氯沙坦对血管紧张素Ⅱ损伤RIN-m细胞胰岛素分泌功能的保护及机制探讨

目的观察氯沙坦对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)损伤β细胞(RIN-m)功能的保护,并对其机制进行探讨。方法常规培养RIN-m细胞,分为空白对照组、100nmol/LAngⅡ组和氯沙坦预处理组,各组干预24h后使用放射免疫法检测基础(3.3mmol/L)和葡萄糖(16.7mmol/L)刺激下RIN-m细胞胰岛素分泌量;DCFH-DA染色流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平;RT-PCR和Western blotting分别检测RIN-m细胞解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白的表达。结果①各组基础胰岛分泌没有显著差异(P>0.05),在高糖刺激下,100nmol/LAngⅡ组胰岛素分泌量明显低于空白对照组(P<0.001),氯沙坦预处理组胰岛素分泌量与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较AngⅡ组明显增加(P<0.001);②100nmol/LAngⅡ组细胞内ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达均较空白对照组明显增加(P<0.001),氯沙坦预处理组与空白对照组无显著差异(P>0.05),但较100nmol/LAngⅡ组显著降低(P<0.001)。结论AngⅡ损伤β细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌(GSIS)功...     

血管紧张素Ⅱ对体外人胰岛细胞GLUT-2mRNA表达的影响

目的：探讨血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）对体外人胰岛细胞内葡萄糖转运蛋白2（GLUT-2）mRNA的影响,通过体外实验了解血管紧张素Ⅱ影响胰岛细胞分泌功能的相关分子机制。方法：人胰岛细胞被分成空白对照组,AngⅡ组（100 nmol/L）和氯沙坦组（1μmol/L）,以半定量RT-PCR检测细胞内GLUT-2mRNA的表达情况。结果：在100nmol/L AngⅡ作用下,人胰岛细胞GLUT-2 mRNA的表达显著低下（P〈0.05）;AngⅡ的这种作用,可被氯沙坦部分逆转。结论：AngⅡ可能通过抑制GLUT-2的表达而影响胰岛β细胞胰岛素的分泌。     

脂联素通过分泌型卷曲相关蛋白2及相关通路缓解AngⅡ诱导的心肌肥厚

目的 探讨脂联素(APN)通过调控分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)及相关通路对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥厚的作用及机制。 方法 出生3d Wistar大鼠中分离出原代心室肌细胞(NRVMs)。采用免疫荧光法检测NRVMs的骨架蛋白α-SMA的表达。将提取的NRVMs分为空白组、1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组,检测不同浓度AngⅡ对NRVMs的作用。将NRVMs分为空白组、AngⅡ组、APN+AngⅡ组、AngⅡ+APN+si-sFRP2组、AngⅡ+APN+LiCl组、APN组、SP600125+AngⅡ组以及SB203580+AngⅡ组检测APN对AngⅡ作用的影响。采用Western blotting法检测各组细胞sFRP2的表达量以及Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活。采用qPCR法检测各组细胞心肌肥厚相关指标以及sFRP2的表达水平。 结果 在NRVMs中加入AngⅡ24 h后,与空白组相比,1 nmol/L组、10 nmol/L组、100 nmol/L组、500 nmol/L组ANP、BNP的表达升高(F_ANP=27.30, P=0.002;F_BNP=38.18, P=0.002),p-JNK和p-p38表达均升高(F_p-JNK=57.65,P<0.001; F_p-p38 =8.880,P=0.018),sFRP2的表达下调(F_AngⅡ=47.53,P<0.001)。加入APN预处理1 h后,与单加AngⅡ组相比,APN+AngⅡ组NRVMs心功能损伤标志物ANP、BNP的表达降低(F_ANP=101.8,P<0.001;F_BNP=51.14,P<0.001),sFRP2的含量上调(F=88.93,P<0.001),同时Wnt/β-catenin(F=41.33,P=0.006)及p38/JNK(F_p38=73.42,P<0.001;F_JNK=39.28,P=0.002)通路的激活被抑制。加入p38/JNK通路抑制剂后,能够达到APN预处理的效果(F_ANP=122.9, P<0.001; F_BNP= 202.3, P<0.001)。 结论 APN可能通过上调sFRP2,抑制Wnt/β-catenin、p38/JNK通路的激活,从而抑制AngⅡ诱导的心肌肥厚。     

