伴有t(8;21)变异易位的急性髓系白血病患儿二例遗传学研究

 【摘要】　目的　报道2例分别伴有t(8;20)(q22;q13)和t(1;8;21) (q32;q22;q22)的t(8;21)变异易位的M2型急性髓系白血病（AML-M2）。方法　骨髓细胞短期培养法制备染色体标本,应用反带和吉姆萨显带技术进行核型分析;双色双融合AML1-ETO探针进行间期及中期双色荧光原位杂交（D-FISH）检测AML1-ETO融合信号;多重巢式反转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）技术检测AML1-ETO融合基因转录本。结果　例1 核型为45,X,-Y, t (8;20)(q22;q13) [12]／46,XY[3],例2 核型为46,XX,t(1;8;21)(q32;q22;q22)[18]／46,XX[2];间期和中期FISH证实了AML1-ETO融合基因和变异易位的存在;多重巢式RT-PCR检测到AML1-ETO融合基因转录本。结论　t(8;20)(q22;q13)和t(1;8;21)(q32;q22;q22)实质上都是t(8;21)的变异型易位;核型分析联合D-FISH、多重巢式RT-PCR对确定伴有变异型t(8;21)易位的AML患者的性质和预后是重要的。     

乙亚胺治疗银屑病导致1例以t(11;19)(q23;p13)为特征的治疗相关性急性髓系白血病

目的：报道1例乙亚胺治疗银屑病导致以t(1l；19)(q23；p13)为特征的急性髓系白血病(AML-M4)。方法：骨髓细胞24h培养后按常规制备染色体，用R显带技术进行核型分析，并以ll号、19号染色体涂抹探针和位于llq23的混合谱系白血病(AML)基因单一序列探针进行荧光原位杂交(FISH)检测。结果：染色体分析20个中期分裂相．其中15个t(11；19)(q23；p13)为唯一异常，5个除此以外，同时伴有der(6)t(?；6)(?；p24)；染色体荧光原位杂交(FISH)检测证实1条ll号染色体和1条19号染色体之间发生了相互易住，并且FISH检测揭示MLL基因重排细胞占58．4％．结论：二氧哌嗪类药物除了可诱发AMLt(15；17)M3型和t(8；21)、t(7；11)M2型之外，还可诱发t(1l；9)M4型．     

急性白血病患者混合谱系白血病基因重排的检测

 【摘要】　目的　探讨荧光原位杂交（FISH）技术和多重巢式RT-PCR技术对急性白血病（AL）患者混合谱系白血病（MLL）基因重排检测的价值。方法　采用MLL双色FISH基因探针,应用间期FISH和多重巢式RT-PCR技术对189例AL患者进行检测,同时进行染色体R或G显带。结果　179例AL患者行FISH检测,其中9例（5.03 %）MLL基因重排阳性[无MLL-部分串联重复（PTD）],而经多重巢式RT-PCR检测的189例中16例（8.47 %）MLL基因重排阳性,包括MLL／AF9、MLL／AF10、MLL／AF6、MLL／AF17、MLL／ELL、MLL-PTD,189例患者同时进行染色体R或G显带,其中仅5例（2.65 %）涉及11q23的相互易位。急性淋巴细胞白血病（ALL）（73例）与急性髓系白血病（AML）（116例）中6种常见MLL基因重排的发生率差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论　多重巢式RT-PCR技术是对初诊AL患者进行MLL基因重排筛检的有效方法,不仅能证实常规细胞遗传学易位,还能检测出染色体核型分析和FISH技术均不能检出的 MLL-PTD,为预后判断和治疗方案的选择提供依据。     

