尼莫地平(nimodipine)对体外培养成骨细胞的影响

目的观察钙通道阻断剂--尼莫地平(nimodipine)对体外培养成骨细胞的作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第二继代成骨细胞(OB2)培养液中分别加入不同浓度(10-4～10-12g/ml)尼莫地平,分别观察OB2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示),分化功能[用碱性磷酸酶(ALP)活性表示]和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示).结果OD值(均值±sf标准差)为0.121±0.009～0.411±0.035;ALP活性(均数±标准差)为0.092±0.008U/mg蛋白质;矿化结节数量/视野(均数±标准差)为1.250±0.893个.结论与对照组比较,尼莫地平各浓度对OB2的增殖、分化和矿化功能作用各异.当尼莫地平浓度为10-9g/ml时,对OB2的增殖和分化功能具有刺激作用(p＜0.05),对OB2的增殖功能具有明显的抑制作用(p＜0.01);当浓度降低(10-11g/mi)时,对OB2的增殖功能失去作用(p＞0.05).     

长春新碱对体外培养成骨细胞的影响

目的　观察抗癌药物长春新碱对体外培养成骨细胞的作用。方法　在新生SD大鼠头颅骨次代成骨细胞 (OB2 )培养液中分别加入不同浓度 (10 -1～ 10 -9g/L)长春新碱 ,分别观察OB2 的增殖功能 (用波长 5 70nm处OD值表示 )、分化功能 [用碱性磷酸酶 (ALP)活性表示 ]和矿化功能 (用矿化结节数 /视野表示 )。结果　OD值实验组为 0 0 91± 0 0 0 5～ 0 2 97± 0 0 44 ,对照组为 0 34 7± 0 0 35 ;ALP(U/g蛋白质 )活性实验组为 77± 12 ,对照组为 81± 4;矿化结节数 /视野 (个 )实验组为 1 0±0 816,对照组为 1 5± 1 0。结论　从绝对数来看 ,各浓度长春新碱对OB2 的增殖、分化和矿化功能均具抑制作用。与对照组比较 ,长春新碱对OB2 增殖功能的抑制作用具有极显著性意义 (P <0 0 1)。     

降钙素对体外培养成骨细胞的影响

目的观察破骨细胞抑制剂--降钙素(密钙息)对体外培养成骨细胞的作用.方法在新生SD大鼠头颅骨第二继代成骨细胞(OB\-2)培养液中分别加入不同浓度(10-4～10-12g/ml)的密钙息,分别观察OB\-2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示),分化功能[用碱性磷酸酶(ALP)活性表示]和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示).结果OD值(均值+标准差)为0.323±0.101～0.523±0.158;ALP活性(均数±标准差)为(0.104±0.012)U/mg蛋白质;矿化结节数量/视野(均数±标准差)为5.75±0.957个.结论与对照组比较,适当浓度(10-8～10-12)的密钙息对OB\-2的增殖,分化和矿化功能均具有促进作用,10-10g/ml浓度密钙息作用尤其显著,它们的作用显著性差异为促进OB2增殖功能P＜0.05;促进OB2分化功能P＜0.01和促进OB2矿化功能P＜0.001.     

骨折愈合刺激素对体外培养成骨细胞的影响

目的　观察骨折愈合刺激素对体外培养成骨细胞的作用。方法　在新生SD大鼠头颅骨次代成骨细胞 (OB2 )培养液中分别加入不同浓度 (2× 10 2 U/L～ 2× 10 4U/L)骨折愈合刺激素 ,观察OB2的增殖功能 (用波长 5 70nm处OD值表示 ) ,取药物敏感浓度 (2× 10 2 U/L)分别观察分化功能〔用碱性磷酸酶 (ALP)活性表示〕和矿化功能 (用矿化结节数量 /视野表示 )。结果　OB2 增殖功能 (OD值 )实验组为 0 336± 0 0 73～ 0 35 9± 0 0 5 1,对照组为 0 347± 0 0 35 ;OB2 分化功能〔ALP(U/g蛋白质 )活性〕实验组为 83± 9,对照组为 81± 4 ;OB2 矿化结节数量 /视野 (个 )实验组为 6 0± 1 82 6 ,对照组为1 5± 1 0。结论　骨折愈合刺激素各浓度对OB2 的增殖和分化功能均无明显作用 (P >0 0 5 ) ,而对其矿化功能具有明显的刺激作用 (P <0 0 1)。     

