细胞外基质在大鼠胚胎心脏的时相性分布

采用酶免疫组织化学法检测 ECM及其受体 β1 在胎龄 11至 19天胚鼠心脏中的表达 ,结果显示 ECM中 FN、L MN、Vn及受体 β1 均于 ED11起在胚鼠心脏存在表达 ,但其表达高峰及在流出道、心内膜垫、心室肌及室间隔中表达持续时间各不相同 ,Co IV在胚胎各期均为阴性表达 ,提示不同的 ECM在胚胎心脏的不同部位有着不同的时相性表达规律 ,ECM(主要是 FN与 L MN)及其受体 β1 在胚胎心脏的发生发育中起着一定的介导作用     

小鼠胚胎心流出道心内膜垫的形成与融合

目的观察不同发育时期小鼠胚胎心流出道心内膜垫的发育过程。方法对胚龄9-12d小鼠胚胎心脏连续切片进行HE染色和免疫组化染色。结果胚龄10d,流出道远端心胶质内开始观察到间充质细胞。胚龄11d,两侧流出道心内膜垫形成,心内膜垫内部分间充质细胞染色呈α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)阳性。胚龄12d,两侧流出道心内膜垫内部分间充质细胞聚集形成致密漩涡状结构,随着心内膜垫融合,两侧漩涡状结构融合。结论小鼠胚胎流出道心内膜垫形成于胚胎发育第11天,第12天融合,间充质细胞参与心内膜垫融合。     

小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫发育的形态学特征

目的 探讨小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫的形成与融合过程中的形态学特征。方法 选用抗α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、抗心肌肌球蛋白重链（MHC）、抗磷酸化组蛋白H3（PHH3）抗体,对30只胚龄9～13d小鼠胚胎连续切片进行HE和免疫组织化学染色。另选15只胚龄12d、12.5d、13d小鼠胚胎心脏制作半薄切片和超薄切片进行观察。 结果 胚龄9d,心房与心室之间可见缩窄的房室管,房室管的心胶质较厚,但未见间充质细胞出现。胚龄10d,房室管心内膜垫开始形成,但连续切片观察显示背侧心内膜垫体积大于腹侧心内膜垫,且背侧心内膜垫对应的α-SMA、MHC阳性房室管心肌向心内膜垫内有明显延伸。心内膜垫内间充质细胞不表达α-SMA或PHH3。胚龄11～12d,背、腹侧心内膜垫变得对称,垫内间充质细胞增多,偶见α-SMA或PHH3阳性细胞。胚龄12～13d,两侧房室管心内膜垫彼此接近开始融合。透射电子显微镜下观察仅部分间充质细胞相邻细胞膜彼此相贴,局部形成细胞连接。胞质内可见粗面内质网、线粒体等细胞器,微丝较少。 结论 小鼠胚胎心脏房室管心内膜垫形成时首先表现为内皮细胞由扁平变为立方形;两侧房室管心内膜垫形成不同步;房室管心内膜垫融合时间充质细胞局部形成细胞连接,胞质内微丝少,与流出道嵴融合时的超微结构特点不同。     

GATA-4在HCY诱导鼠胚心脏畸形中的表达及意义

目的探讨锌指转录因子GATA-4在同型半胱氨酸（Homocysteine,HCY）诱导的大鼠胚胎发育畸形心脏的表达水平及相关意义。方法SD成年健康清洁级雌、雄大鼠各16只,常规方法交配获取孕鼠后,随机分为2组：1正常对照组,2HCY组。各组孕鼠分别于妊娠第13、15、17、19天剖腹取出胚胎,通过切片进行胎鼠心脏组织学观察以确定心脏畸形情况,并通过RT-PCR法半定量测定胎心GATA-4因子mRNA表达。结果HCY组不良胚胎率及胚胎心脏畸形率与对照组相比均显著增高（P〈0.001）;HCY组各妊娠天数胎鼠心脏GATA-4因子mRNA表达均较对照组减少,但无统计学意义（P〉0.05）;而心脏发育畸形胎鼠的心脏GATA-4因子mRNA表达比心脏发育正常胎鼠明显降低（P〈0.001）。结论HCY诱导的孕鼠不良胚胎率及胚胎心脏畸形率均明显增高,且胎鼠畸形心脏组织中GATA-4表达下调,表明锌指转录因子GATA-4的心脏表达抑制与HCY对大鼠胚胎心脏的毒性作用之间存在重要关系。     

