枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护的实验研究

目的:观察枸杞子含药血清对受损兔色素上皮细胞(RPE)中超氧化物歧化酶(SOD)活性及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法:常规细胞培养,建立兔RPE细胞光损伤模型,设正常对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,分别于光照结束后24、48、72h进行指标的检测。结果:模型组各时间点兔RPE细胞中SOD活性及Bcl-2/Bax蛋白的表达与正常对照组比较,差异有统计学意义(P0.05);低剂量组及高剂量组各时间点兔RPE细胞中SOD活性及Bcl-2/Bax蛋白表达与模型组比较,差异有统计学意义(P0.05),且随时间的延长,SOD活性逐渐增高,Bcl-2蛋白表达逐渐增高,Bax蛋白表达依次降低,同时高、低剂量组之间存在量效关系。结论:枸杞子对兔RPE细胞具有一定的保护作用,这与其具有抗氧化性且能提高受损兔RPE细胞中SOD的活性有关。     

不同方法提取化瘀消癥复方对HTR-8/SVneo细胞凋亡的影响

目的:探讨不同方法提取化瘀消癥复方(丹参、桃仁、赤芍、天花粉和紫草)对人源妊娠滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞凋亡的影响。方法:采用CCK8法检测经不同方法提取的化瘀消癥复方(A水提、B醇提、C醇提后药渣水提、D醇提+水提)对HTR-8/SVneo细胞增殖的影响;流式细胞术检测48 h后细胞凋亡情况;设甲氨蝶呤组为阳性对照组,未经药物处理的细胞为阴性对照组。结果:不同提取方法的中药复方对HTR-8/SVneo细胞作用后对其增殖均有抑制作用,其中A组抑制率大于B、C、D组(P0.05);其凋亡率分别为(24.37±3.24)%(A组),(12.83±0.37)%(B组),(11.70±0.48)%(C组),(14.37±0.51)%(D组),(18.05±1.27)%(MTX组),与阴性对照组(7.057±0.76)%相比,各组凋亡率均明显增加(P0.01);其中A组凋亡率高于MTX组、B组、C组、D组(P0.01)。结论:不同提取方法提取化瘀消癥复方对HTR-8/SVneo细胞凋亡的影响,以水提组最明显,可将水提法作为化瘀消癥复方后续研究的中药提取方法。     

榄香烯联合中频交变微电流抑制胶质瘤U251细胞增殖

目的探索榄香烯联合中频交变微电流对胶质瘤U251细胞活力、凋亡和周期的影响。方法中频交变微电流作用胶质瘤U251细胞,筛选最佳作用参数;运用CCK-8法分析榄香烯不同药物浓度对U251细胞活力的影响;将U251细胞分为对照组、中频交变微电流组(50 kHz、150 mA、30 min)、榄香烯组(IC_(50):235μmol/L)、中频交变微电流与榄香烯联合组,连续作用3天后,观察细胞形态,利用CCK-8、流式细胞术分析中频交变微电流、榄香烯对胶质瘤U251细胞活力、凋亡和周期的影响。结果中频交变微电流的最佳作用参数为:50 kHz、150 mA、30 min,榄香烯的IC_(50)为235μmol/L;与对照组比较,中频交变微电流组、榄香烯组、联合组细胞存活率降低,分别为[(86.5±0.3)%、(51.7±2.3)%、(36.2±1.0)%,P0.05]。中频交变微电流组、榄香烯组、联合组的凋亡率分别为(17.2±2.7)%、(47.5±2.2)%、(68.5±1.7)%,均高于对照组[(4.4±1.2)%,P0.05];中频交变微电流组、联合组均将细胞阻滞于G_2/M期。结论榄香烯联合中频交变微电流可抑制U251细胞的活力、促进细胞凋亡、改变细胞周期,能够协同抗肿瘤。     

枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡线粒体信号传导途径的影响

目的:研究兔视网膜色素(RPE)上皮细胞光损伤以及枸杞子含药血清干预防治后细胞中参与凋亡的蛋白分子表达量的变化,探讨枸杞子含药血清对兔视网膜色素上皮细胞光损伤保护可能的信号传导途径,为临床应用枸杞子治疗年龄相关性黄斑变性等视网膜光损伤性疾病提供理论依据。方法:体外培养兔RPE细胞,用三基色冷光灯模拟自然光源,选取(2500±500)Lux作为基础光照强度,照射4h建立光损伤模型。制备含不同效量的枸杞子含药血清,光照前1h孵育体外培养的兔RPE细胞后进行光照实验,设置四个实验分组:A组:空白对照组;B组:光损伤模型组;C组:低剂量组;D组:高剂量组。通过透射电子显微镜进行兔RPE细胞超微结构的观察及拍片;采用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测兔RPE细胞内细胞色素C(Cyt-C)、caspase-9及caspase-3蛋白的表达量。结果:与空白对照组相比,光损模型组细胞内的Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平明显上调(P0.05);枸杞子含药血清能有效的抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与光损模型组比较,差异有统计学意义(均P0.05),其中高浓度组可显著抑制细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达,与空白对照组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:枸杞子对RPE细胞具有一定的保护作用,这一保护作用可能是通过线粒体信号传导途径来实现的。     

Salubrinal保护人结肠癌系HT29细胞内质网应激凋亡的实验研究

目的:探讨Salubrinal对毒胡萝卜素内酯(Thapsigargin,Tg)诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡的保护作用及机制。方法:以HT29细胞为研究对象,分别给予不同浓度的Salubrinal(1、10、50μg/mL)预处理,30 min后加入Tg(1μmol/L),继续培养24 h后通过流式细胞和TUNEL检测方法对HT29细胞凋亡进行检测;Western Blot法检测凋亡蛋白Caspase-12的表达变化。结果:通过流式细胞仪测定,HT29细胞早期凋亡率为(9.67±1.03)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(35.64±1.62),明显增加(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,随着剂量的增加,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)。TUNEL检测正常空白组细胞凋亡率为(6.94±0.97)%,经1μmol/L Tg诱导24 h后HT29细胞凋亡率为(34.56±1.45)%(P0.05);与模型组比较,加用Salubrinal(1、10、50μg/mL)干预后,各组细胞凋亡率均明显降低(P0.05);且Salubrinal(50μg/mL)细胞凋亡率明显低于Salubrinal(10μg/mL)(P0.05)。Western Blot检测结果表明,Caspase-12在正常空白组表达较低,HT29细胞经药物干预24后,在1μmol/L Tg诱导模型组表达增高(P0.05);通过不同浓度Salubrinal干预后,随着其浓度的增加凋亡蛋白Caspase-12表达逐渐降低(P0.05)。结论:Salubrinal对毒胡萝卜素内酯诱导的人结肠癌系HT29细胞凋亡具有保护作用,作用机制可能与抑制内质网应激凋亡通路有关。     

补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨补肾养血明目方基于线粒体途径对RPE细胞凋亡的保护作用。方法将ARPE-19细胞分为4组:正常组、模型组、空白肠吸收液组(对照组)、肠吸收液干预组(干预组)。建立氢醌(HQ)诱导的ARPE-19细胞氧化损伤模型。正常组细胞,在常规培养液中培养;模型组细胞,90μM的HQ作用24 h;对照组细胞,空白肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h;干预组细胞,补肾养血明目方含药肠吸收液干预24 h后,加入90μM的HQ作用24 h。分别采用CCK-8法检测细胞活力,荧光分光光度法分析ARPE-19细胞线粒体膜通透转换孔(mPTP)的开放程度,ELISA技术测定细胞色素C(Cyt-c)含量的变化,TUNEL方法观察细胞凋亡情况。结果 (1)RPE细胞活力:与模型组比较,干预组(浓度分别为1%,2%,5%)RPE细胞活力提高(t1%=-4.309,P=0.002;t2%=-9.503,P=0.000;t5%=-4.008,P=0.003),其中,浓度为2%的补肾养血明目方含药肠吸收液保护效果最好。(2)RPE细胞mPTP开放:与模型组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.521,P=0.001),对照组无明显变化(P0.05);与对照组比较,干预组Calcein平均荧光强度提高(t=-5.009,P=0.001)。(3)RPE细胞胞浆Cyt-c含量:与模型组比较,干预组ARPE-19细胞胞浆Cyt-c含量降低(t=2.968,P=0.018),对照组无明显变化(P0.05);与对照组比较,干预组Cyt-c含量降低(t=2.717,P=0.026)。(4)RPE细胞凋亡:与模型组相比,干预组ARPE-19细胞凋亡率下降(t=2.360,P=0.029),对照组凋亡率无明显变化(P0.05);与对照组相比,干预组细胞凋亡率下降(t=2.932,P=0.008)。结论补肾养血明目方含药肠吸收液可降低氧化损伤ARPE-19细胞mPTP的开放程度,抑制线粒体Cyt-c的释放,减少HQ诱导的ARPE-19细胞凋亡。线粒体保护是补肾养血明目方发挥抗HQ诱导的ARPE-19细胞氧化损伤的重要途径。     

