低剂量辐射对脐血免疫细胞功能影响的初步研究

目的 观察低剂量辐射对脐血淋巴细胞增殖，CD25分子表达，IL－2水平和NK细胞活性的影响。方法：（1）采用^3H-TdR掺入法和^3H-TdR释放法检测62mGy,124mGy,186mGy 射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性。（2）采用单克隆抗体直接免疫荧光标记流式细胞术和酶联免疫吸附实验检测62mGy γ射线照射新鲜分离的脐血淋巴细胞在不同时间（12h,24h,48h）CD25分子表达和培养上清液的IL－2水平。结果 在一定剂量范围内的低剂量辐射显著促进脐血淋巴细胞增殖和增强NK细胞活性。62mGy γ射线照射后脐血淋巴细胞CD25表达和IL－12水平显著上调，CD25表达和IL－2的水平随时间推移逐步增高。结论 在一定剂量范围内的低剂量辐射能促进淋巴细胞的增殖，活化和成熟，增强NK细胞活性。低剂量辐射对脐血免疫细胞存在兴奋效应。可能加速脐血移植时造血功能和免疫功能的重建，这可能增加移植物抗白血病效应，降低其复发，显示出临床应用前景。     

多抗甲素体外对小鼠LAK细胞活性的影响

目的:探讨多抗甲素(PA)能否增强LAK细胞增殖反应及LAK活性;方法:采用MTT方法测定小鼠脾淋细胞的增殖反应及LAK细胞杀伤S_(180)肉瘤及K_(562)人红白血病细胞的作用;结果:①亚适剂量IL—2(200U/ ml)和不同浓度PA共同诱导脾淋巴细胞,PA能明显增强淋巴细胞的增殖反应且呈剂量依赖性;②在较高浓度时,PA能明显增强LAK细胞杀伤S_(180)细胞作用,对于LAK细胞杀伤K_(562)细胞,无论浓度高低,PA均有明显增强作用;结论:在临床上可望将PA与LAK/IL—2联合应用,以提高其抗瘤效果,降低IL—2用量及毒副作用。     

电离辐射对小鼠脾淋巴细胞IL-10表达的影响

目的 观察75mGy、2GyX射线全身照射对小鼠脾淋巴细胞中IL－10的影响。方法 采用Northern blot检测IL－10转录水平的变化，并同时通过流式细胞术检测其蛋白合成的变化。结果 ①蛋白合成结果表明，75mGy X射线全身照射后脾淋巴细胞IL－10合成在照后2h开始即呈时间依赖性降低，至48h仍无恢复迹象（P＜0．01），而2Gy照射后则出现IL－10合成升高，于照射后8h达到峰值（P＜0．05）。②Northern blot结果表明，75mGy照射后脾细胞IL－10 mRNA转录水平从照后1h即降低，并维持较低水平一直到48h开始恢复，达到假照射组的88．35％；2GyX射线全身照射后早期mRNA水平即有所升高，2h达到假照组的134．06％，4h略有下降，随后逐渐恢复至假照射组水平。结论 不同剂量X射线全身照射可引起不同的辐射效应，IL－10在其中起着重要的作用。     

低剂量辐射对恶性肿瘤患者自体CIK细胞免疫功能影响的实验研究

目的 观察低剂量辐射对恶性肿瘤患者自体CIK细胞增殖、表型和杀伤活性的影响,为临床应用CIK细胞过继免疫治疗提供依据。方法 取10例恶性肿瘤患者外周血,常规分离出单个核细胞,用不同细胞因子培养诱导CIK细胞。培养10 d后,以30、50、80、100和200 mGy X射线照射,24 h后采用³H-TdR掺入法检测对CIK细胞增殖的影响;流式细胞术检测对CD3+CD56+表型CIK细胞百分率的影响;³H-TdR释放法检测对其杀伤活性的影响。采用³H-TdR释放法检测80 mGy X射线照射对自体CIK细胞在12、24、48和72 h杀伤活性的影响,及80 mGy连续照射3 d对CIK细胞杀伤活性的影响。结果 CIK细胞增殖活性与对照组(0 mGy)相比均有明显增高(t =2.2、3.5、3.3和2.2, P ＜0.05)。50、80和100 mGy组的CD3+CD56+细胞的百分率均有显著性增高(t =2.3、4.2和2.4, P ＜0.05)。CIK细胞接受LDI,80 mGy组和100 mGy组与对照组(0 mGy)相比,CIK细胞杀伤活性均有显著性增高(t =3.3和2.3, P ＜0.05)。80 mGy照射后24 h,CIK细胞的杀伤活性出现高峰,为(54.2±5.0)%(t =3.2, P ＜0.01),48和72 h下降到正常水平。80 mGy连续照射3 d,24和48 h CIK细胞杀伤活性分别为(55.2±5.3)%和(61.9±4.4)%,72 h达到最高水平为(67.2±5.7)%(t =2.6、4.7和5.7, P ＜0.05)。结论 低剂量辐射对肿瘤患者CIK细胞显示兴奋效应,具有临床应用前景。     

