影响杂交瘤细胞融合成功率的若干因素的探讨

1980年以来,我国各地虽有大量关于杂交瘤技术以及建立单克隆抗体杂交瘤细胞株的报 告,但关于影响细胞融合成功率的报道为数不多,我们为了提高细胞融合率特进行PEG浓度、pH,用量以及提高用于融合的骨髓瘤细胞活性的方法和应用饲养细胞(Feeder cells)     

改良的杂交瘤方法:化学性抗原介入(骨髓瘤细胞)的细胞融合

目前采用的PEG介入的淋巴细胞融合是一种效果较差的随机方法。融合结果的研究,常表明所得到韵具有一定的扰体特屏性的克隆数月比理论上所应该得到的数昌少。为了减少随机反应,一促进特异性的细胞膜接触,     

提高细胞融合率和获得杂交瘤细胞过量生长的有效方法

B淋巴细胞促分裂素—鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)细胞壁水溶性蛋白提取物(STM)的应用和延迟使用含HAT的选择性培养基等条件的改进,使细胞融合率提高到90％以上,分泌特异性抗体的杂交瘤细胞系阳性率提高到50％以上,并得到不同类和亚类的单克隆抗体。某些影响杂交瘤细胞生长的因素和条件也作了讨论。     

骨髓瘤细胞裂解物致敏的DC-CIK细胞抗骨髓瘤细胞作用

目的:研究负载骨髓瘤细胞裂解物的健康供者树突状细胞(Dendritic cells,DCs)联合细胞因子诱导杀伤细胞(Cytokine induced kil1er cells,CIK)体外对骨髓瘤U266细胞杀伤作用的影响。方法:通过血细胞分离机采集健康供者单个核细胞100 ml用于体外培养,选取贴壁细胞进行DC细胞培养,悬浮细胞用于CIK细胞培养,DC细胞培养7日后用骨髓瘤U266细胞裂解物致敏,然后与CIK细胞共培养7日,用倒置显微镜、扫描电镜观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞表型,乳酸脱氢酶释放法检测共培养细胞对U266细胞杀伤作用。结果:CIK细胞大部分形态为圆形,少数梭形,DC细胞有典型细胞突起,流式细胞仪分析培养的CIK细胞高表达CD3,培养后CD3和CD56共表达细胞明显升高,在致敏后DC细胞表达CD86、CD80,共培养细胞对U266细胞杀伤作用强于单独CIK细胞作用。结论:瘤细胞裂解物致敏的健康供者DC-CIK细胞能显著提高对瘤细胞的杀伤性,在患者干细胞移植后是否可应用以清除残留病变,值得进一步研究应用。     

小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合的研究

目的 使肺癌细胞表达共刺激分子,探讨其作为疫苗的可能性。方法 小鼠骨髓细胞在体外经GM－CSF和TNF－α诱导,使之成为成熟树突状细胞（BmDC)。将其与小鼠Lewis肺癌细胞AL9901融合,并以S－P免疫细胞化学染色法检测融合细胞和BmDC上有关分子的表达。结果 通过GM－CSF和TNF－α诱导获得BmDC,以诱导5d时收获为佳。获得的BmDC能高表达B7－1和CD40分子,与肺癌细胞融合后,获得的融合细胞仍能高表达B7－1和CD40分子。结论 通过将小鼠肺癌细胞与树突状细胞融合,使肺癌细胞获得了BmDC表达的B7－1和CD40分子,从而提高了其免疫原性,为制备肺癌疫苗奠定了基础。     