常规细胞遗传学和荧光原位杂交方法检测14q32/IgH基因重排

  目的 比较常规细胞遗传学（CC）,间期荧光原位杂交（FISH）技术及连续R显带后FISH检测免疫球蛋白重链（IgH）基因重排的应用价值。方法 应用常规细胞遗传学及间期FISH分析血液系统肿瘤患者43例。结果 43例患者中14q32+／IgH+患者19例,14q32-／IgH+患者2例（4.7 %）,14q32+／IgH-患者3例（7.0 %）,14q32-／IgH-患者19例。部分病例CC与间期FISH方法检测14q32／IgH基因重排得到了不一致的结果。对5例患者进行连续R显带后FISH分析,对照核型和FISH图,能清楚地看到IgH基因易位涉及的染色体。结论 间期FISH可以提高14q32／IgH重排检出率,R显带后FISH可以帮助识别与14q32易位的伙伴染色体。     

急性髓系白血病伴新的t(8;21)变异易位——t(7;21)(p21;q22)易位

目的:探讨1例急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)伴新的t(8; 21)变异易位即t(7; 21)(p21;q22)易位患者的临床与分子生物学特点.方法:将AML患者的骨髓细胞经短期培养后按常规方法制备染色体,R显带进行核型分析;利用AML1/ETO双色双融合探针进行荧光原位杂交检测;实时荧光定量PCR法检测AML1/ETO融合基因的转录本拷贝数.结果:患者的常规细胞遗传学分析结果显示为t(7; 21)(p21;q22)易位.86％的骨髓细胞为AML1/ETO融合基因阳性,融合基因转录本为51 440个拷贝/10 000个内参Ab1基因拷贝.结论:t(7;21)(p21; q22)是一种新的t(8; 21)(q22; q22)变异易位,与其他类型的t(8; 21)变异易位相似,预示有良好预后.     

11例t(16;21)(p11;q22)急性髓系白血病病例报告并文献复习

目的:探讨11例伴t(16;21)(p11;q22)染色体易位的急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML)患者的临床和实验室特点。方法:回顾性分析2007年07月至2022年03月我院收治的11例t((16;21)(p11;q22)染色体易位的AML患者临床及实验室特征并复习相关文献。结果:11例t(16;21)(p11;q22)染色体易位的白血病均为AML,FAB分型:M2型4例,M4型1例,M5型3例,AML(非M3)型3例;其中男5例,女6例。染色体R显带分析11例均可见到t(16;21)(p11;q22)染色体易位,其中9例伴有附加染色体异常。融合基因TLS/FUS-ERG检测了9例均为阳性。免疫表型除表达髓系CD34、CD117、CD33、CD13、CD38外,均表达CD56。化疗1个周期后完全缓解7例。结论:t(16;21)(p11;q22)染色体易位是一种少见的重现性染色体异常,该易位产生TLS/FUS-ERG融合基因,免疫学检测多伴CD56阳性,以AML中M2/M5型多见,化疗1个周期大部分可完全缓解,但短期内易复发,预后不良。     

二例伴有i(17q-)的急性早幼粒细胞白血病的临床和实验研究

  目的 探讨伴有i(17q-)的急性早幼粒细胞白血病（APL）的临床和实验室特征。方法 骨髓细胞经24 h培养后按常规方法制备染色体,用R显带技术进行核型分析,并用PML／RARα和HER-2探针进行荧光原位杂交（FISH）检测。用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测PML／RARα融合基因。结果 2例的临床和血液学改变符合AML-M3诊断。染色体核型分析揭示2例患者染色体均存在t(15;17)易位及i(17q-),并通过FISH检测加以证实。2例RT-PCR 均检测到了PML／RARα融合基因。结论 i(17q-)是APL中一种少见的染色体附加异常,其预后意义有待进一步讨论。     

