基质金属蛋白酶及其抑制剂的活性测定方法

基质金属蛋白酶在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中起重要作用，并与一系列的病理过程紧密相关。在体外测定基质金属蛋白酶的活性水平，对恶性肿瘤的诊断和预防具有重要意义，同时为小分子基质金属蛋白酶抑制剂的活性筛选提供有益的依据。主要的活性测定方法有化学法、酶谱法、免疫分析法、荧光底物法、高通量筛选法。对这些测定方法的原理、操作及优缺点进行了介绍及比较。     

组织蛋白酶S抑制剂的研究进展

组织蛋白酶S（cathepsin S,Cat S）在退行性疾病和自身免疫性疾病的发病过程中具有重要的作用。同时,Cat S参与主要组织相容性复合体Ⅱ类分子调节的抗原提呈作用,其过表达与肿瘤的生长、血管的生成和转移密切相关。目前,许多Cat S抑制剂被合成出来,从结构上可以分成肽类和非肽类化合物。本文对近几年来发现的Cat S抑制剂进行综述,并对其构效关系进行了归纳。     

基质金属蛋白酶-26和金属蛋白酶组织抑制剂-4在子宫内膜癌组织中的表达

目的研究基质金属蛋白酶(MMP)-26、金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-4和雌激素受体(ER)-α在正常子宫内膜、子宫内膜非典型增生和子宫内膜癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组织化学和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测41例子宫内膜癌组织,12例子宫内膜非典型增生组织和10例正常子宫内膜组织中MMP-26、TIMP-4和ER-α的蛋白表达及MMP-26 mRNA和TIMP-4 mRNA表达水平并结合临床病理特征进行分析。结果MMP-26和TIMP-4蛋白主要定位于子宫内膜腺上皮细胞和肿瘤细胞中。RT-PCR及免疫组织化学半定量分析结果表明:与正常子宫内膜和子宫内膜非典型增生组织相比,MMP-26低表达于子宫内膜癌组织(P均<0.05),并只与肿瘤组织分化程度密切相关。其中,腺癌高分化组MMP-26蛋白染色强于中分化组和低分化组(P均<0.05);低分化组MMP-26 mRNA含量也明显少于中分化组和高分化组(P均<0.05)。TIMP-4和ER-α同样在癌组织中低表达,并随着肿瘤分化程度的降低,二者表达逐渐减弱。癌组织中,MMP-26 mRNA/TIMP-4 mRNA随着肿瘤分化程度的下降、肌层浸润程度的加深和淋巴结的转移而升高(P均<0.05)。由于MMP-26、TIMP-4表达模式和ER-α相似,我们对其启动区域进行分析,发现MMP-26启动区域从-130至-116位点及TIMP-4启动区域-930至-916位点间的两段序列与公认的雌激素反应元件(ERE)高度同源。结论MMP-26和TIMP-4蛋白选择性地表达于子宫内膜的上皮部分。MMP-26、TIMP-4与ER-α表达相仿,在子宫内膜癌中表达下调。MMP-26、TIMP-4启动区域含有潜在的ERE序列,ER-α可能参与了MMP-26和TIMP-4基因水平的调节。     

一种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂RanacyclinE的活性研究

目的 评价一种两栖类动物皮肤分泌物中的多肽RanacyclinE(氨基酸序列SAPRGCWTKSYPPKPCK)的丝氨酸蛋白酶抑制活性。方法 RanacyclinE由Fmoc固相化学合成后经基质辅助激光解析质谱鉴定,测定胰蛋白酶抑制常数Ki。结果 RanacyclinE的酶抑制常数Ki值为95.96μM。结论 天然生物肽RanacyclinE是一种潜在的丝氨酸蛋白酶抑制剂。     

蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响

目的研究蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。方法首先制备霞水母刺丝囊细胞,再利用Mini-Beadbeater组织研磨器破碎细胞提取毒素,然后向获得的霞水母毒素中加入不同种类及剂量的蛋白酶抑制剂,如金属酶抑制剂EDTA、酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A、丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF和Aprotinin,巯基蛋白酶抑制剂Leupeptin,并且测定蛋白酶抑制剂对霞水母毒素溶血活性的影响。结果 EDTA和Pepstantin A能够明显抑制蛋白酶的活性从而增强霞水母毒素的溶血活性,1 mmol.L-1EDTA和4μg.ml-1 Pepstantin A使其溶血率分别从40%上升到93%和5%上升到78%;而PMSF、Aprotinin和Leupeptin却对霞水母毒素溶血活性的影响较小。结论金属蛋白酶抑制剂EDTA和酸性蛋白酶抑制剂Pepstantin A能有效地保护霞水母毒素的溶血活性,为深入研究霞水母毒素提供帮助。     