神经细胞分泌因子促进骨骼肌细胞生长

BACKGROUND: There is no effective treatment for muscle atrophy caused by peripheral nerve damage. Skeletal muscle cells, a structural unit of muscle contraction, can be used for studies on muscle atrophy when cultured in vitro. OBJECTIVE: To investigate the promotion effect of neuron-secreted factors on the growth of skeletal muscle cells in vitro. METHODS: Skeletal muscle cells primary cultured in vitro were divided into two groups: experimental group with neuron-secreted factors, and control group with common culture medium, respectively. Afterwards, the number of skeletal muscle cells and expression level of alpha actin were detected by hematoxylin-eosin staining and immunohistochemical staining, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:The number of skeletal muscle cells and expression level of alpha actin in the experimental group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). In conclusion, neuron-secreted factors have the ability of promoting the growth of skeletal muscle cells and may be helpful for denervated muscle atrophy. Subject headings: Tissue Engineering; Satellite Cells, Skeletal Muscle; Actinin; Neurons; Cells, Cultured 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

应用体外致敏的淋巴细胞与异源性骨髓瘤细胞融合制备人单克隆抗体

由于不能通过活体免疫制备抗原特异性的B细胞,以及缺乏可用作融合成分的非免疫球蛋白分泌性的骨髓瘤,它可无限地分泌特异性免疫球蛋白,因此防碍了有用的人单克隆抗体(MAb)的制备。作者已经对用B型流感杆菌的蛋白质抗原作体外免疫,其产生特异性抗体讨程中的一些影响因素进行了研究。并建立了一种小鼠-人异源骨髓瘤的融合细胞。扁桃腺     

用液氮冻存的脾细胞进行细胞融合

<正> 制备单克隆抗体的细胞杂交技术是建立在骨髓瘤细胞与脾细胞融合的基础上。脾细胞通常来自免疫的或感染病原体的BALB/c小鼠。到达免疫高峰或感染高峰的小鼠需及时应用,否则引起动物死亡或需重新加强免疫,造成研究工作中人力、物力和时间上极大的浪费。如果脾细胞能象骨髓瘤细胞或分泌     

一种适用于骨髓瘤细胞、淋巴细胞杂交瘤细胞生长的无血清培养液CBSF

大多数哺乳类细胞的培养均需在培养液中加入一定量的血清,但是,由于血清的成份极为复杂,有些甚至抑制一些细胞的生长和功能,此外若要从培养液中分离提纯一些细胞产物,由于血清的存在也增添了困难。从细胞工程发展的前景来看。应用培养罐来大规模培养细胞,以获得细胞产物的技术开发已在着手进行。无血清培养也成为迫待解决的问题。这类     

基底硬度对肝细胞和肝癌细胞融合生长的影响

目的通过比较融合生长肝细胞(L02)与肝癌细胞(HCCLM3)对不同硬度基底(0.5、4 kPa和玻璃)的响应,探查两类细胞融合生长差异的成因。方法运用实时显微摄影技术、免疫荧光染色、流式细胞技术及Western Blot-ting等试验方法分别检测融合生长L02和HCCLM3细胞在不同硬度基底上的形态特征、骨架构象、E-cad和Integrinβ1表达分布,以及Src激酶活性水平的变化。结果 (1)融合生长L02细胞呈圆形或立方形,HCCLM3细胞呈多角形,铺展和极化更为明显;随基底硬度增加,L02细胞圆度随时间变化幅度较小,HCCLM3细胞变化幅度较大。(2)融合生长的L02细胞皮质下呈现环形骨架,E-cad定位于细胞-细胞接触处,HCCLM3中皮质骨架环不完整,胞内骨架沿基底呈放射状分布,E-cad呈弥散分布于细胞质中。(3)随基底硬度增加,L02和HCCLM3细胞中E-cad表达显著降低(P<0.01),而p-Src和Integrinβ1的表达量则显著增加(P<0.01),HCCLM3较L02细胞变化明显。结论皮质下环形骨架装配与E-cad在细胞-细胞定位呈正相关,基底硬度对肝癌细胞钙黏素与整合素黏附系统平衡调节的影响较对肝细胞的影响明显。     

