利培酮对大鼠各脑区组织BDNF-TrkB信号通路的影响

目的 探索非典型抗精神病药利培酮对大鼠脑区中脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）及其受体酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor, TrkB）、P75神经营养因子受体(P75 neurotrophin receptor,P75NTR)的调控作用。方法 将大鼠随机分为利培酮处理组（ n=8)和对照组（ n=8),利培酮处理组采用0.25 mg/kg利培酮腹腔内注射,对照组采用等量安慰剂腹腔内注射,连续处理14 d后处死大鼠。取大鼠左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马,提取RNA并进行BDNF、TrκB和P75NTR mRNA的实时荧光定量PCR分析。结果 利培酮处理组大鼠的左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马中BDNF及TrkB mRNA的表达水平较对照组增高（P<0.05）,而利培酮处理组P75NTR mRNA的表达与对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 利培酮能够上调大鼠左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马BDNF-TrkB信号通路,而不能改变上述脑区中P75NTR mRNA的表达水平。     

神经营养因子受体p75在肿瘤中的作用

神经营养因子受体p75（p75 neurotrophin receptor,p75NTR）是神经营养因子的低亲和力受体,属于肿瘤坏死因子受体超家族（TNFR）的成员之一,广泛分布于神经系统及众多非神经系统的组织及肿瘤细胞中。神经营养因子（neurotrophin,NT）家族成员主要包括神经生长因子（NGF）、     

神经营养因子低亲和力受体p75NTR的表达及新药开发

p75NTR作为神经营养因子低亲和力受体,可与各种配体和细胞内因子相互作用后对神经系统产生促存活或致凋亡的不同效应;同时,作为肿瘤坏死因子受体超家族的一员,其在细胞凋亡和神经再生中发挥重要作用。p75NTR的表达与其多潜能性之间密切相关,因此,了解p75NTR在各种类型细胞及损伤或疾病状态下的表达,有助于对其功能或潜在作用进行更深入的研究。本文主要对p75NTR的表达进行综述,并探讨目前靶向作用于p75NTR药物的研究和开发。     

乌头汤对DPN大鼠NGF受体TrkA、p75NTR表达的影响

[目的] 通过观察乌头汤对糖尿病周围神经病变（DPN）大鼠胫神经神经生长因子（NGF）受体、酪氨酸蛋白激酶A（TrkA）和p75神经营养因子受体（p75NTR）表达及血清NGF含量的影响,探索该方改善DPN的可能机制。[方法] Wistar大鼠腹腔注射链尿佐菌素（STZ）建立糖尿病模型,观察乌头汤对胫神经纤维组织TrkA、p75NTR及血清NGF的影响。[结果] 干预前后模型组和乌头汤组均较空白组FBG显着升高（P<0.01）,各组内FBG在干预前后无统计学差异（P>0.05）;与模型组比较,乌头汤组血清NGF含量明显升高（P<0.05）,神经组织p75NTR明显降低（P<0.05）.乌头汤组p75NTR免疫组化染色阳性表达程度较模型组明显降低。[结论] 乌头汤改善DPN的作用可能与其能够调节神经纤维p75NTR含量和血清NGF含量有关。     

GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系的研究

目的观察外源性胶质细胞系源性神经营养因子（GDNF）促进大鼠C6胶质瘤细胞增殖的时效及量效关系,为深入研究GDNF对C6细胞的促增殖机制提供最佳的时效及量效作用点。方法将体外培养的C6细胞分为空白对照组、溶剂对照组和实验组（GDNF浓度分别为10、30、50、70、90μg／L,作用时间分别为12、24、48、72h）,用MTT比色法检测不同浓度GDNF通过不同作用时间对C6细胞增殖情况的影响。结果浓度在50μg/L以上的GDNF作用24h后,C6细胞增殖水平升高,在48h时达到高峰而后趋于平稳或呈下降趋势,与对照组比差异有统计学意义。其中,70μg/LGDNF作用48h后,C6细胞的增殖率明显高于其他实验组。结论外源性GDNF促进体外培养的大鼠C6胶质瘤细胞增殖的最佳时效及量效作用点为浓度70μg/L、时间48h。     