肿瘤相关抗原肽与低剂量全身照射的协同抑瘤作用

目的观察低剂量X射线照射对小鼠肝癌H-22细胞膜相关抗原肽(TAP)提取物的抑瘤作用及免疫学功能的影响,为低剂量辐射(LDR)与肿瘤疫苗联合治疗肿瘤提供实验依据。方法采用微酸洗脱法制备相对分子质量≤3×106的细胞膜TAP提取物,先给予小鼠75mGyX射线全身照射,12h后以TAP提取物皮下免疫小鼠,检测脾细胞CD3、CD69和TCRαβ表面标记、脾T细胞亚组百分数的变化、脾细胞ConA反应性、IL-2和IFN-γ活性、CTL杀伤活性的变化及抑瘤效应。结果小鼠经TAP提取物免疫后,移植肿瘤的发生率降低,肿瘤平均出现时间延迟,生长速度减慢;脾细胞CD3分子和CD69分子的表达显著升高,脾细胞ConA反应性、IFNγ分泌活性和CTL杀伤活性显著增强,IL-2分泌增多。而同时给予LDR的小鼠不仅上述功能不同程度增强,脾CD8+细胞百分数显著增高。结论LDR与细胞膜TAP具有协同抑瘤作用,细胞免疫力的明显增强可能为其机制之一。     

脐血基础与临床研究

目的 对脐血进行系列研究，以期为临床应用提供实验依据。方法 采用分离新鲜脐血单个核细胞，未行或行低剂量^60Co γ射线62mCy照射，并用^3H-TdR掺入和释放法、ELISA分析、流式细胞仪、MTT和粒巨噬细胞集落形成单位测定等方法对脐血量、单个核细胞（MNC）数量、活性MNC百分率、CD34^＋细胞数及其与新生儿月龄、性别、脐血血象及产妇年龄关系、脐血T淋巴细胞、NK细胞活性、低剂量照射脐血后T淋巴细胞和NK细胞活性变化、脐血清集落刺激活性物质和临床用于白细胞减少症疗效进行了实验和临床研究。结果 每份脐血在100～150ml范围内占95．4％，其量与MNC无相关性，存放在6℃冰箱3d以内较适宜，活性MNC在91．2％以上；脐血中CD34^＋细胞数除与性别相关外，与其他因素无相关性；脐血T淋巴细胞和NK细胞活性偏低，低剂量照射能提高其活性；脐血清富含细胞集落刺激活性物质，以IL-3为主；白细胞减少症患者输注脐血可提升外周血白细胞总数水平。结论 由于以上诸多优势，故脐带血具有临床应用的广阔前景。     

低剂量照射对LAK细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响

作者采用＾Ｈ－ＴｄＲ释放实验，观察了低剂量γ射线照射的ＬＡＫ细胞体外杀伤肿瘤靶细胞的影响。来自健康献血员的外周血淋巴细胞，用重组白介素２培养９６小时获取ＬＡＫ效应细胞，在细胞培养的不同时期给予培养中的细胞一次不同剂量的γ射线照射。     

