycin。首先采用免疫荧光法鉴定人诱导多能干细胞的多能性，人诱导多能干细胞消化后分别在21%氧气和5%氧气条件下悬浮培养5 d，利用显微镜观察悬浮阶段拟胚体的形成和形态变化，5 d后检测拟胚体中三胚层标记基因的表达情况。接着分别取等量的拟胚体接种到明胶包被的培养皿，继续在21%和5%氧气条件下培养2 d，观察贴壁阶段拟胚体的粘附性能和粘附后向外周扩增速度的差异，检测低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达情况，随后在5%氧气条件下使用HIF-1α特异性抑制剂Echinomycin后，再次检测低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达情况。结果常氧组和低氧组的拟胚体均具有三胚层分化的潜力。与常氧培养组相比，低氧组悬浮拟胚体周围的凋亡碎片明显减少，且较早出现囊性拟胚体，获得的拟胚体大小更加均匀一致。此外，低氧组的拟胚体贴壁数量明显高于常氧组（P < 0.05），拟胚体贴壁后向外生长的速度明显快于常氧组（P < 0.05）。低氧组HIF-1α的mRNA未显著上调（P>0.05），而β-catenin和VEGFA的mRNA显著上调（P < 0.05）；在蛋白质水平，低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的表达均上调（P < 0.05）。低氧组使用HIF-1α特异性抑制剂Echinomycin后，低氧信号通路相关的HIF-1α、β-catenin和VEGFA的蛋白质表达均下调（P < 0.05）。结论低氧条件不影响拟胚体的三胚层分化潜力。生理性低氧可以促进悬浮拟胚体的形成和成熟，并且能增强拟胚体的贴壁和贴壁后增殖性能，初步证实通过激活HIF-1α/β-catenin/VEGFA信号通路，提升人诱导多能干细胞的分化能力。     

CT影像组学鉴别儿童腹膜后神经母细胞瘤和节细胞神经母细胞瘤的价值

目的基于平扫和增强CT的影像组学分析在鉴别儿童腹膜后神经母细胞瘤（NB）和节细胞性神经母细胞瘤（GNB）中的价值。方法纳入172例NB和48例GNB患儿，按7∶3的比例分层随机抽样划分为训练集和测试集。分别从平扫期、动脉期和静脉期CT图像中提取并筛选影像组学特征，基于最优特征子集采用多变量回归模型建立各期以及三期复合的影像组学模型，绘制模型ROC曲线，计算并比较各期模型的AUC、准确度、灵敏度及特异性等评价指标。结果从平扫期、动脉期和静脉期CT图像中分别提取了1218个影像组学特征，最终筛选出平扫期模型4个特征、动脉期模型3个特征、静脉期模型2个特征以及三期复合模型5个特征。平扫期模型在训练集中的AUC为0.840（95%CI: 0.778~0.902），测试集中AUC为0.804（95%CI: 0.699~ 0.899）。动脉期模型在训练集中的AUC为0.819（95%CI: 0.759~0.877），测试集中AUC为0.815（95%CI: 0.697~0.915）。静脉期模型在训练集中的AUC为0.730（95%CI: 0.649~0.803），测试集中AUC为0.751（95%CI: 0.619~0.869）。三期复合模型在训练集中的AUC为0.861（95%CI: 0.809~0.910），测试集中AUC为0.827（95%CI: 0.726~0.915）。结论基于平扫和增强CT的影像组学特征有助于区分儿童腹膜后NB和GNB，纹理特征相对于一阶直方图特征能更好的反映病灶的差异。平扫期、动脉期和静脉期影像组学模型均可较好鉴别儿童腹膜后NB和GNB。三期复合模型与平扫期、动脉期模型效能相似，但优于静脉期模型。     