GDI2通过p75NTR通路调节结直肠癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡

目的：探讨GDP解离抑制因子2(GDI2)对结直肠癌（CRC）细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡以及细胞周期的影响及其机制。方法：TCGA数据库分析GDI2 mRNA在CRC肿瘤组织中的表达。将CRC细胞分为sh-NC组和sh-GDI2组,采用CCK-8法检测细胞活力,克隆形成实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡和周期,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测GDI2基因表达,western blotting检测GDI2蛋白和神经生长因子受体（p75NTR）通路关键因子（IKK、p-NF-κB和p-IκB）的表达。构建异种移植瘤裸鼠模型,观察GDI2对CRC肿瘤生长的影响。结果：与癌旁正常组织和正常结肠上皮细胞相比,GDI2在CRC患者肿瘤组织和细胞系中的表达上调（P<0.05）。sh-GDI2能抑制CRC细胞增殖、迁移、侵袭,阻滞细胞周期进程,并促进凋亡（均P<0.05）。与sh-NC组相比,sh-GDI2组p75NTR蛋白表达上调,IKK、p-NF-κB、p-IκB蛋白表达下调（均P<0.05）。敲低GDI2可明显抑制裸鼠体内...     

ATRA对NB细胞增殖抑制及诱导分化作用的研究

目的；通过对神经母细胞瘤（NB）细胞系SH－SYT6和SMS－KCNR的体外实验，探讨全反式维甲酸（ATRA）对NB细胞增殖抑制的可能分子机制及脑源性神经营养因子（BDNF）－TrkB信号转导途径在NB细胞分化中的作用。方法：通过台盼蓝拒染计数活细胞，用倒置相差显微镜观察加药处理前后细胞形态学变化。结果：5μmol/L ATRA抑制NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞增殖，而5nmol/L ATRA无此作用；ATRA可诱导SMS－KCNR细胞分化成熟，对SH－SY5Y细胞诱导分化作用极弱；BDNF可使经ATRA处理的SY5Y细胞发生显著形态学分化。结论：5μmol/L ATRA对人NB细胞系SMS－KCNR和SH－SY5Y细胞的体外增殖有抑制作用；ATRA能诱导人NB细胞系SMS－KCNR细胞分化成熟，ATRA与BDNF共同作用可使1SH－SY5Y发生显著形态学分化；BDNF－TrkB信号转导途径的激活可能是ATRA体外诱导NB细胞分化逆转的分子生物学机制之一。     

脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病的关系

脑源性神经营养因子(BDNF)是一种在成年哺乳类大脑分布广泛的小二聚体蛋白,结构类似神经生长因子。BDNF可促进与阿尔茨海默病(AD)有关神经元(包括海马和皮质神经元,隔核和基底前脑胆碱能神经元和黑质多巴胺神经元)的存活。总结BDNF的分子和细胞生物学方面的工作,包括细胞内的运输,合成和释放的调节,突触水平的变化,对近年有关BDNF’-及其受体(TrkB)与AD神经病理生理学关系的研究进展作一综述。     

脑源性神经营养因子与阿尔茨海默病的关系

脑源性神经营养因子(BDNF)是一种在成年哺乳类大脑分布广泛的小二聚体蛋白,结构类似神经生长因子.BDNF可促进与阿尔茨海默病(AD)有关神经元(包括海马和皮质神经元,隔核和基底前脑胆碱能神经元和黑质多巴胺神经元)的存活.总结BDNF的分子和细胞生物学方面的工作,包括细胞内的运输,合成和释放的调节,突触水平的变化,对近年有关BDNF及其受体(TrkB)与AD神经病理生理学关系的研究进展作一综述.     

Different apoptotic reactions of dorsal root ganglion A- and B-cells after sciatic nerve axotomy: effect of p75 neurotrophin receptor

Background By unbiased stereological methods, we have observed preferential dorsal root ganglion （DRG） B-cell loss in rodents after nerve injury, and caspase-3 activation and cell loss were related to the present of p75 receptor （p75^NTR）. We hypothesized that DRG B-cells express higher levels of pro-apoptotic proteins as compared to A-cells and the expressions of pro-apoptotic proteins can be reduced by depletion of p75^NTR. This study aimed to identify the p75NTR involved apoptotic pathway in DRG neurons after nerve injury. Methods The p75NTR knockout mice （p75-/-） and wildtype Balb/C mice （p75＋/＋） were used in this study. The expressions of pro-apoptotic proteins, c-Jun-N-terminal kinase （JNK）, c-jun and p38 in DRG were evaluated with immunohistochemistry 2 and 7 days following unilateral sciatic nerve transection. In addition, extra-cellular related kinase （ERK）, a transducer of survival signals, was also tested with immunohistochemistry and Western blotting methods in these animal models. Results Phosphorylated JNK （P-JNK） and phosphorylated p38 （P-p38） were mainly located in small B-cells, whereas phosphorylated c-jun （P-c-jun） was located in both A- and B-cells. Phosphorylated ERK （P-ERK） was located in both B-cells and satellite cells. Axotomy dramatically increased the expressions of P-JNK and P-c-jun （paired t-test）, with no influence on the expressions of P-p38 and P-ERK. Furthermore, the increase of P-JNK in p75＋/＋ mice 2 days after nerve axotomy was approximately 2.2-folds of that in p75-/- mice （P=-0.001, unpaired t-test）. Conclusion p75NTR-dependent JNK-caspase-3 pathway is involved in DRG B-cell loss after nerve injury and JNK is not the unique upstream of c-jun activation.     