以转录因子AP-1为靶点的decoy ODNs对大鼠心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的抑制作用

目的 探讨AP-1 decoy ODNs对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖及细胞胶原合成的抑制作用,为高血压心肌纤维化的防治提供理论依据.方法 通过2.5％胰酶分离培养新生SD大鼠心脏成纤维细胞,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,羟脯氨酸比色法测定培养细胞上清胶原合成,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度的AP-1 decoyODNs对AngⅡ诱导的CFs增殖,胶原的合成及细胞周期的影响.结果 CFsMTT比色法显示10-7mmol/LAngⅡOD490值明显高于空白对照组(0.451±0.014和0.342±0.096,n=9,P<0.05);100 mnol/L和200 mmol/L组的OD490值分别为0.329±0.04和0.214±0.25,均较AngⅡOD490值显著降低(P<0.05);AngⅡ作用24 h后能够显著增加CFs胶原合成,decoy ODNs可以抑制这种作用,其中100 nmol/L和200 nmol/L均有显著性抑制作用.FCM细胞周期分析表明,AngⅡ作用24 h后能够明显增加S期细胞百分率(21.93±0.71％和10.93±0.2％,n=6,P<0.01),随着decoy ODNs浓度增加,S期细胞百分率明显降低,其中100nmol/L和200nmol/L作用具有显著性意义(P<0.01).但突变的decoyODNs对CFs的增殖及胶原合成均没有明显的影响.结论 AP-1 decoy ODNs可以抑制AngⅡ诱导的CFs增殖和胶原的合成,其作用机制可能与影响CFs细胞周期有关.     

烟酰胺单核苷酸对RIN-m5f细胞中胰岛素分泌及PDX-1和FoxO1基因表达的影响

目的：在细胞水平研究烟酰胺单核苷酸（nicotinamide mononucleotide,NMN）对胰岛素分泌的调节作用及其对与胰岛素分泌相关的重要转录因子胰十二指肠同源盒基因（pancreatic and duodenalhomeobox-1,PDX-1）和分叉头框家族转录因子1（forkhead box-containing protein O-1,FoxO1）基因表达的影响。方法：采用大鼠胰岛素ELISA试剂盒检测RIN-m5f细胞胰岛素分泌水平。用Real-time PCR检测RIN-m5f细胞PDX-1和FoxO1的mRNA表达水平。用Western印迹检测RIN-m5f细胞PDX-1蛋白表达水平。结果：用瑞格列奈10 nmol/L＋NMN 100μmol/L处理RIN-m5f细胞48 h,与空白对照及DMSO对照组相比,胰岛素分泌量均显著增高（P〈0.05）;与NMN 50μmol/L组比较,胰岛素分泌量的增高也有统计学意义（P〈0.05）。10,50和100μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36 h,PDX-1的mRNA表达量均上调（依次为P〈0.05,P〈0.01,P〈0.001）。100μmol/L剂量组与10μmol/L和50μmol/L剂量组比较差异也有统计学意义（P〈0.001）。50,100和200μmol/L的NMN作用RIN-m5f细胞36或48 h,PDX-1的蛋白表达量与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：NMN可以调控RIN-m5f细胞中胰岛素的分泌及PDX-1的mRNA表达水平。     