低剂量辐射适应性反应对辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的影响

目的 探讨低剂量辐射对致癌剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的影响及其免疫学机理。方法 采用4次1.75GyX射线全身照射C57BL/6J小鼠诱发胸腺淋巴瘤模型, 观察不同剂量照后6个月小鼠胸腺淋巴瘤发生率, 照后1个月脾脏NK细胞毒活性、IL-2和γIFN分泌活性、腹腔巨噬细胞吞噬功能及其TNFα分泌活性以及胸腺细胞分化的变化。结果 每次1.75Gy照射前6h或12h接受25mGy或75mGy全身照射均可降低胸腺淋巴瘤发生率, 且预先接受75mGy全身照射的作用效果更为明显; 每次1.75Gy照射前12h接受75mGy照射小鼠, 上述免疫指标均比单纯1.75Gy照射组增强, 且多数指标接近假照射组; 其胸腺CD4^-CD8^-和CD4^-CD8⁺细胞较单纯1.75Gy照射组减少、CD4⁺CD8⁺细胞增多。结论 低剂量辐射可诱导辐射诱发胸腺淋巴瘤适应性反应, 对致癌剂量辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤有抑制作用, 其抑制作用的免疫学机理可能与低剂量辐射的免疫增强效应及诱导的免疫学适应性反应, 减轻致癌剂量辐射对机体免疫功能的损伤, 使胸腺淋巴瘤前体细胞在形成胸腺淋巴瘤之前被免疫系统清除有关。     

γ射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响

目的观察γ射线照射对脐血淋巴细胞增殖和NK细胞活性的影响。方法取正常分娩的新生儿脐带血,体外肝素抗凝,应用常规密度梯度离心法分离脐血单个核细胞(MNC),计数并调整细胞浓度。Gamma Cell 1000数控细胞照射仪体外照射脐血MNC细胞,吸收剂量率3.72 Gy/min。①采用3H-TdR掺入法测量脐血淋巴细胞增殖:取已分离的单个核细胞,调至细胞浓度1×106个/ml,接受0.248、0.496、0.992、1.984、3.9685、.952、7.936和15.872 Gyγ射线照射。照射后继续培养56 h后加3H-TdR(3.7×107Bq/孔)再培养8 h后收集细胞,用Beckman液体闪烁计数器计数放射性核素每分钟闪烁数(计数/min)。②采用3H-TdR释放法检测脐血NK细胞活性:取传代培养24~48 h的K562细胞为靶细胞,调整浓度1×106个/ml,加入3H-TdR(3.7×108Bq/ml)孵育6 h,洗涤2次去除游离的3H-TdR,再制备成5×105个/ml备用。脐血单个核细胞调整细胞浓度为1×107个/ml作为效应细胞(效靶比20∶1),给以上述不同剂量γ射线照射。将效应细胞与制备好的靶细胞继续培养18 h后收集细胞,用Beckman液体闪烁计数器计数放射性核素每分钟闪烁数。结果在γ射线对脐血淋巴细胞增殖活性影响的研究中,0.248~15.872 Gyγ射线照射显著降低淋巴细胞增殖能力,增殖活性抑制程度与辐射剂量呈正相关(r=0.839,P<0.05);3.968 Gyγ射线照射组增殖活性仅为对照组的30.86%(P<0.01),SI=7.8,其中3.968~15.872 Gyγ射线照射未发现其明显的增殖活性。而γ射线对脐血NK细胞活性的影响的观察中发现0.248~1.984 Gyγ射线照射可引起脐血NK细胞活性显著增高(P<0.01);3.968 Gyγ射线照射保持NK细胞活性,与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);5.952~15.872 Gyγ射线可引起脐血淋巴细胞NK细胞活性显著降低(P<0.01)。结论3.968 Gyγ射线照射完全抑制脐血淋巴细胞增殖的同时仍呈现脐血NK细胞抗肿瘤活性。因此,在进行供者淋巴细胞输注或混合脐血移植时,应用3.968 Gyγ射线照射淋巴细胞,再进行过继性细胞免疫治疗可能降低移植物抗宿主病效应,同时不影响移植物抗白血病效应;混合脐血移植时增强移植物抗白血病效应。     

低剂量辐射对小鼠脾脏和胸腺Ⅰ型和Ⅱ型辅助性T细胞的影响

目的研究低剂量辐射对Ⅰ型辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ１）和Ⅱ型辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ２）的影响，揭示低剂量辐射使Ｔｈ激活的分子机理。方法采用分子杂交方法，检测Ｘ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺细胞ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ的表达。结果７５ｍＧｙＸ射线全身照射后小鼠脾脏和胸腺ＩＦＮ－γ和ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达水平明显增高。结论低剂量辐射诱导Ｔｈ１和Ｔｈ２激活，其分子机理与其启动调节Ｔｈ１和Ｔｈ２克隆发育的细胞因子的基因表达有关     