p75NTR对乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR耐药及细胞周期的影响

目的 探讨神经营养因子受体(p75NTR)对乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR化疗耐药性及细胞周期的影响.方法 采用CCK-8法检测转染p75NTR及p75NTR-siRNA后乳腺癌耐药细胞系MDA-MB-231/ADR对耐药的影响;FCM检测转染p75NTR及p75NTR-siRNA的乳腺癌及耐药细胞的细胞周期分布及细胞凋亡的影响.结果 过表达p75NTR可有效增强MDA-MB-231/ADR细胞对ADM、GEM和OXA的耐药性(P<0.05);抑制p75NTR的表达可抑制MDA-MB-231/ADR细胞对ADM、GEM和OXA的耐药性(P<0.05).转染pcD-NA3.1-p75NTR后,MDA-MB-231/ADR-p75NTR细胞的细胞周期阻滞于G0/G1期,G0/G1期细胞增至(61.12±1.89)%,S期细胞减至(32.76±0.23)%,凋亡率减至(16.83±1.29)%,差异有统计学意义(P<0.05);转染p75NTR-siRNA后MDA-MB-231/ADR-p75NTRsi1细胞的细胞周期于G0/G1期减至(39.26±1.31)%,S期细胞增至(52.88±1.74)%,凋亡率增至(21.49±1.41)%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 过表达p75NTR能够使乳腺癌耐药细胞MDA-MB-231/ADR细胞周期阻滞于G0/G1期,促进细胞存活,抑制其凋亡,降低MDA-MB-231/ADR细胞对化疗药物的敏感性而促进其多药耐药性.     

慢性脑低灌注性血管性认知损害患者血清p75神经营养素受体细胞外段水平及其与炎性因子的关系

目的 检测慢性脑低灌注性血管性认知损害（CCH-VCI）患者血清p75神经营养素受体细胞外段（p75NTR-ECD）水平,并探讨其与肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6的关系。方法 选择海军军医大学（第二军医大学）长海医院2018年8月至12月收治的34例CCH-VCI患者,以及同期相同年龄段的36名中老年健康人和34例缺血性脑卒中患者作为研究对象。采用酶联免疫吸附试验测定3组研究对象的血清p75NTR-ECD、TNF-α、IL-1β、IL-6水平并进行组间比较。采用Spearman相关分析研究CCH-VCI患者血清p75NTR-ECD水平与TNF-α、IL-1β、IL-6水平的相关性。结果 CCH-VCI组血清p75NTR-ECD水平高于健康对照组和缺血性脑卒中组[（544.36（440.88,628.50）pg/mL vs 276.49（262.59,313.87）pg/mL、366.87（337.09,450.43）pg/mL],差异均有统计学意义（U=87.500、335.500,P均<0.05）。CCH-VCI组患者血清TNF-α、IL-1β、IL-6水平分别为196.02（141.20,280.35）pg/mL、68.23（60.79,91.94）pg/mL、51.04（40.24,65.26）pg/mL,缺血性脑卒中组分别为218.67（143.76,281.28）pg/mL、76.87（59.10,99.91）pg/mL、64.45（43.13,86.76）pg/mL,均分别高于健康对照组[分别为73.71（56.94,79.81）pg/mL、42.98（34.52,51.34）pg/mL、14.97（11.76,21.19）pg/mL],差异均有统计学意义（U=31.000、4.000,106.000、132.000,48.000、13.000;P均<0.05）。CCH-VCI患者血清p75NTR-ECD水平与TNF-α水平存在相关性（r=0.391,P=0.022）,但与IL-1β和IL-6水平均无明显相关性（r=0.032、0.164,P=0.855、0.355）。结论 慢性脑低灌注损伤后p75NTR可能与TNF-α等炎性因子有关,并共同参与了CCH-VCI的发病。     