血管紧张素Ⅱ通过上调富含半胱氨酸蛋白61表达诱导HEK293T细胞凋亡

目的探讨富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）在血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导HEK293 细胞功能中的改变及作用。方法 HEK293T细胞于体外培养,并应用CRISPR/Cas9技术敲低HEK293T细胞Cyr61基因。将细胞分为四组：（1）对照组;（2）Cyr61 敲低组;（3）AngⅡ组;（4）AngⅡ+Cyr61敲低组,以10-7 mol/L AngⅡ处理细胞,48 h收集细胞用流式细胞仪检测细胞凋亡,通过 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术及蛋白质免疫印迹技术检测细胞Cyr61及Bcl-2的mRNA及蛋白表达量。结果Cyr61敲低 组Cyr61蛋白水平较正常对照组明显下降（P<0.05）,AngⅡ干预48 h 后Cyr61蛋白和mRNA表达水平显著升高（P<0.05）,Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显下降（P<0.05）,敲低Cyr61 后Bcl-2 蛋白和mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,与对照组凋亡率 （11.88±1.46）%相比,Cyr61敲低组凋亡率为（3.87±0. 83）%,AngⅡ干预组HEK293T细胞凋亡率为（26.94±3.73）%（P<0.05）,与 AngⅡ干预组相比,Cyr61 敲低+AngⅡ组凋亡率为（15.76±1.31）%（P<0.05）。结论Cyr61 表达量的上调与AngⅡ诱导的 HEK293T细胞损伤有关,下调Cyr61的表达可以有效地保护AngⅡ诱导的细胞损伤。     

精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响研究

背景　恶性肿瘤的发病率不断上升,放疗所致的正常器官的辐射损伤难以避免,精胺是具有极高生物活性的一种多胺类物质,研究证明外源性精胺具有一定的活性氧清除剂作用,而心脏作为常见的辐射损伤器官,外源性精胺对辐射损伤的心肌细胞的影响研究较少。目的　探讨精胺对辐射所致氧化损伤H9c2心肌细胞的影响。方法　2018年12月至2020年12月,取对数生长期的H9c2心肌细胞加入精胺,分为100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组,空白对照组为加等量不含药物的培养液,采用CCK8溶液计算各组细胞培养12、24、48 h的存活率。根据前期筛选结果将体外培养的H9c2心肌细胞分为空白对照组（单纯DMEM培养基）、单纯辐射组（单纯X线照射）、辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组;各组用医用直线加速器进行照射,X线照射后继续培养0、12、24、48 h,计算细胞凋亡率。使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,荧光显微镜拍摄各组细胞照射后状态,丙二醛（MDA）试剂盒检测各组细胞MDA水平,总超氧化物歧化酶（T-SOD）试剂盒检测各组细胞的SOD活性。结果　100 μmol/L组、200 μmol/L组、400 μmol/L组24 h细胞存活率高于12、48 h（P<0.05）。处理时间12 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组、200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间24 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间48 h：空白对照组细胞存活率高于100 μmol/L组、200 μmol/L组及400 μmol/L组（P<0.05）;100 μmol/L组细胞存活率低于200 μmol/L组,高于400 μmol/L组（P<0.05）;200 μmol/L组细胞存活率高于400 μmol/L组（P<0.05）。处理时间0 h：辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于空白对照组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组细胞凋亡率高于单纯辐射组（P<0.05）;辐射+200 μmol/L精胺组细胞凋亡率低于辐射+100 μmol/L精胺组（P<0.05）。处理时间为12、24、48 h细胞凋亡情况同处理时间为0 h。空白对照组0 h细胞凋亡率低于12、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于24 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+200 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0 h、12 h和48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,24 h细胞凋亡率低于48 h（P<0.05）。辐射+100 μmol/L精胺组24 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）,12 h细胞凋亡率低于0、48 h（P<0.05）。单纯辐射组0 h细胞凋亡率低于12、24、48 h（P<0.05）;12 h细胞凋亡率低于24、48 h（P<0.05）;24 h细胞凋亡率比48 h低（P<0.05）。处理时间为12 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组细胞及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性高,比辐射+100 μmol/L精胺组细胞MDA水平低（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为24 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+100 μmol/L精胺组及辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低,比辐射+200 μmol/L精胺组细胞MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。处理时间为48 h时：空白对照组与辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组SOD活性、MDA水平比较,差异有统计学意义（P<0.05）;单纯辐射组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）;辐射+100 μmol/L精胺组比辐射+200 μmol/L精胺组细胞SOD活性低、MDA水平高（P<0.05）。给予X线照射24 h后,空白对照组H9c2心肌细胞形态呈长梭形,细胞核形态完整,染色均匀;辐射+200 μmol/L精胺组、辐射+100 μmol/L精胺组、单纯辐射组的H9c2心肌细胞出现不同程度的变化,如细胞形态变圆、细胞核碎裂、染色不均匀等,其中200 μmol/L精胺组的细胞形态最接近空白对照组细胞,变化程度较轻。结论　精胺对辐射导致的心肌细胞的氧化损伤具有保护作用,且其保护作用与浓度及时间有关,在一定浓度范围内高浓度精胺的保护能力更强,各浓度精胺处理24 h时的细胞保护能力最强。     