研究确定促进β细胞生长的免疫细胞类型

据KulkarniRN[Diabetes,2012,61（9）：2205—2213．]报道,Joslin研究人员确定了促进1型糖尿病患者β细胞生长的免疫细胞类型。这项研究提供了进一步的证据表明,在1型糖尿病病理组织中免疫细胞功能发生了改变。在1型糖尿病患者中．免疫系统浸润胰岛细胞,     

多发性骨髓瘤中来那度胺促进NK细胞作用的研究进展

自然杀伤(natural killer,NK)细胞是机体重要的免疫细胞,在恶性血液病的免疫监测中起到关键作用。多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者的恶性浆细胞通过多种机制影响NK细胞的活化及杀伤功能。来那度胺是治疗多发性骨髓瘤的一种有效的免疫调节药物,能够有效的恢复自然杀伤细胞活性,促进肿瘤细胞的死亡并改善患者的生存率。本文就多发性骨髓瘤的恶性浆细胞对NK细胞的活性抑制以及来那度胺恢复NK细胞的杀伤功能的相关研究进行综述,为有效的治疗多发性骨髓瘤提供依据。     

睾丸支持细胞促进体外培养神经元生长的研究

目的　探讨睾丸支持细胞 (SC)对体外培养神经元生长发育的促进作用。　方法　将SCs制备成饲养层和SCs条件培养液 (SCM)后与神经元共培养 ,观察培养细胞的存活数和突起数 ,并应用图像分析仪观察细胞的面积。　结果　SCs饲养层及SCM培养神经元的存活数、突起数和胞体面积明显高于对照组 (P <0 0 1)。　结论SCs对体外培养的神经元具有显著的促生长作用。     

伸长细胞促进共培养皮层神经元生长机制的研究

将皮层神经元与传代培养的伸长细胞(tanycytes,TAS)共培养,并与嗅球成鞘胶质细胞(olfactory ensheathing cells,OEC)、星形胶质细胞(astrocytes,AST)共培养的结果相比较,探讨TAS促进共培养神经元生长的机制。共培养中,按胶质细胞介质不同分五组:TAS、OEC、AST、TAS条件培养液组(TCM)和对照组,分析各组神经元2h贴壁数量和7d后神经元存活总数量和突起总长度的差异。结果显示,胶质细胞介质组和TCM组神经元的生长明显高于对照组(P<0.05);TAS组和OEC组对神经元数量和突起长度的影响无明显差别(P>0.05),并均明显高于AST和TCM组(P<0.05);AST与TCM组相比无明显差别(P>0.05)。提示传代培养的TAS与OEC一样都可明显促进皮层神经元的生长;TAS通过接触粘附作用及成鞘作用促进神经元的生长。     

浅蓝菌素对人结肠癌细胞LoVo在裸鼠体内生长的抑制作用

目的 研究脂肪酸合酶抑制剂－浅蓝菌素对人结肠癌细胞ＬｏＶｏ在裸鼠体内生长的抑制作用。方法 建立人结肠癌裸鼠移植瘤模型,浅蓝菌素每次８０ｍｇ／ｋｇ体重、１６０ｍｇ／ｋｇ体重腹腔注射１０次,动态观察肿瘤体积及抑瘤率,治疗后１７ｄ处死并解剖动物,瘤组织做形态学观察和免疫组织化学ＳＰ法检测。结果 不同浓度浅蓝菌素处理人结肠癌细胞ＬｏＶｏ裸鼠移植瘤模型,低剂量和高剂量浅蓝菌素的体积抑瘤率分别为３７．７％和６３．８％,后者接近常规化疗药物５－Ｆｕ治疗对照组（６５．８％）。瘤体组织学显示为人未分化结肠腺瘤,浅蓝菌素处理的移植瘤组织内瘤细胞出现明显的细胞凋亡的超微结构改变,免疫组织化学显示ｂｃ１－２蛋白表达率低于对照组,ｂａｘ基因蛋白的表达结果则相反。结论 浅蓝菌素能够选择性地抑制人结肠癌细胞ＬｏＶｏ细胞在裸鼠体内的生长,这种     

