无细胞真皮基质的制备及应用

无细胞真皮基质是指异体或异种皮经一系列处理后 ,保留原有胶原纤维成分及基本组织结构的一种永久性真皮替代物。其制作方法有胰酶消化法 ,Dispase- Triton X- 10 0法 ,高渗盐溶液 - SDS法 ,平衡盐浸泡法等。与其他真皮基质相比 ,其具有来源广泛、低免疫原性、生物亲和性高、有利于黑色素细胞增生等特点。其既可用于创面修复 ,又可用作软组织的替代物。广泛应用于烧伤、整形、口腔、神经外科、眼科、耳鼻喉科等学科领域     

无细胞真皮基质的制备及应用

无细胞真皮基质是指异体或异种皮经一系列处理后，保留原有胶原纤维成分及基本组织结构的一种永久性真皮替代物，其制作方法有互酶消化法，Dispase-TritonX-100法，高渗盐溶液-SDS法，平衡盐浸泡法等，与其他真皮基质相比，其具有来源广泛，低免疫原性，生物亲和性高，有利于黑色素细胞增生等特点，其既可用于创面修复，又可用作软组织的替代物，广泛应用于烧伤，整形，口腔，神经外科，眼科，耳鼻喉科等学科领域。     

成纤维细胞-无细胞真皮替代物的生物学活性及移植实验

目的 研究含成纤维细胞的无细胞真皮替代物的生物学活性及真皮支架作用。方法 将成纤维细胞种植于无细胞真皮表面培养,形成活性真皮替代物。采用ELISA法和RIA法测定培养上清中IL－6、IL－8、TGF－β1及细胞外基质层粘连蛋白、透明质酸的分泌。并将真皮替代物植入BALB／c-nu小鼠（裸鼠）全层皮肤缺损创面,观察血管化速度、创面收缩率。结果 成纤维细胞种植于无细胞真皮表面生长良好,可形成单层细胞膜片,并分泌多种细胞因子和细胞外基质成份。活性真皮替代物植入创面后,与单纯无细胞真皮移植相比,血管化速度加快,收缩率减小。结论 无细胞真皮上种植成纤维细胞后具有较强的生物学活性,可作为较好的真皮替代物。     

以活性复合真皮基质为载体构建组织工程皮肤的研究

目的 构建含活性真皮基质的组织工程皮肤. 方法将人成纤维细胞(Fb)与Ⅰ型牛胶原混合接种于猪脱细胞真皮基质(PADM)的表面,构建活性真皮替代物.其上接种人表皮细胞进行气-液面培养,获得组织工程皮肤,进行组织学观察. 结果 Fb在胶原内结构完整,与PADM形成复合真皮基质.所构建的组织工程皮肤表皮层结构与人正常皮肤相似,具备基底层、棘层、颗粒层和角质层,细胞之间有桥粒连接,细胞分化良好. 结论 Fb-胶原-PADM真皮替代物可作为较好的构建组织工程皮肤的真皮支架.     

无细胞真皮基质的研制

目前治疗大面积深度烧伤的方法是刃厚自体皮移植,后者因缺乏足够的真皮成分,常常造成瘢痕和挛缩.因此,研制一种含有足够量真皮成分的永久性皮肤替代物将具有很大的临床意义.将异体(或异种)皮用高渗盐溶液处理以去除表皮,去污剂处理以去除真皮中细胞成分,得到一种无细胞真皮基质.经光镜和透射电镜观察证实,它去除了表皮全层和真皮中所有细胞成分,保留了完整的基底膜复合物,胶原束结构和排列保持正常,弹力纤维亦正常存在.与AlloDerm相比,无细胞真皮基质具有以下主要优点:①由于延长去污剂的作用时间,真皮中残留的细胞成分被完全清除,因此制得的真皮基质更为理想;②AlloDerm用同种异体皮制备,而无细胞真皮基质除用同种异体皮外,亦可用异种猪皮制备,因此来源广泛,价格低廉.     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的 探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间.方法 取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1 cm×1 cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8 h取材一次,分别取材15次.取材标本行大体和组织学观察.结果 肉眼观察十二烷基硫酸钠作用8 h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示0.25%十二烷基硫酸钠在作用40 h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质.制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120 h也无法形成真正的脱细胞真皮基质.结论 十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40 h.与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间.     

