汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺内酸溶性胶原的变化

本研究比较了正常大鼠、矽肺大鼠和汉防己甲素治疗矽肺大鼠肺内酸溶性胶原在含量、羧甲基纤维素柱层析和氨基酸组成等方面的差异。矽肺大鼠肺中总胶原和酸溶性胶原的含量都增高。在酸溶性胶原中出现了与α_1(Ⅰ)不同的α_1(Ⅰ)~b峰,它随肺纤维化的程度而增高。汉甲组的酸溶性胶原中含有大量被降解的胶原片段,包括α_1链的前体。对上述结果作了初步讨论,并试图解释汉甲抑制矽肺纤维化发生的原因。矽肺组织中胶原蛋白大量增加,但人们对其组成特点却了解甚少。不久前,久保等报道了矽肺组织中胶原蛋白的类型。我们对矽肺大鼠肺中胶原的组成也做了一些观察。本文报道对矽肺大鼠,经汉防己甲素(简称汉甲)治疗的矽肺大鼠和正常大鼠肺中酸溶性胶原的含量、类型、羧甲基纤维素柱层析行为及若干组份的氨基酸组成的研究结果。酸溶性胶原是组织中可为稀酸提取的胶原,其主要成份是Ⅰ型胶原[α_1(Ⅰ)]_2α_2,为两种α肽链组成的三链螺旋。期望此项工作能为阐明二氧化矽引起肺纤维化和汉甲抑制矽肺纤维化的机理提供线索。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中——Ⅲ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防已甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅲ型胶原的变化。Ⅲ型胶原分布于肺泡间隔中,在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中Ⅲ型胶原含量高于正常肺泡间隔,但增长程度低于Ⅰ型胶原。Ⅲ型胶原是矽肺胶原纤维组分之一,在胶原纤维之间也有分布。汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制。大细胞由矽结节外周向矽结节中心浸润,并吞噬降解Ⅲ型胶原,证明汉甲素有促进胶原分解代谢的作用。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中Ⅰ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防己甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅰ型胶原的变化。Ⅰ型胶原是肺间质的重要成分。在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中的Ⅰ型胶原含量明显地高于正常的肺泡间隔。在矽结节中,可见到发射绿色荧光的Ⅰ型胶原纤维束排列致密,表明Ⅰ型胶原参与了矽肺纤维化。用汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制,胶原纤维松解、断裂,互相缠绕,说明汉甲素可减低胶原纤维的聚合程度,并对胶原有一定的降解作用。汉甲素治疗的大鼠矽肺中存在大量大细胞,大细胞胞浆内可见发射绿色荧光的Ⅰ型胶原,可能为大细胞所吞噬从而加速胶原的分解。     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型胶原的电镜观察

本实验是以电镜观察矽肺大鼠和煤矽肺病人肺坦织中Ⅰ型胶原纤维的结构,並各与其相对照的未纤维化肺中胶原纤维做比较,结果表明:正常鼠肺组织中Ⅰ型胶原分子的长度为270nm,矽肺大鼠结节中的Ⅰ型胶原分子的长度范围为240～270nm,后者与正常胶原分子比,有缩短的趋势。未纤维化的人肺中Ⅰ型胶原分子长度为280～300nm,而煤矽肺病人肺Ⅰ型胶原分子长度为230～280nm,这与在大鼠肺胶原中所见到的结果相类似。说明发生矽肺纤维化病变以后,Ⅰ型胶原在结构上发生了变化。     

矽肺大鼠和病人肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原纤维的分布及相对含量的研究

免疫酶标法用于观察肺组织中胶原的分布。显微分光光度法用于研究大鼠与矽肺病人的纤维化组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原的相对含量。染色中应用大鼠及人的抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原多克隆抗体。Ⅰ型胶原分布于正常肺泡间隔及间质中。Ⅲ型胶原也在相同的部位存在。在由石英所致的大鼠纤维化肺组织中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原在极度扩展的间质中聚集。Ⅲ型胶原是早期纤维化肺中主要增生的胶原。Ⅰ型胶原是纤维化后期主要增生的胶原。在矽肺病人肺组织中也见到同样的现象。染电焊烟尘的大鼠肺,直至180天以前,Ⅲ型胶原为主要积聚的胶原,而在180天以后,Ⅰ型胶原的增加才占优势。     