Notch2信号参与调控小鼠胚胎心脏主动脉与肺动脉瓣膜的发育

背景：先天性心脏畸形常表现为动脉瓣膜发育异常,其中以主动脉瓣二叶式畸形最常见,但目前对于胚胎主、肺动脉瓣膜的具体发育过程有待阐明。目的：探讨小鼠胚胎心脏流出道的分隔与主、肺动脉瓣膜原基形成及其重塑过程。方法：2月龄SPF级健康ICR小鼠雌鼠16只、雄鼠10只,于每日晚18:00以雌雄2∶1的比例进行合笼,次日6:00发现阴栓者记为妊娠0.5 d。选取胚龄9.5-15 d的小鼠胚胎石蜡包埋连续切片,免疫组织化学染色观察胚龄9.5-15 d的小鼠胚胎心脏Isl1、Nkx2.5、肌球蛋白重链、Ap2α、Sox9、α-平滑肌肌动蛋白、Snail、Jag1、Notch2、Alk3和p-Smad1/5/8的蛋白表达;心脏的三维重建观察流出道心内膜垫和插入垫的变化以及瓣膜的形态。结果与结论：(1)胚龄9.5-10.5 d小鼠胚胎,流出道内皮细胞经过上皮-间充质转化形成心胶质内的间充质细胞,参与形成流出道心内膜垫;胚龄11-11.5 d,咽前Isl1阳性细胞延伸入流出道壁形成插入垫,此过程未发生上皮-间充质转化;Notch2信号参与流出道心内膜垫形成过程但未参与插入垫的形成;(2)胚龄12.5 d,流...     

发育大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43表达特性

目的：探讨大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43(Cx43)表达的发育特性。方法：应用SP免疫组化和图像分析方法,观察胎大鼠、出生1 d、5 d、10 d和25 d大鼠心肌细胞Cx43的蛋白表达。结果：(1)胎鼠心肌细胞Cx43呈斑点状遍布于心肌细胞侧—侧连接、细胞质内和闰盘处。(2)出生后1 d大鼠心肌细胞的Cx43分布与胎鼠相似,5 d和10 d组逐渐向闰盘处聚集。25 d时部分已聚集于端闰盘处,其余仍呈斑点状散在分布。(3)出生前后心室肌细胞Cx43分布有差异。分布密度总规律是：胎大鼠＞出生1 d＞5 d＞10 d＞25 d。结论：出生前后大鼠心肌细胞Cx43分布随心脏发育逐渐向闰盘处重排,其分布密度呈逐渐下降趋势。     

小鼠胚胎心脏发育期T型钙离子通道的表达

目的 检测哺乳动物心脏中T型钙离子通道α1亚基在小鼠胚胎心脏发育过程中表达部位和时间的分布特征。 方法 对小鼠胚胎心脏发育关键时期（Ｅ9.5至胚胎E18.5共9d）的胚胎进行连续切片,用RT-PCR和免疫组织化学的方法对α1G和α1H蛋白进行阳性检测。 结果 α1H从胚胎期10.5d左右开始表达并一直延续到发育晚期（E18.5）,而α1G则从E11.5d延续到E18.5;免疫组织化学的结果显示,T型钙离子通道主要在心肌层以及左右传导束支稳定表达,而在心内膜垫以及心室肌小梁的心内膜内皮和间充质细胞中不表达。 结论 T型钙离子通道对于心肌细胞以及心脏传导组织的形成起到了一定的作用。     