半胱氨酸组织蛋白酶抑制剂：一类新型的骨质疏松治疗药物

组织蛋白酶是人体组织中的一类重要的半胱氨酸蛋白酶。近年研究发现组织蛋白酶Ｋ,Ｌ等半胱氨酸蛋白酶主要在骨破骨细胞表达,促进骨纤维胶质的分解代谢,对骨吸收起重要调节作用。组织蛋白酶与骨质疏松症等骨质减少性疾病有关,组织蛋白酶Ｋ,Ｌ已成为研究防治骨 质疏松症药物的新靶标。在有关酶分子生物学及蛋白质晶体结构研究的基础上,已设计合成了有效的肽及肽模拟物类组织蛋白酶抑制剂。某些组织蛋白酶Ｋ、Ｌ抑制剂活性强、酶     

真菌来源的组织蛋白酶B抑制剂F04ZA-1203A的研究

目的 组织蛋白酶B(cathepsin B,CatB)是一种主要存在于溶酶体的半胱氨酸蛋白水解酶,具有广谱蛋白水解酶活性,能够降解多种基底膜蛋白,为癌细胞的转移打开通道,促进肿瘤细胞向深部组织浸润.因此,研究CatB抑制剂在抗肿瘤转移方面具有潜在的应用价值.本研究筛选CatB抑制剂,发现潜在的抗癌药物先导化合物.方法 利用自建的快速、高效的组织蛋白酶B抑制剂的高通最筛选方法,从大量真菌菌库及其来源的代谢产物中筛选能够产生CatB抑制活性产物的菌株,对其发酵产物进行有机溶剂提取、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱及HPLC制备分离获得活性化合物,经紫外、质谱、核磁等理化数据的分析进行结构鉴定.结果 筛选分离得到一个活性化合物FIMZA-1203A,结构解析确定了其为已知化合物thielavin B,该化合物对CatB的抑制IC50为1.85 μg/ml.结论 F04ZA-1203A(thielavin B)对CatB有强的抑制活性,国内外未见报道.     

组织蛋白酶L小分子抑制剂的抗SARS-CoV-2活性研究

新冠肺炎(coronavirus disease 2019,COVID-19)是一种由新型严重急性呼吸系统综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)感染引起的急性传染性疾病,已给社会经济造成了沉重负担。由于突变体的不断出现,疫苗和单克隆抗体仅对SARS-CoV-2部分毒株导致的感染有效,因此寻找广谱高效的小分子药物以应对SARS-CoV-2感染及未来可能暴发的疫情依然具有重要意义。组织蛋白酶L (cathepsin L,CatL)切割SARS-CoV-2刺突蛋白(spike glycoprotein,S),在病毒进入宿主细胞的过程中发挥着不可或缺的作用,因此CatL是广谱抗冠状病毒药物开发的理想靶标之一。在本研究中,以荧光标记的底物建立CatL酶抑制剂筛选模型,通过高通量筛选获得两个具有CatL抑制活性的化合物IMB 6290和IMB 8014,其半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC₅₀)分别为11.53±0.68和1.56±1....     

丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定紫外光谱法的建立

目的  建立一种丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法。方法  采用温控紫外分光光度计同时测定2种丝氨酸蛋白酶抑制剂,重组Textilinin-1（recombinant Textilinin-1,Rtxln-1）与抑肽酶（aprotinin,AP）的抑制常数。优化活性测定方法的线性范围和孵育温度。应用此方法对Rtxln-1和AP进行活性测定,并对活性测定方法进行验证。结果  该方法的标准曲线拟合度决定系数≥0.98,测定Rtxln-1和AP的线性范围分别为10～50、0.056～0.560 nmol/L。Rtxln-1孵育温度为37 ℃,精密度的变异系数≤5%。结论  建立的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性测定方法特异性高、拟合度优,对Rtxln-1活性测定的精密度好,可用于AP、Rtxln-1等胰蛋白酶抑制剂的生物学活性的测定,也可用于广泛的丝氨酸蛋白酶抑制剂的活性测定。     

Medivir提交组织蛋白酶K抑制剂的临床前数据

Medivir公司在31届ASBMR会议上介绍了两个组织蛋白酶K抑制剂候选药物的临床前数据（MIV-710，MIV-711）。在介绍中强调了结论：候选药物表现出在体外抑制猫蛋白K的有效和高选择性。     

