宫内传播中乙型肝炎病毒前S/S基因序列分析

目的　研究宫内传播中乙型肝炎病毒 (HBV)的前S/S基因结构 ,探讨HBV基因变异与宫内传播的关系。方法　根据新生儿发生HBV宫内感染与否 ,将其HBsAg阳性母亲分为宫内感染组和非宫内感染组 ,经PCR扩增HBV前S/S基因 2 848- 835位核苷酸序列 ,克隆、测序 ,比较 2组基因结构的差异。结果　全部HBV株序列都属于C基因亚型、adr亚型 ,宫内感染组中母婴序列的相似性达 99.2 %～ 1 0 0 .0 %。 2组患者在前S1区、前S2区和S区均有各自的突变位点 ,S区“a”决定簇表位几乎没有突变发生。非宫内感染组中nt2 90 9、nt399、nt2 93和nt483突变出现较多 ,而在宫内感染组尤其是新生儿的序列中出现较少。而且非宫内感染组前S2区 (P <0 .0 5)、S区 (P <0 .0 1 )和前S/S区 (P <0 .0 5)突变率也高于宫内感染组。结论　引起新生儿宫内感染的HBV前S/S基因异质性较低 ,提示前S/S区突变率低的HBV株可能容易引起新生儿的宫内感染     

乙型肝炎免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播过程中病毒S区基因变异的研究

目的了解乙型肝炎免疫球蛋白（HBIG）在阻断母婴传播过程中S基因变异的特点,比较与未予阻断者的差异,探讨基因变异与宫内传播的关系,协助评价HBIG的治疗安全性.方法将18对乙型肝炎病毒（HBV）携带母亲及其宫内感染新生儿按母亲产前处理分为HBIG组8对,母亲于产前3月起肌肉注射HBIG 200～400IU至分娩前;对照组10对,母亲产前不接受HBIG者.巢式PCR扩增HBV S基因片段并直接测序.以每对病例第一份（母亲孕中期）血清HBV株S基因区氨基酸（或核苷酸）作为标准,对每对病例第二份血清（母亲分娩前）和第三份血清（新生儿）HBV株进行分析.结果HBV S区碱基替代突变率和氨基酸变异数在HBIG组和对照组之间的差异均无统计学意义;18例宫内感染儿17例其病毒株与母亲分娩前的优势株一致,其中4例为S区变异株;18例宫内感染儿病毒株分型B型adw2 12例,C型adrq^＋6例.结论无症状携带HBV孕妇产前使用现有剂量HBIG至临产并未增加HBV S区的变异.HBV S区变异株和未变异株均可经宫内传播,宫内感染发生于孕后期;HBV S区变异并非发生宫内感染的主要原因.     

乙型肝炎病毒基因在宫内传播中的选择性

目的探讨乙型肝炎病毒（HBV）基因突变与宫内传播的关系。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法从HBsAg阳性孕妇及其新生儿血清中扩增得到包括HBV前C／C区和前S／S区基因的2．5kb基因片断或前S／S区1．2kb基因片断,克隆、测序,分析测序结果,比较母婴HBV基因序列的差异。结果4对发生宫内感染的母婴HBV序列共得到43株,都属于HBVC基因亚型、adr血清亚型。HBV前S／S区序列中,新生儿序列的差异性低于母体（P〈0．05）。4对母婴问序列的平均相似率分别为99．47％、99．39％、99．37％和99．46％;母婴序列具有高度一致性;每对母婴序列间的进化距离都比较小,核苷酸差异率分别为0．4、0．8、1．2和0．3。母婴序列间均存在1个或数个核苷酸位点的差异,母体内的优势株和新生儿体内的优势株不完全相同。结论母体内的优势株或弱势株都可以通过宫内传播感染新生儿,可能与其基因突变有密切关系。提示HBV的宫内传播存在基因选择性。     

乙型肝炎病毒基因型与HBV宫内传播关系的研究

目的：探讨乙型肝炎病毒基因型与HBV宫内传播之间的关系。方法：采集170例HBsAg阳性孕妇及其172例新生儿外周血，巢式PCR检测血清HBV DNA。PCR-RFLP技术结合PCR产物直接测序鉴定HBV基因型。结果：太原地区HBsAg阳性孕妇及其新生儿携带乙型肝炎病毒有B、C、133种基因型，以C型为优势基因型。HBV C型与B型孕妇HBV宫内感染率分别为56．45％、50．00％（x^2=0．092，P=0，761），两组孕妇的HBV宫内感染率差异无统计学意义。所有发生宫内感染的新生儿HBV基因型均与其母亲一致。结论：孕妇感染HBVC型与B型其新生儿发生HBV宫内感染的几率相当。乙型肝炎病毒宫内传播过程中，HBV基因型可能不发生改变。     