抗纤维化短肽对矽肺大鼠肺内胶原合成与降解的调节作用

目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠肺内Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达以及基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9酶活力表达的调节在拮抗矽肺纤维化形成过程中的作用.方法 气管内灌注染尘法制作大鼠矽肺模型,实验动物被分为6组:矽肺模型对照1组、矽肺模型对照2组、矽肺模型1组、矽肺模型2组、抗纤雏化治疗组及预防治疗组.采用HE染色对矽肺纤维化病变进行形态学观察;采用Western blot法对肺内Ⅰ型和Ⅲ型胶原表达进行检测;采用明胶酶谱法对肺内MMP-2和MMP-9酶活力表述进行检测.结果 抗纤维化治疗组I型胶原表达量分别是矽肺模型1组与2组的71.08%和58.13%,Ⅲ型胶原表达量分别是矽肺模型1组与2组的80.13%和70.70%;预防治疗组Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达量分别是矽肺模型2组的40.13%和65.77%.而抗纤维化治疗组MMP-2的表达分别是矽肺模型1组与2组的1.02倍;MMP-9表达分别是矽肺模型1组与2组的1.02倍和1.03倍.预防治疗组MMP-2与MMP-9表达都是矽肺模型2组的1.01倍.结论 AcSDKP可以从抑制胶原合成与促进胶原降解的两个方面发挥拮抗矽肺纤维化的作用.     

矽肺大鼠血清中抗Ⅰ型与Ⅲ型胶原抗体测定的初步研究

本文采用竞争性酶联免疫吸附法(ELISA)检测了正常大鼠、矽肺大鼠及汉防己甲素-克矽平(简称汉甲-PVNO)联合治疗的矽肺大鼠血清中抗Ⅰ型胶原抗体及抗Ⅲ型胶原抗体的存在及含量。结果表明,大鼠血清中不存在抗Ⅰ型胶原抗体。实验前三周时各组大鼠体内均存在抗Ⅲ型胶原抗体。第四周时。正常鼠血清内不再存在抗Ⅲ型胶原抗体。汉甲-PVNO治疗组大鼠血清中抗Ⅲ型胶原抗体也消失,仅矽肺大鼠血清中有抗Ⅲ型胶原抗体继续存在。     

汉防己甲素对矽肺大鼠肺中Ⅰ、Ⅲ型胶原基因表达的影响

使用Ｐｒｏα１（Ⅰ）、Ｐｒｏα１（Ⅲ）人胶原ｃＤＮＡ探针，采用ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ班点杂交技术，观察了染尘２个月、４个月的矽肺大鼠及汉防己甲素治疗１个月和３个月的矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原的ｍＲＮＡ水平的改变情况。实验结果表明，矽肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原ｍＲＮＡ的含量比正常肺组织明显增加（Ｐ＜０．０５），汉防己甲素治疗后Ⅰ、Ⅲ型胶原正常含量则较矽肺组织显著减少。因此，我们认为矽肺病变组织中胶原纤维的积聚是由石英粉尘引起胶原基因表达改变所致；汉防己甲素能直接或间接地抑制胶原基因的转录，从而抑制矽肺病变中胶原蛋白的合成。     

熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用北大核心CSCD

目的观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用。方法75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只。模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天。动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死。ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P<0.05)。模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P<0.05)。熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P<0.05)。熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致。结论熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生。     

熊果酸对矽肺大鼠TNF-α和胶原合成的调节作用

目的观察熊果酸对矽肺大鼠TNF-α含量和胶原合成的调节作用。方法75只Wistar雄性大鼠,SPF级,随机分为对照组、模型组、熊果酸组,每组25只。模型组与熊果酸组大鼠采用非暴露法气管内一次性注入SiO2悬液(250 mg/kg)复制动物矽肺模型。熊果酸组自注射SiO2第二天灌胃熊果酸40mg/kg,对照组以同样方法灌注等量生理盐水,共连续28天。动物分别在注射SiO2后第7、14、28天处死。ELISA法检测大鼠血清中TNF-α的含量,应用羟脯氨酸试剂盒检测肺组织中总胶原蛋白含量,Western blot法检测Ⅰ/Ⅲ型胶原表达情况。结果与对照组比较,模型组大鼠血清中的TNF-α含量各时间点明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。熊果酸组TNF-α含量与模型组相比均显著降低(P0.05)。模型组肺组织中总胶原蛋白含量与同期对照组比较明显增加(P0.05)。熊果酸组与模型组相比,总胶原含量明显下降(P0.05)。熊果酸组与模型组大鼠肺组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原表达与总胶原蛋白含量变化一致。结论熊果酸可以减少矽肺纤维化过程中TNF-α和胶原蛋白的产生。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对TGF-β1介导Smad通路调节在大鼠矽肺纤维化形成中的作用

