功劳木组分F_6逆转白血病MDR的作用和机制

目的:背景与目的从中药功劳木中提取、分离出来的异喹啉类生物碱组分(Fraction 6,F6),具有抗病毒、抗炎、降血压等生理活性。近年有文献报道异喹啉类生物碱具有一定的逆转肿瘤细胞耐药的作用。本文以白血病多药耐药细胞(K562/ADM)为对象来研究F6逆转肿瘤多药耐药性(Mu ltidrug resistance,MDR)的效果及作用机制,以寻找具有多药耐药逆转活性的新型中药。方法:采用MTT法检测F6及阿霉素(Adriamyc in,ADM)对K562/S和K562/ADM细胞增殖的抑制作用;RT-PCR法检测F6对耐药肿瘤细胞MDR1基因mRNA表达的影响;流式细胞仪分析细胞内罗丹明123(Rhodam ine123,Rh123)浓度,以检测F6对肿瘤细胞膜P糖蛋白(P-glycoprote in,P-gp)泵功能的影响;免疫组化方法检测F6对肿瘤细胞膜P-gp表达水平的影响;流式细胞仪检测F6对肿瘤细胞凋亡的作用。结果:10 mg/L为F6的无毒剂量;ADM对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.68±0.08)mg/L和(80.25±1.06)mg/L;无毒剂量F6与ADM联合应用后对K562/S和K562/ADM细胞的IC50分别为(1.09±0.07)mg/L和(16.68±0.72)mg/L,此剂量F6使K562/ADM细胞的IC50下降4.81倍;无毒剂量的F6应用前后,K562/ADM细胞MDR1基因表达水平和细胞膜P-gp表达水平无明显差异;Rh123蓄积试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的29.21%升高到85.35%,Rh123外排试验中无毒剂量的F6应用后使K562/ADM细胞内Rh123浓度由F6应用前的27.19%升高到59.22%;凋亡检测结果显示无毒剂量的F6使K562/ADM细胞凋亡率升高3.82倍。结论:F6能有效逆转白血病细胞的MDR;F6逆转白血病MDR的机制为通过抑制肿瘤细胞膜上P-gp的药泵功能,增加耐药细胞内化疗药物浓度逆转耐药性,而不是抑制MDR1基因和P-gp表达。     

三氧化二砷逆转甲磺酸伊马替尼对K562/MDR1耐药的实验研究

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对蛋白酪氨酸激酶抑制剂甲磺酸伊马替尼(imatinib mesy-late,IM)K562/MDR1耐药的逆转作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法分别检测IM对K562和K562/MDR1细胞的药敏性,计算半数抑制浓度(IC50)及IM对K562/MDR1的耐药倍数;检测ATO对K562/MDR1细胞的药敏性,计算IC50;将非细胞毒作用浓度的ATO与IM联合应用于K562/MDR1,计算此时IM的IC50以及ATO应用后的逆转倍数。应用流式细胞术比较IM单用以及与非细胞毒作用浓度的ATO联合应用后,对K562/MDR1凋亡率的影响,分析ATO对IM敏感性的影响。结果IM存在对K562/MDR1耐药的现象,与亲本K562细胞比较,其耐药倍数为2.51,采用非细胞毒作用的ATO对IM的逆转倍数为1.86,并可提高IM对K562/MDR1的凋亡率。结论IM存在对K562/MDR1的耐药现象,ATO可有效逆转IM耐药,并可增强IM对K562/MDR1细胞的诱导凋亡作用。     

人参皂苷Rg1联合阿霉素对K562/ADR细胞增殖及耐药的影响

目的 探究人参皂苷Rg1对人慢性髓细胞白血病耐阿霉素(adriamycin, ADR)细胞K562/ADR增殖的影响及其对K562/ADR细胞的耐药逆转作用。方法 CCK-8法检测不同浓度的人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞增殖的影响;CCK-8法检测人参皂苷Rg1与ADR联用对K562/ADR细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC₅₀)和逆转倍数;集落形成实验检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞集落形成能力的影响;流式细胞术检测人参皂苷Rg1联合ADR对K562/ADR细胞周期的影响。结果 与对照组相比,各浓度和作用时间的人参皂苷Rg1均可抑制K562/ADR细胞增殖(P<0.001),当人参皂苷Rg1浓度为120μg/mL,作用时间为48 h时,细胞增殖抑制率最高(P<0.05);与单用ADR相比,人参皂苷Rg1联合ADR作用48 h后,K562/ADR细胞IC₅₀值明显下降(P<0.05),人参皂苷Rg1对K562/ADR细胞的耐药逆转倍数为2.34;与对照组和ADR或人参皂苷Rg1单药作用相比,人参皂...     

