淫羊藿素和脱水淫羊藿素对人类乳腺癌细胞T47D增殖和细胞周期的影响

目的 探讨淫羊藿素和脱水淫羊藿索对人类乳腺癌细胞株T47D增殖和细胞周期的影响.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法测定淫羊藿素和脱水淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌细胞T47D的细胞增殖作用.并以雌激素受体拮抗剂ICI 182,780和雌激素受体ERB激动剂DPN为工具药来评价淫羊藿素和脱水淫羊藿素发挥雌激素样作用与雌激素受体的关系,流式细胞术对T47D细胞的增殖情况进行分析.结果 淫羊藿素和脱水淫羊藿素在10-8～10-6范围内能促进T47D细胞的增殖,并将T47D细胞周期由G1期向S期推进,促进DNA合成,提高细胞分裂增殖指数,且淫羊藿素和脱水淫羊藿素促进T47D细胞增殖作用被雌激素受体拮抗剂所拮抗.结论 淫羊藿素和脱水淫羊藿素具有雌激素活性,此作用可能是通过雌激素受体(ER)介导的.     

阿魏酸对人类乳腺癌细胞增殖作用机制的实验研究

目的:考察阿魏酸对人类乳腺癌细胞的增殖作用及可能的作用机制。方法:利用体外培养的ER阳性人乳腺癌细胞系T47D细胞和ER阴性人乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞,通过MTT增殖实验、流式细胞技术检测细胞周期分布、测定ER亚型蛋白表达和用实时荧光定量RT-PCR法检测阿魏酸对雌激素效应基因pS2的调控作用。结果:1×10-5~1×10-7mol.L-1的阿魏酸可促进T47D细胞增殖(P0.05),1×10-8mol.L-1雌激素受体拮抗剂FaslodexTM能抑制这种增殖效应。实验浓度阿魏酸以及它们与1×10-8mol.L-1雌激素受体拮抗剂FaslodexTM共孵育对MDA-MB-231细胞的增殖作用无论在时效或者量效方面均无显著的统计学意义。阿魏酸能使T47D细胞S期细胞数增加,细胞分裂增殖指数升高(P0.05);随着细胞的孵育时间延长至48 h,细胞分裂增殖指数与孵育24 h相比显著降低(P0.01),实验浓度阿魏酸以及它们与1×10-8mol.L-1雌激素受体拮抗剂FaslodexTM共孵育使T47D细胞S期和G2M期细胞比例下降,G0-G1期比例升高,细胞周期停滞于G0-G1期。1×10-7,1×10-6mol.L-1阿魏酸可诱导T47D细胞ERα蛋白表达水平显著升高(P0.01),而对ERβ蛋白表达水平无显著影响。1×10-7,1×10-6mol.L-1阿魏酸均上调T47D细胞雌激素依赖性基因pS2mRNA表达。结论:阿魏酸通过促进ER阳性乳腺癌细胞增殖、上调ERα蛋白和雌激素依赖性基因pS2mRNA表达水平,有植物雌激素样作用。     

淫羊藿苷和淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响

目的 研究淫羊藿苷及淫羊藿素对乳腺癌T47D细胞增殖的影响,探讨雌激素受体(ER)与其作用机制的关系.方法 用不同浓度的淫羊藿苷和淫羊藿素处理雌激素受体呈阳性的乳腺癌T47D细胞系后,MTT法检测T47D细胞增殖,流式细胞术检测T47D细胞周期的变化,Western blotting法检测T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达.结果 淫羊藿苷和淫羊藿素浓度为1×10-9～1×10-6 mol/L,能显著促进T47D细胞增殖,且该作用可被雌激素受体拮抗剂ICI 182.780(1×10-6 mol/L)所拮抗.与对照组相比,淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L使S期T47D细胞比例明显增加,增殖指数显著升高,但该作用可被ICI 182.780抑制.淫羊藿苷和淫羊藿素1×10-7 mol/L还可显著增加ERα、ERβ蛋白表达(P＜0.01).结论 淫羊藿苷和淫羊藿素均可显著促进T47D细胞增殖,该作用可能是通过上调胞内ERα、ERβ蛋白表达介导的.     