低剂量辐射对LAK/TIL培养扩增及抗肿瘤作用的实验研究

目的　为了解低剂量电离辐射对LAK/TIL细胞培养扩增及抗肿瘤作用的影响。方法　从荷瘤小鼠的脾脏制得LAK细胞 ,从荷Lewis肺癌小鼠瘤组织中分离得TIL细胞 ,给予不同剂量的X射线照射后培养。结果　低剂量电离辐射可增加LAK/TIL细胞的扩增量 ,降低细胞扩增过程死亡率 ,并增加细胞毒性。结论　低剂量电离辐射对生物活性细胞不仅有诱导扩增作用 ,同时亦降低扩增过程细胞死亡率。     

低剂量辐射对小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响

目的　研究低剂量电离辐射对昆明小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响。方法　在分离 75mGy照射组和假照射组小鼠胸腺细胞浆和细胞核的基础上 ,采用SephadexG 10 0凝胶过滤和高效液相分析两组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达 ,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测这些蛋白质表达的生物活性。结果　胸腺细胞浆相对分子质量为 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核相对分子质量 30 4× 10 3的蛋白质照射组比假照射组明显增加。并且这些增加的蛋白质组分对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变具有刺激和保护作用。结论　低剂量辐射兴奋效应可能与胸腺细胞浆 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核 30 4× 10 3的蛋白质表达增高有关。     

Flt3配体联合其他细胞因子对受照射小鼠免疫系统的作用研究

目的：研究Flt3配体（FL）在受照射小鼠免疫系统恢复中的作用。方法：采用F－800血细胞自动计数仪行外周血细胞计数及血细胞分类计数，流式细胞仪分析外周血淋巴细胞表型。结果：照射前应用FL或照射后联合应用FL，IL－11，EPO和G－CSF等细胞因子，能有效地促进受照小鼠外周血白细胞和淋巴细胞的恢复，对CD8^ 细胞的恢复作用尤为明显，同时使CD4^ /CD8^ 细胞比值较早恢复正常，提高受照射小鼠的生存率，结论：FL不但能促进辐射损伤机体造血功能的恢复，对免疫系统的亦具有重要的作用，FL单独或与其他细胞因子联合应用，对辐射损伤动物具有明显的防护和治疗效应。     

X射线全身照射对免疫细胞共刺激分子表达的影响

目的：探讨低剂量电离辐射对免疫细胞表面分子的影响，方法：用流式细胞术FITC－CD28／PE－CTLA－4双染染法观察了小鼠胸腺和脾细胞的CD28和CTLA－4表达变化，用免疫细胞化学（ABC）法观察了小鼠腹腔巨噬细胞B7－1和B7－2的表达变化。结果：低剂量电离辐射和较高剂量电离辐射均能增强腹腔巨噬细胞B7分子的表达；同时发现，低量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CD28的表达，而CTLA－4的表达降低，脾细胞较胸腺细胞更明显。较高剂量电离辐射显著增强胸腺和脾细胞CTLA－4的表达，同时抑制两种细胞CD28的表达，以脾细胞为更显著，结论：共刺激分子CD28和B7的表达上调可能是低剂量电离辐射免疫兴奋效应机理中的重要因素。     

SCF和IL-6双基因共转染促进小鼠造血和免疫功能的恢复

目的：探讨逆转录病毒介导的IL－6和SCF双基因共转染骨髓基质细胞对辐射小鼠造血和免疫功能的影响。方法：利用动物实验观察逆转录病毒介导的含IL－6和SCF双基因共转染的骨髓基质细胞对辐射小鼠外周血，骨髓有核细胞数，骨髓细胞CFU－GM培养，脾脏淋巴细胞ITT，CD4／CD8等指标的影响。结果；表明转IL－6和SCF基因的骨髓基质细胞可以促进辐射小鼠造血和免疫功能的恢复，结论：IL－6与SCF基因在骨髓基质细胞中获得表达，为进一步研究转基因骨髓基质细胞对造血调控的作用奠定了基础。     

