Mcl-1在阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡中的作用

目的研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用。方法采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性。结果骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化。结论阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关。     

Effect of Mcl-1 on osteosarcoma cells under doxorubicin-induced apoptosis

目的 研究阿霉素诱导骨肉瘤细胞凋亡过程中Mcl-1含量的变化以及Mcl-1对骨肉瘤细胞凋亡的调控作用.方法 采用半定量PCR法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin的mRNA水平变化;Western blot法检测Mcl-1、Bcl-2、β-actin蛋白变化;转染pcDNA3-Mcl-1质粒使细胞高表达Mcl-1、Bcl-2;采用Caspase3/7活性试剂盒检测Caspase3/7活性.结果 骨肉瘤细胞在阿霉素作用下,Mcl-1和Bcl-2的mRNA水平无变化,而蛋白水平下调;过表达Mcl-1可以明显抑制凋亡标志物PARP的剪切,而Bcl-2不具有抑制效应;同样,过表达Mcl-1可以抑制阿霉素作用下Caspase3/7的活化.结论 阿霉素作用下,Mcl-1蛋白水平下降是骨肉瘤细胞发生凋亡的重要原因,并且该凋亡过程与Caspase的活化有关.     

miR-1与miR-499对心肌细胞增殖与凋亡调控作用及机制研究

目的研究miR-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡中的调控作用及其机制。方法通过脂质体2000转染试剂将miR-1 mimics、miR-499 inhibitor转染至H9C2心肌细胞。设置空白对照组、H_2O_2组(未进行转染的H9C2心肌细胞)、干预组A(miR-1 mimics转染的H9C2心肌细胞)、干预组B(miR-499 inhibitor转染的H9C2心肌细胞)、干预组C(miR-1 mimics+miR-499 inhibitor转染的H9C2心肌细胞)。通过H_2O_2诱导建立H9C2心肌细胞氧化应激模型。采用CCK-8法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bim、Mcl-1蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,H_2O_2组细胞增殖显著降低而细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组相比,干预组A、干预组B细胞增殖进一步降低而细胞凋亡率进一步升高,这种改变在干预组C中更加显著,差异有统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,H_2O_2组Bim蛋白表达水平明显升高,Mcl-1蛋白表达水平明显降低,差异有统计学意义(P0.05)。与H_2O_2组相比,干预组A、干预组B的Bim蛋白表达水平进一步升高,Mcl-1蛋白表达水平进一步降低,这种改变在干预组C中更加显著,差异有统计学意义(P0.05)。结论 miR-1与miR-499在心肌细胞增殖与凋亡中发挥重要调控作用,miR-1可能通过上调Bim、下调Mcl-1蛋白表达促进心肌细胞凋亡,miR-499则通过下调Bim、上调Mcl-1蛋白表达抑制心肌细胞凋亡。     

MiR-29b下调肝肿瘤细胞Mcl-1的表达并诱导其发生凋亡

目的:探讨miR-29b(microRNA-29b)的作用靶点及其对肝肿瘤细胞系Huh7的凋亡诱导作用。方法:荧光定量PCR检测正常肝细胞系LO2及肝癌细胞系Huh7的miR-29b和Mcl-1的表达水平。通过生物信息学分析预测Mcl-1基因是否受microRNA调控。将miR-29b模拟物通过Lipofectamine 2000顺时转染Huh7细胞,检测miR-29b对Mcl-1表达水平的影响。MTT法检测miR-29b模拟物转染对Huh7细胞增殖的影响;Annexin V/PI染色法检测miR-29b对Huh7细胞凋亡的影响。结果：肝肿瘤细胞相比于正常肝细胞高表达Mcl-1低表达miR-29b,在肝癌细胞中转染miR-29b可使Mcl-1的表达水平下降,转染miR-29b可抑制Huh7细胞的增殖并诱导其发生凋亡。结论：MiR-29b下调Huh7细胞Mcl-1蛋白的表达并诱导其发生凋亡。     

