甲基莲心碱对大鼠肝CYP450酶含量及CYP2D1, CYP3A1,CYP2E1 mRNA的影响

目的 :探讨甲基莲心碱对大鼠微粒体混悬液蛋白中细胞色素P450(CYP450)含量,及其对CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平的影响。 方法 :Wistar大鼠48只,随机分成空白组、肝药酶诱导剂组、肝药酶抑制剂组,甲基莲心碱(Nef)低、中、高剂量组。对照组给予1%羧甲基纤维素钠(CMC-Na),诱导剂组地塞米松100 mg ·kg^-1,抑制剂组酮康唑40 mg ·kg^-1,Nef低、中、高剂量组分别为Nef 10,20, 50 mg ·kg^-1 灌胃给药,1日1次,连续6 d。取大鼠的肝制备肝微粒体,测定肝微粒体中的蛋白浓度,用分光光度计对样品进行比色测定CYP450总酶的含量。并采用实时定量反转录——聚合酶链反应(Quantitive real-time RT-PCR)定量分析了大鼠CYP450亚型CYP3A1,CYP2D1,CYP2E1的mRNA表达水平。 结果 :甲基莲心碱在高剂量组的P450含量与空白组比较有显著性差异(P＜0.01),提示该药在较大剂量时(20~50 mg ·kg^-1)对CYP450有诱导作用。Nef在高剂量时,分别对CYP3A1和CYP2D1有诱导作用,可显著升高二者的活性(分别为空白组的1.92,2.99倍,P＜0.05);中剂量时对CYP2D1具有诱导作用(为空白组的2.40倍,P＜0.05);Nef在3个剂量下对CYP2E1均无诱导作用。 结论 :Nef在20,50 mg ·kg^-1剂量可增加CYP450总酶活性和CYP2D6 mRNA的表达,在50 mg ·kg^-1剂量可增加CYP3A1 mRNA的表达,提示Nef在较高剂量时可诱导肝药酶加速自身代谢。     

甘草和五味子对大鼠肝微粒体CYP450诱导作用的研究

目的：考察甘草和五味子对大鼠肝微粒体CYP450的诱导作用及其对丙咪嗪体外代谢的影响。方法：大鼠分别给予甘草或五味子的水提物连续3d或6d，然后制备肝微粒体并测定其CYP450的水平；以丙咪嗪为底物，采用体外温孵法，用HPLC测定丙咪嗪及其主要代谢物的量以考察其代谢情况。结果：给予中草药的大鼠肝微粒体CY P450水平均显著增加，其对丙咪嗪的体外代谢速率显著加快。结论：研究显示甘草和五味子对大鼠CYP450有诱导作用，且与剂量或诱导时间有关。     

热毒宁注射液对大鼠肝微粒体CYP450酶的诱导作用研究

目的：研究热毒宁注射液（RDN）对大鼠肝微粒体CYP450酶的诱导作用。方法：将SD大鼠随机分为空白溶剂组、阳性对照组和热毒宁注射液低、中、高剂量组（1、2、4 mL·kg^-1·d^-1）,分别于连续给药7天后处死,取肝组织称重并制备肝微粒体。计算大鼠肝脏的脏器系数,以BCA法测定微粒体的蛋白含量,以“cocktail”法测定大鼠肝微粒体中5种重要的CYP450酶亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A1/2的活性。结果：与空白溶剂组比较,阳性对照组大鼠的肝脏脏器系数、微粒体得率及各CYP450酶亚型的活性均明显增加（P<0.01）。热毒宁注射液低、中剂量组的脏器系数、微粒体得率和蛋白含量无显著性差异,但高剂量组的脏器系数和微粒体得率有显著性差异（P<0.05）。对酶活性的影响方面,热毒宁注射液能显著诱导大鼠CYP1A2的活性,且呈剂量依赖性;中、高剂量组对CYP2C9和CYP2C19均有一定的诱导作用;对CYP3A1/2和CYP2D6的作用不明显。结论：阳性对照组对大鼠肝微粒体CYP450酶有明显的诱导作用,所建立的实验体系可用于诱导作用的评价;热毒宁注射液对大鼠CYP1A2、CYP2C9和CYP2C19亚型有一定的诱导作用,对CYP3A1/2和CYP2D6无明显作用。     

