扶正化瘀方对大鼠纤维化肺组织MMP-2活性与Ⅳ型胶原表达的影响

目的观察扶正化瘀方影响肺组织MMP-2活性与Ⅳ型胶原表达的抗肺纤维化作用机制.方法一次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,分模型对照组、扶正化瘀方组、甲强龙组,每组各14只模型大鼠.另设正常组10只,一次性气管内注射等量生理盐水.造模次日扶正化瘀方组予以4.6 g·kg-1大鼠体重的扶正化瘀方灌胃;甲强龙组予以15 mg·kg-1大鼠体重的甲强龙腹腔注射,正常组和模型组灌喂等量生理盐水;每日1次,共4周.Masson染色观察肺组织胶原沉积,称量肺重量与计算肺系数,Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸含量,明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性,Western blot检测肺组织MMP-2,MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达量.结果与正常组比较,模型组肺系数明显增加,肺组织胶原沉积明显,Hyp含量、Ⅳ型胶原、MMP-2与MMP.9蛋白表达增加,MMP-2活性水平升高,尤其是活性型MMP-2活性升高明显,而MMP-9活性略有下降.与模型组比较,扶正化瘀方与甲强龙均不同程度减轻模型组肺组织胶原沉积与Ⅳ型胶原蛋白表达,减少肺系数与肺组织Hyp含量,降低MMP-蛋白与2活性水平,尤其是活性型MMP-2水平.其中,对肺系数、Ⅳ型胶原蛋白与MMP-2蛋白与活性的抑制作用以扶正化瘀方较为明显.而2种药物对MMP-9蛋白表达与活性无明显影响.结论扶正化瘀方具有良好的抗大鼠肺纤维化作用,其部分作用机制在于抑制纤维化肺组织的MMP-2蛋白及其活性,以减少组织的炎性破坏;抑制Ⅳ型胶原过度表达,以减少胶原的病理增生沉积.     

扶正化瘀方对大鼠纤维化肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的影响

目的：观察扶正化瘀方影响肺组织MMP-2活性与IV型胶原表达的抗肺纤维化作用机制。方法：一次性气管内注射博来霉素诱导肺纤维化模型,分模型对照组、扶正化瘀方组、甲强龙组,每组各14只模型大鼠。另设正常组10只,一次性气管内注射等量生理盐水。造模次日扶正化瘀方组予以4.6 g·kg^-1大鼠体重的扶正化瘀方灌胃；甲强龙组予以15 mg·kg^-1大鼠体重的甲强龙腹腔注射,正常组和模型组灌喂等量生理盐水；每日1次,共4周。Masson染色观察肺组织胶原沉积,称量肺重量与计算肺系数,Jamall氏法测定肺组织羟脯氨酸含量,明胶酶图法检测肺组织MMP-2与MMP-9的活性,Western blot检测肺组织MMP-2,MMP-9和Ⅳ型胶原的蛋白表达量。结果：与正常组比较,模型组肺系数明显增加,肺组织胶原沉积明显,Hyp含量、Ⅳ型胶原、MMP-2与MMP-9蛋白表达增加,MMP-2活性水平升高,尤其是活性型MMP-2活性升高明显,而MMP-9活性略有下降。与模型组比较,扶正化瘀方与甲强龙均不同程度减轻模型组肺组织胶原沉积与Ⅳ型胶原蛋白表达,减少肺系数与肺组织Hyp含量,降低MMP-蛋白与2活性水平,尤其是活性型MMP-2水平。其中,对肺系数、Ⅳ型胶原蛋白与MMP-2蛋白与活性的抑制作用以扶正化瘀方较为明显。而2种药物对MMP-9蛋白表达与活性无明显影响。结论：扶正化瘀方具有良好的抗大鼠肺纤维化作用,其部分作用机制在于：抑制纤维化肺组织的MMP-2蛋白及其活性,以减少组织的炎性破坏；抑制Ⅳ型胶原过度表达,以减少胶原的病理增生沉积。     