Genistein对乳腺癌细胞致成骨细胞生物学功能改变的影响

目的 探讨Genistein对乳腺癌细胞致成骨细胞(osteoblast, OB)增殖、分化和矿化功能的影响,观察Genistein在乳腺癌骨转移的病理条件下是否能调节OB生物学功能.方法 源于大鼠颅盖骨的原代OB与50%来自人源性乳腺癌细胞系MDA-MB-231或MCF-7的条件培养基(conditioned medium,CM)共同培养,并加入5×10-7 mol/L (G7)、5×10-8 mol/L (G8)或5×10-9mol/L (G9) 的Genistein进行干预.MTT法观察其对OB增殖的影响;PNPP偶氮法观察其对OB碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性的影响;茜素红S(ARS)进行矿化结节染色并计算面积以观察其对OB矿化能力的影响.结果 MDA-MB-231和MCF-7细胞条件培养基可显著抑制OB的增殖.用Genistein干预1 d、3 d和5 d后,OB增值率可有不同程度的提高,差异有统计学意义(P<0.05).此外,乳腺癌细胞条件培养基可明显下调OB的ALP活性,而用不同浓度的Genistein干预后,OB的ALP活性分别较MDA-MB-231和MCF-7细胞条件培养基组增加22.7%、32.4%、63.5%和27.7%、32.0%、58.3%(P<0.05).Genistein还可改善乳腺癌细胞条件培养基对OB矿化能力的抑制,增加OB形成的矿化结节面积.结论 在乳腺癌骨转移的病理条件下,Genistein可促进OB的增殖、分化和矿化能力,改善乳腺癌细胞对OB生物学功能的抑制作用.     

异烟肼、利福平联合应用对体外培养成骨细胞生物活性的影响

目的研究不同浓度的异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)联合应用对大鼠成骨细胞(osteoblast,OB)增殖、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性、I型胶原蛋白表达和成骨细胞成熟与矿化能力的影响。方法分离、培养新生SD大鼠乳鼠颅骨OB,分别采用CCK-8法、碱性磷酸酶试剂盒检测ALP活性、免疫荧光染色法和茜素红染色法检测,观察不同浓度INH+RFP [(10+3)μg/mL、(20+6)μg/mL、(30+12)μg/mL、(40+24)μg/mL、(50+48)μg/mL]对成骨细胞增殖、ALP活性、Ⅰ型胶原蛋白表达以及矿化能力的影响。结果与对照组相比,当INH+RFP的浓度在(20+6)μg/mL及以上时,抑制大鼠OB增殖、I型胶原合成、使ALP活性及矿化能力显著下降(P0.05),且均随着浓度增加而加强抑制作用。结论 INH、RFP联合用药较低浓度对成骨细胞有抑制作用,因此,骨关节结核病灶清除术后,局部用药应该严格控制药物浓度。     

股密葆含药血清对高浓度地塞米松干预后成骨细胞增殖分化作用的影响

目的：观察股密葆含药血清对高浓度地塞米松干预后成骨细胞增殖分化的影响.方法：用多次酶消化法分离出生24 h内新生SD大鼠颅盖骨成骨细胞,P1代细胞进行实验.将不同浓度地塞米松（0、10-8、10-7、10-6、10-5、10-4 mol/L）干预成骨细胞,1周后进行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色,3周后进行矿化结节染色.根据上述实验结果,进一步选择10-5 mol/L地塞米松干预成骨细胞1周,继而改换空白鼠血清及高、中、低浓度股密葆含药血清培养基,培养1周后进行ALP染色,Western-blot检测Ⅰ型胶原及增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）表达,培养2周后进行矿化结节染色.结果：生理浓度地塞米松（10-8 moL/L）可促进成骨细胞ALP的表达及矿化结节产生,而高浓度地塞米松（10-7～10-4 mol/L）可抑制上述结果,股密葆含药血清可逆转高浓度地塞米松对成骨细胞ALP、矿化结节、Ⅰ型胶原及PCNA的抑制作用.结论：高浓度地塞米松可抑制成骨细胞增殖分化,而这种抑制作用可被股密葆含药血清逆转.     

