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荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒 总被引:270,自引:0,他引:270
目的 用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病(HBV)的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了HBVFQ-PCR诊断试剂盒,以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量PCR方法,检测了532份临床血清标本,结果 经FQ-PCR检测,158份HBV的s抗原,e抗原,c抗体(HBsAg,HBeAg,HBcAb)都阳性的标本,其血清标本HB 相似文献
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246份母—脐血配对HBV检测结果与分析 总被引:4,自引:0,他引:4
我们收集了 2 4 6份母 脐配对血进行HBV血清标志物及DNA定量检测 ,结果报告如下。1 材料与方法1 1 标本来源 2 4 6份母 脐配对血均来自 1999年 11月至 2 0 0 0年 6月本院产科住院产妇静脉血及所产新生儿脐带血 ,分离血清置 - 2 0℃冰箱内保存。对HBsAg阳性的母血 ,无论其对应脐血HBV血清标志物结果怎样 ,均进一步用荧光定量PCR(FQ PCR)检测HBV DNA。1 2 试剂与方法 HBV M检测使用科华公司试剂盒按说明书操作。FQ HBVDNA试剂购自复星公司。用PE5 70 0荧光定量扩增仪 ,结果自动测出。1 3 结… 相似文献
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荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
本文采用荧光定量PCR法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行HBV DNA含量测定 ,探讨HBV DNA含量与肝病变发展的关系。1 材料和方法1 1 材料 标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量HBV DNA试剂盒由匹基公司提供。仪器∶PE5 70 0PCR仪。1 2 方法 HBV DNA定量分析采用荧光定量PCR法。按操作说明书进行。1 3 统计学方法 各组HBV DNA含量均数比较采用t检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2 结果2 1 HBV DNA、FQ PCR标准曲线 HBV … 相似文献
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荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒 总被引:29,自引:1,他引:28
目的用荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了HBVFQPCR诊断试剂盒,以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法,检测了532份临床血清标本。结果经FQPCR检测,158份HBV的s抗原、e抗原、c抗体(HBsAg、HBeAg、HBcAb)都阳性的标本,其血清标本HBVDNA也全部阳性,平均HBVDNA拷贝数为1.1×108/ml;98例HBsAg、HBeAb、HBcAb都阳性的标本,其阳性率为73%(71例),平均拷贝数为8.6×105/ml,而常规PCR只有33%的阳性率;67例HBsAb、HBeAb、HBcAb都阳性标本的平均拷贝数为2.3×105/ml。结论能够避免PCR后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。FQPCR可以检测HBV的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。 相似文献
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乙肝病毒血清标志物 (HBV -M)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (HBV)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测HBVDNA是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定HBV感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量PCR(FQ -PCR)克服了常规PCR假阳性率高的缺点 ,实现对HBVDNA的定量检测 ,可为乙型肝炎提供… 相似文献
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丁友法 《上海医学检验杂志》2002,17(3):179-180
乙型肝炎病毒 (HBV)DNA定量检测已越来越受到临床的重视[1~3] 。我们采用聚合酶链反应(PCR)杂交定量检测试剂测定乙型肝炎 (乙肝 )患者血清HBVDNA含量 ,并且对检测试剂作初步评价和临床应用观察 ,现报道如下。材料和方法一、检测对象乙型肝炎患者 5 3 8例 ,男 40 2例 ,女 1 3 6例 ,平均年龄 3 5岁。二、HBVPCR杂交酶联定量检测1 .试剂 由上海浩源生物科技有限公司提供 ,按说明书操作。2 .仪器 BIO -RAD5 5 0型酶标仪 ,MJ - 1 0 0热循环仪。结果一、扩增效率由于PCR反应的定量结果与PCR平均效率直接有… 相似文献
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PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用 总被引:5,自引:1,他引:5
血浆HBV核酸模板提取质量对HBVDNA定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了PEG沉淀提取制备HBV核酸模板方法 ,并用于HBVDNA荧光定量PCR检测。1 材料与方法1.1 标本 本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用PCR专用管收集血液 ,EDTA抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2 试剂 沉淀剂由PEG 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由NP40配制而成 ;HBVDNA荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Roche公司。1.3 PEG沉淀提取法 取血浆样本 10 0 μl加入等量沉淀剂 ,混… 相似文献