扶正化瘀319方治疗慢性乙型肝炎及其对纤维化血清学指标的影响

扶正化瘀３１９方治疗慢性乙型肝炎５６例，并以大黄虫丸治疗的１９例患者为对照，临床有效率分别为８７．５％和６８．４％。该方不但能有效地改善肝功能及临床症状，且能降低患者显著增高的血清单胺氧化酶Ｂ（ＭＡＯ－Ｂ）活性，金属蛋白酶组织抑制因子－１（ＴＩＭＰ）、Ⅲ型前胶原肽、Ⅳ型胶原、透明质酸及层粘蛋白（ＬＮ）的含量，提高尿羟脯氨酸（Ｈｙｐ）排泄量（Ｐ＜０．００１～０．０５）。与对照组相比，除ＴＩＭＰ外．改善程度均以观察组为著。表明该方对慢性乙型肝炎具有较好的治疗效果，在一定程度上抑制了肝纤维化的进展。     

扶正化瘀方对大鼠肾间质纤维化肾组织基质金属蛋白酶活性调节的作用

目的:探讨扶正化瘀方影响肾间质纤维化大鼠肾组织基质金属蛋白酶(MMPs)活性调节的抗肾纤维化作用机制。方法:大鼠分为正常组、模型组与扶正化瘀方组,以氯化汞灌胃诱导大鼠肾间质纤维化模型,扶正化瘀方组以4g/kg扶正化瘀方灌胃。生化检测血清肾功能、肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量;病理染色观察肾组织病理形态改变;蛋白印迹法分析肾组织MMP-13、MMP-2、膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-1/2)蛋白表达;明胶酶谱法测定MMP-2活性;荧光底物反应法检测MMP-13活性。结果:与模型组比较,扶正化瘀方组明显改善大鼠血清肾功能指标,降低肾组织Hyp含量,减轻肾组织胶原沉积,降低大鼠肾组织的MMP-2、MT1-MMP、TIMP-1/2蛋白表达,降低MMP-2活性,但增加MMP-13活性。结论:扶正化瘀方抗肾间质纤维化的作用机制在于:抑制MMP-2活性,保护肾组织基底膜;抑制TIMP-1表达,提高MMP-13活性与促进病理沉积间质性胶原的降解。     

扶正化瘀方对大鼠肝脏与肾脏并存纤维化的影响

本项研究用DMN腹腔注射合喂饲重金属,同时诱导大鼠肝纤维化和肾间质纤维化病变,造成多器官纤维化的动物模型,观察扶正化瘀方对该模型的干预作用,从而为多器官纤维化的治疗提供有效手段.     

扶正化淤方对四氯化碳肝纤维化大鼠基膜型基质金属蛋白酶活性的影响

目的 探讨扶正化淤方通过影响基膜型基质金属蛋白酶活性而抗肝纤维化的作用机制.方法 四氯化碳(CCl4)皮下注射与高脂低蛋白饲料复合建立大鼠肝纤维化模型.随机分为正常组、模型组与扶正化淤方药物干预组.药物组自造模之日起以扶正化淤方稀释液灌胃,共用药6周.HE染色观察肝组织炎性病理变化,天狼猩红染色观察肝组织胶原沉积,盐酸水解法测定肝组织羟脯氨酸含量,Western 印迹法分析肝组织α-SMA、Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-2和MT-MMP1蛋白表达水平;明胶酶图法检测肝组织MMP-2/9活性.结果 与正常大鼠比较,模型大鼠血清肝功能异常、肝组织炎症明显、肝组织IV型胶原表达与沉积增加,α-SMA、Ⅳ型胶原、MMP-2、MMP-9、TIMP-2和MT-MMP1蛋白表达升高,而MMP-2/9活性水平明显上升.扶正化瘀方显著改善模型大鼠血清肝功能、减轻肝脏炎症和胶原沉积;减少肝星状细胞活化;抑制Ⅳ型胶原蛋白表达和沉积;降低MMP-2、TIMP-2和MT1-MMP蛋白表达;抑制MMP-2/9活性.结论 扶正化瘀方可通过抑制MMP-2的激活与活性水平,并减少Ⅳ型胶原沉积,而起到减轻肝组织的破坏与重构而发挥抗肝纤维化的作用.     