HIV-1/HBV共感染患者HBV病毒基因组前S区、BCP区和前C区的变异

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)合并人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者和HBV单独感染者HBV基因组三个重点区域的变异。方法收集湖南省HIV-1/HBV合并感染患者(试验组)和HBV单独感染患者(对照组)血清各40份,进行HBV全基因组扩增及测序,并对突变位点进行分析。结果有59份血清HBV成功分型和测序,其中试验组21份,对照组38份,试验组与对照组HBV载量值和不同基因型比较,差异均有统计学意义(均P0. 05)。试验组4例患者血清标本HBV在前S区22个氨基酸发生变异,12例在前C区和BCP区45个核苷酸发生突变,试验组和对照组前S区氨基酸总体缺失突变率分别为0. 60%、0. 64%,差异无统计学意义(χ~2=0. 042,P 0. 05)。试验组与对照组前C区和BCP区各个主要突变位点变异发生率比较,差异无统计学意义(均P 0.05),试验组和对照组前C区和BCP区总体变异发生率分别为1. 36%、1. 73%,差异无统计学意义(χ~2=1. 920,P 0. 05)。结论共感染患者的HBV变异水平与单感染患者基本一致,短时间内HIV-1暂未对HBV的进化突变造成显著影响。     

HBV "a"决定簇突变及其对宫内传播影响的研究

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒感染者“a”决定簇突变及其对HBV宫内传播的影响。方法收集2001年11月至2004年7月在太原市传染病医院妇产科住院的HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血,选取其中部分HBV DNA阳性标本进行nPCR产物直接测序,分析HBV“a”决定簇变异情况,比较HBV“a”决定簇突变组孕妇与未突变组孕妇HBV宫内感染率的差别。结果307例血清HB-sAg阳性孕妇中,HBeAg阳性119例,HBV DNA阳性126例。309例新生儿中,HBsAg、HBV DNA任一项阳性者69例,新生儿HBV宫内感染率为22.33%(69/309)。经过测序的49份标本(41份孕妇标本、8份婴儿标本)中,HBV基因型以C型、B型为主,D型只发现1份。49份标本(含1份假阳性)中共有7份标本(6份孕妇标本、1份婴儿标本)(9个位点)发生了HBV“a”决定簇突变,突变检出率为14.58%(7/48);突变组和未突变组的HBV宫内感染率分别为50.00%(3/6)、40.00%(14/35),差异无统计学意义(χc2=0.000 120,P>0.05);发生了HBV宫内感染的母儿之间,HBV序列同源性在98.67%以上,其中1例新生儿所携带HBV的aa145的密码子发生了同义突变(GGA→GGC)。结论对于感染HBV的孕妇而言,无论携带HBV“a”决定簇变异株还是野生株,未发现其新生儿发生HBV宫内感染的可能性有差别;宫内传播过程中存在S基因“a”决定簇变异株。     

562例HBsAg阳性孕妇HBV宫内感染及产后随访分析

目的 探讨HBV母婴垂直传播特点.方法 选取湖北医药学院附属人民医院单胎妊娠、HBV感染的562例孕妇及其新生儿为研究对象,分析HBV宫内感染及产后婴幼儿HBV感染情况.结果 母亲乙肝标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性348例,宫内感染35例,宫内感染率10.06%;母亲乙肝标志物HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性共214例,宫内感染5例,宫内感染率2.34%.对所有宫内感染病例40例随访,37例转阴,余未感染病例150例随访未发现HBV感染.孕妇乙肝大三阳组与小三阳组宫内感染率存在明显差异(χ2=11.95,P=0.001<0.05);孕妇HBeAg阳性前S1抗原阳性和前S1抗原阴性宫内感染率存在明显差异(χ2=13.74,P<0.05);孕妇HBV-DNA病毒复制量大于106与小于106宫内感染率存在明显差异(χ2=4.29,P<0.05).结论 孕妇HBV病毒复制量高是导致宫内感染的重要因素.产后及时主被动免疫联合免疫治疗是阻断母婴垂直传播的关键.     