无细胞真皮基质的研制

目前治疗大面积深度烧伤的方法是刃厚自体皮移植 ,后者因缺乏足够的真皮成分 ,常常造成瘢痕和挛缩。因此 ,研制一种含有足够量真皮成分的永久性皮肤替代物将具有很大的临床意义。将异体 (或异种 )皮用高渗盐溶液处理以去除表皮 ,去污剂处理以去除真皮中细胞成分 ,得到一种无细胞真皮基质。经光镜和透射电镜观察证实 ,它去除了表皮全层和真皮中所有细胞成分 ,保留了完整的基底膜复合物 ,胶原束结构和排列保持正常 ,弹力纤维亦正常存在。与AlloDerm相比 ,无细胞真皮基质具有以下主要优点 :①由于延长去污剂的作用时间 ,真皮中残留的细胞成分被完全清除 ,因此制得的真皮基质更为理想 ;②AlloDerm用同种异体皮制备 ,而无细胞真皮基质除用同种异体皮外 ,亦可用异种猪皮制备 ,因此来源广泛 ,价格低廉     

异种(猪)脱细胞真皮基质在瘢痕整形中的应用

目的 探讨异种(猪)脱细胞真皮基质在切除瘢痕后做为真皮替代物的临床作用.方法 采用DR脱细胞猪皮和大张自体刃厚皮复合移植(一步法和二步法)覆盖切除瘢痕后的创面.结果 对47例瘢痕患者中的22例进行异种(猪)脱细胞真皮基质移植7 d左右,再植大张自体刃厚皮的二步法复合移植,其中在脂肪层上复合移植成活率(88.3±3.7)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(89.7±3.4)%.25例采用异种(猪)脱细胞真皮基质+自体刃厚皮同时复合移植的一步法,在脂肪层上复合移植成活率(92.5±4.1)%,在深筋膜层上复合移植成活率为(93.2±5.2)%.复合移植成活后,创面颜包淡红,表面平坦光滑,柔韧性好.最长随访时间90 d,复合区皮肤近似正常,皮肤结实、光滑、平整,可捏起,仅见移植边缘有少许轻微瘢痕增生,功能好.结论 一步法复合移植比二步法成活率高,且脂肪层上的复合移植皮比深筋膜上的复合移植皮肤弹性较好,也更柔软、丰满,两者在功能上则无区别.异种(猪)脱细胞真皮基质是覆盖瘢痕切除后创面的较理想的真皮替代物.     

利用不同支架材料构建人工真皮的研究

目的 探讨脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶的不同支架材料上构建人工真皮的可行性。方法 采用酶消化法分离幼儿包皮成纤维细胞，并进行传代培养；将第3代成纤维细胞种植于三种不同支架上，14天后利用HE染色、透射电镜和扫描电镜对构建的人工真皮结构进行鉴定。结果 ①酶消化法得到皮肤成纤维细胞，可在含有10％小牛血清的DMEM中传代培养；②成纤维细胞在三种不同支架上形成单层细胞，并可向胶原膜和胶原凝胶内部生长；③成纤维细胞在胶原膜和脱细胞基质内增殖不如胶原凝胶内活跃，但人工真皮收缩不明显，而胶原凝胶构建的人工真皮收缩明显。结论 利用脱细胞基质、胶原蛋白基质网架、胶原凝胶支架材料构建的人工真皮具有较好的组织结构，是一种较理想的皮肤替代物，可作为移植物进行深入研究。     

真皮替代物移植后的血管化过程及组织学变化的实验研究

目的了解不同种类真皮替代物移植后的血管化过程及组织学变化。方法将21只SD大鼠根据其皮下埋植不同的真皮替代物分为猪脱细胞真皮基质(sADM)组、人脱细胞真皮基质(hADM)组及人工真皮(Integra)组。于埋植后2、3、4、7、10、14、21、30、60、90、120、150、180d行移植物大体观察,采用免疫组织化学法观察移植物的血管化过程及组织学变化。结果大体观察术后各组大鼠创口周围皮肤无明显红肿及炎性反应,切口愈合良好,移植物与创面接触紧密。90d后各组移植物不易从体表触及。180d时,部分移植物面积缩小、厚度变薄甚至难以辨认。组织学观察移植术后2d起可见成纤维细胞、中性粒细胞、淋巴细胞等侵入移植物内,3d时与受床组织连接处可见长入的新生毛细血管芽。30—60d,移植物内形成丰富的血管网。150d后近似正常真皮结构。180d后部分移植物有不同程度吸收退化。结论3种真皮替代物移植后均能很快建立与受床组织的血液循环,并长时间存留于创面,但有一定程度的吸收退化。     