急性淋巴细胞白血病AML1基因重排与MLL基因丢失同时出现临床意义的探讨

目的:对急性淋巴细胞白血病(ALL)急性髓系白血病(AML1)基因重排与混合谱系白血病(MLL)基因丢失同时出现进行探讨。方法:在常规细胞遗传学(CC)分析基础上运用荧光原位杂交技术(FISH),采用多种位点特异性DNA探针(染色体全染、特殊位点和双色易位融合探针),对63例ALL患者(8例成人,55例儿童)进行分析。结果:63例ALL患者中有4例(6.3%)出现MLL基因重排,其中3例出现MLL基因丢失,1例出现MLL基因的移位即t(4;11),3例出现了MLL基因丢失的患者同时合并有AML1基因重排,2例为t(12;21)易位而形成的TEL/AML1融合基因,1例为AML1基因复制引起的环形21号染色体,即r(21)。55例儿童ALL中有15例(27.3%)出现AML1基因重排,即由t(12;21)易位而形成的TEL/AML1融合基因,TEL/AML1阳性患者免疫分型均为B细胞型,8例成人均无t(12;21)。结论:儿童ALL常合并有t(12;21),TEL/AML1融合基因的出现是预后良好的指标,而MLL基因重排的患者具有对常规化疗不敏感及预后不良的特点,两者同时出现说明白血病染色体重排、病理过程及影响预后因素的复杂性。     

t(8;21)急性髓系白血病患者MICM分型及预后的回顾性分析

 目的　分析t(8;21)急性髓系白血病（AML）患者的细胞形态学、免疫表型、遗传学、分子生物学（MICM）分型及临床治疗疗效。方法　运用瑞特染色法、FAB细胞形态分类标准、流式细胞术（FCM）直接免疫荧光标记技术、遗传学染色体吉姆萨显带技术及RT-PCR技术对70例确认有t(8;21)与AML1-ETO融合基因双阳性的AML患者及70例正常染色体核型的AML患者进行分析和比较。结果　70例t(8;21)AML患者中M1 1例,M2 64例,M4 3例,无法分型的急性白血病（AL）2例;免疫表型分析发现CD13、CD33、CD34、CD117高表达,40 %表达CD19,11 %表达CD15,10 %表达CD11b,7 %表达CD7;遗传学显示50 %的t(8;21) AML患者有附加染色体异常,主要为性染色体丢失、9q-及超二倍体;RT-PCR检测AML1-ETO融合基因100 %阳性。CD+19 t(8;21) AML患者完全缓解（CR）率72 %,CD+19伴CD+7 t(8;21)AML患者CR率为0,正常核型CR率31 %。结论　t(8;21) AML患者主要在M2中集中出现,附加染色体异常较多见。CD19表达较高,而CD7表达极低,CD34、CD117高表达,这些抗原的表达可能与核型密切相关。CD+19 是预后良好的指标,但同时出现CD+7,则预后不良。     

应用FISH技术检测慢性淋巴细胞白血病ATM 和RB1基因缺失*

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病（CLL）中11q22.3（ATM基因）和13q14（RB1 基因）的缺失情况以及荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）技术检测慢性淋巴细胞白血病（CLL）染色体异常的价值,了解CLL 的分子遗传学特性。方法:分别用ATM和RB1 探针,运用荧光原位杂交（FISH）技术对10例CLL 确诊患者的11q22.3 和13q14染色体进行检测,并和常规细胞遗传学（Conventional cytogenetics,CC）检测方法,即G 显带法进行比较。结果:10例CLL 患者常规细胞遗传学检出2 例,其中t（5,9）,t（10,12）和+ 12各1 例;而FISH方法检出7 例至少有一种分子遗传学异常,del（11q22.3）4 例,纯合缺失2 例,del（13q14）7例,纯合缺失2 例。10例患者中4 例同时有del（11q22.3）和del（13q14）这2 种染色体异常。结论:FISH是一种在分析CLL 染色体异常方面较为快速、准确和敏感的有效技术,可提高染色体异常检出率,为CLL 提供较为准确的分子细胞遗传学信息,指导临床与预后分析。      

