NGX6基因联用5-Fu对人结肠癌细胞凋亡的影响

目的:探讨候选抑瘤基因NGX6联用5-Fu对结肠癌细胞凋亡的影响.方法:以稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用作为实验组.以PDTC与5-Fu联用的HT-29细胞作为对照组.通过EMSA检测各组结肠癌HT-29细胞核转录因子-κB(NF-κB)的激活情况,利用MTT比色法检测各组细胞增殖的情况.吖啶橙(AO)/溴化乙啶(EB)双染法显微镜观测以及PI/Annexin-V双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况.结果:稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞以及应用了PDTC的HT-29细胞NF-κB的激活均明显受到抑制;与5-Fu作用的HT-29细胞组比较,5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞后,HT-29细胞增殖受到明显抑制,5-Fu诱导HT-29细胞凋亡作用增强;与5-Fu联合PDTC作用于HT-29细胞的对照组比较,在诱导细胞凋亡以及抑制细胞增殖方面,稳定转染并表达NGX6基因的HT-29细胞与5-Fu联用组和对照组所取得一致的效果,NGX6基因增强5-Fu对HT-29细胞增殖抑制的能力及诱导HT-29细胞凋亡的能力.结论:NGX6基因抑制了肿瘤细胞NF-κB的激活,具有增强5-Fu诱导结肠癌细胞凋亡的能力,其机制可能是抑制肿瘤细胞NF-κB的激活,NGX6基因对肿瘤的治疗及预后起积极作用.     

WISP-1/NGX6和G3BP/TIP30基因表达对肿瘤细胞增殖转移的影响

肿瘤的恶变过程包括细胞增生、DNA过度复制、细胞周期功能紊乱、细胞永生化、逃逸凋亡、血管增生及转移浸润等一系列过程.相应的分子机制为癌基因的激活、抑癌基因的失活、修复相关基因的功能缺失、凋亡机制缺失、信号转导调控机制紊乱及浸润转移相关分子事件等,而在肿瘤恶变的一系列分子机制中,细胞增殖凋亡、侵袭转移日益被重视.现全文就WISP- 1/NGX6、G3BP/TIP30两组基因表达对肿瘤细胞增殖转移的影响作一综述.     

NGX6在肿瘤中的表达及作用

NGX6基因是近年来发现的肿瘤抑制基因,它通过抑制肿瘤的血管生成及淋巴管生成等作用机制来抑制肿瘤的侵袭及转移。NGX6基因的表达与鼻咽癌、肺癌、大肠癌等多种肿瘤的侵袭及转移存在负相关关系。因此 NGX6水平的测定对于预测肿瘤患者的预后有着重要的意义。     

染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响

目的:研究染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响.方法:采用MTT比色法测定染料木黄酮对人结肠癌细胞系HT-29细胞增殖的影响,应用流式细胞术检测染料木黄酮对HT-29细胞周期及凋亡的影响.结果:染料木黄酮能够显著抑制HT-29细胞的增殖,且具有浓度依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为23μmol/L;染料木黄酮能够引起HT-29细胞发生G0/G1期阻滞,并能够诱导HT-29细胞发生凋亡;western结果显示染料木黄酮作用后Bax表达增强,而Bcl-2表达减弱.结论:染料木黄酮能够诱导人结肠癌HT-29细胞发生周期阻滞和凋亡,从而导致HT-29细胞增殖能力下降.     

采用基因表达谱芯片筛选肺癌细胞系差异表达基因的初步探讨

目的:探讨基因芯片技术分析高低不同转移能力肺癌细胞系的差异表达基因.方法:采用基因芯片技术检测具有高低不同转移能力的肺癌细胞系BE-1和LH-7的差异表达基因.抽提细胞mRNA,利用荧光标记dUTP逆转录制备cDNA探针,与人肺癌表达谱基因芯片杂交,以ScanArray 4000荧光扫描仪扫描芯片上两种荧光信号,获得的荧光信号图像用计算机分析,每点上两种荧光信号的强度分别代表Cy3-dUTP和Cy5-dUTP的量,最后计算每点的Cy5和Cy3的比值.结果:在所检测的人高低肺癌转移细胞系BE-1和LH-7中,20个基因有表达差异,其中高表达14条,低表达6条.结论:基因芯片技术为筛选人类肺癌转移基因提供了有效方法.     

