荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的 用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱ－ＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎疾病（ＨＢＶ）的数量和免疫指标以指导临床,方法 设计合成了ＨＢＶＦＱ－ＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本,结果 经ＦＱ－ＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原,ｅ抗原,ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ,ＨＢｅＡｇ,ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢ     

246份母—脐血配对HBV检测结果与分析

我们收集了 2 4 6份母 脐配对血进行ＨＢＶ血清标志物及ＤＮＡ定量检测 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　 2 4 6份母 脐配对血均来自 1999年 11月至 2 0 0 0年 6月本院产科住院产妇静脉血及所产新生儿脐带血 ,分离血清置 - 2 0℃冰箱内保存。对ＨＢｓＡｇ阳性的母血 ,无论其对应脐血ＨＢＶ血清标志物结果怎样 ,均进一步用荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ ＰＣＲ)检测ＨＢＶ ＤＮＡ。1 2　试剂与方法　ＨＢＶ Ｍ检测使用科华公司试剂盒按说明书操作。ＦＱ ＨＢＶＤＮＡ试剂购自复星公司。用ＰＥ5 70 0荧光定量扩增仪 ,结果自动测出。1 3　结…     

荧光定量PCR检测HBV—DNA的临床意义

本文采用荧光定量ＰＣＲ法对本院临床和门诊血清标本2 0 0份进行ＨＢＶ ＤＮＡ含量测定 ,探讨ＨＢＶ ＤＮＡ含量与肝病变发展的关系。1　材料和方法1 1　材料　标本取自确诊或怀疑乙肝的患者及无症状体检者 ,共检测 2 0 0例。试剂∶荧光定量ＨＢＶ ＤＮＡ试剂盒由匹基公司提供。仪器∶ＰＥ5 70 0ＰＣＲ仪。1 2　方法　ＨＢＶ ＤＮＡ定量分析采用荧光定量ＰＣＲ法。按操作说明书进行。1 3　统计学方法　各组ＨＢＶ ＤＮＡ含量均数比较采用ｔ检验。遇有阴性结果不参加平均值的统计。2　结果2 1　ＨＢＶ ＤＮＡ、ＦＱ ＰＣＲ标准曲线　ＨＢＶ …     

荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒

目的用荧光定量聚合酶链反应（ＦＱＰＣＲ）方法准确地定量检测血清中乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）的数量和免疫指标,以指导临床。方法设计合成了ＨＢＶＦＱＰＣＲ诊断试剂盒,以一种完全闭管式的ＰＣＲ和荧光探针杂交技术相结合所产生的实时检测定量ＰＣＲ方法,检测了５３２份临床血清标本。结果经ＦＱＰＣＲ检测,１５８份ＨＢＶ的ｓ抗原、ｅ抗原、ｃ抗体（ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢｃＡｂ）都阳性的标本,其血清标本ＨＢＶＤＮＡ也全部阳性,平均ＨＢＶＤＮＡ拷贝数为１．１×１０８／ｍｌ;９８例ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性的标本,其阳性率为７３％（７１例）,平均拷贝数为８．６×１０５／ｍｌ,而常规ＰＣＲ只有３３％的阳性率;６７例ＨＢｓＡｂ、ＨＢｅＡｂ、ＨＢｃＡｂ都阳性标本的平均拷贝数为２．３×１０５／ｍｌ。结论能够避免ＰＣＲ后处理导致的假阳性污染,并实现准确定量。ＦＱＰＣＲ可以检测ＨＢＶ的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断,治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

荧光定量PCR方法检测乙肝病毒DNA实验条件的研究

乙肝病毒血清标志物 (ＨＢＶ -Ｍ)检测是目前诊断乙型肝炎最常用的指标 ,即俗称的“两对半”。主要反映人体对乙肝病毒 (ＨＢＶ)的免疫反应状态 ,由于不同血清标志模式反映不同的临床意义 ,非传染病专业的医师很难准确掌握。因此采用简单快捷的诊断指标对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态具有重要意义。定量检测ＨＢＶＤＮＡ是衡量乙肝传染性的最精确的指标 ,是确定ＨＢＶ感染不同复制状态的非常有价值的检测手段。荧光定量ＰＣＲ(ＦＱ -ＰＣＲ)克服了常规ＰＣＲ假阳性率高的缺点 ,实现对ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,可为乙型肝炎提供…     

杂交酶联定量PCR检测HBV DNA的初步应用

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)ＤＮＡ定量检测已越来越受到临床的重视[1～3] 。我们采用聚合酶链反应(ＰＣＲ)杂交定量检测试剂测定乙型肝炎 (乙肝 )患者血清ＨＢＶＤＮＡ含量 ,并且对检测试剂作初步评价和临床应用观察 ,现报道如下。材料和方法一、检测对象乙型肝炎患者 5 3 8例 ,男 40 2例 ,女 1 3 6例 ,平均年龄 3 5岁。二、ＨＢＶＰＣＲ杂交酶联定量检测1 .试剂　由上海浩源生物科技有限公司提供 ,按说明书操作。2 .仪器　ＢＩＯ -ＲＡＤ5 5 0型酶标仪 ,ＭＪ - 1 0 0热循环仪。结果一、扩增效率由于ＰＣＲ反应的定量结果与ＰＣＲ平均效率直接有…     