芒柄花素的植物雌激素作用研究

目的:探讨芒柄花素的雌激素样作用及其可能机制。方法:选取当归、黄芪、红三叶草中含有的黄酮类物质之一——芒柄花素,利用ER阳性T47D细胞,检测其对细胞增殖速率、分裂增殖指数以及ER亚型表达的影响,评价芒柄花素的植物雌激素活性。结果:MTT增殖试验结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素不能促进人乳腺癌细胞T47D的体外增殖;在ICI182,780抑制试验中,芒柄花素可能能够与ICI182,780协同作用抑制T47D细胞体外增殖;流式细胞术测定细胞周期结果显示,1×10-7~1×10-6mol.L-1芒柄花素对T47D细胞的分裂增殖指数没有影响;芒柄花素有增强T47D细胞ERα表达的作用(P0.05)。结论:芒柄花素能够在体外条件下增强T47D细胞ERα表达,具有植物雌激素样作用,但该物质不能促进T47D细胞的体外增殖。     

鼠尾草酚抗乳腺癌细胞增殖活性及其雌激素受体亚型介导和调节机制的研究

既往研究已经表明,鼠尾草酚（carnoso1）具有一定的抗乳腺癌效应,但其ER亚型特异性调节和介导机制与该物质抑制细胞增殖效应的相关性尚不清楚。该研究利用雌激素受体（ER）阳性乳腺癌T47D细胞观察鼠尾草酚对细胞增殖活性的影响及其雌激素受体α,卢亚型特异性介导和调节机制。以ERα和ERβ特异性拮抗剂MPP,PHTPP为工具药,采用MTT细胞增殖实验观察鼠尾草酚对T47D细胞增殖的影响;检测T47D细胞增殖周期的变化。利用Western blot方法检测鼠尾草酚对T47D细胞ERα和ERβ表达情况的影响。研究发现,1×10^-51×10^-7mol·L^-1鼠尾草酚能够显著抑制T47D细胞增殖,该抑制作用可被ERα拮抗剂MPP增强、被ERβ拮抗剂PHTPP减弱;1×10^-1,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞增殖指数显著下降。Western blot检测结果显示1×10^-5,1×10^-6mol·L^-1鼠尾草酚可使T47D细胞ERα和ERβ蛋白表达显著增加,并可明显提高ERα/ERβ。结果表明鼠尾草酚具有抑制ER阳性乳腺癌细胞增殖的作用,其效应是通过靶细胞雌激素受体,特别是ERβ途径实现的;同时,鼠尾草酚对靶细胞雌激素受体ERα和ERβ亚型的表达及其比例具有调节功能。     

槲皮素对人类乳腺癌细胞增殖的影响

目的观察槲皮素（Quercetin，Que）对人类乳腺癌细胞株增殖的影响。方法采用MTT法测定槲皮素对雌激素依赖性乳腺癌细胞MCF-7和非雌激素依赖性乳腺癌细胞MDA-MB231细胞增殖作用，并以雌激素受体拮抗剂ICI182、780为工具药来评价槲皮素发挥雌激素样作用与雌激素受体（ER）的关系，采用流式细胞术对MCF-7细胞的增殖情况进行分析。结果与溶剂对照组相比较，Que（10-50μmol／L）能显著促进MCF-7细胞的增殖，而抑制ER阴性MDA-MB231细胞，并将MCF-7细胞周期由G1期向S期推进，促进DNA合成，提高细胞分裂增殖指数，且Que促进MCF-7细胞增殖作用被ER拮抗剂所拮抗。结论Que具有雌激素活性，此作用是通过ER介导的。     

β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体表达及其下游基因PS2的影响

目的:观察β-谷甾醇对T47D细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)及下游基因PS2的影响,探讨其植物雌激素样作用机制。方法:以ER拮抗剂ICI182 780为工具药,应用实时荧光定量PCR技术检测ERα、ERβ及PS2mRNA表达变化,western-blot技术检测ERα、ERβ蛋白表达变化。结果:β-谷甾醇可诱导ERα、ERβ及PS2 mRNA表达,且上调ERβ更显著,对PS2 mRNA的诱导作用可以被ICI182 780抑制,能够上调ERα和ERβ蛋白表达,且可以被ICI182 780抑制。结论:β-谷甾醇可以通过ER途径调节下游靶基因的表达而发挥植物雌激素样作用。     

甲基莲心碱对人脐静脉血管平滑肌细胞增殖及Cyclin D1，P^21Wafl/Cip1表达的影响

目的：观察甲基莲心碱对人脐静脉平滑肌细胞（HUVSMCs）增殖,Cyclin D1及P^21Wafl/Cip1表达的影响,旨在探讨甲基莲心碱作用的分子机制。方法：采用MTr法和流式细胞仪观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）及甲基莲心碱对HUVSMCs增殖的影响。用免疫印迹法检测CyclinD1及P21Wafl／Cipl蛋白表达,以半定量逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测CyclinD1及P21Wafl／CiplrnRNA的表达。结果：AngII对HUVSMCs有明显促增殖作用,其促增殖效应在24h达到峰值,且在0．001-0．1μmol／L浓度范围内有剂量依赖关系。甲基莲心碱呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVSMCs增殖,同时可抑制AngⅡ诱导的CyclinD1蛋白及mRNA的表达,促进P^21Wafl/Cip1蛋白及mRNA表达。结论：甲基莲心碱可通过下调CyclinD1及上调P^21Wafl/Cip1的表达阻滞细胞周期的进程,从而抑制血管平滑肌细胞的增殖,是一种有效的抑制血管平滑肌细胞增殖的药物。     