醛固酮通过调节ACE2-Ang (1-7)-Mas受体轴诱导内皮细胞凋亡的研究

目的 探讨醛固酮对内皮细胞ACE2—Ang (1-7)—Mas受体轴的影响及其与凋亡的关系。方法 将体外培养的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分为对照组（DMEM/F12培养基）、醛固酮组（10、100、1 000 nmol/L醛固酮干预）和醛固酮拮抗组（100 nmol/L醛固酮+1 μmol/L醛固酮受体拮抗剂共同干预）。采用免疫荧光细胞化学染色法观察细胞ACE2蛋白的表达;Western blotting检测细胞中ACE2和Mas受体的表达;酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中AngⅡ和Ang (1-7)蛋白的含量以及凋亡相关蛋白caspase-3的活性;流式细胞术结合FITC-Annexin V/PI荧光染色检测细胞凋亡。结果 与对照组比较,醛固酮组细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调（P<0.01）,并呈浓度依赖性。在100 nmol/L醛固酮组,随着干预时间的延长,细胞ACE2和Mas受体的表达明显下调（P<0.01）,呈时间依赖性;而醛固酮拮抗组细胞ACE2和Mas受体的表达显著高于100 nmol/L醛固酮组（P<0.01）。ELISA检测结果显示,随着干预时间的延长,醛固酮组细胞培养上清中AngⅡ浓度和caspase-3活性均显著升高,而Ang (1-7)浓度降低。流式细胞术检测结果显示：醛固酮组细胞凋亡率显著高于对照组,醛固酮拮抗组细胞凋亡率显著低于醛固酮组（P<0.05）。结论 醛固酮具有调节ACE2—Ang (1-7)—Mas受体轴的作用,并可能通过此轴诱导内皮细胞凋亡。     

促红细胞生成素对血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ/Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白表达的影响研究

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）诱导的系膜细胞增殖及Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ）和纤维连接蛋白（FN）表达的影响。方法 将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为4组：对照组,AngⅡ组（0.1、1.0、10.0 μmol/L）,EPO组（1、10、100 U/L）,AngⅡ+EPO组（EPO 1、10、100 U/L预处理1 h后加AngⅡ 1.0 μmol/L）。各组处理0、24、48 h时,CCK-8法检测系膜细胞增殖情况,免疫印迹法检测系膜细胞ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平,ELISA法检测系膜细胞培养上清液中ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白水平。结果 单独给予AngⅡ或EPO均可刺激系膜细胞增殖,AngⅡ组亚组和EPO组亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平均高于对照组,且48 h时高于24 h时,24 h时高于0 h时,差异均有统计学意义（P＜0.05）;单独给予AngⅡ或EPO均可促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,除EPO 1 U/L亚组Col Ⅰ蛋白表达水平与对照组间差异无统计学意义（P＞0.05）外,AngⅡ组亚组和EPO组其他亚组ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义（P＜0.05）。与AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 1 U/L亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 10 U/L亚组和AngⅡ1.0 μmol/L+EPO 100 U/L亚组在24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,但与对照组及同浓度单纯EPO亚组比较,AngⅡ1.0 μmol/L+EPO组各亚组24、48 h时系膜细胞增殖水平及ColⅠ、Col Ⅳ和FN蛋白表达水平均增高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Ang Ⅱ能刺激系膜细胞增殖,促进系膜细胞合成及分泌ColⅠ、Col Ⅳ和FN,EPO亦有一定程度类似作用,但两者同时存在时,EPO可拮抗AngⅡ诱导的系膜细胞增殖及ColⅠ、Col Ⅳ和FN的合成及分泌,提示EPO除可纠正肾性贫血外,可能对AngⅡ诱导的肾小球硬化具有抑制作用而保护肾功能。     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导巨噬细胞MMP-9表达的影响