多氯联苯(PCB1254)诱导胰岛细胞凋亡的机制研究

目的 :本研究探讨多氯联苯(PCB1254)诱导体外培养胰岛β细胞株INS-1凋亡的可能机制。方法 :用不同浓度的PCB1254刺激INS-1细胞后,使用CCK-8法检测细胞活性,选择适当浓度的PCB1254进行INS-1细胞凋亡机制的研究;PCB1254(5μg/ml)刺激INS-1细胞后,倒置显微镜下观察细胞的形态学变化,并以流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved Caspase-3、Caspase-3、Bim、Bcl-2、c-Fos、p-JNK、p-P38、p-ERK蛋白的表达;二氢乙啶(dihydroethidium,DHE)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;PCB1254诱导INS-1细胞凋亡后,使用ERK抑制剂PD98059进行干预,倒置显微镜下观察细胞凋亡情况。结果:随着浓度的增加,PCB1254对细胞活性的抑制逐渐增强,当浓度≥5μg/ml时,与对照组差异有统计学意义(P<0.01);倒置显微镜下观察PCB1254(5μg/ml)能引起INS-1细胞凋亡,凋亡细胞脱落,漂浮于培养基中;流式细胞术检测结果显示PCB1254能诱导INS-1细胞凋亡;Western blot检测凋亡细胞中凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Bim表达上调,抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调,氧化应激相关蛋白c-Fos表达上调,ROS荧光增强;MAPK信号通路中p-ERK蛋白表达上调;ERK抑制剂PD98059干预后细胞凋亡无明显变化。结论:PCB1254可能通过氧化应激信号通路引起INS-1细胞的凋亡,此过程中伴有ERK信号通路的激活。     

单核细胞趋化蛋白-1通过促进胰淀素表达调控胰岛β细胞凋亡

目的观察单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)对胰岛β细胞凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法体外培养大鼠胰岛β细胞株INS-1E,给予1ng/ml的MCP-1刺激48h后,real-time PCR及western blot检测细胞中Amylin的mRNA及蛋白表达水平,同时流式细胞仪检测细胞凋亡情况。细胞转染Amylin SiRNA,再给予MCP-1刺激,同样采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。结果 INS-1E细胞经MCP-1刺激后,细胞中Amylin的mRNA及蛋白表达水平均升高(P<0.05),细胞出现了凋亡现象。而预先转染了抑制Amylin表达的siRNA后再进行MCP-1的刺激,此时细胞的凋亡率低于单独刺激组(P<0.05)。结论 MCP-1通过促进胰淀素的表达调控胰岛β细胞的凋亡,从而影响血糖代谢。     

波动性高糖下血红素加氧酶-1对INS-1细胞凋亡相关蛋白的影响

目的 探讨波动性高糖下血红素加氧酶-1(HO-1)对INS-1细胞凋亡相关蛋白的影响.方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,分为正常对照组、持续性高糖组、波动性高糖组、钴原卟啉(CoPP)+波动性高糖组、锌原卟啉(ZnPP)+波动性高糖组.各组均干预72 h,Western blot检测HO-1蛋白表达,免疫细胞化学法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果 与正常对照组相比,波动性高糖组、持续性高糖组HO-1表达显著增高,Bcl-2/Bax比值显著降低(P均<0.05).与波动性高糖组相比,CoPP+波动性高糖组HO-1蛋白表达显著升高,Bcl-2/Bax比值亦明显升高(P均<0.05),而ZnPP+波动性高糖组则出现相反的变化趋势.结论 波动性高糖可降低INS-1细胞凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax比值,而HO-1可能通过上调Bcl-2/Bax比值对INS-1细胞发挥抗凋亡的保护效应.     