胃癌组织NGX6和Cyclin D1表达及其生物学意义的探讨

目的:探讨胃癌组织中NGX6和Cyclin D1的表达及其生物学意义.方法:采用免疫组化SP法检测89例胃癌组织和53例正常胃黏膜组织中NGX6和Cyclin D1蛋白的表达情况.结果:NGX6蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为51.69％,胃癌组织中阳性表达率明显高于正常胃黏膜组织的83.02％,P＜0.05;而Cyclin D1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为74.16％,胃癌组织中阳性表达率显著高于正常胃黏膜组织的0,P＜0.05;免疫组织化学结果显示,胃癌组织中NGX6和Cyclin D1蛋白的阳性表达呈负相关,两者均与胃癌的临床分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P＜0.05),而与组织学分级无关.结论:NGX6和Cyclin D1蛋白表达异常可能共同参与了胃癌的发生、发展、侵袭和转移;联合检测2种蛋白对于评价胃癌的恶性程度、判断其转移潜能和预后可能具有重要的临床意义.     

不同转移潜能人肝癌细胞系的基因表达分析

目的：比较不同转移潜能人肝癌细胞系的基因表达谱,寻找与癌转移相关的基因表达改变。方法：采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系MHCC97－L和HCCLM3,分析其基因表达谱的差异。结果：在1626个候选基因中,筛选出25个差异表达基因。HCCLM3与MHCC97－L相比,表达上调的基因有8个,包括细胞增生基因E25、信号传导基因NKK6和免疫相关基因SP40,40等;下调的有17个,包括细胞周期调控基因Rb2、信号传导基因PKCβ2和错配修复基因hMSH2等。结论：肝癌转移是多基因作用的综合结果,筛选的基因对预测转移和抗转移干预措施可能有指导意义。     

人胃癌腹膜高转移潜能细胞系的基因表达分析

目的:比较人胃癌细胞系与其腹膜高转移潜能细胞系的基因表达谱,寻找与胃癌腹膜转移相关的基因表达改变。方法:采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系GC9811和GC9811-P,分析其基因表达谱的差异。选取部分基因行RT-PCR进一步验证基因芯片的准确性。结果:在11901个候选基因中,筛选出248个(2.1%)差异表达基因。GC9811-P与GC9811相比,表达上调的基因有218个,下调的有30个,包括DNA合成和错配修复基因如H3F3A、细胞增生基因、蛋白合成与修饰基因、信号传导基因和离子通道与运输蛋白相关基因等。半定量RT-PCR对PTEN、S100A4和ZNRD1基因检测结果验证了基因芯片数据的可靠性。结论:胃癌腹膜转移是多基因作用的综合结果,筛选的基因对预测胃癌腹膜转移和抗转移干预措施可能有指导意义。     

NDRG 1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的研究NDRG1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3和空载体pEGFP-N3采用阳离子脂质体Lipofectamine转染HT-29人结肠癌细胞株,通过荧光倒置显微镜检测绿色荧光蛋白的表达。免疫组织化学染色检测转染前后HT-29细胞NDRG1的表达。并通过多种体外实验（流式细胞术法、24-transwell法、扫描电镜和透射电镜等）研究NDRG1对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力及表面和超微结构的影响。结果流式细胞术结果显示,与未转染组和转染pEGFP-N3空载体组比较,pEGFP-NDRG1-N3组细胞生长周期G0/G1期比例增高,S期明显减低,差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞侵袭和迁移实验的结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组细胞与空载体和空白对照组比较,穿过微孔膜的细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。扫描和透射电镜结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组HT-29细胞生长增殖受抑制,细胞分化程度有增高趋势。结论 NDRG1基因可明显抑制HT-29人结肠癌细胞的体外增殖活性,降低其侵袭和迁移能力,促进其分化,提示其可作为一种候选的肿瘤转移抑制基因。     

Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨

目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7．neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c-myc顺式增强子元件pMyc-SEAP共转染,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT-PCR方法,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERF35T2细胞内c-myc、p15、p21表达水平的变化,调查Smad7基因对TGF-β介导的抗增殖基因反应的调控。结果 报告基因检测结果表明,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c-myc顺式增强子元件活性增强。RT-PCR结果表明,在稳定转染Smad7基因的细胞中,c-myc表达上调,p15表达降低,对TGV-β刺激的应答丧失,p21表达降低。结论 Smad7基因可通过调控TGF-β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长、增殖能力。     