目的：探讨氯沙坦对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导巨噬细胞MMP-9表达的影响。方法：体外培养巨噬细胞,测定AngⅡ诱导巨噬细胞MMP-9表达及氯沙坦的干预作用。结果：AngⅡ组MMP-9表达明显高于对照组（P〈0.05）,且1×10-7mol/LAngⅡ亚组MMP-9表达明显高于对照组（P〈0.01）;AngⅡ＋氯沙坦组MMP-9表达明显低于AngⅡ组（P〈0.05）。结论：氯沙坦可阻断AngⅡ与AT1受体结合,下调巨噬细胞MMP-9的表达。     

PI3K/AKT通路与TRPC6通道在AngⅡ诱导足细胞损伤中的相互作用

目的探讨磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路与瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肾小球足细胞损伤过程中的作用及其可能机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,分别利用AngⅡ、氯沙坦、PI3K/AKT通路抑制剂(LY294002)、TRPC6通道阻滞剂(SKF96365)进行处理,将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+氯沙坦组、氯沙坦组、AngⅡ+LY294002组、LY294002组、AngⅡ+SKF96365组、SKF96365组,采用qRT-PCR检测各分组细胞TRPC6 mRNA的变化。采用Western blot检测各分组细胞AKT、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、TRPC6蛋白质表达的变化。采用Hoechst 33258染色法检测各组足细胞凋亡情况。结果与空白对照组相比,AngⅡ组AKT磷酸化水平降低,TRPC6的表达升高,足细胞凋亡增加(P<0.05)。与AngⅡ组相比:AngⅡ+SKF96365组AKT磷酸化水平升高,TRPC6的表达下降,足细胞凋亡减少(P<0.05);AngⅡ+LY294002...     

甲状旁腺激素通过非依赖PLC的PKC途径抑制成骨细胞的凋亡

目的观察甲状旁腺激素的非依赖PLC的PKC转导通路（PTH/nonPLC/PKC）是否会对成骨细胞（MC3T3-E1）的凋亡以及 细胞数量具有影响。方法培养MC3T3-E1细胞,以1.5×104密度接种到96孔板,然后置于培养箱培养3 d直到细胞达到汇合状 态,随机分为5 组：按100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）;100 nmol/L［Gly1, Arg19］hPTH （1-34）+1 μmol/L Go6983,1 μmol/L Go6983;空白对照组加入等体积的去离子水,分别刺激细胞1、24、48 h,然后使用细胞计数 试剂盒（CCK-8）和Caspase-Glo® 3/7试剂盒（caspase-3）检测细胞的细胞数量与凋亡。结果CCK-8检测结果显示,［Gly1, Arg19］ hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有提高细胞数量的趋势,但结果并没有统计学差异, 48 h［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,可以明显提高细胞的数量（P<0.05）。进一步的研究发现在 ［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组添加抑制剂Go6983 后,细胞数量增多的效应消失（P<0.05）。Caspase-3 检测凋亡结果显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）+Go6983组相比,在1 h和24 h具有抑制细胞凋亡（细胞凋亡受到抑制）,但是差 异无统计学意义。48 h检测细胞凋亡显示,［Gly1, Arg19］hPTH（1-34）组与［Gly1, Arg19］hPTH（1-28）组相比,前者可以明显抑制细 胞凋亡（P<0.05）,给予PKC抑制剂Go6983后,其抑制凋亡现象消失。结论PTH的nonPLC/PKC信号转导通路可能在长时间 （48 h）作用于MC3T3-E1细胞时,可抑制细胞凋亡,提高细胞的数量。     

