马蔺子甲素体外抗癌及其诱导白血病细胞K562凋亡的作用

 目的 研究马蔺子甲素体外抗癌及其诱导白血病细胞K562凋亡的作用。方法 采用四氮唑蓝（MTT）法检测马蔺子甲素对白血病K562和阿霉素耐药株K562/AO2、白血病HL-60、肺癌GLC-82、肝癌BEL-7402、胃腺癌BGC-823、神经母细胞瘤LA-N-5、星型胶质瘤TJ-905、骨肉瘤MG-63 9种人癌细胞株的IC₅₀;应用荧光显微镜、电镜和流式细胞术的方法检测马蔺子甲素诱导K562细胞凋亡的作用,并采用流式细胞仪检测其凋亡百分率和细胞周期。结果 马蔺子甲素对9种人癌细胞株作用72 h,IC₅₀均在26.70 nmol·mL-1（10.0 μg·mL-1）以下;马蔺子甲素终浓度8.01 nmol·mL-1（3.0 μg·mL-1）与K562细胞共培养72 h,电镜和荧光镜下明显可见细胞形态学呈凋亡特征样改变,流式细胞仪检测其凋亡率为（20.36±1.41）%,与对照组比较统计学差异有显著性;马蔺子甲素终浓度2.67 nmol·mL-1（1.0 μg·mL-1）也具有诱导K562细胞凋亡的作用。马蔺子甲素作用后,K562细胞G₀/G₁期显著升高,S期细胞则显著降低,细胞周期被阻断在G₀/G₁期。结论 马蔺子甲素对多种人癌细胞株具有显著的体外抗癌活性,并能诱导白血病细胞K562凋亡。     

过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷的保护作用

 目的探讨过氧化氢诱导PC12细胞凋亡及芍药苷保护作用的可能机制。方法MTT测定细胞存活率,流式细胞仪测定细胞凋亡率,DCFH-DA为细胞内荧光探针,测定细胞内ROS浓度,流式细胞仪检测线粒体跨膜电位。结果200μmol·L^-1H₂O₂可诱导PC12细胞凋亡,细胞内ROS浓度增加,细胞线粒体跨膜电位明显下降。预先经过0.1,1和10μmol·L^-1浓度的芍药苷处理后,H₂O₂诱导的PC12细胞凋亡明显减少,同时明显减弱H₂O₂对细胞内ROS浓度和线粒体跨膜电位的影响。结论芍药苷可抑制过氧化氢诱导PC12细胞凋亡,其作用机制可能与其抑制细胞内ROS累积,稳定细胞线粒体跨膜电位有关。     

隐丹参酮对K562细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨隐丹参酮诱导人慢性髓系白血病K562细胞凋亡的作用及其线粒体途径相关机制。方法 MTT法检测隐丹参酮对细胞增殖的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测丹参酮对细胞凋亡的影响,DAPI染色法观察细胞形态的变化;Western blotting检测丹参酮对细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP、Bax、Bcl-2和细胞色素C（Cyt C）表达的影响,线粒体膜电位检测试剂盒检测丹参酮对线粒体膜电位的影响;检测线粒体膜通透性转运孔（PTP）抑制剂环孢霉素A和caspase抑制剂z-VAD-fmk对隐丹参酮药效的影响。结果 隐丹参酮对K562细胞的生长有显著抑制作用,可引起细胞形态发生明显改变,诱导细胞发生凋亡,提高蛋白Bax/Bcl-2的比例,降低线粒体膜电位,促进Cyt C从线粒体释放到胞浆,增强促凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9和PARP的活性。环孢霉素A和cz-VAD-fmk均能减弱隐丹参酮抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。结论 隐丹参酮可显著诱导K562细胞凋亡,其机制与线粒体凋亡途径密切相关。     

汉黄芩素体外抗人胃癌SGC7901细胞的增殖、凋亡作用

 目的 探讨汉黄芩素对人胃癌SGC7901细胞增殖抑制和凋亡诱导作用。方法 应用四甲基偶氮唑盐（MTT法测定汉黄芩素对于SGC7901细胞增殖活性;应用肿瘤细胞侵袭实验观察细胞侵袭能力;应用形态学方法、流式细胞仪测定汉黄芩素对SGC7901细胞的凋亡作用,进行细胞周期分析,并观察对胃癌细胞内活性氧（ROS的影响。结果 汉黄芩素对SGC7901细胞增殖和侵袭活性具有明显抑制作用,其抑制细胞增殖的IC₅₀为（74.26±1.21μmol·L-1,汉黄芩素也具有诱导胃癌细胞凋亡作用,荧光染色可见明显核碎裂、染色体聚集,并使胃癌细胞阻滞于G₀/G₁期;使肿瘤细胞内ROS水平明显升高。结论 汉黄芩素对胃癌SGC7901细胞的增殖有抑制及促进凋亡的作用,可能与上调细胞内ROS水平有关。     