[目的]观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化肺组织中胶原含量、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2/3和Smad 7表达的调节,探讨AcSDKP拮抗矽肺纤维化的作用机制. [方法]选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP,采用羟脯氨酸测量法和Western-blot法定量分析肺组织中胶原蛋白的含量.Western-blot法检测肺组织内TGF-31、phospho-Smad2/3及Smad7蛋白的表达. [结果]AcSDKP治疗组胶原含量和Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达低于相对应的矽肺模型组.与相应的对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达均增加,而Smad7蛋白表达减弱.与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内TGF-β1、phospho-Smad2/3蛋白表达表达均明显降低.而Smad7蛋白表达增强. [结论]AcSDKP可能是通过对TGF-β1介导Smad通路调节而发挥抗矽肺纤维化的作用.     

矽肺大鼠肺组织中Ⅰ型与Ⅲ型胶原含量及其比值变化的研究

用胃酶和醋酸自大鼠肺中提取Ⅰ和Ⅲ型胶原,並用酶联免疫法对其含量及比值进行测定。实验结果表明自大鼠气管注入石英后,在肺部所引起的纤维化的过程中,Ⅰ型与Ⅲ型胶原的含量均不断增长。在染尘后10天时,Ⅰ/Ⅲ型胶原的比值低于未染尘时的数值,而在20天后,此比值明显升高,並维持恒定。通过Ⅰ型与Ⅲ型肺胶原含量及其比值的测定表明电焊烟尘所引起的大鼠肺纤维化病变进展缓慢,其纤维化程度也轻。本实验结果证明Ⅰ/Ⅲ型胶原之比值可用来表示不同粉尘所引起的纤维化程度。     

染矽尘大鼠血硅及尿硅含量与肺纤维化程度的关系

目的探讨染矽尘大鼠血、尿中硅含量与肺组织中羟脯氨酸、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原含量的关系。方法处理组采用气管灌注法注入矽尘混悬液建立大鼠矽肺模型,对照组采用同样处理但用生理盐水代替矽尘混悬液。两组取第28天大鼠的血液、尿液,经样品前处理后用原子吸收分光光度计检测;大鼠肺组织制作石蜡切片,采用天狼猩红染色法,用偏振光显微镜和图像分析系统对肺组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达进行分析;试剂盒检测肺组织羟脯氨酸含量。结果处理组大鼠血硅、尿硅、Ⅰ型胶原及Ⅲ型胶原明显高于对照组(P<0.05),羟脯氨酸虽稍低于对照组,但无统计学意义(P>0.05);血硅、尿硅分别与Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原建立直线回归,有统计学意义(P<0.05),血硅、尿硅分别与羟脯氨酸建立直线回归,无统计学意义(P>0.05)。结论血硅、尿硅对早期矽肺纤维化程度可能有一定的指示意义。 更多还原     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对矽肺大鼠肺内P38信号转导通路蛋白表达的调节

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠矽肺纤维化模型Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、转化生长因子-β1(TGF-β1)与P38分裂原活化蛋白酶(MAPK)蛋白表达的影响,探讨AcSDKP拮抗矽肺纤维化可能的作用机制。方法选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型,并给予AcSDKP。免疫组化法、Western-blot法检测肺组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1、磷酸化P38 MAPK(phospho-P38 MAPK)、P38 MAPK蛋白的表达。结果与对照组相比,矽肺模型组大鼠肺组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1、phospho-P38 MAPK蛋白表达均增加;与矽肺模型组相比,AcSDKP治疗后,大鼠肺组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TGF-β1、phospho-P38 MAPK蛋白表达均明显降低。而各组间比较,P38 MAPK蛋白表达无明显改变。结论AcSDKP可能通过抑制TGF-β1介导的P38 MAPK信号转导途径,从而发挥抗矽肺纤维化的作用。     