PEG沉淀提取法在提取HBV DNA中的应用

血浆ＨＢＶ核酸模板提取质量对ＨＢＶＤＮＡ定量检测起重要作用。本文参照文献[1] 建立了ＰＥＧ沉淀提取制备ＨＢＶ核酸模板方法 ,并用于ＨＢＶＤＮＡ荧光定量ＰＣＲ检测。1　材料与方法1.1　标本　本院门诊及住院乙型肝炎患者 ,用ＰＣＲ专用管收集血液 ,ＥＤＴＡ抗凝 ,分离血浆 ,置 - 2 0℃保存或当日检测。1.2　试剂　沉淀剂由ＰＥＧ 6 0 0 0和氯化钠及水配制而成 ;裂解液由ＮＰ40配制而成 ;ＨＢＶＤＮＡ荧光定量试剂由本科研制 ;磁颗粒核酸提取试剂盒购自Ｒｏｃｈｅ公司。1.3　ＰＥＧ沉淀提取法　取血浆样本 10 0 μｌ加入等量沉淀剂 ,混…     

应用荧光定量PCR技术检测HBVDNA的临床意义

ＰＣＲ定量技术作为基因诊断的主要方法 ,对疾病诊断、预后及药物疗效的评估起着十分重要的作用。我们应用荧光定量ＰＣＲ技术对 144 0例各型乙肝患者进行了ＨＢＶＤＮＡ的定量检测 ,现将结果报告如下。1　材料和方法1.1　一般资料病例选自 1999年 11月至 2 0 0 1年 11月我院门     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

乙肝患者粪便中HBV－DNA的检测

乙肝患者粪便中ＨＢＶ－ＤＮＡ的检测刘家秀，刘兴祥，曹维克（江苏省淮阴卫生学校）本文采用ＰＣＲ检测１５０例乙肝患者粪便中ＨＢＶ－ＤＮＡ，以了解各型肝炎患者粪例中ＨＢＶ－ＤＮＡ的确切情况及传染性如何，并对其临床意义作了一些探讨。１材料与方法１１５０例肝炎...     

斑点杂交与荧光定量PCR检测血清HBV-DNA的临床意义

ＨＢＶ ＤＮＡ是一种十分重要的ＨＢＶ感染标志 ,是直接反映ＨＢＶ的存在、病毒活动性复制与具有传染性的标志 ,对于确定ＨＢＶ感染的诊断有重要价值[1] 。目前ＨＢＶ感染的基因诊断技术已从定性发展到定量[2 ] 。斑点杂交定性检测不能直接反映病毒负荷量。近年来 ,荧光定量ＰＣＲ逐渐应用于临床检测ＨＢＶ ＤＮＡ。通过对 10 5例慢性乙型肝炎患者用斑点杂交与荧光定量ＰＣＲ两种方法同时进行血清ＨＢＶ ＤＮＡ检测 ,以了解两种方法的一致性 ,探讨两者的临床应用价值及问题。1　材料和方法1.1　研究对象　 2 0 0 1年 3至 7月间中山医科大学…     

聚合酶链反应凝胶呈像技术检测乙型肝炎病毒

目的 建立聚合酶链反应（ＰＣＲ）－凝胶呈像（ｇｅｌｄｏｃｕｍｅｎｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍＧＤＳ）技术,并应用于临床检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）核酸ＤＮＡ。方法 用凝胶呈像技术对血清ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ扩增产物的电泳凝胶进行摄像,分析,并与紫外灯下的肉眼观察结果相比较,对肉眼未判断出阳性而凝胶呈像分析邮阳性的血清标本,用定量ＰＣＲ（ＱＰＣＲ）方法检测ＨＢＶ－ＤＮＡ。结果 通过３８份血清标本的检测,发现     

临床血清标本的HBV－DNAPCR检测指标与若干HBV免疫学指标关系

临床血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡＰＣＲ检测指标与若干ＨＢＶ免疫学指标关系程宗浩上海青浦县卫校我们应用上海复华公司的ＰＣＲ检测试剂和上海科华公司ＥＬＩＳＡ检测试剂分别检测了３４７份血清标本的ＨＢＶ－ＤＮＡ和ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ指标。其中ＨＢｓＡｇ阴性３０...     