重组人p75NTR169-Fc抗酶裂嵌合体在大肠杆菌中的表达、纯化及活性鉴定

目的制备重组人p75NTR169-Fc融合蛋白,其是一种潜在的抗凋亡和止痛的候选药物。方法 (1)应用PCR法,以本组保存的pUC12-NGFR和人肝cDNA为模板,扩增出p75NTR(1～169氨基酸),IgG Fc(216～433氨基酸)基因顺序,再按照重叠PCR的原则和方法,将两组扩增产物混合变性、复性后再扩增,得到"p75NTR(1～169)-IgG Fc(216～433)"融合基因,缩写为p75NTR169-Fc。(2)应用DNA重组技术将p75NTR169-Fc融合DNA片段经NcoⅠ、EcoRⅠ酶切插入到pET28a(+)原核表达载体中,获得pET28a-p75NTR169-Fc重组质粒。(3)利用pET28a(+)/BL21(DE3)原核表达系统诱导表达目的蛋白,经protein A亲和层析纯化,得到纯度约96%的p75NTR169-Fc重组蛋白质。(4)用MTT方法,以PC12细胞检验不同剂量重组蛋白抗β-淀粉样肽(Aβ25～35)细胞毒的作用。结果 (1)成功构建了pET28a-p75NTR169-Fc/BL21(DE3)表达系统,其高效表达可溶性重组蛋白。实验表明:该重组蛋白p75NTR169-Fc稳定性好,不再被蛋白酶降解,为单一条带。亲和层析纯化后,分子质量均一。(2)p75NTR169-Fc与p75NTR竞争结合Aβ(25～35),拮抗Aβ(25～35)对PC12的细胞毒作用。结论重组人抗酶裂嵌合体蛋白p75NTR169-Fc具有生物学活性,在临床治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)上具有应用前景,系针对神经退行性疾病的新的候选药物。     

Cotransfection of TrkA and p75NTR in neuroblastoma cell line (IMR-32) promotes differentiation and apoptosis

Objective To assess the effects of both TrkA and p75NTR on nerve growth factor (NGF)-induced differentiation of neuroblastoma cells.Methods Retroviral vectors were constructed to express the high affinity NGF receptor (TrkA) and low affinity NGF receptor ( p75^NTR). Neuroblastoma cell line IMR-32 was transfected by the vectors expressing either TrkA or p75^NTR or both by using lipofectmine^TM reagent separately or cotransfected at the same time. Southern blot, Northern blot, RT-PCR and flow cytometry were used to determine the success of the transfection. MTT technique was to monitor the cell proliferation. Colony formation in soft agar and tumor forming assay in nude mice were used to test the biological characteristics of the tumor cells. Terminal-deoxynucleotidytransferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)assay was used to test the apoptosis of the tumor cells.Results Stable transformant cell lines expressing TrkA, p75^NTR or both genes were established.Studies on these transformant cell lines have shown different NGF responses. The p75^NTR transfection only resulted in the mild differentiation response, and transfection of TrkA gene caused remarkable neurite extension, up-regulation of neurofilament and decreased expression of N-myc oncogene after NGF treatment. The cotransfection of the two genes into this cell line resulted in the more rapid and more apparent morphological changes than single TrkA transfected cells after NGF treatment. The cotransfected cells underwent apoptosis after withdrawal of NGF.Conclusions The results indicate that coexpression of both low-and high-affinity NGF receptors are not only more efficient in restoration of NGF-induced differentiation pathway, but also be able to activate the pro-apoptotic activity of low-affinity NGF receptor and make the tumor cells become NGF-dependent and irreversibly differentiated.     

坐骨神经损伤后脊神经节A细胞和B细胞的不同凋亡反应：p75神经营养因子受体的作用

研究背景： 采用公平的体视学方法,我们已发现：神经损伤后,脊神经节B细胞优先丢失;而且,脊神经节细胞Caspase-3的活化和脊神经节B细胞的丢失都与p75神经营养因子受体（p75NTR) 有关。 方法：为明确神经损伤后 p75NTR 参与的脊神经节细胞的凋亡通路,我们使用了 p75NTR 基因剔除鼠和其野生鼠。采用免疫组化的方法,我们观察了单侧坐骨神经损伤后的第二天和第七天,前凋亡蛋白,包括：JNK、c-jun和p38在脊神经节细胞的表达。另外,采用免疫组化和western blot的方法,我们同时观察了生存信使,ERK, 在脊神经节细胞的表达。 结果： 磷酸化的JNK和p38主要由B细胞表达,而A细胞和B细胞均表达磷酸化 的c-jun。磷酸化的ERK见于B细胞和卫星细胞。神经损伤后,磷酸化的JNK和c-jun阳性细胞数显著增多,而磷酸化p-38和ERK的表达没有明显变化。而且,神经损伤后第二天,野生鼠的磷酸化JNK阳性细胞百分率是p75NTR 基因剔除鼠的2.2倍（p=0.001)。 结论：神经损伤后, p75NTR 依赖的JNK－caspase－3途径参与脊神经节B细胞的丢失,JNK不是c-jun的唯一激活者。     