可溶性环氧化酶水解酶抑制剂-1471预防2型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的机制

目的:探讨可溶性环氧化酶水解酶抑制剂-1471(sEHI-1471)预防2型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的作用及其机制。方法:2型糖尿病KKAy小鼠随机分为2组:sEHI-1471组(18只)及对照组(18只),分别饮用含8mg/L的sEHI-1471或等体积生理盐水的饮用水,将同周龄的雄性C57BL/6J小鼠设为正常组,饮水不受干预。比较各组小鼠空腹血糖(FBG)和空腹胰岛素水平(FINS),计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。TUNEL检测胰岛β细胞凋亡。Western Blot检测胰腺组织Bcl-2,Bcl-xL,Bim,Bax和Bid表达水平。结果:干预3周后,与正常组相比,对照组FBG、FINS和HOMA-IR指数均显著升高(P<0.05);与对照组相比,sEHI-1471组小鼠FBG、FINS和HOMA-IR指数均显著降低(P<0.05);比较各组凋亡变化的结果,对照组较正常组胰岛β细胞凋亡数显著增加(P<0.05),sEHI-1471组较对照组凋亡细胞数明显下降(P<0.05)。比较各组小鼠胰腺抗凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-xL和促凋亡蛋白Bax,Bim,Bid表达水平,对照组相对于正常组Bcl-2,Bcl-xL表达明显降低,Bax,Bim和Bid表达明显升高,而相对于对照组,sEHI-1471组Bax,Bim和Bid表达明显降低,Bcl-2和Bcl-xL表达明显升高(P<0.05)。结论:sEHI-1471能降低血糖,增加糖尿病小鼠对胰岛素的敏感性,减少KKAy小鼠胰岛β细胞凋亡,其机制可能与降低促凋亡蛋白Bax,Bim,Bid表达和增加抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL表达有关。     

尼古丁对A549 化学治疗敏感性的影响

目的 探讨尼古丁（Nicotine）诱导的肺癌A549 细胞对顺铂的敏感性,以及对凋亡相关蛋白表达水 平的影响。方法 将A549 细胞随机分为对照组、顺铂（CDDP）组和CDDP+Nicotine 组,培养48 h,MTT 法检 测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting 检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bak 和Mcl-1 的表达 水平。结果 与CDDP 组比较,CDDP+Nicotine 组的细胞活力更高,细胞凋亡率更低,促凋亡蛋白Bak 的表 达无变化,抗凋亡蛋白Bcl-2 和Mcl-1 的表达上调,且Mcl-1 磷酸化水平上调。结论 尼古丁可能通过上调 Bcl-2 和Mcl-1 的表达,以及Mcl-1 的磷酸化水平降低肺癌细胞A549 对CDDP 的敏感性。     

miR-221-3p靶向TIMP-2对腹主动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、凋亡影响

目的分析miR-221-3p靶向基质金属蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)对腹主动脉瘤(AAA)血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响。方法对人VSMC细胞进行培养,10μmol/L血管紧张素(Ang Ⅱ)对VSMC进行处理,将VSMC细胞分为miR-221-3p inhibitor组(转染miR-221-3p inhibitor)、阴性对照组(转染miR-221-3p inhibitor NC)、空白组(未经转染的VSMC细胞),对照组(未进行Ang Ⅱ处理及转染的VSMC细胞),实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-221-3p、TIMP-2 mRNA的表达水平;细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测各组细胞活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;蛋白印迹(WB)法检测增殖蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、凋亡蛋白B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)及蛋白TIMP-2、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-12的表达;双荧光素酶报告实验证明miR-221-3p与TIMP-2的靶向关系。结果与对照组比较,空白组、阴性对照组miR-221-3p表达、细胞凋亡率、蛋白Bax、MMP-2、MMP-12表达显著升高,TIMP-2 mRNA表达水平、细胞活力、蛋白β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、TIMP-2表达显著降低,差异均有统计学意义(P0.05);与空白组、阴性对照组比较,miR-221-3p inhibitor组miR-221-3p表达、细胞凋亡率、蛋白Bax、MMP-2、MMP-12表达显著降低,TIMP-2mRNA表达水平、细胞活力、蛋白β-catenin、CyclinD1、Bcl-2、TIMP-2表达显著升高,差异均有统计学意义(P0.05)。miR-221-3p靶向调控TIMP-2。结论 Mi R-221-3p可能靶向抑制TIMP-2的表达,抑制VSMC的增殖,促进其凋亡,进而参与AAA的发病。     