汉防己甲素对矽肺大鼠肺内脂类含量的影响

本文比较了正常大鼠、矽肺大鼠和汉防己甲素不同时间治疗的矽肺大鼠肺组织、肺冲洗物的湿重和脂类含量的差异。矽肺鼠肺组织、肺冲洗物的湿重和脂类含量均比正常鼠高,肺表面活性物增高显著;汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺组织、肺冲洗物湿重和脂类含量均较矽肺大鼠的低,肺表面活性物减低显著,但仍较正常鼠高。本文对其结果作了讨论,提出肺重肺脂可作为粉尘毒性指标,试图解释肺脂增高与肺纤维化的关系以及汉防己甲素的作用原理。     

汉防己甲素治疗的矽肺大鼠肺组织中糖胺多糖的进一步研究

本文研究了汉防己甲素(简称汉甲)对已形成矽肺大鼠肺中糖胺多糖(glycosaminoglycan简称GAG)的作用,并与曾报道的汉甲预防治疗组大鼠进行了比较。汉甲可以减低矽肺发生过程中GAG总量的上升,抑制各种GAG相对含量发生改变。组织化学观察证明,随着矽肺的发展,GAG分布密集,并由细丝状转变为条索状。不同月龄大鼠肺中GAG含量不同,各种GAG相对含量亦不相同。     

尘肺清颗粒防治大鼠实验性矽肺的病理观察

目的了解尘肺清颗粒对大鼠实验性矽肺的病理形态学影响。方法用超细粉碎的石英粉注入大鼠气管,造成矽肺动物模型。4周后开始给药,20、10、5g/kg,灌胃,每日1次,连续给药12周处死动物,做肺组织常规病理学、羟脯氨酸含量测定和肺干重等检查。并对肺碱性磷酸酶、Ⅰ型和Ⅲ型胶原进行原位定量。结果给药组肺干重、羟脯氨酸含量明显低于模型组;肺病变程度减轻;图像分析显示给药组肺组织内碱性磷酸酶增加;Ⅰ型胶原纤维明显减少。结论尘肺清颗粒可以明显改善大鼠实验性矽肺的组织形态,促进组织修复,改变胶原沉着比例,减轻肺纤维化。     

染矽尘大鼠肺脏器系数和肺胶原含量的变化

目的 探讨染尘大鼠肺脏器系数和肺胶原含量变化。以寻找评价不同时期矽肺纤维化更合适指标。方法 采用气管注射染矽尘（40mg/鼠）方法建立动物模型;测定肺脏器系数、胶原含量;采用EXCEL作图,采用SPSS8.0数据分析。结果 染矽尘实验动物肺胶原含量在实验第21天前降低。实验第21天后升高;肺脏器系数在实验第7天就出现升高,而且一直持续;实验组肺胶原含量和脏器系数在实验第21天呈现分离趋势;第21天后出现平行增加趋势。结论 评价肺纤维化肺脏器系数和肺胶原含量各有优缺点。矽肺形成第7天就有肺脏器系数升高,并且一直持续;肺胶原含量第21天前先降低。第21天后升高。     

磷酸羟基哌喹对大鼠实验性煤矽肺治疗作用的研究

本文报告了磷酸羟基哌喹对大鼠实验性煤-矽混合性煤矽肺的治疗效果。结果表明100％石英尘所致的实验性矽肺不论预防性治疗或病后治疗,其全肺鲜重、干重和全肺胶原均明显低于对照组。全肺胶原的T/C值为0.46～0.53,而煤-矽混合性尘肺其疗效随混合尘中二氧化矽含量减少疗效递减,对煤肺无效,病理与细胞培养也证实上述结果。     

汉防己甲素对矽肺大鼠胶原代谢的作用

从胶原蛋白质水平和ｍＲＮＡ水平分析了汉防己甲素（汉甲）的抗纤维化作用。大鼠染石英尘后肺组织的全肺干重、全肺胶原含量以及血清中Ⅰ型胶原含量均上升，汉甲可以抑制以上各种指标的上升趋势。ｃＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交实验从转录水平上进一步证明，汉甲对胶原代谢的影响发生在胶原合成的起始阶段。以上结果对抗矽肺药物联合用药的配伍设计有理论意义