高血压病气虚血瘀证患者血清诱导体外培养的人脐静脉血管内皮细胞凋亡的研究

目的观察高血压病气虚血瘀证患者血清诱导体外培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的情况,并观察其形态学改变。方法用高血压病气虚血瘀证患者血清作用于体外培养的人脐静脉血管内皮细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变,并观察补阳还五汤的保护作用。结果流式细胞仪检测结果:与健康对照组相比,高血压病气虚血瘀证组的早期与晚期凋亡率之和显著增加(P0.01),而补阳还五汤组凋亡率之和较高血压病气虚血瘀证组显著下降(23.67±1.95)%,并且与健康对照组相比无显著差异(P0.05);荧光显微镜检测结果:模型组可见较多凋亡细胞,细胞核呈现深染、致密的颗粒状荧光。药物组较模型组减轻,对照组细胞核荧光均匀、弥散。透射电镜检测结果:高血压病气虚血瘀证组:内皮细胞表面有少量细长的微绒毛,多数内皮细胞胞质内所含的饮液泡(亦称吞饮泡)较正常组为多,大小差别悬殊。此外,尚有少许高电子密度的圆形颗粒(嗜锇)分散在饮液泡之间,体积较饮液泡小。粗面内质网数目较少,并有扩张,核糖体部分丢失。平滑内质网明显扩张呈空泡状。同时细胞线粒体肿胀或空泡变,管网状结构碎裂,嵴消失。细胞核收缩变圆。补阳还五汤组逐渐减轻,对照组未见明显异常。结论高血压病气虚血瘀证存在血管内皮细胞凋亡,补阳还五汤具有保护作用。     

阿魏酸对体外低糖低氧损伤兔窦房结细胞凋亡及β-微管蛋白的影响

目的：观察阿魏酸对体外低糖低氧损伤兔窦房结细胞凋亡及β-微管蛋白(β-tubulin)的影响,探讨其作用机制。方法取新生乳兔窦房结细胞,分为空白对照组,模型组,阿魏酸高、中、低剂量组。除空白对照组外,其他组以缺氧缺糖模拟缺血,以恢复氧和糖的供应模拟再灌注造成窦房结细胞损伤模型。在造模更换培养基时,阿魏酸高、中、低剂量组分别加入阿魏酸溶液100、20、10μmol/ml,模型组加入等体积培养基,空白对照组予正常培养基培养。运用流式细胞仪检测各组窦房结细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜观察β-tubulin 的形态变化。结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率[(56.95±11.99)%比(31.45±6.32)%]明显增加（P＜0.01）,β-tubulin表达[(5.141±0.218)比(8.035±0.762)]降低;阿魏酸高、中剂量组细胞凋亡率[(24.85±6.34)%、(26.70±9.84)%比(56.95±11.99)%]明显低于模型组（P＜0.01）,β-tubulin表达[(7.927±0.357)、(5.961±0.351)比(5.141±0.218)]较模型组升高（P＜0.01）。结论阿魏酸可抑制低糖低氧引起的窦房结细胞凋亡,保护窦房结β-tubulin蛋白形态。     