转染TRIM29-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响

目的：探讨转染三结构域蛋白（TRIM）家族成员三结构域蛋白29（TRIM29）-siRNA对胶质瘤U87MG细胞周期和凋亡的影响,阐明TRIM29在胶质瘤发生发展中的作用。方法：将体外培养的U87MG细胞分为对照组（未转染）、NC-siRNA组（转染阴性对照NC-siRNA）和TRIM29-siRNA组（转染TRIM29-siRNA）,采用实时荧光定量PCR法检测3组U87MG细胞中TRIM29 mRNA表达水平,流式细胞术检测3组不同细胞周期U87MG细胞百分率和凋亡率,Western blotting法检测3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：3组细胞中TRIM29、CyclinD1、P21、Bcl-2和Bax蛋白表达水平,TRIM29 mRNA表达水平,G₀/G₁期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,NC-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平和G₁/G₀期、S期、G₂/M期U87MG细胞百分率及细胞凋亡率差异无统计学意义（P>0.05）;与对照组和NC-siRNA组比较,TRIM29-siRNA组U87MG细胞中TRIM29 mRNA和TRIM29、CyclinD1、Bcl-2蛋白表达水平以及S期和G₂/M期U87MG细胞百分率均明显降低（P<0.05）,G₀/G₁期U87MG细胞百分率和细胞凋亡率以及P21、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论：转染TRIM29-siRNA可诱导U87MG细胞周期阻滞和凋亡,其作用机制可能与下调CyclinD1、Bcl-2蛋白表达和上调P21、Bax蛋白表达有关。     

氯化锂对地塞米松诱导的大鼠胰岛β细胞凋亡的影响及其机制

目的：建立地塞米松（Dex）诱导的大鼠胰岛INS-1细胞凋亡模型,探讨氯化锂（LiCl）对Dex诱导的胰岛β细胞凋亡的影响及其可能机制。方法：将INS-1细胞分为对照组、0.1 μmol·L^-1Dex组和LiCl+0.1 μmol·L^-1Dex组。TUNEL染色和Annexin Ⅴ/PI染色法检测各组INS-1细胞凋亡率,Real-time PCR法检测各组INS-1细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、诱导型-氧化氮合酶（iNOS）、NADPH氧化酶4（Nox4）、NADPH oxidase （p47phox）和糖原合成酶激酶3β（GSK-3β） mRNA表达水平,Western blotting法检测各组INS-1细胞中GSK-3β、p-GSK-3、SOD、iNOS和Nox4蛋白表达水平,GENMED试剂盒检测各组NIS-1细胞中活性氧（ROS）水平,Griess法检测各组INS-1细胞中一氧化氮（NO）水平。结果：与对照组比较,0.1 μmol·L^-1Dex组INS-1细胞凋亡率升高（P<0.05）,SOD mRNA和p-GSK-3β蛋白表达水平降低（P<0.05）,细胞中Nox4、p47phox、iNOS mRNA表达水平升高（P<0.05）,细胞中ROS和NO水平升高（P<0.05）;与0.1 μmol·L^-1Dex组比较,LiCl+0.1μmol·L^-1Dex组INS-1细胞凋亡率降低（P<0.05）,SOD mRNA和p-GSK-3β蛋白表达水平升高（P<0.05）,细胞中Nox4、p47phox和iNOS mRNA表达水平降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和NO水平降低（P<0.05）。结论：Dex可诱导大鼠胰岛β细胞凋亡,LiCl可通过抑制GSK-3β活性减轻Dex诱导的胰岛β细胞凋亡。     

miR-29c过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化影响的研究

目的：探讨miR-29c过表达对P19细胞增殖、凋亡和分化的影响及机制。方法：(1)体外传代培养P19细胞,利用细胞转染技术构建miR-29c过表达组(mimic组),荧光观察和定量PCR验证miR-29c过表达效率。(2)CCK-8试剂盒检测细胞增殖;(3)Hoechst染色结合流式细胞技术检测凋亡情况,定量PCR检测凋亡相关基因Bax/Bcl-2表达情况;(4)二甲亚砜(DMSO)诱导P19细胞分化,定量PCR检测心肌特异性标志基因肌球蛋白重链(α-myosin heavy chain,αMHC), 转录因子GATA4和心肌增强因子2c(Myocyte enhancer factor 2c,Mef2c)表达情况,明确miR-29c过表达对P19细胞分化的影响;(5)蛋白质免疫印迹(Western blot)验证Akt3为miR-29c的靶基因。结果：miR-29c过表达组细胞与对照组相比,增殖速率更慢,凋亡率高于对照组,Bax表达水平高于对照组而Bcl-2表达无明显差异;P19细胞分化第6天和第8天miR-29c过表达组αMHC, GATA4和Mef2c的表达水平显著高于对照组;miR-29c过表达组的p-Akt3蛋白表达水平高于对照组,而miR-29c沉默组的p-Akt3蛋白表达水平低于对照组。结论：miR-29c过表达可能是通过调控Akt3来抑制P19细胞增殖,促进P19细胞凋亡和分化。     