熊果酸对肝星状细胞内活性氧产生的影响及与细胞调亡的关系

目的：体外观察熊果酸对肝星状细胞内活性氧（ROS）的产生、细胞凋亡、NF-κB核易位及X-连锁凋亡抑制蛋白（XIAP ）mRNA表达的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的机制。方法：取对数生长期的肝星状细胞（HSC-T6）进行分组：A组：瘦素(100 ng/ml)刺激组,B组：瘦素+熊果酸（50μM）组,C组：瘦素+ N-乙酰-L半胱氨酸（10mM）组,D组：空白对照组。检测DCF荧光强度（反映ROS水平）、细胞凋亡率、NF-κB（P65）核移位率; XIAP mRNA的表达。结果：1. A组HSC-T6细胞内DCF荧光强度明显强于D组,B组、C组细胞内ROS水平明显降低于A组（均P<0.001）。2．A组在48h的HSC-T6细胞凋亡率低于D组（P<0.05）;B组在48h的 HSC-T6凋亡率不仅明显高于A组（P<0.001）, 而且高于C、D组（均P<0.05）。3．A组细胞凋亡率显著高于D组（P<0.001）;B组、C组的NF-κB核移位率均显著低于A组（均P<0.001）;4．瘦素作用HSC-T6细24h的XIAP mRNA表达显著高于D组（P<0.01）;B组、C组在12h、24h的表达均低于A组(P<0.01 或P<0.05)。结论：熊果酸能抑制瘦素刺激HSC-T6细胞引起的ROS产生,并能诱导HSC-T6细胞凋亡,其机制可能与抑制ROS对 NF-κB的活化,下调XIAP基因表达有关。     

5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸对人脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的作用及其机制

目的：探讨氯通道阻断剂5-硝基-2-(3-苯丙胺)苯甲酸（NPPB）对人脑胶质瘤SHG-44细胞生长的影响,初步阐明NPPB抑制胶质瘤细胞增殖和诱导细胞凋亡的可能机制。方法：培养人脑胶质瘤SHG-44细胞,将其分为空白对照组和50、100及200  μmol•L^-1 NPPB组,MTT法检测各组SHG-44细胞的增殖活性,细胞分析仪分析细胞周期变化及凋亡率。结果：MTT检测,与空白对照组比较,50   μmol•L^-1 NPPB 组在48 h时细胞增殖活性降低（P<0.05）,200  μmol•L^-1 NPPB组3 h时细胞增殖活性增高（P<0.05）,100和200   μmol•L^-1 NPPB组24和48 h时细胞增殖活性明显降低（P<0.01）。细胞周期检测,与空白对照组比较,50  μmol•L^-1 NPPB组G1期细胞百分数明显减少,G2/M期细胞百分数明显增多（P<0.01）,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞增殖停滞在G1期（P<0.01）。细胞凋亡检测,与空白对照组比较,100和200  μmol•L^-1 NPPB组细胞凋亡率明显升高,分别达到24.64%和41.85%（P<0.01）。结论：高浓度NPPB可以抑制人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖并诱导其凋亡,提示氯通道在人脑胶质瘤SHG-44细胞的增殖与凋亡中起一定的作用。     