多参数流式细胞术观察251例白血病细胞CD14表达的意义

目的　探讨 CD14在白血病细胞的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义。方法　采用 CD45 /SSC参数设门多色流式细胞术分析 2 5 1例白血病细胞 CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果　 2 5 1例中有 19例 ( 7.5 % )白血病细胞表达 CD14,95例急性髓系白血病 ( AML )中 16例 ( 16 .8% )白血病细胞表达 CD14,130例淋系白血病未见 CD14阳性的病例。 M4和 M5b CD14的阳性率 ( 9/ 14;6 / 6 )明显高于 M2 ( 1/ 30 ) ( P=0 .0 0 1;P=3.6× 10 - 6 )及 M5a( 0 / 5 ) ( P=0 .0 3;P=2 .2× 10 - 3 )。标准 CD14单抗均不与 5例 M5a细胞反应 ,而自制 CD14新克隆 2 F9单抗则全部阳性。5例 M5a中 1例 CD15和 2 9例 M2 中 13例 CD11b的阳性率明显低于 M5b( 6 / 6 ,P=0 .0 2 ;6 / 6 ,P=0 .0 2 )。在 AML 组中 ,CD14的表达与 CD117呈负相关 ( r=- 0 .2 ,n=81,P=0 .0 3) ,与 CD11b、CD15及HL A- DR呈正相关 ( r=0 .5 ,n=93,P=0 .0 0 1;r=0 .4,n=95 ,P=0 .0 0 1;r=0 .2 ,n=95 ,P=0 .0 2 )。结论　 CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及其单核细胞相关性白血病的诊断与鉴别 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为 96 .7% ,敏感性为 6 0 .0 %。     

Detection of cryptic chromosomal aberrations in the in vitro non-proliferating cells of acute myeloid leukemia

A total of 22 acute myeloid leukemia (AML) cases were analyzed by cell-specific comparative genomic hybridization (micro-CGH). Conventional banding analysis identified a monosomy 7 in six (group I), a trisomy 8 in eight (group II) and a normal karyotype in eight cases (group III). A total of 32 additional chromosomal imbalances was detected and confirmed in two independent micro-CGH experiments. However, only in 9 of the 22 cases (group I: 4 cases; group II: 1 case; group III: 4 cases) the existence of 11 of the 32 (34.5%) detected copy number alterations could be confirmed by other fluorescence in situ hybridization (FISH) approaches. These results lead to two conclusions: i) in the in vitro non-proliferating population of AML tumor cells one can detect cryptic chromosomal aberrations, which might constitute tumor markers of diagnostic and prognostic value; ii) The results of CGH need to be checked by other approaches.     

急性白血病伴CD56阳性的临床意义

目的：探讨CD56在急性白血病中的表达及其临床意义。方法：就近2年来应用流式细胞仪检测了CD56的92例急性白血患者中发现的CD56阳性病例,分析细胞形态学、免疫表型和临床特点。结果：92例急性白血病中15例（16．3％）表达CD56,其中1例急性前髓系／NK细胞白血病（Myeloid/NK cell precursor acute leukemia),1例原始NK细胞白血病（Blastic NK cell leukemia),1例NK样T细胞淋巴瘤／白血病（NK－like T-cell lymphoma/leukemia),12例急性髓细胞白血病伴NK细胞抗原表达或急性髓系／NK细胞白血病。结论：伴CD56阳性急性白血病,其细胞形态学、免疫表型及临床表现各有特点,见于M2、M5、L2,髓外浸润多见,多预后不良。     

急性粒-单核细胞白血病的细胞遗传学异常研究

背景与目的：2001年WHO分型特别提出4种伴再现性遗传学异常的急性髓细胞白血病（AML），其中inv（16）（p13：q22）与急性粒一单核细胞白血病（M4）密切相关，是预后好的标志。本研究旨在探讨M4的细胞遗传学特征。方法：采用直接法及短期培养法制备骨髓细胞染色体，并以R显带技术对89例M4患者进行核型分析，并应用间期荧光原位杂交（I-FISH）技术对其中伴有＋22异常的患者进行inv（16）检测。结果．89例M4患者中，异常染色体检出率为40．4％（36／89），共12种主要异常核型，其中5种为特异性染色体异常，见于25例患者，占核型异常患者的69．4％。单纯＋8（10例）为最常见的数目异常；结构异常最多见的是inv（16）（5例）；t（8；21）者3例；伴t（9；22）者有1例；其中5例inv（16）及3例＋22均只见于M4Eo患者。3例＋22患者FISH检测inv（16）均阳性。结论：细胞遗传学研究对于急性粒一单核细胞白血病的诊断具有重要价值，但是细胞遗传学对inv（16）检测阳性低，对怀疑病例及所有＋22异常的患者，应尽可能进行FISH检测。     