脱细胞真皮基质的研究进展

烧伤或皮肤组织缺损的创面修复多采用自体中厚或全厚皮片移植 ,供皮区损伤较重易形成疤痕 ,影响外观及功能。而早期自体薄厚皮片 (autologeus thin split- thickness skin,auto- TTS)或刃厚皮移植 ,则往往由于皮片薄、缺少有效的真皮成分和引导性组织再生的作用 ,皮片成活后常形成不同程度的瘢痕增生和挛缩畸形 ;在关节等功能部位更易造成功能障碍 ,影响患者生活质量。近年来脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)作为一种新型真皮替代物不但受到烧伤与整形外科界的重视 ,也引起了整个美容医学的兴趣。本文对其综述如下 :1　 ADM…     

皮肤组织工程研究进展

组织工程学是近年来发展起来的一门新兴学科 ,现就皮肤组织工程的研究作一简要概述 :早在 195 1年 ,就有学者建议用实验室生长的皮肤来治疗烧伤病人[1] ,但由于表皮细胞培养困难 ,此方法未能实施。直到 1975年Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ和Ｇｒｅｅｎ[2 ] 攻克了体外大规模培养表皮细胞的难题 ,皮肤替代物的研究和制作才日渐广泛。皮肤替代物可分为 :表皮替代物、真皮替代物和复合皮肤替代物。一、表皮替代物1.表皮细胞悬液 :Ｂｉｌｌｉｎｇｈａｍ等[3 ] 首先用培养的表皮细胞悬液治疗大面积全厚皮肤缺损 ,但该方法存在两大难题 :一是无法确定转移到…     

成纤维细胞促进真皮替代物血管化的作用机制

目的 探讨成纤维细胞促进真皮替代物移植后血管化的作用机制。方法 将成纤维细胞种植于无细胞真皮表面培养，形成活性真皮替代物，采用置USA法测定培养上清中白介素—8(IL—8)和转化生长因子—β1(TGF—β1)的含量，RT—PCR法检测成纤维细胞中酸、碱性成纤维细胞生长因子(aFGF、bFGF)mRNA的表达量。将含成纤维细胞的真皮替代物植入BALB/C小鼠全层皮肤缺损创面，采用原位杂交的方法观察成纤维细胞的转归。结果 成纤维细胞种植于无细胞真皮表面生长良好，可形成单层细脑膜片，并分泌IL—8(192．3土15．9)pg／m1和TGF—β1(1．105土0．051)pg／m1，表达aFGF、bFGF。植入创面后3周，成纤维细胞仍成活并生长、增殖。结论 成纤维细胞分泌多种与血管形成有关的活性肽，移植后继续生长、增殖，可能对真皮替代物的血管化具有重要作用。     

十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的实验研究

目的探讨十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度及作用时间。方法取临床截肢患者废弃的皮肤,分成90块,随机分成6组,每块约1cm×1cm,分别置于0.1%、0.25%、0.5%、1.0%、2.5%、5.0%十二烷基硫酸钠溶液中脱细胞,每隔8h取材一次,分别取材15次。取材标本行大体和组织学观察。结果肉眼观察:十二烷基硫酸钠作用8h后,0.25%组可将表皮与真皮完整分离;光镜检查显示:0.25%十二烷基硫酸钠在作用40h后,能将真皮内的细胞及细胞碎片脱净,形成脱细胞真皮基质。制备的脱细胞真皮基质,主要由胶原纤维网架构成,其他组作用120h也无法形成真正的脱细胞真皮基质。结论十二烷基硫酸钠制备脱细胞真皮基质的最佳浓度为0.25%,最佳时间为40h。与其他方法比较,具有简便、快捷、有效、价廉、宜推广等特点,可为临床急诊的修复争取宝贵的时间。     

经VEGF165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物的构建及其对创面愈合作用的实验研究

目的:构建经血管内皮生长因子(VEGF)165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,观察其在促进大鼠深度创面愈合过程中的作用.方法:采用分子生物学方法将扩增的VEGF165基因克隆入真核表达载体pcDNA31(+),在脂质体介导下将重组质粒转染至经传代培养的鼠成纤维细胞(NIH/3T3),再将转染后的NIH/3T3接种于猪脱细胞真皮表面得到成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物;而后将此替代物与自体薄皮片移植于SD大鼠深度创面(实验组),对动物创面愈合情况进行观察.单纯脱细胞异种真皮替代物移植大鼠作为对照组.结果:构建的真核表达载体pcDNA31(+)-VEGF165可成功转染至鼠成纤维细胞,移植后实验组皮片成活率(9376±340)%,对照组皮片成活率(8501±174)%,两者差异有显著性(t=8873,P＜001).组织学观察显示,移植第4周实验组毛细血管数量明显多于对照组.结论:成功构建了经VEGF165转染的成纤维细胞-脱细胞异种真皮替代物,且其具有明显的促进动物创面愈合作用.     

