衣霉素对高糖刺激肾系膜细胞增殖的影响及其机制研究

目的 观察N-糖链抑制剂衣霉素(TM)对肾小球系膜细胞(GMC)β1整合素以及其下游重要信号分子粘着斑激酶(FAK)和细胞周期正调控蛋白cyclinD1表达的影响。了解衣霉素在抑制高糖刺激GMC增殖中的重要作用。方法 体外培养的大鼠系膜细胞株分为：正常对照组，高糖组，甘露醇组，高糖加不同浓度衣霉素(TM)组。用流式细胞技术检测B1整合素的表达；免疫组化方法测定FAK和细胞周期素D1(cyclin D1)的表达，四唑盐比色(MTT)法测定细胞增殖。结果 正常系膜细胞中B1整合素、FAK和cyclin D1均有一定表达，高糖作用24h可以使3者表达明显升高，细胞增殖能力增强，且与渗透压无关。衣霉素(TM)可呈浓度依赖性的抑制高糖的这种作用。结论 N-糖链抑制剂TM通过阻断细胞表面糖蛋白的糖基化过程，形成脱糖蛋白，从而抑制β1整合素的表达，并进一步影响细胞FAK和cyclin D1表达，使高糖诱导的细胞增殖受抑制。     

过氧化物酶体增殖物活化受体γ减少高糖诱导系膜细胞外基质的积聚及其机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ对高糖诱导肾小球系膜细胞(GMC)外基质(ECM)积聚的抑制作用及其机制。方法以表达野生型小鼠PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/WT转染系膜细胞(WT),然后予30mmol/L的高糖(HG)刺激48h,以ELISA法检测细胞上清液中TGF-β1、纤连蛋白(FN)的浓度。GMC中c-fos、c-jun、葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)mRNA的表达检测采用半定量RT-PCR法,并以Western印迹检测胞浆中核因子抑制物(Ⅰ-κB)、核因子(NF-κB)及胞核中NF-κB、磷酸化细胞外调节激酶(p-ERK)的蛋白表达水平。同时以2μmol/L的PPARγ激活剂吡咯列酮(Pio)、转染表达功能缺陷的突变型(dominantnegative,DN)PPARγ1的质粒pIRES2-EGFP-mPPARγ1/DN(DN)或空白质粒pIRES2-EGFP作为对照。PPARγ的活性以其与PPARγ反应元件(PPRE)的结合能力表示。结果HG培养时系膜细胞的PPARγ活性较正常糖浓度(5mmol/L)培养时明显上升(P<0.01),HG WT组的PPARγ活性显著高于HG DN、HG pIRES2-EGFP和HG Pio组。与HG DN、HG pIRES2-EGFP相比,WT转染所致的PPARγ1高表达能显著抑制高糖诱导GMC的TGFβ-1、FN生成增多,减轻c-fos和c-jun的mRNA表达的上调,改善p-ERK蛋白水平的增加、胞浆Ⅰ-κB表达的降低以及NF-κB由胞浆向胞核转移的增加(P均<0.0     

ERK1/2对高糖刺激肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1和p27Kip1表达的作用

高糖是引起糖尿病肾病（DN）时肾脏肥大的始动因素。葡萄糖通过葡萄糖转运蛋白（GLUT）进入细胞。肾小球系膜细胞（GMC）主要表达GLUT1。细胞外高糖可以刺激GMC的GLUT1表达以及对糖的摄入。然而，高糖诱导GMC的GLUT1表达机制不甚明确。本研究利用大鼠GMC观察细胞外调节蛋白激酶（ERK1／2）对高糖诱导的GLUT1表达及细胞周期抑制蛋白（CKI）p27^Kip1的影响。旨在给DN时抑制ERK1／2的活性可以阻止GLUT1的表达增高而延缓GMC肥大的假设提供理论依据。     

罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾脏的保护作用

目的观察罗格列酮对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾皮质过氧化物酶体增殖物活化受体(PPAR)γ、转化生长因子(TGF)β1表达介导的肾间质纤维化的作用。方法UUO大鼠给予罗格列酮5mg·kg-1·d-1灌胃,用免疫组化、RT-PCR及Western印迹的方法检测术后7d、14dPPARγ、TGF-β1、增殖细胞核抗原(PCNA)表达量及观察肾脏病理改变。结果与假手术组相比,UUO组及药物治疗组PPARγ、TGF-β1、、PCNA表达均增高且UUO组显著高于治疗组(P<0.05)。结论罗格列酮可通过活化PPARγ,下调TGF-β1,从而减轻UUO术后肾组织间质纤维化。     

肾安Ⅰ号对大鼠GMC增殖及TGF-β1、HGF表达的影响

目的:观察肾安Ⅰ号对大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及TGF-β1和HGF表达的影响.方法:应用细胞培养技术进行大鼠GMC传代培养,分别用台盼蓝染色计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察肾安Ⅰ号对大鼠GMC的毒性作用及增殖水平,并用免疫细胞化学技术法观察大鼠GMC表达TGF-β1和HGF情况.结果:(1)台盼蓝染色排斥试验显示:肾安Ⅰ号25%、12.5%和6.25%浓度组各时段细胞活力均达90%以上,经x2检验,与空白组比较无统计学差异(P＞0.05).(2)MTT法测OD值显示:肾安Ⅰ号对大鼠GMC的抑制作用与浓度呈显著的正相关关系(r=0.992和0.976,P＜0.05);LPS组大鼠GMC增生水平明显高于GMC组(P＜0.05或P＜0.01);肾安Ⅰ号各浓度组大鼠GMC增生水平明显低于LPS组(P＜0.05或P＜0.01).(3)免疫细胞化学染色结果显示:LPS组TGF-β1表达明显高于GMC组(P＜0.05),而HGF表达与GMC组无统计学差异(P＞0.05);肾安组TGF-β1表达与GMC组无统计学差异(P＞0.05),而HGF表达明显高于GMC组(P＜0.01);肾安组TGF-β1表达明显低于LPS组(P＜0.01),而HGF表达明显高于LPS组(P＜0.01).结论:肾安Ⅰ号能明显抑制LPS刺激培养条件下的大鼠GMC增殖,下调TGF-β1的表达,上调HGF的表达,具有阻缓肾纤维化作用.     

高糖刺激肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白4及p21的表达及其意义

目的探讨早期糖尿病肾病(DN)肾小球系膜细胞(GMC)中葡萄糖转运蛋白(GLUT)4、p21mRNA表达变化及其与GMC肥大的关系。方法大鼠1097系膜细胞株分为高糖组、甘露醇组、不同浓度胰岛素组、高糖加不同浓度胰岛素组、正常对照组。用RT-PCR法检测各组GLUT4mRNA、p21mRNA的表达。流式细胞仪测各组GMC体积大小。结果正常对照组GMC有一定GLUT4mRNA、p21mRNA表达。高糖组GLUT4mRNA表达明显下降,p21mRNA表达明显增加。胰岛素刺激GMCGLUT4mRNA表达存在浓度依赖关系。p21mRNA表达越高,细胞前向角度散射光(FSC)越强,GMC体积越大。结论高糖刺激导致GMC肥大,GMC的p21mRNA表达上调和GLUT4mRNA表达下调与DN早期GMC肥大-肾小球肥大有关。     

黄芪甲苷对高糖刺激下的足细胞黏附功能的保护作用及机制

目的 研究黄芪甲苷对体外培养的足细胞黏附功能的保护作用及机制。 方法 条件性永生的小鼠足细胞分为正常糖组、高糖组、甘露醇高渗对照组及高糖＋黄芪甲苷组 （AS-Ⅳ）,分别用荧光定量法和物理离心法观察不同剂量（10、50、100 mg/L)及不同作用时间（3、6、12、24 h）的AS-Ⅳ对足细胞黏附功能的影响。实时定量PCR法及Western印迹法分别检测足细胞α3β1整合素mRNA和蛋白表达。 结果 与正常糖对照组比较,高糖组足细胞与基底膜蛋白复合物（BMC）间的黏附功能显著下降（P < 0.05）,而AS-Ⅳ能明显改善高糖刺激下的足细胞黏附功能（P < 0.05）,且呈剂量和时间依赖关系。此外,高糖组足细胞α3β1整合素mRNA及蛋白表达水平均显著低于正常糖组（P < 0.05）,而AS-Ⅳ能呈剂量和时间依赖性上调高糖刺激下的足细胞?琢3β1整合素mRNA及蛋白表达。 结论 AS-Ⅳ对体外培养的高糖刺激下的足细胞黏附功能有明显保护作用,其机制可能与AS-Ⅳ上调α3β1整合素mRNA及蛋白表达水平有关。     