LINC01285促进结直肠癌细胞的增殖和转移

目的探究长链非编码RNA LINC01285在结直肠癌（CRC）中的表达特点及临床意义，阐明潜在的生物学功能及调控机制。方法基于Starbase生物数据库检索LINC01285在CRC及癌旁组织中的表达量；收集本单位结直肠癌患者的CRC样本及周围正常样本各70例，分组为肿瘤组与非肿瘤组；利用荧光定量PCR实验（RT-qPCR）验证本中心CRC队列、肿瘤细胞中LINC01285的表达量，并分析其与患者临床病理参数及无瘤生存时间的关系。采用脂质体转染技术构建LINC01285低表达细胞株并分为si-Control（对照组）、si-LINC01285-1（敲低组1）、si-LINC01285-2（敲低组2）3个组，采用CCK-8实验、流式细胞学、Transwell法及蛋白印迹法检测LINC01285对结直肠癌细胞的增殖、凋亡及转移能力的影响及潜在的调控机制。结果Starbasev3.0公共数据库获取TCGA-COAD转录组测序数据发现LINC01285在癌组织中的表达量明显高于正常组织（P=0.00016）；RT-qPCR结果显示：与非肿瘤组相比，LINC01285在肿瘤组表达水平显著上调（P=0.0002），其表达量与肿瘤组织学分化程度（P=0.036）、T分期（P=0.000）、淋巴结转移（P=0.001）、TNM分期（P=0.000）、Duke分期（P=0.009）和无瘤生存时间（P=0.0102）密切相关。相比于正常结直肠粘膜细胞，CRC细胞（尤其在SW620和HT-29）内LINC01285的表达水显著高表达（P < 0.001）。相比于si-Control组，脂质体转染的细胞（si-LINC01285-1、si-LINC01285-2）内LINC01285表达量显著下降（P < 0.001）。同时相比于si-Control组，LINC01285敲低CRC细胞组的增殖能力明显降低（P < 0.001）、早期凋亡、晚期凋亡及总凋亡率明显升高（P < 0.05）。相比于si-Control组，LINC01285敲低组的CRC细胞迁移和侵袭能力显著下降（P < 0.001），且上皮- 间质转化相关通路的E-钙粘蛋白表达量显著升高（P < 0.001、N-钙粘蛋白显著下调（P < 0.001）。结论LINC01285的表达与CRC的预后高度相关，可调节上皮-间质转化通路影响CRC细胞的增殖、凋亡与转移能力。     

过表达CLEC5A基因抑制肝细胞癌增殖和转移并逆转上皮-间质转化

目的研究C型凝集素结构域家族5成员A（CLEC5A）对肝细胞癌（HCC）增殖、迁移和侵袭能力以及上皮-间质转化（EMT）特性的影响，探索CLEC5A在HCC发生发展过程中的作用及机制。方法采用免疫组化实验检测CLEC5A在50例HCC组织和癌旁组织中的表达特点，并分析其与HCC肝癌临床病理参数的相关性；通过慢病毒转染构建CLEC5A过表达HCC细胞，分别采用细胞增殖实验（CCK-8法、EdU法）、细胞迁移和侵袭实验（Transwell法）和Western blot实验检测CLEC5A对HCC细胞增殖、迁移及侵袭能力以及EMT标志物表达水平的影响。结果CLEC5A蛋白在HCC癌组织中的表达低于癌旁组织，其表达水平与患者的肿瘤大小（P=0.008）、肿瘤数量（P=0.010）、肿瘤分化程度（P=0.016）、BCLC分期（P=0.040）和微血管侵犯（P=0.024）等相关；过表达CLEC5A能够抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力，并逆转HCC细胞的EMT特性。结论CLEC5A是HCC潜在的抑癌基因，有望成为该疾病新的治疗靶点。     

基于深度学习并行网络模型的心律失常分类方法

目的提出一种并行神经网络分类方法，以提高对正常搏动、室上性异位搏动、心室异位搏动、融合搏动4种心律失常的分类性能。方法首先进行心电信号去噪、小尺度心拍和大尺度心拍的分割、数据增强等预处理；然后基于深度学习理论，应用密集连接卷积神经网络改善人工提取波形特征的局限性，并结合双向长短时记忆网络和高效通道注意力网络，以增强提取波形时序特征和重要特征的功能；接着采用并行网络结构，同时输入小尺度心拍和大尺度心拍的的波形特征，以提高心律失常分类的准确性；最后使用Softmax函数实现对心律失常的4分类任务。结果利用MIT-BIH心律失常数据库和3组实验验证所提方法。多种并行网络模型分类性能对比实验和不同心拍输入方式下，各分类模型性能对比实验得出所提分类模型的总体准确率、平均灵敏度和平均特异性分别达到99.36%、96.08%、99.41%；并行网络分类模型收敛性能分析实验得出分类模型每次训练时间为41 s。结论并行多网络分类方法在保持较高总体准确率的同时，平均灵敏度、平均特异性以及训练时间均有改善，该方法有望为心律失常临床诊断提供新的技术方案。     