灵芝对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、MMP-9和Ⅳ型胶原表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝的干预作用.方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常时照组(C组)、糖尿病未治疗组(DM组)、糖尿病灵芝(1.2g·k-1·d-1)治疗组(GL组),用免疫组化方法(SP法)检测治疗后各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9及Ⅳ-C的表达,同时进行光镜、透射电镜观察各组大鼠肾皮质病理改变.结果:DM组大鼠肾小球MMP-2、MMF-9蛋白表达较C组明显降低,Ⅳ-C蛋白表达明显升高,出现糖尿病肾病典型的病理改变.GL组MMP-2、MMP-9蛋白较DM组表达明显升高,Ⅳ-C表达较DM组明显降低,病理改变好转.结论:灵芝通过上调MMP-2、MMF-9蛋白表达,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而对糖尿痛大鼠起到肾脏保护作用.     

扶正化瘀方影响肝脏胶原生成的拆方配伍研究

将扶正化瘀方拆分为扶正组、化瘀组、虫草组、丹参组及丹参加虫草组。制备各组含药血清,分离培养大鼠肝星状细胞,观察含药血清对培养星状细胞增殖活化、１型胶原蛋白及其ｍＲＮＡ表达的影响。复制二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化模型,以全方及拆方组治疗,观察模型大鼠肝脏羟脯胺酸（Ｈｙｐ）含量与胶原沉积的变化。结果各组含药血清均可抑制星状细胞的增殖和活化,其中化瘀药效果最明显;各组含药血清均可抑制星状细胞Ｉ型胶原ｍＲＮＡ     

扶正化瘀方对骨髓移植肝纤维化小鼠骨髓细胞肝脏迁移的影响

目的: 探讨扶正化瘀方(FZHY)对肝纤维化小鼠骨髓细胞肝脏归巢的作用。 方法: BABL/C雌性受鼠性别交叉法骨髓移植模型基础上,四氯化碳(CCl₄)诱导肝纤维化模型;成模后,治疗组以FZHY方4.6 g ·kg^-1 ·d^-1 ig 4周。 PCR,病理及肝功能检测成模情况;通过FISH法标记Y染色体,观察雌性受鼠肝脏内骨髓源性细胞含量;Western blot法检测雌性受鼠肝组织基质细胞衍生因子-1(SDF-1)蛋白相对表达量。 结果: 与模型组比较,FZHY组小鼠,肝组织损伤明显减轻。FISH法标记Y染色体观察显示,FZHY组小鼠较模型组肝内骨髓源性细胞减少(P<0.05)。Western blot结果,FZHY组小鼠较模型组肝脏SDF-1蛋白相对表达量明显减少(P<0.01)。 结论: 在肝脏损伤时,FZHY可能通过抑制肝内SDF-1蛋白的表达来阻止骨髓源性细胞迁移入肝,从而一定程度上抑制骨髓源性细胞入肝后促进肝纤维化。     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞，并伟代培养。用扶正化阏９方给 正常大鼠灌胃，药物血清，温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率，ＥＬＩＳＡ 培养上清的Ｉ型胶原含量，免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达，ＲＴ－ＰＣＲ法分析Ｉ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细     

灵芝对糖尿病大鼠肾组织MMP-2、MMP-9和IV型胶原表达的影响

目的:观察基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在糖尿病大鼠肾组织中的表达及灵芝的干预作用.方法:40只雄性SD大鼠随机分为正常时照组(C组)、糖尿病未治疗组(DM组)、糖尿病灵芝(1.2g·k-1·d-1)治疗组(GL组),用免疫组化方法(SP法)检测治疗后各组大鼠肾皮质MMP-2、MMP-9及Ⅳ-C的表达,同时进行光镜、透射电镜观察各组大鼠肾皮质病理改变.结果:DM组大鼠肾小球MMP-2、MMF-9蛋白表达较C组明显降低,Ⅳ-C蛋白表达明显升高,出现糖尿病肾病典型的病理改变.GL组MMP-2、MMP-9蛋白较DM组表达明显升高,Ⅳ-C表达较DM组明显降低,病理改变好转.结论:灵芝通过上调MMP-2、MMF-9蛋白表达,减少细胞外基质Ⅳ-C积聚而对糖尿痛大鼠起到肾脏保护作用.     