从ERα/RANK通路探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用

目的:通过检测淫羊藿苷对破骨细胞诱导分化过程中雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα),核转录因子-κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)mRNA表达的影响,探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用机制。方法:50μg·L~(-1)核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化成破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。用不同浓度的淫羊藿苷(1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L~(-1))分别处理5 d和9 d后,进行TRAP染色和骨吸收陷窝分析,处理6 d后,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(cathepsin-K,CK),TRAP,ERα,RANK mRNA表达水平,用雌激素受体阻断剂ICI182780阻断雌激素受体通路验证淫羊藿苷对ERα/RANK通路的调节作用。结果:与RANKL诱导组比较,淫羊藿苷可以显著抑制破骨细胞形成数量和骨吸收陷窝数(P0.05,P0.01),同时显著下调破骨细胞MMP-9,CK,TRAP,RANK mRNA表达水平(P0.05,P0.01),上调ERαmRNA表达水平(P0.05)。ICI182780可抑制淫羊藿苷上调破骨细胞的ERαmRNA表达水平和下调RANK mRNA表达水平的作用(P0.05)。结论:淫羊藿苷能抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收活性,该作用可能通过上调破骨细胞的ERαmRNA表达进而下调RANK mRNA表达实现的。     

赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响

目的：评价赤豆的雌激素样作用及其对人类乳腺癌MCF-7细胞孕激素受体水平的影响。方法：采用富含雌激素受体的雌激素依赖性人乳腺癌细胞株MCF-7细胞，分别以E-SCREEN法观察赤豆提取物对其增殖的影响，以RT-PCR法、Western blot法观察赤豆对孕激素受体mRNA和蛋白表达的影响，并以雌激素受体拮抗剂ICI182,780为工具药来评价赤豆提取物发挥雌激素样作用的机制。结果：与溶剂对照组比较，赤豆（10～200 μg·mL^-1）能显著促进MCF-7细胞的增殖，100 μg·mL^-1时作用达到最大；赤豆提取物能明显诱导MCF-7细胞孕激素受体(PR)基因mRNA和蛋白的表达，以上作用均能被雌激素受体拮抗剂所完全拮抗。结论：赤豆提取物具有雌激素活性，此作用是通过雌激素受体(ER)介导的。     

复方五味子素B抑制人胃癌细胞株增殖的机制研究

目的观察复方五味子素B（Sch—C）对人胃癌细胞株SGC-7901增殖的抑制作用并探讨其可能机制。方法MTT法观察Sch—C对人胃癌细胞的增殖抑制作用，计数法观察细胞分裂指数，流式细胞术和组化法检测细胞周期和PCNA蛋白，RT—PCR法观察CyclinD1 mRNA的表达。结果Sch—C（25，50，100μg／mL）作用人胃癌细胞12，24，48h能明显抑制胃癌细胞的增殖和分裂，其中以50μg／mL Sch—C作用48h的抑制作用最为明显；50μg／mL Sch—C作用胃癌细胞48h时，流式细胞仪可以检测到凋亡峰，G0／G1期细胞明显增多且能明显抑制胃癌细胞PCNA蛋白和CyclinD1 mRNA的表达。结论Sch—C可能通过下调CyclinD1 mRNA表达阻滞细胞周期，下调PCNA蛋白表达降低细胞增殖活性来抑制人胃癌细胞株SGC-7901的增殖。     

固本化痰通脉方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期素D1的影响

目的：观察固本化痰通脉方对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D1表达的影响，以探讨其作用机制。方法：血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激体外培养的大鼠血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用一定时间后，通过MTT法测定其对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果：固本化痰通脉方能明显抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞增殖，还以浓度依赖方式减少S期细胞、阻滞细胞于G0／G1期，并下调细胞周期素D1的表达。结论：固本化痰通脉方能抑制血管平滑肌细胞的增殖生长，阻滞细胞周期的进行，因而可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D1的活性有关。     