近视小鼠巩膜成纤维细胞的基因表达谱：基于单细胞RNA测序的生物信息学分析

目的利用单细胞RNA测序(RNA-seq)技术探索巩膜成纤维细胞在近视形成前后基因表达的变化探索巩膜成纤维细胞在近视中的作用机制。方法将正常健康的C57BL/6J小鼠按随机数字法平均分为近视模型组与阴性对照组，6只/组。阴性对照组双眼前节无遮盖、近视模型组使用半透明眼罩行右眼形觉剥夺，实验开始及结束时均测眼轴，并单细胞捕获右眼巩膜成纤维细胞进行RNA-seq，筛选差异表达基因，使用GO功能分析和京都基因和基因组百科全书（KEGG）途径进行功能显著性富集分析。结果近视模型组与阴性对照组比较，筛选出差异基因169个（P>0.05），112个上调基因和57个下调基因，分子功能中71个GO项（P < 0.05）。GO功能分析显示差异基因中有：白细胞聚集、分化以及细胞黏附等与炎症相关GO项；ATP代谢与结合，氧化还原过程、氧化应激反应、氧化磷酸化等与缺氧相关的GO项；蛋白质折叠、蛋白质转运以及蛋白质代谢过程的负调控、内质网、内质网腔、内质网应激等与蛋白质及内质网应激相关GO的生物学过程。KEGG分析显示差异基因显著的富集信号通路主要为与缺氧相关的三羧酸循环、氧化磷酸化、过氧化物酶体增殖物激活受体信号通路、氧化磷酸化等通路，与炎症相关的丝裂原活化蛋白激酶信号通路、白细胞跨内皮转运等，以及与蛋白质相关的帕金森氏病、亨廷顿病、蛋白质消化吸收等通路。结论巩膜成纤维细胞在近视形成过程中出现功能障碍，与炎症、缺氧、蛋白质调节及内质网应激的相关基因表达和通路的调节有一定关系。     

适用于单细胞RNA测序的半月板细胞提取方法的优化

目的优化半月板细胞提取的方法，缩短细胞提取时间，稳定地获取细胞数量多和细胞活率高的细胞悬液，使获得的细胞悬液悬液适用于单细胞RNA测序。方法比较细胞悬液的细胞数量及细胞活率评价不同细胞提取方法的有效性，细胞提取方法包括传统半月板细胞提取法（短时间消化和长时间消化）和优化提取法；通过分析单细胞RNA测序数据集评价优化提取法获取的细胞悬液的稳定性；通过比较优化提取法获得的单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集，分析优化提取法的可靠性。结果在3次重复实验中，优化提取法获得细胞数量最多的细胞悬液，细胞数量超过10⁵，且细胞活率最高，平均达80%。通过分析单细胞RNA测序数据发现每个样本中80%以上细胞的线粒体基因含量少于20%。CD34⁺，MCAM+细胞以及COL1A1⁺胞均存在每个单细胞RNA测序数据集中。在比较基于优化提取法单细胞RNA测序数据集与公开的半月板单细胞RNA测序数据集时发现，优化提取法也能捕获COL3A1⁺细胞，COL1A1⁺细胞，MYLK⁺细胞，BMP2⁺细胞，CD93⁺细胞和CDK1⁺细胞。结论优化细胞提取方法能稳定地获得适用于10×Genomics平台的单细胞RNA测序技术的单细胞悬液。     