罗格列酮对糖尿病大鼠肾保护机制的研究

目的探讨罗格列酮对糖尿病肾损害的保护作用机制。方法单次腹腔注射50mg/kg链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型,糖尿病大鼠随机分成糖尿病组、罗格列酮治疗组(5mg·kg-1·d-1),和正常对照组。用免疫组化、RT-PCR及Western印迹的方法检测8周后过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、TGF-β1表达的改变。结果与正常对照组相比,糖尿病组及治疗组PPARγ及TGF-β1表达增加(P<0.05);而治疗组PPARγ及TGF-β1表达显著低于糖尿病组(P<0.05)。结论罗格列酮可通过活化PPARγ,下调TGF-β1,显著减少糖尿病大鼠尿蛋白,从而延缓肾脏损伤。     

罗格列酮对环孢素A所致大鼠成纤维细胞肾毒性的保护作用

目的观察免疫抑制剂环孢素A(CsA)对大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)增生及细胞因子分泌的影响以及罗格列酮的干预作用,初步探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性的保护作用。方法体外培养大鼠肾脏成纤维细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定CsA及罗格列酮对细胞增生的影响。RT-PCR检测过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、TGF—β1mRNA水平。western印迹检测PPARγ、AT1受体、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)及FN蛋白表达。酶联免疫吸附(ELISA)测定细胞培养上清液中TGF-β1的分泌。结果CsA可明显抑制NRK细胞增生,且呈剂量和时间依赖性(P<0.05)。罗格列酮与CsA合用后,对细胞增殖的抑制作用更明显(P<0.01)。CsA刺激NRK细胞PPARγ、TGF—β1、AT1受体及FN的产生(P<0.05),罗格列酮可下调这些改变(P<0.05)。结论罗格列酮可减轻CsA所致的NRK细胞毒性。     

罗格列酮对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的探讨体外条件下转化生长因子(TGF)β1对人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)表达结缔组织生长因子(CTGF)的诱导情况,以及罗格列酮对其影响和作用途径。方法应用RT-PCR方法检测CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(SMA)mRNA表达。应用Western印迹方法检测CTGF和纤连蛋白(FN)的蛋白表达。结果(1)HK-2细胞低水平表达CTGFmRNA和蛋白,TGF-β1呈剂量和时间依赖性增加HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白表达(P<0.01)。(2)罗格列酮和15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)呈剂量依赖性抑制TGF—β1(4ng/ml)诱导的HK-2细胞CTGFmRNA和蛋白的表达。(3)过氧化物酶体增殖体激活受体(PPAR)γ特异性抑制剂GW9662(1μmol/L)完全阻断罗格列酮和15d—PGJ2对CTGFmRNA和蛋白表达的抑制作用。(4)与单纯TGF-β14ng/ml刺激组相比,罗格列酮5、10μmol/L处理组HK-2细胞FN蛋白分别下调39.9%和53.4%(P<0.01),并呈剂量依赖性(P<0.01),而GW9662完全阻断该作用。结论在体外,罗格列酮可通过激活肾小管上皮细胞PPARγ抑制TGF-β1诱导的CTGF转录和表达,同时也可抑制FN的表达。     