CIK细胞体外逆转多药耐药性的研究

目的:研究CIK细胞体外逆转多药耐药(multidrug resistance,MDR)可行性。方法:用人外周血分离出的单个核细胞,在不同细胞因子诱导下培养成细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK)及树突状细胞(DC),然后将其与成熟DC进行共培养,作为效应细胞,以K562敏感株与耐药细胞株为靶细胞进行体外逆转研究。流式细胞术检测靶细胞的P-gp表达及细胞内的ADR相对含量,MTT法测定其细胞毒作用,RT-PCR检测mdr-1基因耐药性逆转表达状况。结果:K562/ADR耐药细胞株ADR含量经效应细胞细胞作用后,细胞内的ADR含量分别提高了13.80%、39.50%,(P<0.01);,P-gp分别降低12.00%、42.69%,(P<0.01),mdr-1基因表达呈下调趋势,效应细胞对靶细胞的细胞毒作用分别达45.8%、78.9%,(P<0.01)。结论:CIK+K562/ADR-DC对P-gp高表达K562/ADR耐药细胞株具有特异性的细胞毒作用,有效提高了细胞内的ADR含量,下调了P-gp、mdr-1表达,使免疫效应细胞体外逆转多药耐药的效果得以显现。     

新型多胺缀合物NMMB逆转K562/ADM细胞多药耐药及其机制

目的：研究新型多胺缀合物NMMB对白血病细胞株K562/ADM的多药耐药（MDR）逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法：分别以不同浓度的NMMB(10～1 000 mg/L)作用于体外培养的K562和K562/ADM细胞24 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定NMMB的非毒性剂量;采用非毒性剂量,NMMB 0、 2.5 、5.0 和10.0 mg/L组,分别与不同浓度ADM（0.25～100.00 mg/L）联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度,即IC50,计算逆转倍数;利用流式细胞术检测NMMB联合ADM作用后K562/ADM 细胞内ADM蓄积程度和细胞周期变化。结果：随着NMMB浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;NMMB的最大无毒剂量为12.5 mg/L,逆转倍数为4倍;NMMB可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.05）;K562/ADM细胞被阻滞在G0/G1期,与未加NMMB对照组比较差异有显著性（P<0.01）。结论：NMMB对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和多药耐药逆转作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积和将K562/ADM细胞阻滞在G0/G1期而实现的。     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562/A02 细胞的多药耐药

目的:探讨环孢菌素A(CsA)、汉防己甲素(Tet)及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562/A02多药耐药的逆转作用。方法:采用MTT法测定柔红霉素(DNR)对细胞的半数抑制量(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果:DNR对K562细胞和K562/A02细胞IC50分别为0.27和21.22 mg.L-1;CsA(1 mg.L-1)及Tet(0.1 mg.L-1)单独和联合处理K562/A02后,DNR的IC50分别为7.83、5.32和2.32 mg.L-1;CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响;K562/A02细胞48 h凋亡率为2.19%,DNR(1 mg.L-1)作用K562/A02细胞凋亡率为2.70%,CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10.27%、17.64%和52.79%;两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论:CsA及Tet均可逆转耐药,且联合作用逆转效果更强。     