急性白血病MLL基因重排检测的临床意义

 目的　研究混合谱系白血病（MLL）基因重排在急性白血病（AL）中的发生率、产生融合基因的常见类型及其临床意义。方法　采用多重巢式RT-PCR法对109例AL患者进行免疫表型检测,分析MLL基因重排阳性患者的临床特征。结果　109例AL中7例发生MLL基因重排,发生率为6.4 %,其中AML 4例（1例为M2,1例为M4,2例为M5）, ALL 3例,均为B-ALL。多重巢式RT-PCR检测到的融合类型为MLL-AF4、MLL-AF6、MLL-AF9、MLL-AF10、MLL-ENL。MLL基因重排阳性患者外周血WBC高于MLL基因重排阴性患者,差异有统计学意义（P＝0.019）。结论　多重巢式RT-PCR是检测MLL基因重排快速有效的方法。伴MLL基因重排的AL患者WBC较高,预后差。     

Distribution of a new B-cell-associated surface antigen (BL7) detected by a monoclonal antibody in human leukemic disorders

A murine monoclonal antibody (anti-BL7) was raised by immunization of BALB/c mice with a precursor B-cell line (Josh-7) which detects a heat-stable, nonimmunoprecipitable antigen. The expression of BL7 was investigated in peripheral blood and/or bone marrow leukemic cell suspensions stained by indirect immunofluorescence and analyzed by flow cytometry. Lymphoblasts from 43 of 43 cases of "null" acute lymphoblastic leukemia were BL7-. Five cases of T-acute lymphoblastic leukemia and 5 cases of terminal deoxynucleotidyl transferase-positive blastic chronic myelogenous leukemia were also BL7-. All 63 cases of B-cell chronic lymphocytic leukemia were BL7+. Neoplastic cells in 22 of 28 cases of B-cell non-Hodgkin's lymphomas in leukemic phase were also BL7+. Expression of BL7 showed some correlation with Rappaport's histological classification. Four cases of multiple myeloma and plasma cell leukemia were BL7-. Twenty-three cases of acute nonlymphocytic leukemias were also analyzed. Of these, only the acute promyelocytic (M3,4 cases) and acute myelomonocytic (M4, one case) varieties expressed BL7 on a small proportion (approximately 15%) of the leukemic cells. All other subgroups were BL7-. The reactivity of anti-BL7 was compared to other B-cell antibodies on selected samples and was shown to be different from B1, B2, and the BA antibodies. Anti-BL7 is a unique monoclonal antibody useful in the study of B-cell cancers.     

Flow cytometric characterization of acute myeloid leukemia. Part 1. Significance of light scattering properties

Acute leukemias are classified using the morphological and cytochemical criteria set forward by the French, American and British (FAB) group. Immunophenotyping is helpful for the differential diagnosis but is secondary to the morphological criteria. Immunophenotyping performed by flow cytometry, however, can yield valuable information on cell morphology in addition to cell surface antigen expression. To provide a basis of a combined evaluation of both morphology, i.e. light scattering, and immunophenotype by flow cytometry we have compared the light scattering profiles of 70 patients newly diagnosed with acute leukemia with normal bone marrow and related the findings to the FAB classification. Three main light scattering profiles were observed in the bone marrow aspirates of the 70 patients (A1,2; B1,2,3; C1,2,3,4). A1,2, characterized by a predominant cell cluster with low forward and orthogonal light scattering, contained only and all patients diagnosed as acute lymphoblastic leukemia, acute undifferentiated leukemia, and acute non-lymphocytic leukemia M6 and M1. B1,2,3 is characterized by a predominant cell cluster with large forward and low to high orthogonal light scattering. Category B1 contained the majority of patients classified as M5; the M3 leukemias were categorized as B2. C1,2,3,4 is characterized by a predominant cell cluster with low forward and orthogonal light scattering that branches towards regions with larger light scattering. Categories C1 and C2 contained the majority of the patients classified as M2. Category C3 was specific for M4 and M4eo leukemias. The patients diagnosed as M4 were heterogeneous and equally distributed over the B and C categories. The clear relationship found between the FAB classification and classification by the light scattering profile of the acute leukemias enhances the importance of the flow cytometric classification of leukemias. In contrast with light microscopy, flow cytometry can now provide the hematologist with an objective technique to classify leukemias by the simultaneous assessment of cell surface antigen expression and cell morphology, i.e. light scattering.     