番茄红素对鱼藤酮所致PC12细胞线粒体损伤的影响

目的: 研究番茄红素对鱼藤酮诱导PC12细胞线粒体损伤的保护作用。方法: 采用鱼藤酮(0.5 μmol·L^-1)诱导PC12细胞损伤模型,给予番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理2 h后,加入鱼藤酮,使终浓度达到0.5 μmol·L^-1,培养24 h后,CCK-8法检测细胞存活率,倒置相差显微镜观察细胞形态改变、透射电镜观察细胞线粒体超微结构,罗丹明123染色检测线粒体膜电位,以观察番茄红素的保护作用。结果: CCK-8结果显示与正常对照组比较,模型组细胞存活率下降为70.34%±2.81%(P<0.05),与模型组比较,番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理后其细胞存活率分别提高到83.09%±3.15%,87.24%±2.15%,89.17%±2.26%(P<0.05);倒置相差显微镜观察显示鱼藤酮可导致PC12细胞凋亡,经番茄红素处理后,模型细胞凋亡情况明显改善;透射电镜观察显示鱼藤酮可导致PC12细胞线粒体超微结构发生改变,经番茄红素处理后,模型细胞凋亡情况明显改善;流式细胞仪检测结果显示与正常对照组比较,模型组细胞线粒体膜电位平均荧光强度下降为151.63±12.25(P<0.05),经番茄红素(3,10,30 μmol·L^-1)预处理后线粒体膜电位平均荧光强度分别提高到202.24±26.28,226.21±9.71,238.83±10.29 (P<0.05)。结论: 番茄红素对鱼藤酮诱导的PC12细胞线粒体损伤有保护作用。     

野西瓜正丁醇萃取物对HepG2细胞线粒体膜电位和［Ca2+］i的影响

目的 研究野西瓜正丁醇萃取物诱导人肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的机制,观察其对 HepG2 线粒体膜电位和细胞内 Ca²⁺ 浓度［Ca²⁺］_i 的影响。方法 经流式细胞仪观察野西瓜正丁醇萃取物对线粒体膜电位的影响;激光共聚焦显微镜检测野西瓜正丁醇萃取物作用前后,HepG2 细胞［Ca²⁺］_i 的变化。结果 野西瓜正丁醇萃取物可不同程度降低 HepG2 细胞线粒体跨膜电位,此外,中、高剂量的野西瓜正丁醇萃取物还可以显著升高［Ca²⁺］_i,造成钙稳态平衡。结论 野西瓜正丁醇萃取物降低线粒体膜电位,开放 MPTP 孔道,造成细胞内 Ca²⁺ 超载,诱导 HepG2 细胞凋亡。     

尼洛替尼诱导K562/A02细胞凋亡及对HO-1基因表达的影响

 目的 研究尼洛替尼(nilotinib,AMN107诱导K562/A02细胞凋亡及对血红素加氧酶-1(HO-1基因表达的影响。方法 采用荧光原位杂交(FISH法检测K562/A02细胞中的BCR-ABL融合基因;用不同浓度的AMN107分别处理K562/A02细胞24 h后,通过实时荧光定量PCR(RQ-PCR法检测BCR-ABL融合基因mRNA的表达水平;采用MTT法观察细胞增殖变化;通过Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡和细胞周期;采用RT-PCR法和Western Blot法检测HO-1基因的表达。 结果 FISH法分析结果显示,K562/A02细胞BCR-ABL融合基因阳性细胞占细胞总数98%;RQ-PCR法检测结果显示,0,5,10,20 μmol·L-1 AMN107作用于K562/A02细胞24 h后BCR-ABL融合基因表达随AMN107浓度增加而逐渐下降;MTT法和Annexin V/PI法显示与对照组相比,细胞存活率随AMN107浓度升高而下降,凋亡率逐渐增加;细胞周期分析显示,经AMN107处理的细胞,G₀/G₁期和S期细胞明显减少,细胞阻滞在G₂/M期;RT-PCR法和Western blot法均检测到HO-1基因表达随AMN107浓度升高而降低。结论 AMN107可抑制BCR-ABL融合基因和HO-1基因表达,从而诱导慢性粒细胞白血病（CML耐药细胞的凋亡,说明HO-1是CML细胞生长以及BCR-ABL基因存在的一个相关因子,HO-1基因是克服慢性粒细胞白血病耐药的一个潜在靶向。     

龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的线粒体通路研究

 目的观察龙葵碱诱导HepG₂细胞凋亡与线粒体通路的关系。方法MTT法测定龙葵碱对HepG₂细胞的细胞毒作用;AO/EB双染,激光共聚焦扫描显微镜观察龙葵碱对HepG₂细胞形态学的影响;TMRE和Fluo-3/AM双染,激光共聚焦扫描显微镜同时观察细胞线粒体膜电位和细胞内[Ca²⁺]_i的变化。结果龙葵碱对HepG₂细胞有细胞毒作用;龙葵碱诱导HepG₂细胞形态出现凋亡形态时TMRE和Fluo-3/AM双染观察表明,龙葵碱在降低线粒体膜电位的同时能够升高细胞内[Ca²⁺]_i浓度。结论龙葵碱降低膜电位,开放细胞膜PT通道,使细胞内Ca²⁺顺浓度梯度转运,从而升高细胞内Ca²⁺浓度启动细胞凋亡机制。     

石蒜碱调控线粒体氧化损伤介导人乳腺癌细胞自噬及凋亡作用机制

目的 研究石蒜碱介导人乳腺癌MDA-MB-231细胞自噬及凋亡的作用机制。方法 采用CCK-8法检测石蒜碱对MDA-MB-231细胞增殖的影响;倒置显微镜、荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜（laser scanning confocal microscopy,LSCM）观察细胞形态;细胞集落实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡率、细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平、线粒体膜电位;LSCM检测线粒体膜通透性转换孔（mitochondrial permeability transition pore,MPTP）开放情况;Western blotting检测线粒体自噬相关蛋白［线粒体内膜转位酶（translocase of inner membrane,TIM）、线粒体外膜转位酶（translocase of outer membrane,TOM）、E3泛素连接酶（E3 ubiquitin protein ligase,PARKIN）、PTEN诱导的激酶1（PTEN induced putative kinase 1,PINK1）、微管相关蛋白轻链3（microtubule-associated protein light chain 3,LC3-B）、p62］和凋亡相关蛋白［半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3,Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）、细胞色素C（cytochrome-C,Cyt-C）］的表达。结果 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,其半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC₅₀）值为6.21 μmol/L;石蒜碱能够改变细胞形态,部分细胞出现凋亡迹象;石蒜碱能够显著抑制细胞的增殖和迁移能力（P＜0.01）;与对照组比较,随着石蒜碱给药浓度的增加,细胞凋亡率随之升高（P＜0.01）,ROS水平升高（P＜0.01）,线粒体膜电位下降（P＜0.01）,MPTP开放（P＜0.01）;石蒜碱给药48 h后,细胞内TIM、TOM、p62和Bcl-2蛋白表达量下调（P＜0.01）,PARKIN、PINK1、LC3-B、Caspase-3、Bax和Cyt-C蛋白表达量上调（P＜0.01）,且呈浓度相关性。结论 石蒜碱对MDA-MB-231细胞具有生长抑制作用,并可通过调控线粒体氧化损伤介导MDA-MB-231细胞的自噬及凋亡。     

辣椒碱通过TRPV1诱导结肠癌SW480细胞凋亡

目的 探讨辣椒碱通过瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）对人结肠癌SW480细胞的影响及可能的分子机制。方法 设立辣椒碱组及空白组,通过细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测辣椒碱（50,100,200,300,400,500,600,800,1 000 μmol·L^-1）处理SW480细胞12,24,48 h后的细胞活性,选取有效抑制增殖的辣椒碱浓度;采用流式细胞术检测辣椒碱干预（200,400,800 μmol·L^-1）后细胞凋亡及细胞周期的变化;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（200,400 μmol·L^-1）干预后TRPV1,肿瘤抑制蛋白p53,磷酸化p53（p-p53）,抑癌基因［B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）］,活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3（cleaved Caspase-3）,cleaved Caspase-8,活化的聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（cleaved PARP）的蛋白表达的影响;此外,利用微小RNA（mRNA）沉默技术作用TRPV1,观察200 μmol·L^-1辣椒碱处理沉默TRPV1的SW480细胞凋亡率的变化,以及上述蛋白表达的影响。结果 与空白组比较,辣椒碱50,100 μmol·L^-1作用对细胞活性未出现显著影响,浓度在200 μmol·L^-1以上时,随浓度增加细胞活性逐渐降低（P<0.01）,呈剂量依赖效应;与空白组比较,辣椒碱200,400,800 μmol·L^-1处理可明显诱导细胞凋亡（P<0.05,P<0.01）;200,400 μmol·L^-1 辣椒碱干预下,细胞生长表现为G₂/M期阻滞,800 μmol·L^-1表现为G₀/G₁期阻滞（P<0.05）;与空白组比较,辣椒碱200,400 μmol·L^-1处理细胞能够明显上调上述凋亡途径中相关蛋白（p53,p-p53,Bax,cleaved Caspase-3,cleaved Caspase-8,cleaved PARP）的表达（P<0.05,P<0.01）,Bcl-2蛋白表达显著下调（P<0.01）;沉默TRPV1能明显抑制辣椒碱诱导的细胞凋亡及凋亡通路蛋白表达（P<0.05,P<0.01）。结论 辣椒碱可能通过TRPV1受体抑制SW480细胞增殖,阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡。     