胰岛素对大鼠肾系膜细胞增殖及损伤和PAI-1合成的影响

目的:观察不同浓度胰岛素对体外培养的大鼠肾系膜细胞(GMC)损伤、增殖和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的影响。方法:用不同浓度胰岛素刺激GMC,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖程度,采用全自动生化分析仪测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平显示细胞损伤,并以无胰岛素刺激组为对照;采用RT-PCR检测PAI-1mRNA表达。结果:GMC在胰岛素刺激后,细胞增殖和LDH水平在一定浓度范围内呈剂量和时间依赖性增加,高水平胰岛素可从基因水平上调系膜细胞PAI-1的表达。结论:高胰岛素水平能促进GMC增殖,造成细胞损伤,同时上调PAI-1mRNA表达,提示高胰岛素可能通过抑制细胞外基质降解,参与肾小球纤维化的过程。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ配体抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorgamma,PPARγ)配体对大鼠肝纤维化的作用.方法 将Wistar大鼠40只随机分为两组,对照组(20只)和罗格列酮组(20只).所有动物使用饮水中加人质量比0.3‰硫代乙酰胺的方法 制作肝纤维化模型.对照组喂饲普通颗粒饲料.罗格列酮组喂饲含200 ppm罗格列酮的颗粒饲料.喂饲6个月后,用RT-PCR方法 检测肝纤维化大鼠肝脏PPARγ、TGF-β 1 及Ⅰ型前胶原mRNA表达,用Westernblot法检测PPARγ、TGF-β 1 、Ⅰ型胶原及α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,用Van Gieson(VG)染色的方法 检测肝组织切片的胶原表达情况.结果 罗格列酮组与对照组相比,PPARγmRNA表达显著增强(t=6.93,P<0.01),TGF-β 1 mRNA(t=3.89,P<0.01)和Ⅰ型前胶原mRNA表达显著降低(t=5.67,P<0.01).PPARγ、TGF-β 1 及Ⅰ型胶原蛋白表达所得结果 与RT-PCR结果 相一致.罗格列酮组与对照组相比,α-SMA表达显著降低(t=3.12,P<0.01).罗格列酮组肝组织切片的胶原染色低于对照组(t=3.47,P<0.01).结论 PPARγ配体能够抑制大鼠纤维化肝脏的胶原产生,在体内具有一定的抗肝纤维化作用.     

甲状旁腺素对大鼠系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的观察甲状旁腺素(PTH)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及凋亡的影响,并探讨其作用的可能机制。方法体外培养的大鼠系膜细胞经不同浓度的PTH作用后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期及凋亡,吖啶橙荧光活体染色观察细胞凋亡形态,免疫细胞化学结合计算机图文分析系统检测c-jun、c-fos表达。结果PTH持续刺激GMC6h、12h时,10-11～10-9mol/L浓度范围内,促进细胞增殖(P<0.05);10-9mol/L在12h达高峰,并可使G0～G1期细胞减少,S G2M期细胞增多,并能明显促进c-jun、c-fos的表达(P<0.01),而10-8mol/L无明显作用;刺激24h时各浓度均无作用;刺激48h各浓度明显抑制大鼠系膜细胞增殖(P<0.01),且使细胞阻滞在G0～G1期,不能进入S期,并能明显抑制c-jun、c-fos的表达(P<0.01)。PTH不诱导GMC凋亡。结论PTH体外刺激GMC增殖与作用时间及剂量相关,低浓度短时间作用刺激GMC增殖,持续作用抑制GMC增殖,其作用与c-jun、c-fos的表达有关,并影响细胞周期。PTH对体外培养的大鼠GMC凋亡无诱导作用。甲状旁腺机能亢进可能参与了慢性肾病残余肾功能进一步恶化的病理过程。     

高糖对人腹膜间皮细胞整合素表达的影响

目的:研究高糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)整合素表达的影响,探讨腹膜透析中腹膜间皮细胞层完整性损伤的机制.方法:采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为研究对象.观察高浓度葡萄糖对HPMC细胞膜表面整合素表达及基质黏附性的改变,并采用免疫荧光技术观察高糖对细胞Actin微丝骨架的影响.结果:(1)高糖致细胞脱落呈时间依赖效应;(2)高糖引起细胞膜上β1整合素的表达明显减低;(3)高糖使Actin微丝骨架解体;(4)高渗透压组未见上述效应.结论:高糖使β1整合素表达下降,微丝骨架解体,从而损害细胞-基质间黏附的形成,造成腹膜间皮完整性的损害.     