聚二元共聚物多孔支架活性真皮替代物的体外构建

活性皮肤替代物是指含有活细胞成分的皮肤组织工程产品 ,是皮肤组织工程研究的热点。由于人工合成的生物可降解材料具有生物相容性、加工性能良好以及降解速度可控等优点 ,已被广泛用作细胞支架。然而 ,在多孔的人工材料中种植细胞还存在很多问题。本文应用成纤维细胞胶原凝胶 (fibroblastspopulatedcollagenlattice ,FPCL)的制作方法 ,成功地将人成纤维细胞种植于聚二元共聚物 (乙交酯 /丙交酯polylacticacid/ polyglycolicacidcopolymers ,PLGA)多孔真皮支架中 ,体外培养出一种新型的活性真皮替代物。材　料　与　方　法1.胶原和细胞 …     

海绵状胶原膜真皮替代物的研制及实验研究

目的　探讨海绵状胶原膜作为真皮替代物的可行性。　方法　提取猪皮胶原 ,与 6 硫酸软骨素混合沉淀后冻干成膜。将胶原膜包埋于SD大鼠皮下 ,定期取材检测其组织相容性、血管化能力及降解速度。　结果　制备的胶原膜具有密集的相互贯通的微孔结构 ,且具有一定的强度与韧性 ,适于手术操作。SD大鼠皮下埋藏试验表明组织相容性较好 ,无明显急性炎症反应 ,血管化能力较强 ,降解速度慢 ,真皮构架稳定性好。　结论　海绵状胶原膜可作为真皮替代物移植于创面。     

无细胞异种真皮基质的研究进展

预先从异种真皮内除去诱导免疫排异的上皮细胞和内皮细胞成分 ,得到保持真皮原有结构、以真皮胶原为主体的低抗原性真皮替代物 (DS),可减少或消除异种真皮移植后的排异反应。这一设想首先在异体无细胞真皮基质 (allo ADM)动物实验和临床应用方面得到证实[1,2 ] 。近年来 ,为进一步拓宽真皮替代物来源、摆脱异体皮肤存在的不足因素 ,人们再一次把目光转向无细胞异种真皮基质的研究应用。但物种间不仅有细胞 (特别是血管内皮细胞 )和组织蛋白等抗原差异 ,且人类还存在“天然”抗体等 ,这些是异种移植物难以应用于临床的关键因素。用胰蛋白酶或dispase与tritonX 10 0处理新鲜小猪皮 ,制成充当复合皮 (compositeskin,CS)真皮替代物的无细胞异种真皮基质 (xeno ADM),使其抗原性降到最低 ,可减缓或消除宿主对移植物产生的延迟型异种排斥反应[3 ] 。目前 ,国外对xeno ADM临床应用仍持审慎的态度 ,这是由于实验结果显示其有广泛的炎症反应导致的创面愈合不良[4,5] 。国内虽已过渡到临床应用 ,但移植效果颇有争议 ,且多数报告缺乏审慎的免疫学和病理学的检测依据。本文就xeno AD...     

猪脱细胞真皮基质中导入透明质酸后对真皮降解率的影响

寻找皮肤替代物覆盖创面是救治严重烧(创)伤患者的棘手问题.目前的皮肤替代物包括合成材料及天然真皮材料,均存在一定的限制性.异种皮价格低廉来源广泛,若能消除抗原性则可成为理想的皮肤替代物.采用反复冻融法制备的异种ADM抗原性低,真皮胶原结构完整,无细胞毒性,但是由于去除了真皮中的ECM,使胶原纤维失去了原有的环境和保护,对胶原酶等的耐受性降低.为进一步提高异种ADM对胶原酶的耐受性,本研究采用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDC)交联方法在猪ADM中导入透明质酸(HA),观察其性状是否更接近天然真皮.     

猪脱细胞真皮基质中导入透明质酸后对真皮降解率的影响

寻找皮肤替代物覆盖创面是救治严重烧(创)伤患者的棘手问题.目前的皮肤替代物包括合成材料及天然真皮材料,均存在一定的限制性.异种皮价格低廉来源广泛,若能消除抗原性则可成为理想的皮肤替代物.采用反复冻融法制备的异种ADM抗原性低,真皮胶原结构完整,无细胞毒性,但是由于去除了真皮中的ECM,使胶原纤维失去了原有的环境和保护,对胶原酶等的耐受性降低.为进一步提高异种ADM对胶原酶的耐受性,本研究采用1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺(EDC)交联方法在猪ADM中导入透明质酸(HA),观察其性状是否更接近天然真皮.