CBL通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭

目的阐明Casitas B系淋巴瘤（CBL）蛋白对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响并探讨其作用机制。方法乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MCF7常规培养，实验分为NC组、过表达CBL组和siNC组、siCBL组，采用克隆形成法和细胞计数试剂盒-8（CCK-8）、伤口愈合实验、Transwell实验检测过表达（沉默）CBL对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响；流式细胞术和Western blot验证CBL对乳腺癌细胞周期进程、细胞周期标志物和上皮-间充质转化（EMT）的影响；罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架观察CBL对细胞丝状伪足数量的影响。采用IP-质谱法筛选CBL的相互作用蛋白并确定NCK2为研究对象。实验分为CBL组、NCK2组、CBL+NCK2组，通过免疫共沉淀（IP）和免疫荧光共定位实验验证CBL与NCK2蛋白互作情况。通过环己酰亚胺追踪实验和泛素化实验检测CBL对NCK2蛋白稳定性和泛素化的影响。采用CCK-8和Transwell实验检测NCK2对CBL介导的乳腺癌细胞增殖及迁移能力的影响。结果过表达CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著降低（P < 0.05）；沉默CBL组的细胞增殖、迁移、侵袭能力显著增加（P < 0.01）。沉默CBL促进MCF7细胞周期G1/S转换（P < 0.05）。过表达CBL下调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4（P < 0.01）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P < 0.05）、EMT相关蛋白Snail、N-Cadherin、Claudin-1（P < 0.05），同时上调E-Cadherin（P < 0.05）；沉默CBL上调乳腺癌细胞周期相关蛋白CDK2/4/6（P < 0.05）、Cyclin A2/B1/D1/D3/E2（P < 0.05），EMT相关蛋白Snail、Vimentin、Claudin-1（P < 0.05），同时下调E-Cadherin（P < 0.05）。过表达CBL使乳腺癌细胞系MDA-MB-231中丝状伪足数量减少；沉默CBL使乳腺癌细胞系MCF7中丝状伪足数量增加。NCK2与CBL相互作用。过表达CBL抑制NCK2蛋白稳定性（P < 0.05），并促进其泛素降解（P < 0.01）。过表达NCK2能够逆转CBL介导的乳腺癌细胞增殖和迁移的抑制作用（P < 0.01）。结论CBL可通过泛素化降解NCK2抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

非小细胞肺癌细胞外泌体源性FZD10促进体外血管生成

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）细胞外泌体源性FZD10在血管生成中的作用及其机制。方法采用超速离心法分离外泌体，并利用Western blot和RT-qPCR技术分析NSCLC细胞（95D和H1299）、正常人支气管上皮细胞（BEAS-2B）及其外泌体中FZD10的表达；通过转染FZD10-siRNA敲低FZD10表达，用FZD10未敲低和敲低的NSCLC细胞外泌体分别处理HUVEC细胞，利用体外血管生成实验观察其成管能力，采用ELISA和RT-qPCR技术分析血管生成相关因子VEGFA和Ang-1的表达；进一步利用Western blot分析外泌体源性FZD10对信号通路PI3K、Erk1/2和YAP/TAZ激活的影响。结果同BEAS-2B细胞及其外泌体相比较，FZD10在95D和H1299细胞及其外泌体中高表达（P < 0.01）；95D和H1299细胞来源的外泌体可促进HUVEC的微管形成及VEGFA、Ang-1的蛋白分泌、mRNA的表达（P < 0.01），但在95D和H1299细胞敲低FZD10后这些效果受到抑制。FZD10的敲低可抑制PI3K、Erk1/2信号通路的激活，但对YAP/TAZ信号通路的影响不显著。结论NSCLC细胞外泌体源性FZD10可促进体外血管生成，其机制可能与PI3K、Erk1/2信号通路的激活有关。     

羟尼酮可阻止大鼠肝星状细胞活化：基于抑制TGF-β1通路蛋白的磷酸化

目的探讨羟尼酮对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用及相关机制。方法66只雄性SD大鼠按随机数字法分为对照组10只、模型组20只、羟尼酮（100 mg/kg）组12只、羟尼酮（250 mg/kg）组12只、吡非尼酮（250 mg/kg）组12只，采用CCl₄皮下注射进行肝纤维化造模，羟尼酮、吡非尼酮予以灌胃给药，处死大鼠后，留取血清检测肝功能，利用肝脏组织检测羟脯氨酸的含量，肝组织进行HE染色和Sirius Red染色，对炎症和纤维化程度进行评分。将人肝星状细胞系LX-2分组：对照组、TGF-β1组、羟尼酮组、吡非尼酮组，经过TGF-β1刺激和羟尼酮、吡非尼酮处理后，Western blot分别检测α-SMA、I型胶原蛋白和磷酸化Smad3、磷酸化p38、磷酸化Erk1/2、磷酸化Akt等磷酸化蛋白。结果动物实验显示羟尼酮组大鼠肝功能值有改善，肝组织羟脯氨酸含量明显减少，肝组织纤维化程度显著降低，且均具有统计学意义（P < 0.05）。细胞实验发现随羟尼酮浓度的增高，ɑ-SMA和I型collagen蛋白表达水平降低；TGF-β1刺激细胞后，TGF-β信号转导通路中Smad3、P38、ERK、Akt等蛋白的磷酸化水平随着作用时间的延长而增加，但在相同作用时间下，羟尼酮组细胞TGF-β信号转导通路蛋白磷酸化的表达水平低于TGF-β1组细胞（P < 0.05）。结论羟尼酮可抑制TGF-β信号转导通路蛋白的磷酸化，从而阻止TGF-β1介导的肝星状细胞活化，可能是其缓解CCl₄诱导的大鼠肝纤维化机制之一。     