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??OBJECTIVE To study the effect of a novel naphthalimide-polyamine conjugate on apoptosis of human hepatocellular carcinoma HepG2 cell line. METHODS MTT assay was used to evaluate the cell inhibition rate. The cellular morphous was detected with AO/EB/Hoechst staining, the ROS was detected with DCFH-DA staining, the mitochondrial membrane potential(????_m)was detected with Rh123 staining,the expression of caspase-9 and PARP-1 was detected by immunofluorescence method . The cell cycle was detected by HCS. Apoptosis of HepG2 cells was quantified by flow cytometry using Annexin V/PI stain. RESULTS Proliferation of HepG2 cells was inhibited significantly by the naphthalimide-polyamine conjugate in a dosage dependant manner. Under HCS, some HepG2 cells underwent a typical apoptotic morphologic change and the expression of ROS and caspase-9 was increased. The expression of PARP-1 and the mitochondrial membrane potential(????_m)was detected decreased. Flow cytometry indicates 64.12% HepG2 cells were induced apoptosis after 48 h incubation with 25 ??mol??L^-1 naphthalimide-polyamine conjugate. CONCLUSION The naphthalimide-polyamine conjugate could significantly induce the apoptosis of HepG2 cells by the mitochondrial pathway. The mechanism is concerned with increasing ROS, decreasing the mitochondrial membrane potential, upgrading caspase-9 and decreasing the expression of PARP-1.
     

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??OBJECTIVE To investigate the protection of hepatocyte growth factor (HGF) on CML cell line K562 from apoptosis induced by etoposide (VP-16) and its molecular mechanism. METHODS Quantitative and qualitative analyses on cell morphological change of apoptosis were performed through acridine orange (AO) staining and HE staining, and fluorescent flow cytometry.The test analyzes membrane on the surface of the PS evagination and integrity of cell membrane surface and mitochondrial membrane potential changes were performed through Annexin V-FITC/PI double dyeing and JC-1 cell dyeing tests, and apoptotic factors such as Bcl-2, Bax, Caspase-3 and Caspase-9 were measured by SYBR Green (Takara) qRT-PCR. RESULTS The HE and AO staining revealed that apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.05), HGF can inhibit the apoptosis of cells induced by VP-16; FCM (Annexin V-FITC/ PI and JC-1) tests showed that cells apoptotic rates in HGF+VP-16 groups were significantly lower than those in VP-16 groups (P<0.05,P<0.001), indicating that HGF has the anti-apoptosis function. Apoptosis related gene mRNA expression tests found that the Bcl-2 mRNA expression in HGF+VP group was obviously higher than that in the VP-16 group (P<0.001), while Bax mRNA, Caspase-3 mRNA, and Caspase-9 mRNA expressions were significantly lower than those in the VP-16 group (P<0.05, P<0.001, P<0.001),suggesting that HGF possesses antiapoptotic effect through inhibiting apoptosis gene expression and promoting the antiapoptotic gene expression simultaneously. CONCLUSION HGF can significantly protect K562 cells from apoptosis induced by VP-16 through the HGF/c-Met way to regulate PI3K/AKT pathway.     