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PCR定量技术作为基因诊断的主要方法 ,对疾病诊断、预后及药物疗效的评估起着十分重要的作用。我们应用荧光定量PCR技术对 144 0例各型乙肝患者进行了HBVDNA的定量检测 ,现将结果报告如下。1 材料和方法1.1 一般资料病例选自 1999年 11月至 2 0 0 1年 11月我院门 相似文献
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斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义 总被引:2,自引:0,他引:2
HBV DNA是一种十分重要的HBV感染标志 ,是直接反映HBV的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定HBV感染的诊断有重要价值[1] 。目前HBV感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量PCR逐渐应用于临床检测HBV DNA。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量PCR两种方法同时进行血清HBV DNA检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1 材料和方法1.1 研究对象 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学… 相似文献
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聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 建立聚合酶链反应(PCR)-凝胶呈像(geldocumentationsystemGDS)技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒(HBV)核酸DNA。方法 用凝胶呈像技术对血清HBV-DNAPCR扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量PCR(QPCR)方法检测HBV-DNA。结果 通过38份血清标本的检测,发现 相似文献
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程宗浩 《上海医学检验杂志》1996,(3)
临床血清标本的HBV-DNAPCR检测指标与若干HBV免疫学指标关系程宗浩上海青浦县卫校我们应用上海复华公司的PCR检测试剂和上海科华公司ELISA检测试剂分别检测了347份血清标本的HBV-DNA和HBsAg、HBeAg指标。其中HBsAg阴性30... 相似文献
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杜国有 《国际检验医学杂志》2001,(4)
为了评价健康人群与肝病病人之间血清TTVDNA水平的差异 ,本文建立实时PCR检测 (RealtimedetectionPCR ,RTD PCR)系统对感染HCV的病人和感染TTV的志愿献血员(BDS)中的血清TTVDNA水平进行定量 ,并判定TTV数量与肝损害严重性之间的关系。作者分析 78份感染HCV而HBSAg为阴性的病人血清样本 (63份血清ALT升高 ,1 5份正常 )。对照组为 70份BDS 血样 ,其TTV为阳性而HIV、HBV及HCV为阴性 ,ALT正常。所有样本贮存于 - 80℃备测。制备 2对引物和探针设置于 5’未… 相似文献
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PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较 总被引:4,自引:0,他引:4
本文对目前部分市售的HBVPCR试剂进行了灵敏度和检测率的测定,并在检测HBV低水平感染中,用PCR和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的HBV-DNA最低检测浓度从0.1fg到1pg不等,同一公司不同批号的HBV-DNA最低检测浓度也从100fg到100ag不同,差达103~104倍。PCR和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为HBsAg(+)HBeAg(-)抗HBe(-)组:PCR70%,斑点杂交46.4%;HBsAg(+)HBeAg(-)抗HBs(+)组:PCR35.7%,斑点杂交2.9%;HBsAg(-)抗HBe(+)抗HBs(+)/HBc(+)组:PCR16.6%,斑点杂交3.3%。三组检测率均P<0.01。因此,目前市售的HBVPCR试剂必须标化,PCR更适合于检测HBV低水平的感染 相似文献
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乙肝患者血清HBV DNA检出率分析 总被引:7,自引:0,他引:7
探讨PCR技术测定HBV DNA的临床应用价值。用PCR法与ELISA法测定乙国清标志物。结果表明HBV DNA在乙肝患者血清平均检出率54.8%。人为HBV DNA的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。 相似文献
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我们采用PCR酶免定量检测法(PCR通用捕集法)检测乙肝病毒携带者血清HBV-DNA含量,以探讨乙肝患者病毒复制与乙肝病毒标志物之间的关系及其临床意义。1 材料和方法1.1 研究对象 为2001年1月~5月来我院门诊就诊的患者,共366人,全部病例均为HBV血清学标志物阳性患者,年龄在10~67岁,其中男性223例,女性143例。另选择30例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性、肝功能正常者作为对照组。血清采用经高压灭菌的 0.5ml Ep-pendorf管分装于-20℃保存,3天内检测完毕。1.2 试剂… 相似文献
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HBV五项血清指标与HBV—DNA—PCR相关性探讨山东省青岛市胶州中心医院(青岛266300)李志斌吴衍芝本文对572例肝炎门诊和住院病人进行ELISA法检测乙型肝炎病毒(HBV)五项血清指标和应用免疫PCR技术检测HBV-DNA进行分析。1材料与... 相似文献