脱氢表雄酮对离体大鼠成骨细胞代谢和一些细胞因子的影响

目的 研究脱氢表雄酮(DHEA)促进成骨细胞(OB)增殖的作用和机制.方法 体外分离培养大鼠OB,取传一代细胞,分别给予10-5、10-7、10-9,mmol/L DHEA培养72 h,以10-8mmol/L雌二醇(estradiol,E2)为阳性对照,另设空白对照组.以细胞形态学和碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定.应用光镜、四唑盐(MTT)法检测细胞的生长和增殖.茜素红染色观察成骨细胞矿化结节形成功能;同时双抗体夹心ABC-ELISA法测定不同浓度DHEA培养液中对VEGF、OPG、TGF-β、IL-1β和GM-CSF浓度的影响.结果 不同浓度DHEA组OB增殖能力均有上升,其中以10-7mmol/L DHEA组最显著(P＜0.01),其作用和E2相似(P＞0.05);不同浓度DHEA组ALP的活性均升高,亦以10-7 mmol/L DHEA组最显著(P＜0.01),10-7、10-9mmol/L DHEA的作用和E2和相似(P＞0.05);10-9mmol/L DHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组(P＜0.05).不同浓度DHEA组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P＜0.01),其作用和E2相似.在低浓度DHEA组的培养中对OPG、TGF-β1、VEGF的反应呈上升趋势与对照组有显著差别与0B增殖能力呈正相关;在高浓度DHEA组的培养中对IL-1β、GM-CSF的反应呈下降趋势与对照组有显著差别与OB增殖能力呈负相关.结论 DHEA能够促进大鼠OB生长和增殖,其作用可能与刺激OPG、TGF-β、VEGF;抑制IL-1β,GM-CSF途径有关.     

梯度糖溶液对体外培养成骨细胞影响的实验研究

目的：探讨梯度高糖对体外培养成骨细胞（osteoblast，OB）的影响。方法：采用胰蛋白酶-Ⅱ型胶原酶消化法从1～2日龄SD大鼠颅盖骨中分离出OB，倒置显微镜下及HE染色观察其形态，碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALPase）染色法、钙化结节染色、Vam—Gieson染色鉴定细胞后用不同浓度的糖溶液加入到成骨细胞培养体系中，作用不同时间，应用MTT比色法、ALPase含量测定、矿化结节形成量等来检测其对成骨细胞增殖和成骨能力的影响。结果：不同浓度的糖溶液在OB培养48h时具有明显的促进增殖作用，但〉15mmol／L的溶液在72h时则呈抑制效应，其中以≤15mmol／L的糖溶液在培养早期有显著促进作用（P〈0．05或P〈0．01），而在培养较长时也无明显抑制效应；≥30mmol／L的糖溶液在OB培养7d时显著抑制ALPase的分泌（P〈0．05）；≥10mmol／L的糖溶液在培养18d时对矿化结节的形成也具有明显的延迟效应；〈10mmol／L的糖溶液对OB分泌ALPase及矿化结节形成无抑制作用。结论：高糖可影响OB增殖、分化与矿化能力，OB增殖耐受的糖浓度为≤15mmol／L，OB分化与矿化过程耐受的糖浓度为〈10mmol／L。     

锶盐对高浓度地塞米松作用下大鼠成骨细胞的影响

目的 探讨雷奈酸锶(Sr)对高浓度地塞米松(Dex)作用下大鼠成骨细胞（OB)的影响。方法 采用大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)来源的成骨细胞,运用MTT试剂盒和AKP试剂盒分别测定Sr对细胞增殖和分化的影响,定量PCR方法测定Sr对高浓度地塞米松作用下成骨钙素（OC)和转化生长因子-β(TGF-β)表达的影响。结果 Sr浓度在10-5、10-4 mol/L时,能够促进OB增殖和分化(P < 0. 01); Sr浓度为10-4mmol/L能够有效拮抗高浓度Dex( 10-5 mol/L)对成骨细胞分化抑制作用（P <0.01),并能逆转Dex对成骨相关基因OC和TGF-β的抑制作用(P <0. 05,P <0. 01)。结论 Sr能够对大鼠BMSCs来源的成骨细胞的增殖、分化有促进作用,同时10-4 mol/L Sr可以拮抗Dex( 10-5 mol/L)对ALP和成骨相关基因的抑制作用。为Sr防治糖皮质激素性骨质疏松提供了细胞学依据。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。