当归补血汤对高糖条件下系膜细胞增殖及NF—κB表达的影响

目的：观察当归补血汤对培养在高糖条件下肾小球系膜细胞（GMC）增殖及GMC中核转录因子－κB（NF—κB）蛋白的表达的影响,探讨其在糖尿病肾病（DN）防治中的意义。方法：（1）利用噻唑蓝（MTT）比色法动态观察各种处理因素的作用下各组GMC增殖情况;（2）用Western blot的方法检测各种处理因素的作用下各组GMC中NF-κB蛋白的表达情况。结果：高糖能明显刺激体外培养的GMC增殖,同时细胞中NF-κB蛋白表达也增加（P〈0．05）。而当归补血汤能明显抑制GMC增殖及细胞中NF出蛋白表达也相应减少（在相同的观察点,与高糖组相比P〈0．01,与其他对照组相比P〈0．05）,并呈一定量效关系,即随糖或药物浓度的增加,GMC增殖及细胞中NF-κB蛋白表达也相应增加或减少。结论：高糖可促进GMC增殖及GMC中NF—κB蛋白的表达的增加,当归补血汤能明显抑制高糖条件下GMC增殖及其细胞中NF-κB蛋白表达的增加,从而发挥预防和治疗肾小球硬化,进而延缓DN的进展。     

一种新型嘧啶基取代芳基苯酸衍生物对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖抑制的实验研究

目的:观察新型PPARγ激动剂DH9对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞(WT9-12)增殖的影响。方法:予以不同浓度的DH9及罗格列酮作用WT9-12细胞24、48、72、96 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术观察细胞周期的改变;AnnexinV+PI双染色流式细胞术测定细胞凋亡率;Western blotting分析cyclinA、P21CIP/WAF1、Bax和Bcl-2的表达。结果:DH9抑制细胞增殖作用明显优于罗格列酮(P<0.05),并呈量-效和时-效关系。比较加入PPAR-γ抑制剂GW9662前后细胞增殖抑制作用差异无统计学意义(P>0.05)。DH9可增加P21CIP/WAF1蛋白合成,减少CyclinA蛋白合成,使细胞阻滞在S期。DH9作用72 h后Bcl-2/Bax的比值分别为较对照组(2.19±0.08)显著减少(P<0.05),具有促进细胞凋亡的作用。结论:DH9抑制WT9-12细胞增殖活性明显优于罗格列酮,且这种增殖抑制作用与DH9作用在细胞周期的不同调节点,促进WT9-12细胞凋亡有关。     

活性氧与高糖对人腹膜间皮细胞增殖的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖、活性氧(过氧化氢)、抗氧化剂对人腹膜间皮细胞(HPMC)细胞增殖的影响及其机制。方法用^3H-胸腺嘧啶(TdR)掺人法测定细胞增殖；用流式细胞仪检测细胞周期的改变；用半定量RT-PCR检测细胞周期调控蛋白p27^kip1mRNA水平；用细胞免疫组化方法和蛋白印迹(Western blotting)的方法检测p27^kip1蛋白水平。结果 高糖及较大剂量的过氧化氢(0．5mmol／L)均可以抑制HPMC增殖，而细胞周期分析提示细胞停滞于G1期。高糖加过氧化氢，则增加了后者的毒性作用。高糖及外源性过氧化氢均可以增加p27^Kip1蛋白表达。高糖加抗氧化剂，可以改善细胞周期停滞、增殖抑制作用，但p27^kip1的表达未见明显改变。结论 高糖及外源性过氧化氢均可通过增加p27^KiP1的表达使细胞周期发生停滞，从而抑制增殖。而高糖的增殖抑制作用还与内源性的活性氧有关，提示临床上抗氧化治疗可能有益。     