乙酰肝素酶的外源性表达对大肠癌HT29细胞侵袭性的影响

背景与目的:乙酰肝素酶(heparanase,Hpa)基因表达与恶性肿瘤及肿瘤细胞的侵袭、转移和血管生成能力密切相关。本研究旨在通过增强肿瘤细胞中外源性Hpa基因的表达,探讨该基因对大肠癌细胞HT29转移侵袭能力的影响。方法:Hpa全长基因真核表达载体转染HT29细胞,MTT法检测转化细胞增殖能力,Boyden小室体外侵袭实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化,通过转化细胞裸鼠异种接种成瘤和实体瘤回盲部原位种植转移模型建立,观察Hpa基因外源性表达对HT29细胞侵袭性的影响。结果:转染Hpa基因细胞HT29-Hpa较未转染细胞HT29和转染空载细胞HT29-KZ生长速度明显加快;Boyden小室体外侵袭实验显示,HT29-Hpa细胞穿膜数(45.5±0.5)较HT29细胞(29.3±0.1)和HT29-KZ细胞(30.1±0.2)增多,差异具有显著性(P<0.01)。转染细胞裸鼠皮下瘤生长速度明显加快,同期内HT29-Hpa细胞形成的皮下瘤(12mm×9mm×10mm)较HT29细胞皮下瘤(6mm×8mm×6mm)大,HT29-Hpa细胞皮下瘤回盲部原位种植致肝转移率(71.43%)较HT29细胞肝转移率(14.29%)增高,两者间有显著性差异(P<0.01)。结论:Hpa基因外源性的表达能促进肿瘤细胞的生长、侵袭和转移。     

RNAi沉默CD133基因表达对结肠癌细胞株HT-29影响的研究

目的:探讨通过RNA干扰沉默CD133基因对结肠癌细胞株HT-29的增殖和侵袭力的影响。方法:将CD133siRNA用脂质体转染入HT-29细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD133mRNA的变化,蛋白质印迹法检测转染前后蛋白的表达水平,用MTT比色法和Transwell小孔实验分别检测癌细胞的增殖及侵袭力变化。结果:CD133siRNA转染成功,与正常对照组相比,转染组CD133mRNA及蛋白的表达水平均有明显的抑制,并呈现浓度时间依赖性。MTT实验证明转染组细胞随时间延长,增殖逐渐受到抑制,P<0.05。Tran-swell小孔实验中经转染处理的穿膜细胞数明显减少(P<0.05),RNA干扰降低了细胞的侵袭性。结论:CD133在HT-29癌细胞增殖及侵袭过程中起重要作用,RNA干扰可以有效抑制其CD133的表达,并能有效降低癌细胞的增殖及侵袭力。     

基因芯片筛选小鼠肝癌淋巴道转移相关基因

背景与目的肿瘤转移是一个多基因参与的复杂过程。由肿瘤转移所导致的恶性肿瘤患者死亡率高、预后差和其发生机制不清,长期以来一直是肿瘤学领域的突出问题。本研究利用基因芯片技术比较高低淋巴道转移能力小鼠肝癌细胞系Hca-F(高转移)和Hca-P(低转移)的基因表达谱,并筛选出与肿瘤淋巴道转移相关的基因。方法分别提取Hca-F和Hca-P细胞的总RNA,反转录合成双链cDNA,通过体外反转录合成生物素标记的cRNA探针,cRNA探针经片段化处理后分别与AffymetrixGeneChip誖MOE430A(包括22690个转录本对应于约14500个小鼠已知基因和4371个EST)杂交,杂交信号经扫描等处理并用生物信息学对检测结果进行分析。结果与Hca-P细胞相比较,Hca-F细胞中有901个(6.2%)基因表达上调幅度≥2倍,有129个(3%)EST上调幅度≥2倍。在公布的差异最显著的33个包括endoglin(EDG;CD105)、Mcam(Muc18;Mel-CAM;CD146)、Cdc42ep5(CEP5;Borg3)、Ptprr(proteintyrosinephosphatase,receptortype,R)、F2r[coagulationfactorⅡ(thrombin)receptor;Par1;ThrR]、D7Ertd458e(necl-5)、NR1D1、Serpinh1(HSP47)、AXL、Mak和Areg(AR)等基因表达中,上调幅度在29.86～13.93倍之间。根据GO(GeneOntology)分类和Treeview分析,这33个基因的功能主要为促血管生成、细胞粘附、信号转导、细胞运动、转录、分子伴侣活性、蛋白激酶活性和受体结合等。结论高通量的基因芯片技术筛选出大量淋巴道转移相关基因,对这些转移相关基因功能的验证有助于找到淋巴道转移的关键(代表)基因/通路,它们可作为肿瘤淋巴道转移诊断的指标和治疗的靶点。     