舒肝凉血方对MCF-7和T47D细胞增殖及硫酸酯酶活性和表达的影响

目的:观察舒肝凉血方对雌激素受体阳性乳腺癌MCF-7和T47D细胞增殖的影响,并检测舒肝凉血方对两个细胞系中硫酸酯酶的活性及其mRNA表达的影响。方法:培养雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7和T47D,给予不同浓度的舒肝凉血方处理24 h后,MTT法检测复方对MCF-7和T47D细胞增殖的影响;RT-PCR检测舒肝凉血方对硫酸酯酶mRNA表达的影响。培养MCF-7和T47D细胞,转染萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶质粒,给予不同浓度的舒肝凉血方处理24 h后,双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测复方对两个细胞系中硫酸酯酶活性的影响。结果:舒肝凉血方显著抑制了MCF-7和T47D细胞的增殖,并呈现出剂量依赖关系,半数抑制浓度(IC50)分别是46.08 g.L-1和22.98 g.L-1;低浓度的舒肝凉血方对硫酸酯酶mRNA的表达无明显影响,高浓度时则显著下调了硫酸酯酶mRNA的表达;舒肝凉血方显著降低了MCF-7和T47D细胞中硫酸酯酶的活性,且呈现出剂量依赖性。结论:舒肝凉血方能显著抑制MCF-7和T47D细胞的增殖,此作用可能与该方降低硫酸酯酶活性以及下调硫酸酯酶mRNA的表达有关。     

大黄素对血管平滑肌细胞周期调控蛋白CyclinD1表达的影响

目的:观察大黄素对人血管平滑肌细胞周期时相和CyclinD1表达的影响.方法:取对数增长期的平滑肌细胞,采用MTT法观察大黄素对平滑肌细胞增殖抑制的有效浓度范围,求出IC50并干预细胞;然后分别用流式细胞仪和Westernblot法进行细胞周期时相和CyclinD1表达的测定.结果:与对照组比较,LC50时药物组G0/G1期细胞百分比升高,S期细胞百分比下降,CyclinD1表达高峰延迟,表达量下调,细胞周期受阻于G0/G1期.结论:大黄素在抑制平滑肌细胞增殖的过程中通过下调Cyclin D1表达,阻滞了细胞周期的进程;是一种有效的抗平滑肌细胞增殖的药物.     

桂皮醛对NIH3T3细胞周期及相关蛋白表达的影响

目的：观察肉桂主要成分桂皮醛对小鼠成纤维瘤细胞株NIH3T3细胞周期及相关蛋白的影响。方法：采用流式细胞仪检测桂皮醛(5.5 ng ·mL^-1)对NIH3T3细胞周期分布的影响；用免疫细胞化学法检测桂皮醛对NIH3T3细胞的细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和增殖细胞核抗 原(PCNA)蛋白表达的影响。结果：流式细胞仪检测显示,桂皮醛作用24 h后NIH3T3细胞S期比例上升了3%(P<0.05),G₂/M期比 例无明显升高,细胞增殖指数(PrI)增加了3.5%(P<0.01)。经桂皮醛刺激后,NIH3T3细胞Cyclin D1和PCNA蛋白表达量明显增加,与对照组 比较,有极显著差异(P<0.01)。结论：桂皮醛可推动NIH3T3细胞周期向前进展,这种正向调控作用与桂皮醛能促进Cyclin D1和PCNA蛋白 表达有关。     

松脂醇二葡萄糖苷对UVB诱导HDF细胞损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨松脂醇二葡萄糖苷(PDG)对UVB诱导人真皮成纤维细胞(HDF)损伤的保护作用及机制。方法:采用MTT法测定细胞增殖率,利用Western-blot法测定细胞中胶原蛋白(COLⅠ)、基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、ERβ、p-P38蛋白的表达水平,实时荧光定量PCR法检测MMP-1 mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,模型组细胞增殖率及ERβ、COLⅠ蛋白表达显著降低,MMP-1、p-P38蛋白表达及MMP-1 mRNA表达显著升高(P0.01);与模型组比较,松脂醇二葡萄糖苷组细胞增殖率和胶原蛋白显著升高,同时PDG对MMP-1蛋白和MMP-1mRNA表达有抑制作用,并能显著上调ERβ蛋白表达和下调p-P38蛋白表达(P0.01);与松脂醇二葡萄糖苷组比较,ICI182780能显著下调ERβ蛋白表达量并提高MMP-1 mRNA表达,同时SB203580对MMP-1、p-P38蛋白表达和MMP-1 mRNA表达有显著的抑制作用(P0.01)。结论:PDG能促进HDF增殖,其机制可能是通过ER-P38MAPK信号通路实现对MMP-1的抑制,进而促进胶原合成达到预防和治疗光老化的目的。     