表小檗碱体外大鼠肝微粒体孵育代谢产物鉴定及对CYP2D6酶活性的抑制作用

表小檗碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有多种重要的药理活性。该实验利用体外大鼠肝微粒体孵育体系,采用LC-MS/MS分析鉴定表小檗碱体外大鼠肝微粒体(RLM)共孵育后的Ⅰ相和Ⅱ相代谢产物,采用cocktail探针药物法,通过同时测定美托洛尔、氨苯砜、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的含量变化,评价不同浓度表小檗碱对大鼠肝微粒体CYP2D6,CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9亚型活性的影响。结果表明,表小檗碱在大鼠肝脏可发生Ⅰ相和Ⅱ相代谢,从表小檗碱的大鼠体外肝微粒体温孵体系中鉴定出2个Ⅰ相代谢产物和3个Ⅱ相代谢产物;表小檗碱对肝脏CYP2D6酶呈显著抑制作用,半数抑制浓度IC50为35.22μmol·L-1,而对CYP3A4,CYP1A2,CYP2E1,CYP2C9酶的活性没有明显的影响,提示表小檗碱可能存在基于CYP2D6酶的药物相互作用。该研究可为合理开发利用表小檗碱提供实验依据。     

生何首乌、制何首乌对大鼠肝微粒体CYP450的影响

目的研究肝微粒体细胞色素P450（CYP450）以及血液生化酶在生何首乌、制何首鸟致SD大鼠肝损伤中的作用。方法将SD大鼠分为3组,每日灌胃给药30g／kg,连续给药90d,末次给药后处死,称取脏器指数,测定肝脏CYP450、血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、白蛋白（ALB）、肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、甘油三酯（TG）等含量。结果生何首乌组肝微粒体蛋白显著性下降,CYP450含量显著增高（P〈0．01）,制何首乌组无明显变化;血液生化酶中生何首乌组的血清ALT、AST显著性降低,制何首乌血清ALP显著性升高;生何首乌和制何首乌的血清TP、TG均显著性降低;血清BUN中二者均呈下降趋势,但生何首乌具有显著性;CREA二者均呈显著性下降趋势。结论生何首乌致肝损伤并有CYP450的明显升高。制何首鸟对CYP450无影响。生何首乌和制何首乌能够影响血液生化酶,生何首乌减低ALT、AST,制何首乌升高ALP,二者同时降低TG、BUN和CREA,这意味生着何首乌、制何首乌致大鼠肝物质代谢途径的作用机制有所不同。     

栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2的影响

目的:研究栀子苷对大鼠肝指数、肝功能及肝脏微粒体中CYP3A2在酶活性方面的影响,以期为探讨栀子苷致大鼠肝毒性提供实验依据。方法:用紫外分光光度法测定大鼠肝微粒体细胞色素CYP3A2含量,通过红霉素N-去甲基反应评价酶活性。结果:栀子苷大剂量组对大鼠肝功能有损害;在酶活性方面,栀子苷小、中、大3个剂量组均高于空白对照组,差别有统计学意义(P0.01),但栀子苷大剂量组明显低于小、中剂量组,差别有统计学意义(P0.01)。结论:栀子苷具有肝毒性,且可能存在基于药物代谢酶机制方面的药物作用,此尚需进一步结合代谢方面研究,以便综合分析、阐明其作用机制。     

丹参注射液对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶体外抑制作用

目的评价丹参注射液在体外对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)亚型酶活性的影响。方法将丹参注射液分别与5种CYP450亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4)的特异性探针底物非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬与大鼠肝微粒体进行孵育,采用UPLC-MS/MS法测定对应5种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、N-去甲右啡烷的含有量并计算其IC50。结果丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4的IC50值均大于100μg/m L,对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6的IC50值分别是3.32、16.44、0.30μg/m L。结论丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4没有抑制作用,但对CYP2C19和CYP2C9分别有弱和中等抑制作用,对CYP2D6表现出强抑制作用。     

黄连黄芩及配伍诱导对大鼠肝微粒体5种CYP450亚酶活性的影响

探讨黄连和黄芩配伍代谢性相互作用的机制.大鼠连续ig黄连、黄芩及药对提取物7d诱导肝药酶后,采用cocktail探针底物与肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时检测肝微粒体中5种探针底物代谢消除率,评价各给药组对大鼠肝微粒体CYP450酶活性的影响.与空白组相比,黄连对CYP2D6,CYP1A2呈显著抑制作用;黄芩对CYP1 A2,CYP2E1,CYP2C9具有显著抑制作用.黄连、黄芩按1∶1配伍后仅对CYP1 A2显示抑制作用,对CYP2D6,CYP3A4则呈显著的激活作用;而黄连、黄芩按2∶1配伍后对代谢酶的激活作用消失,表现为对CYP1A2,CYP2C9的显著抑制.结果表明黄连与黄芩对P450酶主要表现为抑制作用,二者按一定比例配伍后作用特点发生改变,呈现出激活和抑制的双重性,且与配伍比例相关.推测黄连与黄芩配伍对代谢酶的抑制和诱导作用是其发挥减毒增效作用的原因之一.     