血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的分子机制

目的:探讨AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的分子机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株,分为AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用各种生物化学方法观察不同浓度AngⅡ在不同时间对人脐静脉内皮细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH)的量.应用基因芯片技术检测人脐静脉内皮细胞增殖作用的相关基因表达谱.结果:一定浓度的AngⅡ作用12h时人脐静脉内皮细胞增殖率增加(P<0·05);ROS(·OH)的含量与人脐静脉内皮细胞增殖率呈显著负相关;NAC可以减少人脐静脉内皮细胞ROS(·OH)的含量,明显抑制AngⅡ对人脐静脉内皮细胞的增殖作用;0·0625μmol/LAngⅡ作用人脐静脉内皮细胞12h时,与细胞增殖相关的ERK、CDK、CCN、PCNA等25个基因普遍上调,而与细胞凋亡相关的DR6、Caspas-es6、BAK1、PDCD8等12个基因普遍下调,在1μmol/LAngⅡ作用12h时,呈相反结果.结论:AngⅡ可诱导人脐静脉内皮细胞产生ROS(·OH),引起多种与人脐静脉内皮细胞增殖相关的靶基因表达;ROS(·OH)可能是AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞增殖的主要信号转导分子和基因表达调节分子.     

血管周围脂肪组织中AngⅡ介导VSMCs增殖的机制

  目的 探讨血管周围脂肪组织(PVAT)中血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）介导血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的相关机制。方法 培养大鼠平滑肌细胞,MTT试验检测AngⅡ处理后细胞增殖率,检测AngⅡ处理后活性氧（ROS）、H2O2及HOCL水平; 预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）、ERK1/2抑制剂（PD98059）分别作用于AngⅡ处理的细胞,观察其对细胞总蛋白、细胞周期的影响,并检测H2O2及HOCL含量的变化。结果 AngⅡ（终浓度100 nmol/L）处理24 h后细胞与未予AngⅡ处理比较可明显诱导细胞增殖（P＜0.05）,且ROS随着升高;预先给予NADPH抑制剂apocynin、H2O2水解酶catalase、ERK1/2抑制剂PD98059分别作用于AngⅡ处理的细胞与单用AngⅡ处理的细胞比较可抑制细胞增殖（P＜0.05）;预先给予NADPH抑制剂（apocynin）、H2O2水解酶（catalase）与单用AngⅡ处理的细胞比较可降低H2O2及HOCL含量（P＜0.05）,但ERK1/2抑制剂（PD98059）与单用AngⅡ处理组比较无此效应（P>0.05）。结论 在PVAT中ROS在介导AngⅡ诱导VSMCs增殖的通路可能为Nox/H2O2/HOCL/ERK1/2。     

氯硝柳胺对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究氯硝柳胺对人肾上腺皮质癌SW-13细胞株细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移力、侵袭力的影响.方法 通过体外培养SW-13细胞,采用CCK8法和iCELLigence实时无标记细胞增殖监测仪检测不同浓度氯硝柳胺对细胞增殖的影响;设对照组和氯硝柳胺组,流式细胞技术检测氯硝柳胺作用后SW-13细胞周期的变化,AO/EB染色法和Annexin V/PI染色流式细胞技术测定细胞凋亡率的变化,Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭、迁移能力的变化,Western blot(WB)法检测β-catenin/LRP6表达的变化.结果 不同浓度的氯硝柳胺分别作用SW-13细胞24、48、72、96、120 h后,呈时间和浓度依赖性抑制SW-13细胞增殖(F=157.93,P<0.001);流式细胞仪周期检测结果显示24、48、72 h后,与对照组相比氯硝柳胺组将SW-13细胞周期阻滞在G0/G1期(P=0.001、0.005、0.008);AO/EB染色法和Annexin V/PI染色法结果均显示氯硝柳胺组的凋亡率与对照组相比明显升高(P<0.001);Transwell实验结果示氯硝柳胺组SW-13细胞的侵袭力降低(P<0.001),细胞划痕实验结果显示氯硝柳胺组SW-13细胞的迁移能力下降(P=0.002),WB结果示氯硝柳胺组SW-13细胞β-catenin/LRP6的表达明显降低(P<0.001).结论 氯硝柳胺抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖,阻滞细胞周期,抑制侵袭及迁移能力,促进细胞凋亡;可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.     