牛膝总皂苷含药关节液对骨关节炎体外软骨细胞增殖及凋亡的实验研究

目的:观察牛膝总皂苷(TSA)含药关节液对兔骨关节炎(OA)体外软骨细胞增殖及凋亡的影响。方法:将30只兔分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组,每组10只,分别予TSA、硫酸氨基葡萄糖、蒸馏水灌胃7d后制备含药关节液;进行OA造模,鉴定OA造模成功后体外提取关节软骨细胞进行培养、鉴定。将P3代软骨细胞分为TSA组、硫酸氨基葡萄糖组、空白对照组、经典软骨增殖组,分别用10%TSA含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%硫酸氨基葡萄糖含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%空白含药关节液+10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液、10%FBS+DMEM∶F12(1∶1)培养液进行培养,对培养后的软骨细胞进行细胞形态学观察,用CCK-8法检测细胞增殖情况,免疫荧光染色检测Ⅱ型胶原蛋白表达,Annexin V-PE/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:OA软骨细胞体外分离成功,经甲苯胺蓝染色鉴定细胞为软骨细胞来源;CCK-8法观察四组细胞生长曲线,绘制的生长曲线符合Logistic生长曲线规律,TSA组在第2～7天细胞增殖速度明显高于其它3组,差异有统计学意义(P0.05);连续培养7d后,与空白对照组比较,TSA组Ⅱ型胶原蛋白表达显著,差异有统计学意义(P0.01),硫酸氨基葡萄糖组、经典软骨增殖组Ⅱ型胶原蛋白表达明显,差异有统计学意义(P0.05);流式细胞仪检测显示,与空白对照组(总凋亡率为17.61%±1.19%)比较,经典软骨增殖组(总凋亡率为16.50%±1.42%)细胞凋亡减少不明显,差异无统计学意义(P0.05)。与空白对照组比较,TSA组(总凋亡率为5.15%±1.96%)、硫酸氨基葡萄糖组(总凋亡率为7.76%±1.72%)细胞凋亡减少明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论:TSA含药关节液能有效提高细胞活力、促进软骨细胞增殖、提高Ⅱ型胶原蛋白表达,且降低软骨细胞早期、晚期凋亡率,对证实TSA是牛膝作用于软骨细胞的主要物质基础具有重要意义。     

柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响

目的:探讨柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖与凋亡的影响。方法:设置对照组、150 mg·L-1柴胡皂苷D组、100 mg·L-1柴胡皂苷D组、50 mg·L-1柴胡皂苷D组和25 mg·L-1柴胡皂苷D组,采用CCK-8实验方法检测柴胡皂苷D对人乳腺癌SK-BR-3细胞株增殖的影响;采用流式细胞术检测柴胡皂苷D对人乳腺癌细胞株SK-BR-3的细胞周期及细胞凋亡的影响。结果:柴胡皂苷D各浓度组细胞存活率分别为(85.3±4.13)%、(68.85±3.85)%、(45.28±3.25)%、(23.51±2.23)%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组G1期细胞比例分别为(58.23±2.21)%、(55.51±2.34)%、(45.67±3.23)%、(33.55±4.12)%,S期细胞的比例分别为(12.67±2.32)%、(10.34±2.45)%、(8.23±3.12)%、(7.34±3.98)%,G2期细胞所占的比例分别为(29.10±2.25)%、(34.15±3.45)%、(46.10±3.01)%、(59.11±2.34)%。柴胡皂苷D各浓度组G2期细胞所占比例与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。柴胡皂苷D各浓度组细胞凋亡率分别为(9.00±1.35)%、(20.20±1.45)%、(38.50±2.50)%、(50.25±3.75)%,均高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:柴胡皂苷D可明显阻滞SK-BR-3细胞株的增殖,将SK-BR-3细胞株的细胞周期阻滞于G2期,以促进该细胞的凋亡。     

红景天苷对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞凋亡的影响

目的观察红景天苷对乙醛刺激的肝星状细胞(HSC)凋亡的诱导作用,以及此过程中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)活性的变化.方法体外培养大鼠HSC株;用不同浓度的红景天苷(1.0、1.5、2.0 mg/mL)对乙醛(200μmol/L)刺激的大鼠HSC进行处理,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot法检测磷酸化JNK(p-JNK)蛋白水平.结果不同浓度的红景天苷对乙醛刺激的HSC中p-JNK的水平有明显下调作用(平均光密度比值分别为35.8±3.4、24.9±2.7、3.4±0.9),强度呈剂量依赖关系,同乙醛组(MVI值为48.6±4.8)相比有显著性差异(P＜0.05);同时具有促进细胞凋亡的作用:空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为2.0±0.5%、11±2.0%,两者有极显著性差异(P＜0.01),经红景天苷处理后细胞凋亡率均上升(分别为27±3.2%;33±2.5%;53±3.5%),与乙醛组相比有显著性差异(P＜0.05).结论红景天苷可以诱导乙醛刺激的HSC凋亡,下调JNK活性可能是其诱导HSC凋亡的机制之一.     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及超微结构的影响