隐丹参酮对大鼠肝微粒体CYP酶的影响

目的 研究隐丹参酮(CTS)对大鼠肝微粒体CYP酶各亚型的影响.方法 取SD大鼠,按体重随机分为6组,每组3只,隐丹参酮各剂量组分别灌胃给予隐丹参酮20、60、180、540mg/kg,连续10 d;阴性对照组,灌胃给予羟丙基环糊精水溶液10 mL/kg,连续10 d;阳性对照组从实验第7天开始按80 mg/kg腹腔注射B-NF,于第10天最后1次给药后将大鼠断头处死,取肝脏制备肝微粒体,分别用Cocktail体外孵育法、蛋白免疫印记及逆转录聚合酶链反应观察CTS对CYP酶各亚型酶活性、蛋白表达及基因表达的影响.结果 CTS灌胃后对大鼠肝微粒体CYP1A2有明显的诱导作用,并呈剂量依赖性,CTS 20～540 mg/kg剂量组CYP1A2探针代谢物的量、蛋白表达及基因表达分别较阴性对照组提高60%～430%、130%～320%及10%～150%;隐丹参酮对CYP酶其他亚型无明显作用.结论 CTS能显著地诱导大鼠肝微粒体CYP1A2,提示经CYP1A2代谢的药物在临床上与CTS合用时,可能发生药物之间的相互作用.     

黄芪甲苷对大鼠肝微粒体酶活性影响

目的:研究黄芪甲苷对CYP450酶的影响,为制定合理用药方案提供科学依据。方法:以甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、香豆素、硝苯地平、非那西丁为探针药,HPLC测定探针药与相应代谢产物的浓度,在体外的孵育体系中研究黄芪甲苷对CPY2C9,CPY2E1,CPY2A6,CPY3A4和CPY1A2酶活性的影响。结果:黄芪甲苷对CYP1A2,CYP2A6,CYP2E1酶的活性没有明显的影响,而对CYP2C9和CYP3A4酶的IC50分别为35.40,88.22μmol.L-1。结论:黄芪甲苷对CYP2C9和CYP3A4酶有明显的抑制作用,在与经由CYP2C9,CYP3A4酶代谢的药物合用时,可能会产生药物相互作用。     

黄芩苷对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制作用

目的:观察黄芩苷对大鼠/人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶活性的抑制作用,比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法:通过采用体外肝微粒体温孵体系结合特异性探针底物的方法,结合应用LC-MS/MS检测各探针底物的代谢物的生成量,质谱检测条件为电喷雾离子化(ESI)源,选择性反应监测(SRM)扫描方式,色谱分离条件为ZORBAX Eclipse-plus C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,计算半抑制浓度(IC₅₀)。结果:黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP450酶7种亚型均无抑制作用,而对人肝微粒体CYP1A2,CYP2C19和CYP2E1有较弱的抑制作用,IC₅₀分别为39.72,40.91,32.83 μmol·L^-1。结论:黄芩苷对CYP450酶的抑制作用存在种属差异性,是人CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1的弱抑制剂,临床静脉用药时,应注意可能因CYP450酶抑制引起的药物相互作用。     

葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体 CYP450含量及CYP2E1活性的影响

目的:考察经典解酒方葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝微粒体细胞色素P450( CYP450)含量及细胞色素P450-2E1( CYP2E1)活性的影响.方法:实验小鼠分葛根散高、中、低剂量组、正常对照组和模型对照组,各给药组分别给予葛根散水煎剂(按生药量计,20,10,5 g·kg-1)ig,对照组代以等体积蒸馏水,每天1次,连续10 d;每天给药30 min后,模型对照组和各给药组以15 mL·kg-1 56％白酒ig,正常对照组代以等体积蒸馏水,以血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及肝脏系数为参考指标,制备急性酒精性肝损伤小鼠模型;取小鼠肝组织检测葛根散对肝微粒体CYP450含量及CYP2E1活性的影响.结果:与正常对照组比较:模型对照组血清ALT、AST水平及肝脏系数显著升高(P＜0.01),肝微粒体蛋白含量无明显变化,CYP450含量及CYP2E1活性显著提高(P＜0.01).与模型对照组比较:葛根散各剂量组血清ALT,AST水平及大剂量组肝脏系数呈明显降低(P ＜0.05或P＜0.01),肝微粒体蛋白含量无明显变化,CYP450含量明显增多(P＜0.01)且有剂量差异性(P＜0.05),CYP2E1活性显著降低(P＜0.01)且有剂量差异性(P＜0.01).结论:葛根散对急性酒精性肝损伤小鼠肝功能具有良性干预作用,能提高酒精性肝损伤小鼠肝微粒体CYP450含量和降低CYP2E1活性.     