Jagged1调控STAT3信号通路影响多发性骨髓瘤细胞的生长和凋亡

目的:研究Jagged1对多发性骨髓瘤细胞生长和凋亡的影响及其机制。方法:多发性骨髓瘤细胞U266转染Jagged1小干扰RNA和小干扰RNA阴性对照,RT-q PCR和Western blot检测细胞中的Jagged1水平,以不做转染的细胞为空白对照,台盼蓝染色,绘制细胞生长曲线,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和Bax的蛋白表达水平。用STAT3信号通路抑制剂AG490处理细胞,检测细胞中p-STAT3水平。AG490处理下调Jagged1表达后的U266细胞,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:与空白对照组细胞相比,转染Jagged1小干扰RNA后细胞中Jagged1的mRNA和蛋白水平下降(P0.05),而转染小干扰RNA阴性对照的细胞中Jagged1的mRNA和蛋白水平没有变化。与不做转染的细胞相比,敲减Jagged1表达的U266细胞生长速度降低,细胞活力降低,细胞凋亡率升高(P0.05)。与不做转染的细胞相比,敲减Jagged1表达的U266细胞中Bax水平升高,p-STAT3水平下降(P0.05)。AG490处理后的U266细胞p-STAT3水平下降,STAT3信号通路激活受阻。AG490可以促进下调Jagged1诱导的U266细胞凋亡,抑制细胞活力。结论:敲减Jagged1表达通过抑制STAT3信号通路促进多发性骨髓瘤细胞凋亡,抑制细胞生长。     

用鸡红细胞取代Hela细胞进行细胞融合的实验研究

为了探讨更经济、简便、有效的细胞融合方法 ,作者用鸡红细胞和Hela细胞为材料 ,聚乙二醇 (mw =4 0 0 0 )为诱导剂 ,诱导鸡红细胞 ,Hela细胞融合。结果鸡红细胞和Hela细胞融合率分别为2 2 %和 2 0 % ,两者无显著差异 ,但鸡红细胞更优于Hela细胞     

多发性骨髓瘤的改良细胞遗传学分析

目的探讨改进培养方法对多发性骨髓瘤异常核型检出率的影响及染色体异常的临床意义。方法以20例随访诊治的多发性骨髓瘤患者为研究对象，抽取并分离骨髓单个核细胞，分别做直接法、3天培养、以及培养基中添加IL-6（10ng／mL）＋GM-CSF（30ng／mL）的6天培养法后再行R显带分析，以8例缺铁性贫血患者为对照。结果2例多发性骨髓瘤患者标本因凝血试验失败，2例因细胞较少仅行直接法分析，可评估的16例中有4例检出异常核型，其中3例为复杂核型。这些异常核型均见于细胞因子6天处理组，而直接法和3天培养法均未发现异常核型。临床资料显示伴有异常核型的患者疗效均较差、疾病分期都是Ⅲ期，骨髓中瘤细胞比例较高（25％～56％）。对照组病例在各处理组中均未检出异常核型。结论添加细胞因子和延长培养时间有助于提高多发性骨髓瘤异常核型的检出率；多发性骨髓瘤的遗传学改变多为复杂异常，并提示对治疗反应欠佳。     

卵子的生长环境决定年长妇女受孕成功率

正据美国国家科学院院报(PNAS)网站(2015-08-27)报道,根据美国一份新的研究发现:43岁以上的妇女,在人工受孕的疗程中,早期从卵巢取得卵子可增加成功的概率。研究指出,妇女在43岁以后,滋养和扶持卵子成长的细胞功能会大幅度的下降,卵子更易受排卵后身体所分泌的激素影响。若在人工受孕期间,能提早从较小的卵泡中取出卵子,可以降低这样的风险,使得胚胎的质量提升,且增加怀孕的成