HBsAg阳性母亲HBV核心启动子突变与宫内传播的关系

目的 分析HBV为C基因型的HBsAg阳性母亲核心启动子（BCP）区突变与宫内传播的关系。方法 2011年6月至2013年7月太原市第三人民医院妇产科HBsAg阳性母亲及新生儿399对。收集一般人口学资料,采用荧光定量PCR和电化学发光法分别检测母婴血清HBV DNA及HBV血清学标志物。选择HBV DNA载量≥10⁶ IU/ml的113例母亲为研究对象,其新生儿发生宫内传播的22例为宫内传播组,随机选取其中22例未发生宫内传播者作为对照组,母亲HBV DNA经提取、扩增、克隆、测序和序列编辑及剪接后与从NCBI下载的标准序列比对进行基因分型,最终选择C基因型的39例母亲进行突变分析。结果 HBV为C基因型（88.63%）的母亲共39例,其中宫内传播组19例,对照组20例。母亲A1762T/G1764A双突变率在两组差异显著（7.53% vs.27.72%,P<0.001）。非条件logistic回归分析显示A1762T/G1764A双突变可能是宫内传播的保护因素（aOR=0.065,95% CI：0.006～0.746,P=0.028）。母亲A1762T/G1764A双突变可能与新生儿HBeAg水平有关（P=0.050）。结论 HBV C基因型的HBsAg阳性母亲HBV DNA BCP区A1762T/G1764A双突变可能降低HBV宫内传播的风险。     

HBV宫内感染与孕期使用乙肝免疫球蛋白关系

目的 探讨孕期使用乙肝免疫球蛋白对乙型肝炎病毒(HBV)宫内感染的保护作用及其对孕妇病毒滴度的影响.方法 以HBsAg阳性孕妇及其新生儿为研究对象,以孕期使用过乙肝免疫球蛋白的孕妇为干预组,其余为对照组,比较2组乙型肝炎病毒(HBV)宫内传播发生率、病毒载量的差异,探讨乙肝免疫球蛋白的保护作用及其机制.结果 干预组孕妇210例,有10例新生儿发生宫内感染;对照组402例,有15例发生宫内感染,差异无统计学意义.相关分析显示,乙肝免疫球蛋白使用剂量与HBV DNA拷贝数、HBsAg滴度无关.结论 孕期使用乙肝免疫球蛋白不能降低孕妇病毒载量,对HBV宫内传播也无保护作用.     

HBV前S基因变异及其临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）前S基因分为前S1和前S2区，其中前S2和S基因共同编码中蛋白，前S1、前S2和S基因共同编码大蛋白。前S基因与病毒感染和分泌能力有关。前S区含有强免疫原性的表位，可能是受感染肝细胞的一个重要的识别和清除位点。前S基因发生变异，可影响疾病的发生、发展，并可能与肝炎重型化有关。     

体外活化TLR3对HBV宫内感染新生儿免疫状况的影响

目的:通过体外活化Toll样受体3(TLR3),探索将Poly I:C(免疫佐剂)作为TLR3配体提高HBV宫内感染者TLR3蛋白含量,进而通过改变HBV宫内感染者DCs细胞及B细胞百分比,提供改善机体免疫状态的可能性。方法:采用面对面问卷调查方法连续收集152对HBsAg阳性孕妇及其新生儿流行病学资料,并采集新生儿脐血及股静脉血。分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)及实时荧光定量PCR检测新生儿出生24 h内外周血乙肝病毒标志物及HBV DNA含量,密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(CBMCs)以进行体外培养,经HBV与Poly I:C刺激后,流式细胞术(FCM)检测新生儿CBMCs的TLR3蛋白含量及DCs细胞、B细胞的百分比。结果:HBV非宫内感染的TLR3蛋白含量在经HBV以及PolyI:C+HBV后呈现下降趋势。而HBV宫内感染组呈现先下降后升高的趋势。HBV非宫内感染组与宫内感染组CBMCs经PolyI:C+HBV刺激活化后,两组TLR3蛋白含量、mDC、pDC比例差异均无统计学意义(t=0.11,P=0.91;t=0.46,P=0.64;t=0.21,P=0.23);而两组B细胞百分比差异有统计学意义(t=2.36,P=0.02)。HBV宫内感染组经Poly I:C+HBV刺激后与非宫内感染组经HBV刺激后的B细胞百分比比较差异亦有统计学意义(t=2.45,P=0.02)。结论:Poly I:C作为免疫佐剂一定程度上提高HBV宫内感染者的TLR3蛋白水平,使宫内感染组的TLR3蛋白水平逐渐接近于非宫内感染组,进而改变CBMCs中DCs细胞及B细胞百分比含量,为改善HBV宫内感染新生儿的免疫状况使其接近非宫内感染者水平提供可能。     