尼美舒利联合西妥昔单抗对结肠癌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:研究环氧合酶-2(cycloxygenase 2,COX-2)抑制剂尼美舒利(nimesulide)和表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab,C225)联用对结肠癌HT-29细胞株细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:MTT法检测细胞增殖状态,吖啶橙/溴化乙锭(acridine orange/ethidium bromide,AO/EB)染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡情况,RT-PCR检测COX-2和非甾体类消炎药活化基因-1(nonsteroidal anti-inflammatory drug-activated gene,NAG-1)的mRNA表达水平,Western印迹法检测EGFR通路下游相关蛋白Akt的磷酸化活性.结果:尼美舒利与C225联合作用于HT-29细胞48 h后,该组细胞的生长抑制率明显高于尼美舒利组[(72.8±2.3)% vs(51.8±1.8)%,P<0.05].AO/EB染色观察到尼美舒利与C225联用组HT-29细胞发生典型的凋亡形态学改变,且FCM检测显示48 h时联用组的细胞凋亡率[(57.67±0.86)%]显著高于尼美舒利[(33.27±1.47)%]和C225单用组[(6.27±0.55)%,P<0.05].C225下调COX-2 mRNA的表达,各药物干预组NAG-1 mRNA 的表达均上调,联用组对Akt磷酸化的抑制作用明显强于尼美舒利和C225单用组.结论:尼美舒利与C225联用可增强二者各自对细胞的促凋亡作用,其作用机制可能是EGFR信号通路参与了结肠癌细胞内COX-2基因的表达调控,最终通过其下游促凋亡基因NAG-1、pAkt的蛋白表达变化,影响结肠癌HT-29细胞的增殖与凋亡.     

靶向survivin基因微小RNA真核表达载体的构建及其对人结肠癌细胞增殖的影响

目的 构建靶向survivin基因的微小RNA(miRNA)真核表达载体,探讨其对人结肠癌细胞(HT-29)增殖、凋亡的影响.方法 设计合成针对survivin基因的miRNA序列,定向克隆至pcDNATM6.2-GW/Em GFP-miR真核表达载体上,构建靶向survivin的miRNA重组质粒.HT-29细胞接种于6孔板,分为空白对照组、转染试剂组、空质粒组(阴性对照组)以及目的基因组(阳性对照组)4组.瞬时转染后收集各组细胞,应用流式细胞仪检测各组细胞的增殖指数及凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应和免疫印迹法(Western blot)检测靶基因(survivin) mRNA和蛋白的表达.结果 HT-29细胞转染后,目的基因组增殖指数与正常组、转染试剂组、空质粒组相比明显降低(17.98％±2.35％ vs 38.04％±2.11％ vs36.73％ ±2.51％ vs36.57％±3.05％;t=20.05,P ＜0.01;t =18.75,P＜0.01;t=18.59,P＜0.01),凋亡率明显增高(19.54％±1.74％ vs 3.13％±0.29％ vs 3.70％ ±0.44％ vs 3.61％±0.50％; t=16.40,P＜0.01;t=15.84,P＜0.01;t=15.92,P＜0.01).目的基因组survivin mRNA与其他各组相比明显降低(=0.68,P＜0.01;=0.58,P＜0.01;t =0.61,P＜0.01),蛋白的表达亦明显降低(t=0.64,P＜0.01;t =0.62,P＜0.01;t =0.67,P＜0.01).结论 靶向沉默结肠癌HT-29细胞的survivin基因可以明显抑制细胞增殖,并诱导细胞凋亡.     

子宫内膜腺癌基因表达谱的初步研究

目的　探讨子宫内膜腺癌的候选基因。方法　采用包含有 4 0 96个cDNA克隆的基因芯片技术 ,分别对 2例子宫内膜腺癌组织及其相应正常组织进行基因表达谱的比较。结果　 2例标本共同表达的差异表达基因共 35 0条 ,其中Ratio >3的明显上调基因 33条 ,而Ratio <0 .3的明显下调基因 4 4条。结论　内膜腺癌的形成是由多基因异常引起多条传导通路异常致使细胞恶性转化的结果。     

抑癌基因KLF6的作用机制及其在相关肿瘤中的表达

KLF6的主要作用机制是以p53非依赖方式上调p21,进而导致细胞增殖的抑制,其表达异常或活性缺失与前列腺癌、肝癌、胃癌等多种肿瘤的发生发展及预后密切相关,并有可能成为分子靶向治疗的新靶点.