红花桑寄生总黄酮提取物选择性抑制人源肿瘤细胞增殖和诱导凋亡

目的 观察红花桑寄生总黄酮提取物（Nispex）的体外抗肿瘤效果。方法 应用MTT法研究Nispex对人及小鼠多种肿瘤细胞和非肿瘤细胞增殖的抑制效果, 采用细胞集落培养法研究Nispex对人源肿瘤细胞中增殖细胞群的影响;采用AO/EB荧光染色、末端原位标记（TUNEL）法以及AnnexinV流式细胞术检测细胞凋亡。结果 Nispex能显著抑制人源肿瘤细胞增殖和诱导人源肿瘤细胞凋亡, 对肿瘤细胞中的增殖细胞群作用更为敏感。但Nispex对人源非肿瘤细胞的抑制作用不明显, 对鼠源细胞在检测浓度范围内未见有作用。结论 Nispex是一种对人源肿瘤细胞具有良好选择性的天然植物提取物。     

雷公藤红素对白血病细胞Akt信号通路的影响及在细胞凋亡中的作用

目的 研究雷公藤红素（celastrol)对人类白?∠赴闗562细胞Akt信号通路的影响及其作用。     

槲皮素对人骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:研究槲皮素(quercetin,Qu)对骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300增殖和凋亡的作用及其机制。方法:MTT法观察细胞增殖活性;Annexin V/PI染色检测凋亡;线粒体膜电位及细胞色素C的Western blot检测线粒体凋亡途径;持续活化Akt瞬时转染、Western blot检测Akt通路相关蛋白表达水平变化。结果:槲皮素可明显抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300生长,并呈时间和剂量依赖性;Annexin V/PI可明显检测到细胞凋亡;进一步发现其作用机制是通过下调线粒体膜电位,促进细胞色素C向胞浆释放及抑制Akt磷酸化来实现。结论:槲皮素可显著抑制耐甲氨蝶呤骨肉瘤细胞系U-2OS/MTX300细胞增殖并诱导其凋亡,其机制与线粒体凋亡途径及抑制Akt活性有关。     

烟酰胺对白介素-1β诱导HEK-293细胞凋亡的保护作用

 目的 研究烟酰胺对白介素-1β（IL-1β）诱导HEK-293细胞凋亡的保护作用及机制。方法 体外培养HEK-293细胞,将HEK-293细胞分成6组,在培养基内加不同浓度的IL-1β、烟酰胺干预。干预3 d后噻唑蓝（MTT）检测、Annexin V-PI染色、caspase-3、8、9活性检测、细胞内活性氧簇（ROS）水平、ATP浓度及线粒体膜电位检测。结果 应用烟酰胺的MTT吸光度明显升高,凋亡细胞比例明显降低,caspase-3、8、9活力降低,ATP浓度明显增加,ROS水平明显减少;线粒体膜电位红绿荧光比值明显增加。结论 体外条件下, 烟酰胺促进HEK-293细胞的增殖并抑制IL-1β诱导的HEK-293细胞凋亡,其对细胞凋亡的保护作用可能主要通过保护线粒体功能从而改善细胞线粒体能量代谢来实现。     

黄芪总黄酮和毛蕊异黄酮对K562细胞的抑制作用及其机制研究

目的:探讨黄芪总黄酮(total flavonoids of Astragali Radix,TFA)和毛蕊异黄酮在体外实验条件下对人红白血病K562细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以K562细胞为实验对象,运用MTT方法测定不同浓度TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞的增殖抑制作用,PI单染法检测药物对K562细胞周期的作用,Annexin V/PI双染法检测药物对K562胞诱导凋亡的影响,并且应用RT-PCR技术检测药物作用下K562细胞中Cyclin D1 mRNA水平表达的变化.结果:与阴性对照组相比,TFA及毛蕊异黄酮处理24h后,TFA和毛蕊异黄酮对K562细胞有明显的抑制作用,其IC5o分别为98.63,130.32 mg·L-1;TFA在100 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为7.8％,毛蕊异黄酮在130 mg·L-1的剂量下,对K562细胞的抑制率仅为5.8％;药物对K562细胞持续作用24h后,可以使G0/G1期细胞明显增多,S期细胞明显减少;经IC50剂量的药物处理后,K562细胞内的Cyclin D1 mRNA水平明显降低.结论:TFA和毛蕊异黄酮具有抑制K562细胞增殖作用;将细胞生长周期阻滞在G0/G1期以及降低细胞内Cyclin D1 mRNA水平可能是它们抑制K562细胞生长的主要作用机制.     

白藜芦醇对K562/ADM细胞促凋亡作用研究

目的:探讨白藜芦醇诱导K562/ADM细胞凋亡的效应与细胞活性氧水平的关系。方法:应用噻唑蓝(MTT)比色法、光镜、电镜和流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;FCM测定细胞内活性氧(ROS)水平。结果:白藜芦醇显著抑制K562/ADM细胞增殖,形态学呈现典型的凋亡改变;FCM分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;ROS水平升高。结论:白藜芦醇诱导K562/ADM胞凋亡与细胞内活性氧水平升高有关。