桉叶油对大鼠胚胎发育的影响

目的 探讨桉叶油对SD大鼠胚胎发育的影响。 方法 取SD孕鼠25只,随机分成3个实验组（桉叶油高、中、低剂量）、溶剂对照组（花生油）和阳性对照组（环磷酰胺）,每组5只。实验组和溶剂对照组分别在大鼠妊娠第10天用300、200、100mg/kg 的桉叶油和花生油2ml/只灌胃,每天1次,连续5d。阳性对照组于孕第13天腹腔注射环磷酰胺1次（12.5mg/kg）。各组孕鼠于孕19d处死取胚胎,记录孕鼠的体重、子宫重、卵巢重和胎盘重;统计胚胎植入的总数、吸收胎数、活胎数和死胎数;观察胚胎外形,并测量胎鼠体重、身长和尾长。 结果 桉叶油灌胃SD孕鼠后,孕鼠的体重、子宫重、卵巢重及胎盘重与溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。胚胎植入总数、吸收胎数、活胎数及死胎数与溶剂对照组相比均无显著性差异(P>0.05)。桉叶油各组活胎鼠平均体重、身长及尾长均较溶剂组高,但只有高剂量桉叶油组胎鼠平均体重（2.318±0.606）与溶剂组（1.462±0.397）比较有明显差异（P<0.05）,其余指标与溶剂组比较无明显差异（P＞0.05）。阳性对照组胎鼠平均体重、尾长明显低于溶剂组,且有差异（P<0.05）。阳性对照组胎鼠平均身长低于溶剂组,但统计学分析无差异（P＞0.05）。 结论 本实验条件下,桉叶油对SD孕鼠胚胎无毒性,环磷酰胺对大鼠胚胎有毒性。     

维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织中Caspase-3表达情况

目的　本文旨在探讨维甲酸诱导脊柱裂胎鼠脊髓组织Caspase-3表达情况。 方法　选取孕10 d Wistar大鼠,实验组用溶有维甲酸（40mg/ml）的橄榄油,以135 mg/kg经胃管注入给药制作脊柱裂畸形大鼠模型;对照组选取孕10 d Wistar大鼠给等量橄榄油。将实验组及对照组按照孕12、15、17和20 d分为4组。应用免疫组织化学方法比较分析Caspase-3在对照组、畸形组胎鼠脊髓组织细胞中的分布和表达情况。 结果　脊柱裂大鼠脊髓神经组织中Caspase-3在15 d开始增多,一直持续到20 d胚胎大鼠。其增高情况明显高于同一时间点对照组大鼠。胚胎15、17和20 d显性脊柱裂畸形鼠脊髓组织Caspase-3阳性细胞数多于对照组,荧光强度高于对照组。 结论　维甲酸诱导的脊柱裂胎鼠Caspase-3表达明显高于正常发育胎鼠。     

正常大鼠心室肌弹性纤维和弹性蛋白的增龄变化

目的 探讨大鼠心脏发育过程中弹性蛋白的形态分布特点和增龄变化规律。 方法 取孕18d、生后10d、生后1个月和生后3个月大鼠各10只，采用地衣红染色、免疫组织化学和Western blotting技术，观测心室弹性纤维的分布和弹性蛋白表达的变化；利用图像分析系统对弹性蛋白进行定量分析，并对不同月龄心室弹性蛋白含量进行对比分析。结果 弹性纤维广泛分布于心外膜、心肌细胞周围、小动脉壁。弹性纤维形似发丝，无粗大纤维束；胎鼠至初生期增长迅速，幼年到成年期增速减慢。心内膜的弹性纤维在幼年期达到高峰，成年略有降低。结论 从胚胎至成年大鼠心室弹性纤维逐渐增加，这种变化是心肌生理性重构的重要组成部分。     

转化生长因子β1及Smad4、Bax蛋白在大鼠胚胎心脏发育中的表达及意义

目的观察大鼠胚胎心脏的发育过程并探讨转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad4、Bax蛋白在胚胎心脏发育中的作用机制。方法取大鼠妊娠11~19d(E11~E19)胚胎40只用组织学和免疫组织化学SABC法观察大鼠胚胎心脏的发育过程和TGF-β1及Smad4、Bax蛋白在胚胎心脏的表达。结果大鼠胚胎心脏E12.5时出现室间隔肌部,E16心室分隔完成。TGF-β1在E11~E19均有表达,表达情况由弱到强再减弱,E15时最强。Smad4表达由弱到强,E17时最强,E13时表达出现空间差异。Bax蛋白表达高峰在E15,后降至一个稳定水平。结论E14、E15为心肌分化、心塑形关键时期;TGF-β1及Smad4、Bax蛋白在大鼠胚胎心脏发育中起重要作用。     