地塞米松对小鼠MIN6细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨地塞米松对小鼠胰岛β细胞株MIN6细胞增殖和凋亡的影响.方法实验分对照组和不同浓度地塞米松(50,100,200,400,800 nmol/L)组诱导刺激MIN6细胞1～4 d,MTT法观察地塞米松作用后细胞的存活率;hochest/PI染色荧光显微镜观测细胞凋亡率.结果地塞米松作用1～4 d可明显抑制MIN6细胞的生长;>100 nmol/L组的地塞米松处理48 h后,细胞凋亡明显,凋亡率高达(30.44±4.52)%,与对照组比较差别有统计学意义(P<0.01),800 nmol/L组地塞米松使细胞由凋亡转向坏死.结论地塞米松对小鼠MIN6细胞增殖有明显影响,并能够引起MIN6细胞凋亡.     

AngⅡ对人脐静脉内皮细胞CGRP受体组分的调节差异

目的 探讨血管紧张素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中降钙素基因相关肽(CGRP)受体组分的影响。方法以HUVECs作为实验对象,用无血清培养基同步化24 h后,以Ang Ⅱ非处理细胞为对照组,AngⅡ处理组为不同剂量的AngⅡ处理HUVECs 12 h,流式细胞仪检测细胞增殖率和凋亡率。Western Blot检测CGRP三种受体组分,即降钙素受体样受体(CRLR)、降钙素受体组分蛋白(RCP)和受体修饰蛋白(RAMP)1的蛋白表达。结果与对照组相比,在处理组细胞,AngⅡ呈剂量依赖性地抑制HUVECs增殖和诱导细胞凋亡,同时上调CRLR表达(P<0.01)。而对另外两个受体蛋白而言,AngⅡ(0.01～100 nmol/L)呈剂量依赖性的下调HUVECs的RAMP1的表达和RCP表达(P<0.05)。结论AngⅡ影响人脐静脉内皮细胞CGRP受体组分的表达存在差异,可引起人脐静脉内皮细胞CGRP受体功能改变。     

不同浓度重组人促红细胞生成素对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的影响研究

目的　探讨不同浓度重组人促红细胞生成素（rhEPO）对高氧暴露下人肺泡Ⅱ型上皮细胞（A549细胞）功能的影响。方法　2017年1—12月,培养A549细胞,取对数生长期的A549细胞,将其随机分为对照组（将细胞置于37 ℃恒温的50 ml/L CO2培养箱中进行培养）、高氧组（以3 L/min速度通过900 ml/L O2和50 ml/L CO2高纯混合气,持续通气10 min,之后进行密闭培养）及10、20、50、100 U/ml rhEPO组（分别将细胞加入含10、20、50、100 U/ml rhEPO的培养基,之后预处理24 h,再用高氧诱导）,每组中包含8个复孔。24 h后,采用倒置相差显微镜观察各组细胞形态学变化,细胞增殖实验检测细胞增殖水平,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果　高氧组细胞间空隙较大,细胞受损明显,活细胞数量显著降低,悬浮细胞明显增多;10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞损伤改善,50、100 U/ml rhEPO组细胞形态学变化与对照组较为相似。高氧组及10、20 U/ml rhEPO组细胞增殖水平小于对照组（P<0.05）;10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于高氧组（P<0.05）;50、100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于10、20 U/ml rhEPO组（P<0.05）;100 U/ml rhEPO组细胞增殖水平大于50 U/ml rhEPO组（P<0.05）。高氧组及10、20 U/ml rhEPO组细胞凋亡率大于对照组（P<0.05）;10、20、50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于高氧组（P<0.05）;50、100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于10、20 U/ml rhEPO组（P<0.05）;100 U/ml rhEPO组细胞凋亡率小于50 U/ml rhEPO组（P<0.05）。结论　高氧抑制A549细胞增殖、促进A549细胞凋亡,而rhEPO可减轻这种作用,且50、100 U/ml rhEPO能有效抑制A549细胞发生损伤。