扶正化瘀方对3T3细胞殖和胶原生成的影响

为了探讨扶正化瘀方抗肝纤维化的作用机制。以体外培养的ＮＩＨ／３Ｔ３细胞作为肝脏成纤维细胞的替代模型，用扶正化瘀方药物血清，以１０％的浓度被添加到培养液中，通过［＾３Ｈ］ＴｄＲ掺入法和免疫细胞化学，观察药物血清对３Ｔ３细胞［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入量和胶原生成的影响。结果表明药物血清组［＾３Ｈ］－ＴｄＲ掺入量明显少于正常大鼠血清组。药物血清组Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原量均明显低于正常大鼠血清组，其中Ⅰ、Ⅲ型胶原更     

扶正化瘀方对原代培养肝细胞增殖及胶原生成率影响的血清药理学研究

肝纤维化是各种慢性肝病发展的渐进过程,目前对肝纤维化的防治尚无疗效确切的药物。既往的研究表明,扶正化瘀方(由桃仁、丹参、虫草等组成)能抑制胶原合成,促进胶原降解,恢复肝脏结构及功能,有良好的抗肝纤维化作用。为进一步探讨其抗肝纤维化的作用及机理,本研究采用正常大鼠灌胃给药,分离血清作用于培养细胞的血清药理学方法,探讨该方对原代培养大鼠肝细胞增殖及胶原生成率的影响。1 材料和方法     

虎金丸对肝纤维化大鼠Ⅳ型胶原表达的影响

目的：观察虎金丸对肝纤维化大鼠胶原增生及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)表达的影响。方法：以CCl4复制肝纤维化大鼠动物模型，采用VG染色、免疫组化技术观察虎金丸对肝纤维化胶原增生及Ⅳ-C表达的影响。结果：CCl4肝纤维化大鼠模型肝组织胶原纤维明显增生、Ⅳ-C表达较正常对照组明显增强，虎金丸能抑制肝纤维化大鼠胶原增生及Ⅳ-C在肝纤维化大鼠肝组织中的表达。结论：虎金丸有抗肝纤维化作用。     

扶正化瘀319方抗大鼠肝纤维化的研究

扶正化瘀３１９方可阻止肝纤维化的进展。对已形成的肝纤维化，３１９方能有效地促使其组织结构及功能的回复，与秋水仙碱、大黄虫丸比较，３１９方显示出较明显的优势。     

扶正化瘀319方药物血清对肝星状细胞Ⅰ型胶原及转化生长因子β1表达的影响

目的：探讨扶正化瘀３１９方抗肝纤维化的主要作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用扶正化瘀３１９方给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞。胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,ＥＬＩＳＡ法测定培养上清的Ⅰ型胶原含量,免疫细胞化学染色、图像分析半定量转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）蛋白表达,ＲＴＰＣＲ法分析Ⅰ型前胶原、ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ的表达量。结果：扶正化瘀３１９方药物血清能明显抑制肝星状细胞的细胞内外胶原生成率,抑制细胞的Ⅰ型前胶原基因表达及其胶原分泌,抑制肝星状细胞ＴＧＦβ１与蛋白表达。结论：扶正化瘀３１９方能明显抑制肝星状细胞的活化,对肝星状细胞Ⅰ型前胶原及ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达的抑制可能是该方抗肝纤维化的主要作用机理。     