TLR在小鼠胸腺中的表达及其在胸腺细胞发育中的可能作用

检测体外培养和体内发育过程中,胎鼠胸腺处于不同发育阶段时Toll样受体(TLR)的表达,阐明TLR表达量与胸腺细胞发育相关性,为TLR和胸腺细胞发育分化相关研究提供基础数据。无菌取15d胎龄胎鼠胸腺进行体外培养(FTOC),在培养不同时间点(2d,4d,6d),检测处于不同发育期胸腺TLR的表达;同时在孕期不同天数(15~19d),分别取胎鼠胸腺,检测在体内发育过程中胸腺TLR的表达;在FTOC中加入二脱氧鸟苷培养6d以制备胸腺基质细胞,检测基质细胞与胸腺细胞TLR表达情况。结果:小鼠胸腺中检测到多种TLR。FTOC培养中:培养第2天(F2)开始检测到各种TLR,到培养第6天(F6),TLR1,TLR3,TLR6,TLR7,TLR8明显上调,而TLR4,TLR5保持低水平,TLR4在培养第6天又下降;体内发育过程中:TLR6表达量随胎龄增加有较明显上调,TLR1,TLR3-8保持低水平表达;TLR2,TLR9体内体外都未检测到明显表达。在对胸腺细胞与基质细胞TLR表达比较中发现TLR1,TLR5,TLR6,TLR7高表达于胸腺细胞。胎鼠胸腺表达某些TLR,并且在发育不同阶段表达量有所改变,提示TLR可能参与胸腺细胞的发育过程。     

孕大鼠和胎鼠心脏系统混沌特征分析

应用计算机化大鼠心电信号采集和处理系统,引导妊娠第21dSD大鼠和胚胎宫内心电,记录母胎鼠心动周期信号混沌图形参数和数值参数,探讨正常妊娠大鼠母胎心脏系统混沌特征,分析母胎鼠自主神经系统发育的差异性。结果显示,(1)正常胎鼠与孕鼠比较,频率和电压较低,差异均有显著性(P<0.01);(2)正常胎鼠和孕鼠心动周期信号功率谱具有类似于人的心动周期信号功率谱三峰特征;正常胎鼠和孕鼠比较,第二峰、第三峰明显较低;(3)正常胎鼠与孕鼠比较,相对分散度、李雅普诺夫指数和分维数均显著较低,差异均有显著性(P<0.01)。本研究表明,正常胎鼠心动周期信号变化的复杂性低于孕鼠,胎鼠心脏混沌程度低于孕鼠,胎鼠自主神经系统发育尚不成熟。     

端粒酶逆转录酶和端粒重复结合因子2在大鼠心肌细胞发育过程中的表达

目的：观察大鼠心肌细胞发育过程中端粒酶逆转录酶(TERT)和端粒重复结合因子2(TRF2)的表达,探讨TERT活性与心肌细胞分化和发育的关系。方法：应用免疫组化方法分别检测胎鼠孕16d、出生后2、5、10、20d的大鼠心脏标本,观察TERT和TRF2的表达和分布。结果：TERT分布于胎鼠心肌细胞的胞质和细胞核中,出生后2～20d,TERT在胞质的表达呈下降趋势。TRF2主要分布在胎鼠心肌细胞的胞核中,出生后5～20d,TRF2表达阳性的心肌细胞数目逐渐减少。结论：在大鼠心肌细胞发育过程中,TERT和TRF2的表达下调促使部分细胞永久地退出细胞周期而进入终末分化;TERT活性受到了心肌细胞发育过程的调节。     

缺氧胎鼠骨髓中NOS的表达及药物调控

为了探讨缺氧对胎鼠造血系统的影响以及当归对胚胎缺氧的治疗作用，我们对19天胎龄大鼠颅骨骨髓中有核红细胞中NOS的表达及当归对其的影响进行了研究。本实验采用雌性Wistar大鼠6只，体重240～280g，随机分为对照组、缺氧组和治疗组；6只大鼠经配种妊娠，至19天时，     

胚胎及出生后大鼠视网膜细胞促红细胞生成素的表达

背景：促红细胞生成素是低氧诱导因子1的下游靶基因,受低氧诱导因子1的调节。 目的：观察大鼠视网膜胚胎期及出生后早期发育过程中促红细胞生成素的时空表达与视网膜发育的关系。 方法：取胚胎12,16,20 d鼠胚及成年Wistar大鼠各5只,处死后摘除眼球,分离视网膜,用免疫组织化学方法、半定量反转录聚合酶联反应检测视网膜促红细胞生成素蛋白及促红细胞生成素 mRNA的表达。 结果与结论：胚胎期大鼠视网膜神经上皮及色素上皮细胞的胞浆及胞核内均有促红细胞生成素阳性表达,表达趋势随胎龄增长而逐渐减弱;成年鼠视网膜促红细胞生成素阳性表达最弱。说明大鼠视网膜胚胎发育过程中促红细胞生成素的表达存在时空上的变化,这种变化可能与大鼠视网膜胚胎期的发育密切相关。     