肝X受体激动剂T0901317对INS-1细胞株凋亡的影响

目的探讨肝X受体激动剂T0901317对软脂酸诱导的大鼠胰岛β细胞瘤株INS-1凋亡的促进作用。方法根据不同干预条件分为空白对照组（对照组）,T0901317干预组（T0901317组）。24h、48h后应用MTT检测各组细胞增殖活性;48h后Western blot检测细胞因子Bax及Bcl-2的表达、细胞凋亡应用Caspase-3活力检测、ROS含量应用CM2H2DCFDA试剂盒检测。结果T0901317组细胞增殖活性较对照组增殖受抑制,细胞Caspase-3活性显著高于对照组。T0901317组较对照组上调Bax、下调Bcl-2表达、ROS含量显著升高。结论T0901317可以促进胰岛β细胞的凋亡。     

IL-22抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡并上调其Bcl-2表达

目的研究IL-22对ox-LDL诱导的CRL-1730细胞(人脐静脉内皮细胞)凋亡的影响及其机制。方法 100μg/ml ox-LDL刺激CRL-1730细胞,不同时间点经实时荧光定量RT-PCR检测CRL-1730细胞中IL-22受体R1(IL-22R1)mRNA的表达状况。然后在ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡模型中加入20 ng/ml外源性IL-22,通过AnnexinⅤ-PI凋亡试剂盒检测其对细胞凋亡的影响,经实时荧光定量反转录PCR检测Bcl-2、Bcl-xl、Bcl-w、caspase 3及STAT3mRNA的表达,采用免疫印迹法分析STAT3磷酸化和Bcl-2蛋白的水平。结果 IL-22R1 mRNA在ox-LDL刺激后表达明显增高(P<0.05),且于12 h达峰值(P<0.01);加入IL-22可明显抑制ox-LDL刺激诱导的内皮细胞凋亡(P<0.01),促进抗凋亡基因Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w表达,而降低caspase 3 mRNA表达(P<0.01)。此外,IL-22作用1～2 h STAT3发生磷酸化,4 h后Bcl-2蛋白表达升高(P<0.01)。结论 IL-22可抑制ox-LDL诱导的CRL-1730细胞凋亡,这可能与其促使STAT3磷酸化,上调抗凋亡分子Bcl-2、Bcl-xl和Bcl-w的表达,抑制促凋亡分子caspase 3的表达有关。     

Mcl-1基因与肝细胞癌

Bcl-2家族蛋白在细胞凋亡的调节中起着重要的作用，髓样细胞白血病-1（Mcl-1）是Bcl-2家族中一个重要的抗凋亡成员，并作为促耐药因子在不同肿瘤组织中表达。进展期肝细胞癌对各种化疔药物有着高度的耐药性。Mcl-1下调使HCC癌细胞对不同化疗药物敏感，并增加癌细胞的凋亡率。因而，Mcl-1靶向治疗有望成为肝细胞癌治疗的新途径。     

丝胶对STZ致损伤的INS-1细胞的保护作用

目的 探讨丝胶对链脲佐菌素（STZ）致损伤大鼠胰岛素瘤细胞（INS-1细胞）的保护作用。方法 实验以体外培养的INS-1细胞为研究对象,随机分为5组：正常对照组（常规条件培养细胞）、模型组（培养基中含10mmol/L的STZ）、丝胶低、中、高浓度组（培养基中分别含10mmol/L的STZ,及150μg/mL、300μg/mL、600μg/mL的丝胶）,每组细胞药物作用时间均为24h。蛋白印迹和实时荧光定量PCR法检测各组细胞BCL-2与P53蛋白及mRNA的表达情况。流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果 与正常对照组相比,在模型组中,INS-1细胞中BCL-2蛋白和mRNA的表达显著减少,P53蛋白和mRNA的表达显著增加,早期凋亡率显著升高（P<0.05）。与模型组相比,丝胶各组INS-1细胞BCL-2蛋白与mRNA的表达均显著增多,P53的蛋白与mRNA的表达均显著下降,早期凋亡率显著下降（P<0.05）;3个丝胶组两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 丝胶对STZ致损伤INS-1细胞发挥保护作用的机制与调控凋亡蛋白,抑制INS-1细胞凋亡有关。     