目的:探讨揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及超微结构的影响,进而探讨揉髌手法治疗膝关节骨性关节炎的可能作用机制。方法:采用50只新西兰兔,随机分为手法组、针剂组、模型对照组、假模组和正常组各10只。前3组通过手术结扎并切断右侧臀下静脉、股静脉和大隐静脉造模,假模组显露相应血管但不结扎,正常组不做任何处理。造模1周后手法组采用揉髌手法分别施术于兔右下肢5周共17次;针剂组右膝关节内每周注射一次玻璃酸钠液,连用5周。其余3组不做任何处理。造模后8周末处死所有动物,取右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,采用原位末端标记法检测软骨细胞凋亡率,透射电镜观察软骨组织超微结构变化,数据经统计学处理。结果:模型组软骨组织退变明显,细胞凋亡率(17.25±3.24)%,电镜提示凋亡细胞较多;假模组软骨组织退变明显,细胞凋亡率(16.63±2.13)%,电镜提示细胞结构保存较差;手法组、针剂组软骨组织退变较轻,手法组细胞凋亡率(8.40±2.84)%,电镜提示细胞结构保存较好;针剂组细胞凋亡率(9.50±3.25)%,电镜提示细胞结构保存尚可;正常组软骨组织正常。细胞凋亡率(3.88±1.23)%,电镜提示细胞结构基本正常。与模型组比较,手法组、针剂组和正常组细胞凋亡率均P<0.01,有显著性差别。结论:揉髌手法可降低兔膝关节软骨细胞凋亡率,进而维护软骨组织的正常结构。     

乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响

目的观察IL-1β对兔视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并研究乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的兔视网膜色素上皮细胞增殖、凋亡及NF-κB信号通路的影响。方法MTT法检测IL-1β(2.5、5、10、15、20、30 g/L)作用兔视网膜色素上皮(RPE)细胞24、48、72 h后对其增殖的影响,以及乳香挥发油(0.15、0.3、0.45、0.6、0.75 mg/mL)、地塞米松(50、100、200、400、600 mg/L)对IL-1β介导的兔RPE细胞增殖的影响。流式细胞仪检测乳香挥发油及地塞米松对IL-1β介导的细胞凋亡的影响。根据MTT检测结果及凋亡率检测结果筛选乳香挥发油及地塞米松低、中、高剂量组。免疫细胞化学染色法观察乳香挥发油对IL-1β作用下兔RPE细胞NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达的影响。结果与空白对照组比较,除外20、30 g/L IL-1β组24 h,其余IL-1β组24、48、72 h细胞存活率均显著增高(P<0.05,P<0.01),尤以浓度为10 g/L时最为明显;与本组24 h比较,20 g/L IL-1β组48 h及15、20、30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率增高(P<0.05,P<0.01),同时30 g/L IL-1β组72 h细胞存活率高于本组48 h(P<0.01)。综合以上,选取浓度为10 g/L的IL-1β进行后续实验。与空白对照组比较,IL-1β对照组及溶媒对照组OD值及细胞存活率增高,早期及晚期凋亡率降低(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,乳香挥发油各剂量组及地塞米松各剂量组OD值及细胞存活率降低,早期及晚期凋亡率增高(P<0.05,P<0.01),同时均具有浓度依赖性(P<0.05,P<0.01)。与空白对照组比较,IL-1β对照组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达增高(P<0.01)。与IL-1β对照组比较,低、中、高剂量乳香挥发油组及低、中、高剂量地塞米松组NF-κBp65、p-IκBα、COX-2蛋白表达降低(P<0.01)。同时乳香挥发油组及地塞米松组各剂量间存在剂量依赖性(P<0.01)。结论IL-1β可明显促进兔RPE细胞增殖,其中浓度为10 g/L时促增殖作用最为明显;乳香挥发油及地塞米松可显著抑制IL-1β介导的兔RPE细胞增殖;乳香挥发油及地塞米松干预24 h可显著提高IL-1β介导的兔RPE细胞的早期及晚期凋亡率并可有效抑制IL-1β干预后所致的NF-κBp65核转移及p-IκBα、COX-2蛋白表达量增加。     