DNA, RNA, and protein content in adult acute myeloid leukemia: effects of cytostatic drugs in vivo

DNA, RNA, and/or protein cellular content were studied by flow cytometry in 52 cases of acute myeloid leukemia before and on day 4 of remission induction treatment. Bone marrow (BM) samples were stained after fixation by acridine orange for DNA and RNA content (37 cases) and by propidium iodide and fluorescein isothiocyanate for DNA and protein content (52 cases). A positive correlation was found between pretreatment protein content and BM blast involvement: the higher the percentage of blasts in BM smears the higher the mean protein content (p less than 0.05). Protein content was higher in monoblastic leukemia (M4 and M5) than in the granulocytic types (M1, M2, M3) (p less than 0.05). S + G2 + M was higher in patients with protein content below 80 arbitrary units than in the subgroup with protein content above this threshold (p less than 0.05). Pretreatment RNA content, estimated by the RNase-sensitive fraction of G1 cells, was significantly higher in undifferentiated and M1 leukemias than in the other cytological groups (p less than 0.0001). This fraction was higher in patients who subsequently achieved complete remission, but it was not related to BM blast involvement or proliferative fraction of cells. During cytostatic treatment the changes in RNA and protein content did not follow a typical pattern. The connections between variations of DNA, RNA, and protein content and prognosis are examined and their possible relation to drug-induced blast cell maturation is discussed.     

病态造血特点在骨髓增生异常综合征预后评估中的价值

目的 探讨病态造血特点在骨髓增生异常综合征（MDS）向急性白血病转化及预后评估中的价值.方法 以2008 WHO MDS分类标准为诊断金标准,选择2008年2月至2014年3月98例MDS患者,分别进行细胞形态学、细胞遗传学及流式细胞术等检测,分析患者病态造血特点在MDS向急性白血病转化及预后评估中的意义.结果 98例MDS患者经随访,27例转化为急性髓系白血病,其中转化为M215例、M410例、M62例.67例存在Pelger-Hu（e）t异常者中23例转化为急性白血病,31例无Pelger-Hu（e）t异常者中4例转化为急性白血病,转化率差异有统计学意义（x2=4.87,P=0.030）;37例存在Auer小体者中19例转化为急性白血病,61例无Auer小体者中8例转化为急性白血病,转化率差异有统计学意义（x2=16.87,P=0.000）;52例小巨核病态改变者中21例转化为急性白血病,46例无小巨核病态改变者中6例转化为急性白血病,转化率差异有统计学意义（x2=9.14,P=0.003）.98例MDS患者中,37例死亡,存在Pelger-Hu（e）t异常、Auer小体、小巨核病态改变患者的中位生存时间分别为26个月（95％CI13～38）、19个月（95％CI11～26）、13个月（95％CI6～19）,差异均有统计学意义（x2值分别为11.05、13.04、21.05,P值分别为0.001、0.000、0.000）.结论 形态学异常是MDS患者在细胞学上的外在表现,Pelger-Hu（e）t异常、Auer小体、小巨核病态改变与转化为急性白血病及其预后有相关性,对指导预后有一定意义.