扎鲁司特对哮喘模型肺组织金属蛋白酶抑制剂1表达的影响

目的 观察白三烯受体拮抗剂扎鲁司特对肺组织组织金属蛋白酶抑制剂1（TIMP-1）表达水平的影响。方法 108只健康雄性豚鼠随机分为3组：哮喘发作组（A组）,哮喘发作＋扎鲁司特治疗组（B组）,生理盐水对照组（C）组,每组36只。每组均分为24h和1、2、4、8、12周6个小组。免疫组化标记分析肺组织中TIMP-1表达水平。结果 C组肺组织中TIMP-1的表达无明显改变。卵蛋白激发后,A组TIMP-1的表达C组稍增高,但各个时期无明显差异。B组随时间的推移,TIMP-1的表达逐渐增加,8周起B组TIMP-1表达较A组、C组明显增多,激发后12周3组之间两两比较有显著性差异（P〈0．05）。结论 扎鲁司特可以增加哮喘豚鼠肺组织TIMP-1的表达水平,白三烯受体拮抗剂对预防和减轻哮喘气道重塑有积极意义。     

组织蛋白酶B抑制剂对视网膜血管内皮细胞系生物学行为的影响

组织蛋白酶B（CathepsinB）是一种促进新生血管形成的酶，不仅参与了细胞外基质的降解，还参与了金属蛋白酶抑制剂（TIMP）-1、TIMP-2的降解。利用Cathepsin B的特异性抑制剂CA-074Me来治疗视网膜新生血管，国内外未有报道。本研究目的是通过观察CathepsinB抑制剂对视网膜血管内皮细胞系生物学行为的影响，探求治疗视网膜新生血管的新途径。     

组织蛋白酶在类风湿关节炎中的作用

类风湿性关节炎因其发病机制不明确,致残率高,严重影响患者的生活质量.组织蛋白酶在类风湿性关节炎中起到调控滑膜炎及骨破坏的关键作用,其含量在类风湿患者关节积液及血清中显著升高,而组织蛋白酶缺乏者,其关节炎的严重程度将降低.相关动物实验研究表明,组织蛋白酶抑制剂可降低关节炎的发生,但其在人体中的疗效尚不明确.未来,组织蛋白...     

蛋白酶抑制剂的应用研究进展

介绍了蛋白酶抑制剂在临床治疗炎症、肿瘤、病毒感染等方面的应用进展。     

组织蛋白酶B及其抑制剂与脑出血关系的研究

组织蛋白酶B(Cathepsin B,cat B)是溶酶体中研究最为广泛的蛋白酶之一。脑出血后的细胞凋亡及继发炎性反应在脑出血后脑损伤中发挥重要作用。cat B参与脑出血后细胞凋亡及炎症的级联反应。cat B抑制剂具有神经保护作用,通过促进脑出血后神经细胞突触重组和周围新生血管的形成来提高脑出血后的神经功能。但目前cat B及其抑制剂与脑出血关系的研究较少。本文就cat B及其抑制剂与脑出血的关系进行综述。     

组织蛋白酶K抑制剂 Odanacatib 研究进展

摘要：骨质疏松症患病率近年来明显增加,社会危害巨大。破骨细胞功能活化是骨质疏松发生的重要原因。组织蛋白酶是破骨细胞表达的一类酶,参与有机质的降解,与骨质疏松的发生密切相关。其中组织蛋白酶K是最重要的一种酶,组织蛋白酶K抑制剂Odanacatib(ODN)可以通过抑制其对有机质的降解治疗骨质疏松。在目前进行的一些研究中发现,应用ODN可以增加皮质厚度和小梁骨的骨矿含量,因此增加骨密度和骨的负荷强度。本文就ODN的药理特性,动物试验及临床研究的进展进行综述。     

乳腺癌患者手术前后外周血基质金属蛋白酶和基质金属蛋白酶组织抑制剂的动态监测

目的研究乳腺癌患者手术前后外周血中基质金属蛋白酶（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）含量与肿瘤进展的关系及其意义。方法采用ELISA法测定乳腺癌患者手术前和手术后2周、1个月、6个月血浆MMP-9及TIMP-的浓度，并与健康对照组比较。结果乳腺癌患者术前外周血MMP-9和TIMP-1浓度显著高于健康对照组（P〈0．05），其浓度与肿瘤TNM分期呈正相关（P〈0．05）；手术后2周、1个月、6个月血浆MMP-9、MMP-9／TIMP-1比值较手术前明显下降（P〈0．05）。结论乳腺癌患者外周血中MMP-9和TIMP-1浓度与肿瘤的进展密切相关。动态监测血浆中MMP-9和TIMP-1浓度变化，对于乳腺癌患者的病情监控可提供一定的参考。     

基质金属蛋白酶组织抑制剂1在直肠癌组织中表达的临床意义

目的 探讨直肠癌组织中基质金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)表达的临床意义.方法 采用免疫组织化学法检测TIMP-1在40例直肠癌组织、30例正常直肠组织中的表达,并分析其与直肠癌临床病理特征及预后的关系.结果 TIMP-1在直肠癌组织中表达率(62.5%)明显高于正常直肠组织(36.7%);TIMP-1阳性表达率与Dukes分期、淋巴结转移及远处脏器转移呈负相关,与分化程度呈正相关;TIMP-1阳性表达直肠癌患者的5年生存率(82.6%)明显高于阴性患者(52.1%),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TIMP-1在直肠癌发生发展中起重要作用,检测TIMP-1对直肠癌侵袭转移的预测、预后评估及指导合理的综合治疗等具有重要的临床意义.