半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏 CYP450酶活性的影响

目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性。方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性。结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01);辛开组对CYP2C6有抑制作用(P<0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用;甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用。结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著。     

六味地黄丸对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性影响的研究

目的:探讨六味地黄丸对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响。方法:分别采用生理盐水、六味地黄丸、西咪替丁和苯巴比妥钠给大鼠灌胃。连续7d后,腹腔注射非那西丁。采集不同时间点的血样,用HPLC法测定血浆中探针药物非那西丁的浓度,估算比较其探针药物的t1/2。结果:生理盐水组、西咪替丁组与六味地黄丸组比较,组间差异显著(P<0.01);苯巴比妥钠组与六味地黄丸组比较,组间差异不明显(P>0.05)。结论:大鼠肝微粒体代谢酶P450活性在六味地黄丸作用下会得到一定增强,但对大鼠的实验结果是否适用于人体,尚需进一步研究。     

胡黄连苷Ⅱ对大鼠体内P450酶活性的影响

目的：研究胡黄连苷Ⅱ对大鼠体内P450酶活性的影响。方法：采用多探针技术，测定单次和多次使用胡黄连苷Ⅱ前后大鼠血浆中相应的探针药物咪哒唑仑、奥美拉唑、双氯芬酸、氯唑沙腙和右美沙芬的浓度及其药代动力学参数。结果：大鼠单次给予胡黄连苷Ⅱ（10mg．kg^-1）后，探针药物的浓度及其药代动力学参数均没有显著性变化。按每天两次，每次10mg．kg^-1剂量灌胃胡黄连苷Ⅱ，连续12d后，与用药前比较，咪哒唑仑、双氯芬酸、右美沙芬和氯唑沙宗的血药浓度及其药代动力学参数未见显著性改变；但奥美拉唑的血药浓度及其AUC0-t有升高的趋势（p〈0．05）。结论：单次给予胡黄连苷Ⅱ对大鼠P450活性没有影响，而多次给予胡黄连苷Ⅱ对大鼠CYP2C19的活性有抑制作用。     

藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响

目的：考察藏药余甘子鞣质部位对大鼠肝微粒体代谢酶P450活性的影响。方法：采用“Cocktail”探针底物与大鼠肝微粒体体外温孵法,通过HPLC同时测定6种探针药物氨苯砜、氢溴酸右美沙芬、香豆素、非那西丁、氯唑沙宗、甲苯磺丁脲的代谢消除率,评价余甘子鞣质部位对P450酶中CYP3A4、CYP2D6、CYP2A6、CYP1A2、CYP2E1、CYP2C9亚酶活性的影响。结果：余甘子鞣质部位对P450酶影响较小,CYP3A4,CYP1A2的IC₅₀值超过200μg·mL^{-1,CYP2C9的IC₅₀值超过500μg·mL-1。结论：藏药余甘子鞣质部位对肝P450酶活性影响较弱。}     

四物汤及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及mRNA表达的影响

研究四物汤复方及其配伍对大鼠肝脏P450酶活性及其mRNA表达水平的影响。大鼠口服灌胃四物汤及其配伍水煎液2周后,处死,用生理盐水灌流肝脏,制备肝微粒体,采用混合探针与肝微粒体体外孵育法考察四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450酶的影响。利用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)检测四物汤对大鼠肝脏细胞色素P450 mRNA表达的影响。四物汤复方组CYP1A2酶活性与对照组相比升高(P<0.05),熟地白芍、当归白芍、当归川芎以及白芍川芎组的CYP1A2和CYP2C19的酶活性与对照组相比降低(P<0.05),复方组、单药组、2味药配伍组的CYP2B6的酶活性与对照组相比降低(P<0.05)。复方组对CYP1A2的mRNA表达具有上调作用(P<0.05),4味单药对CYP2B1 mRNA表达具有下调作用的(P<0.05)。四物汤复方对大鼠肝脏CYP1A2的酶活性具有诱导作用,熟地和当归组与对照组相比酶活性相当,但与白芍合用后显著下调了CYP1A2的酶活性。复方及其配伍对CYP2B6的酶活性具有抑制作用,其中当归对酶活性下调作用较强。复方对CYP1A2以及4味单药对CYP2B1的mRNA表达的影响与酶活性水平相平行。     