扶正祛瘀方抗肝纤维化的临床疗效观察

目的:观察扶正祛瘀方治疗肝炎肝纤维化的近期疗效。方法:将49例患者随机分为2组,治疗组29例以自拟扶正祛瘀方治疗;对照组21例以大黄虫丸治疗。观察2组患者的临床症状、肝功能、血清肝纤维化指标及B超积分的改变。结果:治疗组中显效16例,好转9例,无效4例,总有效率为86.2%;对照组显效4例,好转9例,无效7例,总有效率为65.0%。两组总有效率比较有显著性差异(P<0.01)。扶正祛瘀方能显著改善患者临床临床症状,能降低血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、升高血清白蛋白,能明显降低血清透明质酸、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原。结论:扶正祛瘀方对肝纤维化有明显的治疗作用,疗效优于大黄虫丸。     

扶正化瘀方对正常及肝纤维化大鼠体内CYP450酶的影响

使用Cocktail探针药物法,研究扶正化瘀方(FZHY)对正常和肝纤维化大鼠细胞色素P450(CYP450)5种同工酶的影响。正常和二甲基亚硝胺(dimethylnitrosamine,DMN)腹腔注射诱导的肝纤维化模型大鼠,以FZHY浸膏粉连续灌胃2周后,单剂量尾静脉注射由CYP450 5种同工酶的特异性探针底物非那西丁(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C9)、奥美拉唑(CYP2C19)、氢溴酸右美沙芬(CYP2D6)和咪达唑仑(CYP3A4)配置的Cocktail探针溶液后,通过建立的LC-MS/MS法同时检测血浆中5种探针药物的浓度,采用PK solution 2TM对数据进行处理,并计算主要药动学参数。正常大鼠灌胃FZHY后,非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑和氢溴酸右美沙芬的AUC0-t均出现不同程度的增加,CL也均出现降低趋势,提示FZHY能明显抑制正常大鼠CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6的活性,但对CYP3A4的活性影响不明显;肝纤维化大鼠灌胃FZHY后,甲苯磺丁脲的AUC0-t显著增加,Vd显著降低,其他4种探针药物的药动学参数未见显著改变,提示在肝纤维化大鼠体内FZHY仅对CYP2C9有抑制作用,对CYP1A2,CYP2C19,CYP2D6,CYP3A4活性影响不明显。CYP450酶在肝纤维化条件下活性的改变可能是FZHY对正常和肝纤维化大鼠CYP450酶影响不同的原因。     

扶正活血不同组方对肝纤维化大鼠相关血清指标及肝组织羟脯氨酸的影响

目的 观察扶正活血不同组方对肝纤维化大鼠相关血清指标及肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量的影响.方法 采用CCL加橄榄油复制肝纤维化大鼠,以扶正活血不同配伍组方(活血健脾益气方、活血滋养肝肾方、活血温补脾肾方)灌胃给药,检测肝纤维化大鼠相关血清指标及肝组织Hyp)含量.结果 与模型对照组比较,各扶正活血方对血清指标层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)均有明显作用(P<0.01,P<0.05),其中活血健脾益气方、活血滋养肝肾方作用较强;活血健脾益气方、活血滋养肝肾方能明显降低Hyp含量(P<0.05).结论 扶正活血不同组方能改善肝纤维化大鼠相关血清指标,对肝组织Hyp含量也有不同程度的改善作用.     

扶正化瘀胶囊对慢性肝炎肝纤维化指标的影响

探讨扶正化瘀胶囊对慢性肝炎的血清中ALT PCⅢCIV HA的影响。方法：应用扶正化瘀胶囊10g，一日二次，连续服用3个月，于用药前、后第4周、第8周及第12周，分别检测血清中ALT PCⅢCIV HA的含量。结果：用药后第4周，第8周ALT PCⅢCIV HA下降不明显，第12周有明显的下降，治疗组观察项目下降的幅度明显优于对照组（P〈0．05），而且与ALT下降呈正相关。结论：扶正化瘀胶囊有明显的降低血清ALT PCⅢCIV HA的作用，是治疗慢性肝炎，防止肝纤维化的有效药物，且使用方便无明显的副作用。