不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层多孔支架的影响

目的探讨不同交联剂处理对脱细胞小肠黏膜下层(decellularized small intestinal submucosa, SIS)多孔支架理化性能及生物相容性的影响。方法(1) 将新鲜SIS塑形为三维多孔支架并采用戊二醛(glutaraldehyde, GA)、碳二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide, EDC]和原花青素(procyanidine, PA)3种交联剂进行交联, 获得3组交联后支架, 分别为GA组、EDC组和PA组。(2)理化性能评价: 对3组多孔支架进行宏观形貌观察, 使用场发射环境扫描电镜进行微观形貌观察并测定孔径及孔隙率, 使用茚三酮法测定交联度, 使用酶促降解法评价抗降解性能, 使用万能力学测试机测定应力应变曲线及压缩强度。(3)生物相容性评价: 使用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8, CCK-8)法检测交联处理对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells, hBMSCs)增殖的影响, 使用Calcein-AM/PI活死细胞染色法评价交联处理后支架的细胞毒性。结果宏观形貌观察可见交联修饰未破坏支架三维结构; 微观形貌观察可见各组多孔支架具有大小均匀、相互连通的孔隙结构。EDC组孔径最大, 与另两组差异具有统计学意义(P < 0.05);PA组孔隙率最低, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。PA组交联度最高而溶胀率最低, EDC组溶胀率最高。EDC组和GA组的体外降解速率均高于PA组, 其中GA组降解速度最快, PA组抗降解能力最佳, 降解至第15天时3组质量丧失率间的差异有统计学意义(P < 0.05)。EDC组和GA组压缩强度近似, PA组压缩强度最高, 与另两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。GA组支架的细胞毒性最大, hBMSCs在EDC组和PA组支架上具有更好的增殖能力, 在GA组增殖较慢。结论3种交联剂处理均可达到较高的交联度, 经EDC和PA交联处理的SIS多孔支架在拥有较好理化性能的同时具有良好的生物相容性, 相比于GA是更有应用前景的交联处理方法。     

新风胶囊含药血清抑制脂多糖诱导的类风湿关节炎大鼠的滑膜成纤维细胞焦亡

目的观察新风胶囊（XFC）含药血清对脂多糖（LPS）诱导的类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）焦亡的影响及其机制。方法将20只SD大鼠利用随机数字表法分为2组：空白组和XFC组，XFC组予0.324 mg/g灌胃7 d后制备含药血清。CCK-8法检测XFC含药血清作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间。将RA-FLS分为空白组（RA-FLS）、模型组（RA-FLS+5 μg/mL LPS）、MCC950组（RA-FLS+LPS+MCC950）、XFC组（RA-FLS+LPS+XFC含药血清）。CCK-8法检测细胞活性，电镜观察RAFLS焦亡形态，ELISA检测IL-1β、IL-18浓度，Western blotting和qRT-PCR检测NLRP3、caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA的表达。结果XFC作用于RA-FLS最佳干预浓度和时间分别为20%和24 h。与空白组相比，模型组细胞活性显著上升（P<0.05），电镜下可见RA-FLS内形成大量小泡，膜上形成孔隙，胞膜破裂，细胞内容物流出，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1 mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）；与模型组相比，XFC含药血清组、MCC950组细胞活性显著下降（P<0.01），细胞焦亡情况改善，IL-1β、IL-18浓度和NLRP3、GSDMD、caspase-1蛋白及mRNA表达明显降低（P<0.05、P<0.01）。结论XFC可能通过NLRP3/GSDMD通路抑制FLS细胞焦亡，下调炎症细胞因子的分泌，减轻关节局部炎症反应而发挥治疗作用。