HBsAg阳性孕妇新生儿T细胞亚群测定

目的:通过检测HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿T细胞亚群,探讨HBV宫内感染与T细胞亚群之间的关系。方法:以太原市第三人民医院妇产科68例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿作为研究对象,应用酶联免疫吸附法检测孕妇和新生儿出生24 h内外周血乙肝病毒标志物,利用实时荧光定量PCR检测母亲和新生儿外周血HBV-DNA含量,使用流式细胞术检测新生儿股静脉血中的CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群,并分析HBV宫内感染与T细胞亚群表达的关系。结果:宫内感染组新生儿股静脉血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+与未宫内感染组相比升高,CD4+/CD8+与未宫内感染组新生儿相比降低,宫内感染和非宫内感染组新生儿股静脉血T细胞亚群含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:尚未观察到HBV宫内感染新生儿T细胞亚群比例失调。     

乙型肝炎宫内感染免疫失败的原因

孕妇外周血乙型肝炎病毒高浓度、HBeAg阳性、先兆早产和胎盘绒毛毛细血管内皮乙型肝炎病毒感染是胎儿感染乙型肝炎病毒的高危因素。胎儿宫内感染的传播可经两条途径 ,即血源性和细胞性。乙肝免疫球蛋白或拉米夫定的阻断可降低乙型肝炎病毒宫内感染的发生率。变异病毒可以逃避新生儿接种疫苗所产生的免疫 ,乙型肝炎病毒变易株的选择性传播导致了免疫失败     

羊水中微核糖核酸-182表达与早产儿宫内感染和脑损伤的关系

目的 分析羊水中微核糖核酸-182(miR-182)的表达与早产儿宫内感染和脑损伤的关系,为预测宫内感染后早产儿脑损伤的发生提供有效的预防方法。方法 选取2015年12月-2019年1月在江苏大学附属医院生产的125例胎龄小于34周单胎早产儿进行研究,在孕妇分娩时留取10 ml羊水,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测羊水中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素8(IL-8)含量,实时定量PCR检测羊水中miR-182表达。胎盘行病理检查,判断是否存在绒毛膜羊膜炎,早产儿进行头颅影像学检查以诊断脑损伤。基于临床绒毛膜羊膜炎,将所有病例分为宫内感染组和无宫内感染组。结果 宫内感染组60例,其中发生脑损伤20例(33%);无宫内感染组65例,其中发生脑损伤10例(15%)。宫内感染组羊水中除IL-10降低外,IL-1β、TNF-α、TGF-β、IL-8及miR-182表达量均较无宫内感染组明显升高(t=8.04、17.23、17.37、15.56、4.90、18.13,P<0.001)。宫内感染组中合并脑损伤和无宫内感染组中合并脑损伤的羊水中miR-182表达量均较无脑损伤的明显上升(t=14.41、16.39,P＜0.05)。结论 羊水中miR-182的表达与羊水中炎症细胞因子有协同作用,初步推测对早产儿宫内感染和脑损伤有促进作用,可联合细胞因子预测宫内感染后早产儿脑损伤。     

HBV宫内感染胎盘组织TLR-4、HBD-2及孕妇外周血IFN-γ的相关性

目的:研究乙型肝炎病毒宫内感染TLR-4、HBD-2及IFN-γ水平及相关性。方法:选择乙肝标志物HB-sAg、HBeAg为阳性且肝功能正常的孕妇57例为试验组,根据脐血清乙肝两对半结果,分为宫内感染组26例,宫内未感染组31例,外周血血清HBV标志物均为阴性的正常分娩孕妇20例为对照组,采用ELISA法检测孕妇外周血血清IFN-γ水平;SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR的方法检测TLR-4,HBD-2在孕妇胎盘组织中的表达,选择GAPDH为内参。结果:①宫内感染组TLR-4,HBD-2,IFN-γ的表达均显著低于HBV宫内未感染组及对照组(P<0.01)。宫内未感染组和对照组之间的差异无统计学意义(P>0.05)。②胎盘TLR-4、HBD-2与孕妇外周血IFN-γ水平均成显著正相关关系(r=0.815,P<0.01;r=0.685,P<0.05)。结论:TLR-4、HBD-2下调与IFN-γ水平下降相关,导致HBV宫内感染。     