大鼠心肌组织内STAT1蛋白的时空表达差异

目的探讨大鼠心脏发育和成熟过程中信号转导与转录活化因子1(STAT1)蛋白的分布特点和增龄变化。方法分别取胎鼠(孕19 d),新生鼠(出生后10 d),青年鼠(8月)各8只,采用HE染色,免疫组化等技术观察心肌组织结构及STAT1蛋白的分布和增龄变化。利用图像分析系统对STAT1蛋白进行定量分析并进行统计学分析。结果胎鼠与新生鼠光镜结构相似,心肌细胞较小,排列不规则,核浆比较大,横纹不典型;成年鼠心肌变长,排列规则,核浆比小,横纹清晰。STAT1蛋白在心外膜处强阳性表达;在深层心肌成条索状分布,表达强度组间比较差异均有统计学意义(P0.05)。免疫荧光双标显示STAT1和CD34存在共定位。结论 STAT1在心外膜处参与心肌发育和成熟过程,深层心肌与间质血管内皮细胞形成和成熟有关。     

咖啡因对鼠牙胚发育的影响

背景：孕期饮用咖啡会导致孕妇钙吸收障碍,影响胎儿牙胚发育。 目的：观察咖啡因对鼠牙胚发育的影响。 方法：将Wistar孕鼠随机分为2组,在咖啡因组大鼠受孕7 d后的饮水中添加咖啡因,对照组孕鼠饮水中不加咖啡因。孕20 d时,两组各处死一半孕鼠取胎鼠,苏木精-伊红染色观察牙胚组织形态;另一半孕鼠连续用药至产仔后20 d,测定仔鼠血清中钙离子水平,并取仔鼠第一磨牙进行扫描电镜观察。 结果与结论：咖啡因组仔鼠血清中钙离子水平低于对照组(P < 0.05)。苏木精-伊红染色可见咖啡因组胎鼠与相同时期对照组胎鼠相比,牙胚组织体积减小,发育迟缓。电镜结果显示咖啡因组孕鼠所产仔鼠的第一磨牙酸蚀后表面空隙比对照组多。提示对孕鼠使用咖啡因可以影响其仔鼠牙胚的发育,导致牙胚发育迟缓,使釉质基质钙化不全,发育后的牙齿不耐酸蚀。     

大鼠心房肌组织化学和超微结构的研究 Ⅴ.鼠胚和新生大鼠心脏心房肽免疫组织化学研究

用免疫酶组织化学Sternberger过氧化物酶-抗过氧化物酶 (PAP) 方法,研究了鼠胚和新生大鼠心脏心房肽免疫反应颗粒的发生和分布。鼠胚龄以大鼠受孕天数计算。下午9～10h将雌、雄大鼠同笼,次日清晨检查雌性大鼠阴道中出现精子,定为大鼠受孕第1d。在大鼠受孕第12～20d每天下午取材;新生大鼠为出生后6h内取材。共用鼠胚和新生大鼠41只,各天所用鼠胚数量为3～5只。所     

宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞增殖的影响

目的　探讨宫内缺氧对胚胎大鼠神经干细胞 (neuralstemcell,NSC)增殖的影响。方法　用低张性缺氧模型致胎龄 15天大鼠宫内缺氧 ,将胎鼠脑组织作神经巢蛋白 (Nestin)和Fos蛋白免疫组化染色 ,并进行图像分析。结果　缺氧组胎鼠Nestin和Fos免疫组化反应较对照组增强 ,阳性细胞数增多 (P <0 0 5 )。结论　 (1)缺氧可刺激神经干细胞进入增殖状态 ,Fos蛋白的表达可能是引起神经干细胞增殖的机制之一 ;(2 )可采用低张性缺氧方法使孕鼠缺氧来制造胚胎大鼠宫内缺氧模型。