白芍总苷对腹主动脉结扎所致大鼠心肌重构的影响

目的:用白芍总苷作用于腹主动脉结扎所致的大鼠心肌重构整体动物模型,观察白芍中苷类成分的抗心肌重构作用,分析其可能的作用机理,以期为其抗心肌重构的可能临床应用提供实验依据。方法:不完全结扎大鼠腹主动脉造成压力超负荷型心肌重构模型,假手术组动物除不进行结扎外其他操作与模型动物相同。造模一周后取存活的造模动物随机分为模型对照组、阳性对照药卡托普利45mg/(kg.d)组、白芍总苷100mg/(kg.d)组、白芍总苷200mg/(kg.d)组。各组动物灌胃给予受试药物或等体积蒸馏水20mL/(kg.d),每天给药1次,连续给药30天。末次给药动物禁食不禁水12h,进行如下指标的检测:颈总动脉插管测定血流动力学相关指标;称取体重、摘取心脏测定左心室指数及全心指数。结果:腹主动脉不完全结扎1个月,模型组动物的左心室指数、全心指数明显升高(P<0.01),收缩压、平均压明显升高(P<0.05)。与模型对照组相比,阳性药卡托普利45mg/(kg.d)可使左心室指数、全心指数明显降低(P<0.01),收缩压明显降低(P<0.05);白芍总苷100mg/(kg.d)可使左心室指数明显降低(P<0.05);白芍总苷200mg/(kg.d)可使左心室指数、全心指数明显降低,平均压降低(P<0.05)。结论:白芍总苷灌胃给药具有一定的对抗腹主动脉结扎所致心肌重构作用,其中的芍药苷可能是白芍总苷抗心肌重构的主要药效学成分。     

白芍总苷对急性化学性肝损伤小鼠的保护作用研究

目的:研究白芍总苷对D-半乳糖胺诱导的小鼠急性化学性肝损伤的保护作用。方法:将实验小鼠按体重随机分为6组,即正常组、模型组、白芍总苷(60、120、240mg/kg)组、联苯双酯(100mg/kg)组。每天给药1次,连续给药7天,末次给药8小时后,采用腹腔注射D-半乳糖胺诱导建立小鼠急性肝损伤模型,测定白芍总苷对血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平的影响,观察白芍总苷对肝匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性以及丙二醛(MDA)含量变化的影响,ELISA法测定白芍总苷对血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量的影响。结果:与模型组相比,白芍总苷240 mg/kg剂量组能显著降低血清中ALT、AST、TNF-α水平;显著降低肝匀浆中MDA含量;显著升高SOD、GSH-Px活性。结论:白芍总苷对Gal N诱导的小鼠急性化学性肝损伤具有较好的保护作用。     

白芍总苷与辛伐他汀对腹膜纤维化大鼠腹膜功能的影响

目的:比较白芍总苷与辛伐他汀对腹膜纤维化大鼠腹膜功能的影响.方法:选用健康SD大鼠32只,随机分为4组,每组8只,分别为:空白组、模型组、辛伐他汀组、白芍总苷组.用持续4.25％含糖透析液和间断脂多糖腹腔注射进行腹膜纤维化造模.辛伐他汀组每日给予辛伐他汀20mg.kg-1.d 1灌胃,白芍总苷组每日给予白芍总苷灌胃200 mg.kg-1.d-1;实验第30天结束后检测腹膜功能及测量腹膜厚度.结果:模型组的腹膜厚度最厚,腹膜超滤量最差,与其他3组有显著性差异(P＜0.05).辛伐他汀组、白芍总苷组的腹膜厚度及腹膜超滤量与空白组相比,有显著性差异(P＜0.05).辛伐他汀组腹膜厚度与白芍总苷组相比,有显著性差异(P＜0.05).辛伐他汀组超滤量与白芍总苷组相比,无显著性差异(P＞0.05).结论:白芍总苷和辛伐他汀均可一定程度保护腹膜,预防腹膜纤维化的发生.