Abstract：

Objective To investigate the clinical significance and prognosis about expression of tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1) in rectal cancer. Methods The expression of TIMP-1 in 40 samples of rectal cancers and 30 normal rectal mucosa was examined using immunohistochemistry. The relationship of their expression with some clinicopathological characteristics and prognosis was analyzed. Results The positive expression rate of TIMP-1 (62.5%) was higher in rectal cancer than normal rectal mucosa. Increased TIMP-1 expression was significantly correlated with tumor differentiation, Dukes stage and lymph nodes and distant metastasis. Compared with the cases of negative TIMP-1 expression, the patients with positive TIMP-1 expression had a significantly higher 5-year survival rate(P＜0.05). Conclusions TIMP-1 may play a key role in rectal carcinogenesis, tumor invasion and metastasis. TIMP-1 is a allergy indicator for diagnosis of rectal cancer with high specificity. The expression of TIMP-1 is directly correlated with the invasion and metastasis of rectal cancer and prognosis.     

二巯丙磺钠对百草枯急性中毒大鼠肺组织基质金属蛋白酶-9 mRNA及其金属蛋白酶组织抑制剂-1 mRNA表达的影响

目的探讨二巯丙磺钠(DMPS)救治百草枯(PQ)急性中毒大鼠作用机制。方法120只雄性SD大鼠随机分为正常对照组,DMPS(200mg.kg-1,ip)对照组,PQ急性中毒(20mg.kg-1,ip)1,3,7,14和28d组以及DMPS干预(先给DMPS,15min后再给PQ)1,3,7,14和28d组。应用RT-PCR技术检测PQ急性中毒组大鼠及DMPS干预组大鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)mRNA的表达。结果PQ急性中毒组早期肺组织毛细血管扩张充血,炎症细胞浸润,后期出现较大范围慢性炎症病灶,纤维组织增生。与正常对照组比,MMP-9mRNA明显升高,分别为1.13±0.06,1.32±0.04和1.10±0.06,0.85±0.06和0.75±0.05,TIMP-1mRNA明显升高,分别为1.14±0.08,1.29±0.05,1.61±0.09,1.83±0.13和1.73±0.08;7,14和28d MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值明显低于正常对照,分别为0.68±0.03,0.46±0.04和0.43±0.06;DMPS干预后,MMP-9mRNA1,3和7d和TIMP-1mRNA1,3,7,14和24d表达低于PQ中毒组,MMP-9mRNA分别为1.05±0.03,1.17±0.05和0.93±0.09;TIMP-1mRNA分别为10.0±0.07,1.15±0.09,1.09±0.06,1.16±0.08和1.23±0.09;MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值略低于DMPS对照组,但高于PQ中毒组,分别为0.85±0.05,0.63±0.04和0.58±0.02(均P<0.05)。结论DMPS可能通过下调大鼠肺组织MMP-9mRNA和TIMP-1mRNA表达,上调肺组织MMP-9mRNA/TIMP-1mRNA比值发挥救治PQ中毒作用。     

基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶抑制剂-2在子宫内膜异位症中的表达及分析

目的通过检测组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶抑制剂-2(TI MP-2)的表达,探讨它们在子宫内膜异位症发生、发展中的作用。方法用原位杂交染色技术对MMP-2和TI MP-2mRNA进行测定。结果①MMP-2在异位内膜的表达高于在位内膜(P<0·05);在位内膜MMP-2的表达显著强于正常子宫内膜(P<0·05),而且异位组中Ⅲ、Ⅳ期组与Ⅰ、Ⅱ期组间差异有统计学意义(P<0·05)。TI MP-2在位内膜的表达低于正常子宫内膜(P<0·05),异位内膜中TI MP-2的表达显著低于在位内膜(P<0·05),而且异位组中Ⅲ、Ⅳ期组与Ⅰ、Ⅱ期组间差异有统计学意义(P<0·05)。②在正常内膜中,MMP-2与TI MP-2之间呈负相关,r=-0·710。结论患者组织中MMP-2和TI MP-2的异常表达在子宫内膜异位症的发生、发展中起重要的作用。