EGb761对谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中p75NTR表达的影响

目的：观察谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中神经营养因子受体p75（p75neurotrophin receptor,p75NTR）表达水平的变化,探讨银杏叶提取物（EGb761）抗兴奋毒性神经保护作用与p75NTR的相关性.方法：建立谷氨酸诱导的新生大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,观察25200mg/L剂量下EGb761的神经保护作用;RT-PCR,Western Blot及细胞免疫荧光染色方法检测p75NTR的表达变化.结果：100mg/LEGb761预处理给药的神经保护效果最明显;谷氨酸刺激后,p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较对照组明显增高（P〈0.01）;EGb761本身对p75NTR表达无影响,而EGb761预处理组p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较谷氨酸组均显著降低（P〈0.05）.结论：p75NTR在谷氨酸诱导兴奋毒性神经损伤中起着重要作用,EGb761抗兴奋毒性神经保护作用可能与抑制p75NTR的表达有关.     

Mage-D1与活化后的p75神经营养因子受体结合可正向调节大鼠外胚间充质干细胞的矿化

目的 检测Mage-D1与活化后p75NTR的结合及对外胚间充质干细胞（EMSCs）矿化的调控。方法 取孕19.5 d SD大鼠牙胚,组织贴壁法获取EMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原。设置实验分组：空白对照组（NC）,100 ng/mL NGF刺激组（100 ng/mL NGF）、慢病毒干扰Mage-D1组（SH-Mage-D1）。邻位连接技术检测Mage-D1与经NGF活化后p75NTR结合的变化,并比较不同分组间的结合强度差异。茜素红与ALP染色观察染色,RT-PCR与Western blot检测ALP、Runx2、OCN、BSP、OPN、Col1、Msx1及Dlx1的表达水平。结果 组织块贴壁法获得孕19.5 dEMSCs,流式细胞术检测细胞表面抗原结果为CD44、CD90、CD29、CD146,CD105高表达,CD45低表达;邻位连接法检测Mage-D1与经NGF活化后p75NTR的结合随着时间的延长而增多,且实验组与对照组相比结合强度差异具有统计学意义（P<0.05）;茜素红与ALP染色结果显示矿化结节与碱性磷酸酶与强度变化一致;RT-PCR与Western blot检测ALP、Runx2、OCN、BSP、OPN、Col1、Msx1及Dlx1在100 ng/mL NGF组最高（P<0.05）。结论 Mage-D1在外胚层间充质细胞中可与经NGF活化后的p75NTR直接结合,且二者的结合对EMSCs的矿化有正向调节作用。     

肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2、p75~（NTR）在非小细胞肺癌组织的表达及其生物学意义

目的探讨肿瘤干细胞标志物CD133、ABCG2及p75NTR在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的表达及其生物学意义。方法采用免疫组织化学方法,检测44例NSCLC组织、17例癌旁组织、17例非肿瘤组织中的CD133、ABCG2及p75NTR蛋白的表达并对结果进行分析。结果 （1）CD133、ABCG2及p75NTR蛋白在44例NSCLC组织中的阳性表达率分别为68.2%（30/44）、31.8%（14/44）、47.7%（21/44）,在17例癌旁组织中分别为5.9%（1/17）、0（0/17）、11.8%（2/17）,在17例非肿瘤组织中分别为47.1%（8/17）、11.8%（2/17）、17.6%（3/17）,差异均有统计学意义（P〈0.05）;其中NSCLC组织中p75NTR蛋白的阳性表达与肿瘤的远处转移密切相关（P〈0.05）;（2）随肿瘤恶性度的增加,CD133蛋白的阳性表达率也明显增加,差异接近统计学意义（P=0.07）。结论 NSCLC组织中CD133、ABCG2及p75NTR的表达明显高于癌旁及非肿瘤组织,或许这三者与NSCLC恶性演进有关;肿瘤干细胞标记物CD133的表达与NSCLC的分化密切相关,CD133蛋白或许能成为NSCLC的肿瘤干细胞标记物。