夏枯草提取物诱导B、T淋巴瘤细胞凋亡的实验研究

目的:研究夏枯草提取物对人B淋巴瘤Raji细胞及T淋巴瘤Jurkat细胞增殖的影响及其差异,探讨夏枯草提取物体外抗淋巴瘤的作用机制。方法:不同浓度的夏枯草提取物分别作用于Raji细胞及Jurkat细胞;48 h后分别收集各组细胞,应用MTT法、琼脂糖凝胶电泳法及流式细胞技术分别检测每组细胞的增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞凋亡情况;Western blot检测BCL-2及BAX蛋白表达变化。结果:不同浓度的夏枯草提取物对Raji及Jurkat细胞均有明显的增殖抑制作用(P0.01),且对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat,其对Raji细胞IC50(18.01±0.92)μg/mL显著低于Jurkat细胞(25.47±0.96)μg/mL(P0.05);凝胶电泳检测结果表明夏枯草提取物处理Raji及Jurkat细胞后均出现凋亡相关DNA Ladder;随夏枯草提取物浓度的增加,Raji及Jurkat细胞的早期凋亡率均显著增加,与空白对照组比较差异显著(P0.01),浓度为15、20、25μg/mL的夏枯草提取物作用于Raji及Jurkat细胞后的早期凋亡率分别为(9.4±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03±0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%、(22.92±0.20)%,同浓度条件下,Raji细胞的早期凋亡率显著高于Jurkat细胞(P0.01);随夏枯草提取物浓度增加,实验组细胞中BCL-2蛋白的表达逐渐减弱,BAX蛋白的表达逐渐增强,与空白对照组比较均有显著性差异(P0.05),同浓度条件下,Raji细胞内BCL-2蛋白表达的下降程度、BAX蛋白表达的增加程度显著高于Jur-kat细胞(P0.05)。结论:夏枯草提取物具有抑制淋巴瘤细胞增殖的作用,其机制可能与调节BCL-2和Bax蛋白的表达以诱导细胞凋亡有关,且夏枯草提取物对Raji细胞的抑制作用大于Jurkat细胞。     

江浙蝮蛇毒对体外培养人滑膜细胞凋亡的影响

目的探讨江浙腹蛇毒(AHV)诱导类风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞凋亡的作用及对相关蛋白Caspase-3表达的影响。方法 AHV处理培养的滑膜细胞后,采用MTT比色法检测AHV对滑膜细胞增殖的抑制作用,并采用流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率,以免疫组织化学法检测Caspase-3蛋白的表达。结果 MTT的检测结果显示5μg/mL AHV处理组滑膜细胞增殖抑制率达67.2%,且与时间、剂量具有正相关关系(P0.05),AHV体外作用滑膜细胞24 h的IC50为3.508μg/mL。流式细胞仪结果显示,与对照组相比,AHV各剂量组凋亡率明显增加(P0.05),并与剂量呈正相关。AHV体外作用滑膜细胞24 h时出现了明显的Caspase-3蛋白表达,其蛋白表达率明显高于对照组。结论 AHV对滑膜细胞具有较强的增殖抑制作用,细胞凋亡率明显增加可能与AHV诱导滑膜细胞Caspase-3活化相关。     

黄芪水煎剂对IR损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制分析

目的:研究黄芪水煎剂(AE)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾小管细胞凋亡的影响及机制。方法:选择雄性SD大鼠30只,随机将其分成假手术组、缺血再灌注损伤(IR)组和AE预处理组,每组10只,检测肾小管上皮细胞凋亡、肾组织caspase-3、caspase-8、caspase-9、肾小管上皮细胞凋亡指数和肾组织Bax、Bcl-2表达情况。结果:假手术组大鼠肾组织中极少见到凋亡细胞,细胞凋亡率为(2.91±0.41)%;IR组为(39.52±6.33)%,显著高于假手术组(P0.05);AE预处理组肾组织细胞凋亡率为(19.47±5.75)%,显著低于IR组(P0.05)。与假手术组相比,IR组肾组织Bax、Bcl-2表达均显著上调(P0.05),Bax/Bcl-2升高(P0.05);与IR组相比,AE预处理组Bax和Fas的表达明显减少(P0.05),而Bcl-2的表达显著增加(P0.05),故Bax/Bcl-2降低(P0.05)。与假手术组相比,IR组大鼠肾组织caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达均显著升高(P0.05);AE预处理组肾组织caspase-3、caspase-8和caspase-9的表达较IR组明显降低(P0.05)。结论:黄芪水煎剂可改善IR大鼠肾组织再灌注后损伤,对肾小管细胞凋亡有显著抑制作用,其机理可能与其对Bcl-2、Bax表达的调节有关。     