环孢素A联合苯基棕榈酰胺吗啡丙醇对K562/AO2细胞GCS基因表达的影响及对逆转多药耐药

目的 研究环孢素A(CsA)和苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)联合应用对人白血病多药耐药细胞株K562/AO2的葡萄糖神经酰胺合酶(GCS)基因表达的影响及对白血病多药耐药的逆转作用,探索逆转白血病细胞耐药的策略.方法 应用Alamar BlueTM多功能细胞染色法测定阿霉素(ADR)对K562和K562/AO2细胞的半数抑制浓度(IC50)及判断CSA的非细胞毒性剂量;采用RT-PCR法检测GCS基因和mdr1基因的mRNA表达.结果 CsA浓度低于4.5μg/ml对K562/AO2细胞无细胞毒性.ADR对K562和K562/AO2细胞的IC50分别为(0.84±0.04)μg/ml和(89.24±1.27)μg/ml;当1μg/ml CsA和25μmol/L PPMP单用或联合作用于K562/AO2细胞时,ADR的IC50分别为(7.81±0.74)、(17.49±0.53)、(2.82±0.07)μg/ml;而低浓度CsA(0.01μg/ml)和PPMP(10 μmol/1)联合作用时IC50为(16.08±1.25)μg/ml.CsA联合PPMP可明显降低GCS基因的mRNA表达,低浓度CsA和PPMP联用也有此作用.结论 CsA联合PPMP可通过抑制K562/AO2细胞的GCS基因mRNA表达有效逆转其耐药,低浓度CsA联合PPMP在逆转其耐药的同时降低了细胞毒性.     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究

目的:探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的作用.方法:以不同浓度的冬凌草甲素处理K562/A02及敏感株K562/S细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测半数抑制率(IC50),分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内DNR浓度的影响.结果:冬凌草甲素可诱导两种细胞凋亡,两者在各浓度、各时点无显著差异;可显著逆转K562/A02细胞对DNR、HHT的耐药性,提高该细胞内DNR的浓度.结论:冬凌草甲素对K562/A02细胞有诱导凋亡、逆转耐药性的作用,是一种很有希望的抗白血病中药.     

蝙蝠葛酚性碱诱导多药耐药细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的研究

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids from Menispermum dauricum,PAMD)诱导多药耐药(multidrug resistance,MDR)细胞系K562/MDR1凋亡及逆转耐药性的作用.方法:四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562/S及K562/MDR1细胞对不同浓度PAMD的敏感性,并计算半数抑制浓度(IC50).膜联蛋白V (Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)+碘化丙啶(PI)双参数检测细胞凋亡百分率变化,分析在PAMD的作用下,两种细胞对伊马替尼(IM,STI571)敏感性的变化.结果:PAMD可诱导两种细胞凋亡,其低剂量72 h时对K562/S和K562/MDR1细胞的凋亡率分别为(10.92±1.03)%和(8.12±0.98)%,并可提高伊马替尼对K562/MDR1的凋亡率.PAMD可显著逆转K562/MDR1细胞对伊马替尼的耐药性,其逆转倍数为2.22.结论:PAMD对K562/S和K562/MDR1细胞具有诱导凋亡作用,同时具有逆转白血病细胞株K562/MDR1多药耐药性、回归靶位的作用.     

黄芩苷对白血病细胞耐药株逆转耐药效果及机制研究

目的:观察黄芩苷对白血病耐药株细胞的耐药逆转作用,并初步探讨其可能的机制。方法:MTT法检测阿霉素及黄芩苷对白血病亲本细胞及耐药株细胞的抑制率,通过计算阿霉素对耐药株细胞及亲本细胞的半数抑制浓度(IC50)评价耐药倍数,通过阿霉素与黄芩苷联用的IC50评价黄芩苷的逆转作用,流式细胞计数法检测黄芩苷作用后对耐药细胞内阿霉素药物蓄积的影响,RT-PCR检测黄芩苷对耐药细胞中多药耐药相关基因MDR1、MRP1以及LRP1表达的影响。结果:耐药细胞株的耐药倍数为17.384倍,黄芩苷10μg/ml和20μg/ml对白血病耐药株的逆转倍数分别为4.230和7.812,相对逆转率分别为0.81和0.93,黄芩苷作用后耐药株细胞内阿霉素蓄积明显增加,MDR1基因表达显著下降。结论:黄芩苷对白血病耐药细胞株具有显著的逆转作用,其机制可能与下调了细胞内的MDR1基因表达进而抑制P糖蛋白对阿霉素的泵出有关。     

冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562／A02凋亡,逆转耐药性？…

目的：探讨冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系Ｋ５６２／Ａ０２凋亡、逆转耐药性的作用。方法：以不同浓度的冬凌草甲素处理Ｋ５６２／Ａ０２及敏感株Ｋ５６２／Ｓ细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）比色法检测半数抑制率（ＩＣ５０）,分析冬凌草甲素对两种细胞柔红霉素（ＤＮＲ）、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）敏感性的影响,流式细胞仪检测冬凌草甲素对两种细胞内ＤＮＲ浓度的影响。结果：冬凌草甲素可诱导两种细胞     

冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

参芪扶正注射液对K562/ADM多药耐药的影响

目的研究参芪扶正注射液对K562耐药细胞株（K562／ADM）多药耐药的影响。方法采用MTT法检测参芪扶正注射液的细胞毒性；采用PI单染色流式细胞术检测ADM加以及不加参芪扶正注射液处理K562／ADM后的细胞凋亡率；采用直接免疫荧光法流式细胞术检测参芪扶正注射液处理K562／ADM细胞的Bcl-2基因表达水平。结果（1）参芪扶正注射液在10μL／mL时对K562／ADM增殖无抑制作用；（2）参芪扶正注射液明显增加ADM对K562／ADM的毒性作用（P〈0.05），参芪扶正注射液在10μL／mL时耐药逆转倍数为1．71；（3）参芪扶正注射液可明显增强ADM对K562／ADM的促凋亡作用（P〈0．05）；（4）参芪扶正注射液可明显抑制K562／ADM的Bcl-2基因表达（P〈0.05）。结论参苠扶正注射液可以逆转K562／ADM耐药性，其可能机制是促进细胞凋亡和下调Bcl-2表达。     

和厚朴酚对U937/ADR细胞系耐药逆转作用及其机制研究

目的 探讨和厚朴酚(HNK)对白血病细胞U937阿霉素(ADR)耐药细胞系U937/ADR多药耐药逆转作用及其机制.方法 以大剂量(IC50)ADR短时间诱导方法 ,构建U937/ADR细胞系.以低浓度HNK(IC20)与不同化疗药物联合作用于U937/ADR细胞系,检测其对不同化疗药物耐药逆转倍数.罗丹明123检测药物外排功能;荧光定量PCR(FQ-PCR)和Western blotting检测不同浓度HNK对U937/ADR细胞系核转录因子-κB(NF-κB)和耐药相关基因MDR1及其蛋白P-糖蛋白(P-gp)表达的影响;ELISA法检测NF-κB亚单位p65(NF-κB p65)的DNA结合活性.结果 成功构建了白血病多药耐药细胞系U937/ADR,对ADR耐药指数为亲代U937细胞的11倍.6.5 μg/mL HNK可以逆转U937/ADR对ADR的耐药,逆转倍数为2.20倍.HNK能够浓度依赖性地下调U937/ADR细胞NF-κB、MDR1 mRNA和P-gp表达,抑制NF-κB p65的活性.结论 HNK能有效逆转U937/ADR多药耐药,其机制可能与抑制NF-κB p65活性、下调MDR1和P-gp表达有关.     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562／A02细胞的多药耐药

目的：探讨环孢菌素A（CsA）、汉防己甲素（Tet）及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562／A02多药耐药的逆转作用。方法：采用M1Tr法测定柔红霉素（DNR）对细胞的半数抑制量（IC50），流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果：DNR对K562细胞和K562／A02细胞IC50分别为0．27和21．22mg·L^-1；CsA（1mg·L^-1）及Tet（0．1mg·L^-1）单独和联合处理K562／A02后，DNR的IC50分别为7．83、5．32和2．32mg·L^-1；CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响；K562／A02细胞48h凋亡率为2．19％，DNR（1mg·L^-1）作用K562／A02细胞凋亡率为2．70％，CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10．27％、17．64％和52．79％；两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论：CsA及Tet均可逆转耐药，且联合作用逆转效果更强。     

龙眼参提取物对耐药口腔上皮样癌细胞株KB／MIT及耐药乳腺癌细胞株MCF-7／ADR的逆转作用

目的：研究龙眼参提取物XCKB／MIT细胞及MCF-7／ADR细胞株的耐药逆转作用。方法：设计4个不同浓度的龙眼参提取物组，采用MTT方法．测定体外培养的阿霉素敏感株MCF-7及其耐药株MCF-7／ADR以及米托蒽醌敏感株KB及其耐药株KB／MIT的IC50。结果：MCF-7／ADR耐药株及KB／MIT耐药株在龙眼参提取物与阿霉素或米托蒽醌的联合用药中其IC50值分别接近于单独用约于敏感株MCF-7和KB的水平．而与单独用药于耐药株其IC50有显著性差异。结论：龙眼参提取物可以逆转MCF7／ADR和KB／MIT的耐药性。