MiR-218在宫颈癌组织中的表达及对HeLa细胞凋亡及转移的影响

目的 探讨miR-218在宫颈癌组织中的表达,以及对宫颈癌HeLa细胞凋亡及迁移的影响。方法 采用qRT-PCR检测23 例正常子宫颈组织和114 例宫颈癌组织中miR-218 mRNA的表达,分析与临床病理特征的关系;HeLa细胞分为3组:对照组（细胞不转染）、转染空脂质体阴性对照组(NC组)和 转染miR-218类似物 (miR-218M组)。MTT检测细胞增殖;流式检测细胞凋亡;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移; qRT-PCR和Western blot分别检测Bcl-2、Bax、NF-κB和E-cadherin mRNA和蛋白表达。结果 miR-218 mRNA在宫颈癌组织中表达下调,在宫颈癌不同病理类型、分期分级、有无淋巴结转移及间质浸润深度间表达差异有统计学意义（P Bax mRNA和蛋白表达水平上调, E-cadherin mRNA和蛋白表达上调,NF-κB mRNA和蛋白表达下调。结论 MiR-218低表达可能与宫颈癌的病理分级分期等生物学行为有关,上调miR-218表达可抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,抑制细胞侵袭转移。     

余甘子中没食子酸抑制高糖诱导胰岛β细胞凋亡

目的 探究余甘子中没食子酸对高糖诱导胰岛β细胞凋亡的保护作用, 为从中药中发现治疗糖尿病的天然化合物提供一定参考依据.方法 体内实验造模:以wistar雄性大鼠作为体内研究对象, 腹腔注射50mg/kg STZ, 造模成功后口服给予25 mg/kg的没食子酸, 阳性药选用西格列汀, 给药4周后, 取血、摘取胰腺, 进行HE染色, 采用Western blot法测定高糖状态下胰腺组织中NLRP3、TXNIP蛋白表达;体外实验造模:以胰岛瘤细胞株INS-1细胞作为体外研究对象, 建立高糖诱导细胞凋亡模型, 在无糖RPMI1640完全培养基中添加25mmol/L葡萄糖培养INS-1细胞, 以没食子酸为受试样品, 将实验分为正常对照、高糖模型、没食子酸低、中、高剂量组.采用MTT法测定细胞活性, 采用QPCR法、Western blot法测定高糖状态下INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的m RNA表达, 检测NLRP3、TXNIP蛋白表达.结果 (1) INS-1细胞在葡萄糖浓度为25 mmol/L的培养基中培养48 h后, 与对照组比较, 凋亡率升高 (P<0.01) , 表明高糖状态下细胞凋亡模型建立成功. (2) 10、5、2.5μmol/L的GA分别处理对照组和高糖模型组细胞, 对照组细胞存活率没有明显变化 (P>0.05) .体内实验中与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP的蛋白表达具有统计学差异 (P<0.05) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调, 有统计学差异 (P<0.05) , 体外实验中与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3的蛋白表达有统计学差异 (P<0.01) , GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.01) ;TXNIP的蛋白表达水平上调 (P<0.05) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.05) ; (3) 与对照组比, 高糖模型组中INS-1细胞中NLRP3、TXNIP m RNA表达水平均上调 (P<0.01) ;GA处理后蛋白表达水平明显下调 (P<0.01) .结论 将细胞置于添加25 mmol/L浓度葡萄糖的无糖RPMI1640完全培养基中培养48 h.GA对正常INS-1细胞增殖无影响, GA具有保护高糖状态下INS-1细胞凋亡的作用, 其机制可能与GA下调NLRP3、TXNIP的基因表达有关.     

3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)％、(25.5±2.4)％、(45.5±3.5)％,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)％.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.