HB-EGF对系膜细胞增殖及转化生长因子-β1表达的影响

目的：观察肝素结合性表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）对肾小球系膜细胞（GMC）增殖及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的作用。方法：以原代培养大鼠肾小球系膜细胞为细胞模型,采用MTT、ELISA、RT-PCR等方法观察外源性HB-EGF对系膜细胞增殖及TGF-β1表达的影响。结果：（1）不同浓度HB-EGF对系膜细胞增殖有不同影响,10ng/ml时无刺激GMC增殖作用（P〉0.05）,100、1000ng/ml均能刺激GMC增殖（P〈0.01）,100ng/ml作用最明显。（2）HB-EGF（10ng/ml、100ng/ml、1000ng/ml）能刺激系膜细胞TGF-β1的表达（P〈0.01）,100ng/ml时作用最强。（3）100ng/mlHB-EGF刺激GMC24h、36h、48h,系膜细胞TGF-β1的表达均增加,随作用时间而变化,刺激36h和48h比24h作用更明显（P〈0.05）。结论：一定浓度范围内HB-EGF刺激GMC增殖,促进系膜细胞TGF-β1的表达,且具有一定的时间及浓度依赖性。     

罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制。 方法 MTT法检测罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细胞术检测罗格列酮对WT9-12细胞周期及凋亡的影响;Western印迹法检测罗格列酮对哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70核糖体S6激酶（p70S6K）信号通路的影响。给予PPARγ特异性抑制剂GW9662及PPARγ siRNA瞬时转染WT9-12细胞,检测罗格列酮对细胞增殖及对mTOR信号通路的作用是否为PPARγ依赖性的。 结果 罗格列酮抑制WT9-12细胞增殖,此作用在0~200 &#61549;mol/L范围内呈剂量依赖性及时间依赖性,作用72 h的50%抑制率浓度为100 &#61549;mol/L。细胞周期分析显示,罗格列酮（50、100 &#61549;mol/L）作用后,G0/G1期细胞较对照组显著增多（65.43%、64.02%比49.65%,P ＜ 0.05）。50、100 &#61549;mol/L罗格列酮对细胞凋亡影响不大,高浓度（200 &#61549;mol/L）罗格列酮可使凋亡细胞达6%（正常对照组为4%）。罗格列酮可呈时间及剂量依赖性下调WT9-12细胞p70S6K磷酸化表达,而对mTOR及其另一个下游4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平无明显影响。加入GW9662及转染PPARγ siRNA阻断PPARγ表达后,可部分阻断罗格列酮对p70S6K磷酸化的影响（P ＜ 0.01）。 结论 罗格列酮可抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖和阻滞细胞周期,可不依赖于mTOR途径直接下调p70S6K磷酸化表达。罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞p70S6K磷酸化的影响是PPARγ依赖性的。     

冻结肩病理改变及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ激动剂治疗作用的研究

背景:冻结肩是一种以肩关节疼痛和活动受限为主要特征的疾病,目前病因不明,治疗效果欠佳。目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肩关节囊纤维化及炎症反应等病理改变的影响,以及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂对大鼠冻结肩的治疗作用,为临床治疗冻结肩提供新思路。方法:利用TGF-β1诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)异常纤维化,PPAR-γ激动剂三萜类化合物(CDDO-IM)作为治疗药物,检测细胞增殖、迁移情况及细胞外基质蛋白的表达情况。向SD大鼠的肩关节腔注射TGF-β1过表达的腺病毒构建大鼠冻结肩模型。2周后,其中一半大鼠用罗格列酮灌胃饲养2周,作为罗格列酮治疗组。检测大鼠肩关节活动度,利用ELISA检测关节腔炎症因子,HE染色和免疫组织化学法检测大鼠肩关节囊组织细胞外基质蛋白的表达情况。结果:在细胞实验中,TGF-β1组的增殖率为83.6%,TGF-β1+CDDO-IM组增殖率为19.3%(P<0.01);TGF-β1组的迁移率为84.9%,TGF-β1+CDDO-IM组迁移率为44.1%(P<0.05);TGF-β1能够诱导HSF增殖、迁移及异常纤维化。动物实验成功构建了TGF-β1诱导的大鼠冻结肩模型,免疫组织化学结果提示,罗格列酮能够抑制大鼠冻结肩的炎症形成,减少基质蛋白生成,重塑纤维组织结构。结论:冻结肩的病理改变主要是纤维细胞异常增生,炎症细胞浸润,纤维结构紊乱,而PPAR-γ激动剂可以缓解大鼠冻结肩关节僵硬,减弱炎症反应,抑制异常纤维化。