利用实时定量PCR检测TTV DNA含量

为了评价健康人群与肝病病人之间血清ＴＴＶＤＮＡ水平的差异 ,本文建立实时ＰＣＲ检测 (ＲｅａｌｔｉｍｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎＰＣＲ ,ＲＴＤ ＰＣＲ)系统对感染ＨＣＶ的病人和感染ＴＴＶ的志愿献血员(ＢＤＳ)中的血清ＴＴＶＤＮＡ水平进行定量 ,并判定ＴＴＶ数量与肝损害严重性之间的关系。作者分析 78份感染ＨＣＶ而ＨＢＳＡｇ为阴性的病人血清样本 (63份血清ＡＬＴ升高 ,1 5份正常 )。对照组为 70份ＢＤＳ 血样 ,其ＴＴＶ为阳性而ＨＩＶ、ＨＢＶ及ＨＣＶ为阴性 ,ＡＬＴ正常。所有样本贮存于 - 80℃备测。制备 2对引物和探针设置于 5’未…     

PCR检测HBV-DNA不同试剂和方法的比较

本文对目前部分市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂进行了灵敏度和检测率的测定，并在检测ＨＢＶ低水平感染中，用ＰＣＲ和斑点杂交作了比较。结果不同公司试剂盒的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度从０．１ｆｇ到１ｐｇ不等，同一公司不同批号的ＨＢＶ－ＤＮＡ最低检测浓度也从１００ｆｇ到１００ａｇ不同，差达１０３～１０４倍。ＰＣＲ和斑点杂交在三组不同乙肝标志组中的阳性检测率为ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｅ（－）组：ＰＣＲ７０％，斑点杂交４６．４％；ＨＢｓＡｇ（＋）ＨＢｅＡｇ（－）抗ＨＢｓ（＋）组：ＰＣＲ３５．７％，斑点杂交２．９％；ＨＢｓＡｇ（－）抗ＨＢｅ（＋）抗ＨＢｓ（＋）／ＨＢｃ（＋）组：ＰＣＲ１６．６％，斑点杂交３．３％。三组检测率均Ｐ＜０．０１。因此，目前市售的ＨＢＶＰＣＲ试剂必须标化，ＰＣＲ更适合于检测ＨＢＶ低水平的感染     

乙肝患者血清HBV DNA检出率分析

探讨ＰＣＲ技术测定ＨＢＶ ＤＮＡ的临床应用价值。用ＰＣＲ法与ＥＬＩＳＡ法测定乙国清标志物。结果表明ＨＢＶ ＤＮＡ在乙肝患者血清平均检出率５４．８％。人为ＨＢＶ ＤＮＡ的检出率与乙现毒所处的临床阶段,基因的整合与突变及抗病毒药物的应用相关。     

荧光定量PCR和ELISA检测外科病人HBV标志物结果的比较

近年发展起来的定量ＰＣＲ技术[1] ,由于采用荧光技术和闭管检测 ,克服了常规ＰＣＲ易污染的缺点 ,已取代以往的定性方法用于乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)的检测。我们采用此法对 2 0 0例外科住院病人进行了ＨＢＶ的检测 ,并同时对照ＥＬＩＳＡ分析其检测结果 ,现报告如下。1　材料与     

PCR酶免定量检测乙型肝炎病毒DNA及其临床意义

我们采用ＰＣＲ酶免定量检测法（ＰＣＲ通用捕集法）检测乙肝病毒携带者血清ＨＢＶ－ＤＮＡ含量，以探讨乙肝患者病毒复制与乙肝病毒标志物之间的关系及其临床意义。１ 材料和方法１．１ 研究对象 为２００１年１月～５月来我院门诊就诊的患者，共３６６人，全部病例均为ＨＢＶ血清学标志物阳性患者，年龄在１０～６７岁，其中男性２２３例，女性１４３例。另选择３０例体格检查后乙肝五项血清标志全阴性、肝功能正常者作为对照组。血清采用经高压灭菌的 ０．５ｍｌ Ｅｐ－ｐｅｎｄｏｒｆ管分装于－２０℃保存，３天内检测完毕。１．２ 试剂…     

不同血清学标志血清中HBV DNA和HCV RNA的分析研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测４８１例乙肝血清学五项指标至少一项阳性血清中ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ，结果显示ＨＢＶＤＮＡ的检出率为９１．５％，ＨＣＶＲＮＡ的检出率为１５．４％，并提示（１）当乙肝患者血清中抗ＨＢｅ阳性甚至抗ＨＢｓ阳性时，仍有相当部分的ＨＢＶ存在且仍在复制；（２）ＨＢＶ和ＨＣＶ感染可相互增加其易感性；ＨＢｓＡｇ阳性与否与抗ＨＣＶ可能有一定关系；（３）ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ具有较高的敏感性。     

HBV五项血清指标与HBV-DNA-PCR相关性探讨

ＨＢＶ五项血清指标与ＨＢＶ—ＤＮＡ—ＰＣＲ相关性探讨山东省青岛市胶州中心医院（青岛２６６３００）李志斌吴衍芝本文对５７２例肝炎门诊和住院病人进行ＥＬＩＳＡ法检测乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）五项血清指标和应用免疫ＰＣＲ技术检测ＨＢＶ－ＤＮＡ进行分析。１材料与...