加味二至丸植物雌激素样作用及作用机制的实验研究

目的:建立基于荧光素酶报告基因的HEK293T细胞体外雌激素样物质检测方法,评估加味二至丸的雌激素样作用及作用机制。方法:通过荧光定量PCR方法扩增人雌激素受体(Estrogen receptor,ER)及雌激素反应原件(Estrogen response element,ERE)目的基因,构建PCMV-FLAG-His-hERa、PCMV-FLAG-His-hERβ重组质粒以及ERE调控的双荧光素酶报告基因质粒psiCHECK2-ERE-luc,将pERE-Luc和phERa/phERβ共转染HEK293T细胞,药物处理后,检测报告基因荧光素酶活性,分析加味二至丸的雌激素样作用及作用机制。结果:加味二至丸在雌激素受体阴性HEK293T细胞中对ERE调控的报告基因没有转录激活作用,而在过表达ERa或ERβ的HEK293T细胞中,加味二至丸诱导的荧光素酶活性显著高于空白对照组,而且对ERβ的选择性作用强于ERa,其雌激素活性能被ER抑制剂ICI182780拮抗。结论:加味二至丸通过ER途径发挥雌激素样作用,而且对ERβ的亲和力高于ERa,治疗绝经相关外阴阴道萎缩的同时无刺激子宫内膜过度增殖的不良反应。     

淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响

目的观察淡豆豉异黄酮对大鼠成骨细胞增殖及雌激素受体表达的影响。方法采用改良组织块法分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,分别给予不同质量浓度淡豆豉异黄酮(1、10、100、1 000μg/L)、1 000μg/L淡豆豉异黄酮+10 nmol/L雌激素受体拮抗剂ICI 182780、1 000μg/L大豆异黄酮进行干预,以1 nmol/L 17β-雌二醇作为阳性对照,MTT法检测成骨细胞增殖情况;RT-PCR和Western blot法分别检测成骨细胞ERβmRNA及蛋白表达水平。结果MTT结果显示,淡豆豉异黄酮在1~1 000μg/L范围内促进成骨细胞增殖;RT-PCR和Western blot结果显示,1~1 000μg/L淡豆豉异黄酮上调ERβmRNA及蛋白表达水平。而1 000μg/L淡豆豉异黄酮的上述作用能够被雌激素受体拮抗剂所拮抗。结论淡豆豉异黄酮能够促进大鼠成骨细胞的增殖,此作用可能是通过雌激素受体ERβ途径实现的。     

艾灸对类风湿性关节炎家兔滑膜细胞CyclinD1及CDK4蛋白表达的影响

目的:观察艾灸对实验性类风湿性关节炎(RA)家兔滑膜细胞的细胞周期蛋白D1(CyclinD1)及周期蛋白依赖激酶CDK4的影响,探索艾灸调控实验性RA家兔滑膜细胞增殖的分子信号机制。方法:以佐剂性关节炎(AA)作为RA疾病模型,艾灸实验性RA家兔双侧"肾俞"穴,采用Western-blot方法检测治疗前后家兔关节滑膜细胞的cyclinD1和CDK4蛋白表达。结果:RA模型组CyclinD1和CDK4蛋白表达明显高于空白组(P0.01),艾灸组CyclinD1和CDK4蛋白表达明显低于模型组(P0.01)。结论:艾灸抑制RA滑膜细胞CyclinD1及CDK4蛋白的过度表达,可能是其调控RA滑膜细胞增殖的重要分子机制。     

淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样作用研究

目的:用雌激素受体(Estrogen Receptor,ER)表达阳性细胞株人乳腺癌细胞MCF-7检测淫羊藿苷及其拟代谢物的雌激素样活性[1]及构效关系。方法:用MTT法,增殖细胞核抗原(Proliferating CellNuclear Antigen,PCNA)免疫组化法检测其对体外培养MCF-7细胞增殖及细胞周期的影响;Real-timeRT-PCR法检测ERα、ERβ和PS2 mRNA表达水平变化。结果:淫羊藿素促进MCF-7增殖,而淫羊藿苷、淫羊藿次苷I和脱水淫羊藿素促增殖效应不明显;淫羊藿素10-9mol.L-1组PCNA阳性表达强于其它三组;淫羊藿素极显著增加ERα和PS2 mRNA的表达水平。所有受试物均不促进ERβmRNA表达。淫羊藿素促进ERα蛋白表达强于其它三组。结论:淫羊藿素有明显的雌激素样作用,而淫羊藿苷及其它两种受试物雌激素样作用不明显。四种受试物均不促进ERβmRNA表达。