低剂量辐射对小鼠胸腺细胞成熟、分化、凋亡和激活的影响

目的研究低剂量辐射对胸腺细胞成熟、分化、激活和细胞凋亡及有关基因蛋白表达的影响，以揭示低剂量辐射免疫增强效应的发生机理。方法采用双参数直接免疫荧光和间接免疫荧光流式细胞术，检测了低剂量辐射小鼠全身照射后胸腺细胞ＣＤ４、ＣＤ８、ＴＣＲ、ＣＤ３、ＩＬ－２Ｒ、［Ｃａ２＋］ｉ、Ｂｃ１－２、Ｂａｘ的表达和细胞凋亡。结果实验结果表明：低剂量辐射全身照射未引起ＴＳ减少和ＴＨ／ＴＳ比值上调；低剂量辐射未增加胸腺细胞凋亡，这与Ｂｃｌ－２／Ｂａｘ比值上调有关；低剂量辐射促进了胸腺细胞的成熟分化和信息传递过程。结论以上结果提示：低剂量辐射促进胸腺细胞的成熟、分化和激活，使胸腺向外周输送成熟的具有功能活性的效应性Ｔ细胞的储备增强，可能是低剂量辐射免疫增强效应的重要机理。     

粉防己碱增加人乳腺癌细胞对X射线敏感性及其机理研究

目的 研究粉防己碱(Tet)与X射线对人乳腺癌细胞的作用和机理。方法 采用克隆形成分析法，流式细胞术，Western Blotting以及分裂指数法进行实验。结果 在p53突变型MCF-7/ADR细胞中，Tet显著增加X射线的杀伤作用，其增敏比为1．5l；在X射线照射后，细胞明显阻滞于G2期，Tet可以降低这种阻滞。而在p53野生型MCF-7细胞中，Tet增加X射线的杀伤作用不明显，增敏比为1．10；在X射线照射后，细胞阻滞于G1期，部分阻滞于G2期，加入Tet，对于这种阻滞作用降低也不明显。进一步研究显示，MCF-7/ADR细胞在受到X射线照射后，其Cyclin Bl与Cdc2蛋白表达水平明显降低；Tet可以逆转X射线对Cyclin Bl与Cdc2蛋白的表达的抑制作用。分裂指数结果显示Tet可以促使阻滞于G2期的MCF-7/ADR细胞进入M期。结论 Tet是一种G2期阻滞清除剂，能显著增加X射线对人乳腺癌细胞的杀伤作用，这种作用在p53突变型细胞中更明显。     

X射线全身照射对小鼠腹腔巨噬细胞NO产生的影响

目的：观察７５ｍＧｙ、２．０ＧｙＸ射线全身照后不同的时间,小鼠腹腔巨噬细胞ＮＯ产生的时程变化及不同剂量照射后２４ｈ时ＮＯ、ｉＮＯＳ的含量变化。方法分光光度法及免疫组织化学方法。结果：ｉＮＯＳ和ＮＯ产的生与剂量呈正相关。２．０Ｇｙ照射后,ＮＯ从６ｈ到４８ｈ随时间推移产生量逐渐增加,４８ｈ达峰值,为对照的３．８倍,而后回降。结论电离辐射可刺激巨噬细胞合成ｉＮＯＳ及产生ＮＯ。     

99m Tc-MIBI监测肿瘤照射后生物学效应的

目的　研究照射后肿瘤细胞摄取MIBI能力的变化及其与肿瘤细胞凋亡、坏死和增殖状态的关系。方法　将离体肿瘤细胞和实验动物按照射剂量 0、5、10、2 0Gy与照射后 2 4、48、72h进行分组比较。离体肿瘤细胞分别测定单位质量肿瘤细胞摄取99mTc MIBI的放射性计数值 (计数·min- 1 ·mg- 1 cellprotein) ,凋亡指数 (ApoptosisIndex ,AI) ,集落形成率 (Platingefficiency,PE)。实验动物计算肿瘤组织微分摄取率 (differentialuptakeratio,DUR)和AI值。结果　不同剂量照射后 ,肿瘤细胞的99mTc MIBI摄取值与AI值呈负相关 (r=- 0 93) ,与PE值呈正相关 (r =0 84)。 2 4hDUR值与AI负相关 (r=- 0 793)。结论　不同剂量照射后 ,肿瘤细胞活力变化可能用99mTc MIBI作为示踪剂得到反映