海带多糖对人肝癌bel-7402细胞存活和凋亡的影响

目的探讨海带多糖对人肝癌bel-7402细胞存活和凋亡的影响。方法 1体外培养人肝癌bel-7402细胞,加入海带多糖(浓度分别为5、10、20、30 g/L)继续培养48 h,另将不用药物干预的肿瘤细胞组设为对照组;倒置显微镜观察细胞形态的变化,MTT法测定细胞存活率。2体外培养人肝癌bel-7402细胞,设对照组及海带多糖组,海带多糖用药组分别加入海带多糖(10、20、30 g/L),采取相应干预措施。用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡情况。结果 1海带多糖(5、10、20、30 g/L)分别作用bel-7402细胞48 h后,随着海带多糖浓度的增加,bel-7402细胞逐渐变小、固缩、变形;细胞存活率明显降低。2海带多糖作用48 h后,bel-7402细胞凋亡率为(14.8±1.7)%,坏死率为(19.8±2.3)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论海带多糖可抑制bel-7402细胞存活,促进bel-7402细胞凋亡及坏死。     

枸杞多糖预防兔视网膜色素上皮细胞光损伤凋亡机制研究

目的研究不同浓度枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对光诱导损伤的兔视网膜色素上皮(Retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡线粒体通路中相关蛋白分子表达量的变化,探讨枸杞多糖对兔PRE细胞光损伤预防保护作用可能的信号传导途径。方法通过流式细胞术(FCM)检测光照对兔RPE细胞凋亡率的影响,筛选最佳光照时间,通过光诱导建立兔RPE细胞光损伤模型,并进行预防性实验,分别用不同浓度的枸杞多糖于光照前8h对体外培养的兔PRE细胞进行干预,处理结束后0h、6h、12h、24h进行各相应指标检测,通过蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白分子表达量变化。实验组分为正常组、光损伤模型组以及不同浓度枸杞多糖(0. 01,0. 1,1mg/ml)干预组。结果与正常组比较,光照6h、12h、18h、24h兔RPE细胞凋亡率明显升高,且具有时效性,并筛选18h作为光损伤模型建立时间,光损伤组停止光照后兔RPE细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达显著高于同时相内正常组细胞,说明停止光照后光损伤作用仍持续存在,且LBP有效抑制了同时相内兔RPE细胞内Cyt-C、Caspase-9、Caspase-3蛋白的表达。结论枸杞多糖能预防兔RPE细胞的光诱导损伤,具有一定的保护作用,且这一保护作用可能是通过抑制线粒体信号通路来实现的。     

华蟾素对卵巢癌3AO细胞CD44s表达的影响

目的 探讨华蟾素对体外培养的卵巢癌3AO细胞CD44s表达的影响.方法 体外培养卵巢癌3AO细胞,不同浓度的华蟾素干预后,应用RT-PCR检测CD44s mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果 卵巢癌3AO细胞对照组CD44smRNA表达为1.3±0.1,细胞凋亡率为(2.31±0.98)%;0.25mg/ml华蟾素对卵巢癌3AO细胞CD44s mRNA和凋亡率的影响较对照组,无显著性差异(P＜0.05);2.5 mg/mL华蟾素干预后,3AO细胞CD44s mRNA 表达为1.0±0.1,癌细胞凋亡率为(28.69±4.16)%,较对照组有显著性差异(P＜0.05):25 mg·ml-1华蟾素与2.5mg·ml-1华蟾素对卵巢癌3AO细胞CD44s mRNA表达和凋亡率的影响无显著性差异(P＜0.05),较对照组有显著性差异(P＜0.05).结论 2.5 mg·ml-1华蟾素可有效抑制卵巢癌3AO细胞CD44s的表达,抑制癌细胞的侵蚀性生长.