乙型肝炎病毒感染孕妇的新生儿血清乙肝病毒标志物动态变化分析

目的探讨免疫阻断治疗后新生儿乙肝病毒标志物的动态变化。方法193例乙肝病毒（HBV）携带孕妇分娩的193例新生儿于出生后12h内肌注乙肝免疫球蛋白（HBIG）200U,同时在另一部位肌注重组酵母乙肝疫苗（HBVac）10μg。新生儿出生后即刻、6、12、18个月时采静脉血检测HBV标志物（HBVM）及HBVDNA。结果出生时新生儿乙肝表面抗体（HBsAg）阳性率16．6％,宫内感染率为3．6％。孕妇血清HBsAg、HBeAg、抗HBc均阳性,HBVDNA〉1500拷贝／ml分娩的非宫内感染婴儿出生时HBsAg阳性占13．3％,6月龄时均转阴;出生时抗HBs均阴性,12月龄时均转为阳性;出生时HBeAg阳性占95．2％,12月龄时均转阴;抗HBe始终为阴性;出生时抗HBc均为阳性,12、18月龄时阳性占31．3％和27．1％。孕妇血清HBsAg、抗HBe、抗HBc均阳性,HBVDNA≥500拷贝／m1分娩的非宫内感染婴儿出生时HBsAg阳性占5．0％,6月龄时转阴;出生时抗HBs均为阴性,12月龄时均转阳性;HBeAg始终为阴性;出生时抗HBe均阳性,12月龄时均转阴;出生时抗HBc均阳性,12、18月龄时阳性占65．0％和50．O％。出生时非宫内感染婴儿与母亲HBsAg阳性率（12．4％与100．0％）差异有统计学意义;抗HBs均阴性;抗HBc均阳性;HBeAg阳性、抗HBe阳性差异元统计学意义。结论HBV感染孕妇所生婴儿,只要及时给予HBIG与HBVac免疫阻断,可降低HBV感染率。HBeAg、抗HBe或抗HBc阳性随着日龄增长,可逐步转阴,且HBeAg、抗HBe转阴比抗HBe快。     

乙肝疫苗与球蛋白对宫内乙肝病毒感染的控制

目的　对乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白控制宫内乙肝病毒感染进行前瞻性研究。方法　将纳入研究的 131例乙肝检测阳性孕妇分为 4组 ,分别予以单用乙肝免疫球蛋白、乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白、单用乙肝疫苗及空白对照。每个病例均作孕妇体内HBsAg、HBV DNA定量检测及新生儿出生即刻的股静脉血中HBV系列检测 ,以了解宫内感染的发生率。结果　在全程单用乙肝免疫球蛋白组和乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白组新生儿宫内感染率都为 3% ,与对照组比较有显著性差异 ,P <0 .0 5 ,而单用乙肝疫苗组为 10 .7% ,对照组为 17.2 % ,两组比较差异有显著性 ,P <0 .0 5。结论　应用乙肝疫苗联合乙肝免疫球蛋白既可降低乙肝病毒携带HBeAg(+)孕妇的宫内感染 ,又可节约阻断成本。     

孕妇乙型肝炎血清学模式与新生儿宫内感染的相关性分析

目的探讨孕妇乙型肝炎血清学感染模式与新生儿宫内感染的相关性。方法 ELISA法检测孕妇血清乙型肝炎病毒血清学标志物（HBV-M）,HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb任一项阳性者,荧光定量PCR法检测脐血HBV-DNA。根据HBV-M不同模式将结果分为HBeAg（＋）组、HBsAg（＋）HBeAg（-）组、HBsAg（-）HBeAg（-）三组,比较各组脐血HBV-DNA阳性检出率及HBV-DNA定量结果。结果 722例受检孕妇中,93例脐血HBV-DNA检出阳性,阳性检出率为12.9%,HBeAg（＋）组阳性检出率显著高于其它二组（P〈0.001）;三组脐血HBV-DNA对数均值分别为（4.85±1.29）、（4.35±0.98）和（3.75±0.40）,HBeAg（＋）组脐血DNA含量显著高于其它二组（P〈0.001）。结论孕妇血清HBeAg（＋）者新生儿宫内感染率较高,孕妇血清HBsAg（-）HBeAg（-）者新生儿亦存在宫内感染的可能性。