改良的人脐带间充质干细胞培养方法

目的:建立人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)的分离和培养方法,探讨hUCMSCs的成脂成骨分化潜能。方法:用酶消化法、传统组织块法和改良组织块法从人脐带中分离间充质干细胞,流式细胞仪检测其免疫表型;用不同的培养体系诱导hUCMSCs向成骨细胞及成脂细胞分化,并对其进行鉴定。结果:改良的hUCMSCs培养方法培养细胞纯度更高,在相同的培养时间内,改良组织块法所获得的细胞数量是酶消化法的2～3倍,是传统组织块法的20～30倍,细胞呈长梭形生长;高表达CD73、CD90、CD44、CD105,不表达CD31、CD45、CD34;茜素红染色及油红O染色证实了hUCMSCs可分化为脂肪细胞和成骨细胞。结论:建立了hUCMSCs的培养新方法,证实了hUCMSCs的增殖能力和多向分化潜能,为其治疗应用提供支持。     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

人脐带间充质干细胞的分离、鉴定及向肝细胞的定向诱导分化

目的 分离纯化人脐带间充质干细胞(UCMSCs),探讨UCMSCs是否能在体外条件下被诱导成为肝细胞样细胞.方法 无菌条件下采集健康新生儿脐带,采用胰酶、胶原酶顺序消化法分离单个细胞,通过贴壁培养方法分离纯化间充质干细胞(MSCs).从形态、表面抗原、成脂肪细胞和成骨细胞分化潜能三方面进行鉴定.随后通过细胞因子诱导的方法将间充质干细胞诱导为肝细胞样细胞.结果 从人脐带中成功分离纯化得到UCMSCs,细胞呈纤维状;表达CD44、CD105、CD73、CD90,不表达与造血细胞和内皮细胞相关的CD34、CD45、CD31等标志物,不表达与移植物抗宿主病相关的HLA-DR等分子;在不同细胞因子作用下,可以被诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和卵圆形肝细胞样细胞.结论 人脐带中含有较丰富的MSCs,在体外条件下可以被诱导为肝细胞样细胞.     

间充质干细胞向肝细胞分化研究

目的探讨间充质干细胞在体外诱导分化为肝细胞后,细胞增殖能力和免疫抑制能力等干细胞生物学的改变。方法间充质干细胞在体外进行向肝细胞诱导分化培养,分化为具有部分成熟肝细胞功能的肝细胞样细胞,并对这些肝细胞样细胞继续培养。流式细胞仪检测细胞表型,BrdU法检测细胞增殖能力,与CD4⁺T淋巴细胞共孵育实验检测细胞免疫抑制实验。结果间充质干细胞分化为肝细胞后,虽然具备了部分成熟肝细胞的功能,亦丧失了间充质干细胞本身的一些特性;BrdU法测增值能力,其OD值从1.859±0.117降到1.24±0.103,抑制CD4+T细胞激活的能力从94.8%(100%-5.2%)降到68.8%(100%-31.2%)等;而且分化后的细胞处于不稳定的分化状态,继续培养后,其细胞生物学相关特性和功能均出现去分化的现象,比如增殖能力恢复到OD值为1.501±0.229,免疫抑制能力恢复到81.8%(100%-18.2%)。这种不稳定的状态,进入体内后,是否会增加突变或致癌的概率,仍需进一步的研究。结论间充质干细胞比其向肝细胞诱导分化后的细胞更具安全性,更适合肝病治疗。     

大鼠脂肪间充质干细胞与壳聚糖支架体外联合培养

目的采用大鼠脂肪间充质干细胞与壳聚糖支架体外联合培养为颅脑损伤大鼠模型神经修复提供种子细胞。方法取SD大鼠附睾周围脂肪组织,分离培养脂肪间充质干细胞,传至第3代流式细胞仪检测细胞表面标记CD29、CD90、CD44表达;冻干燥法制备壳聚糖支架材料,再取第5代细胞以2×106/m L的密度接种于壳聚糖三维支架上,促进其向神经元和胶质细胞方向分化;免疫荧光染色鉴定细胞分化结果。结果分离培养的脂肪间充质干细胞表面标记CD29、CD90、CD44阳性表达率分别为91.05%、92.76%、96.56%,达到理想的纯度;制备的壳聚糖三维支架具有合适的三维多孔结构;培养基诱导7 d左右可见检测神经细胞特异性标志(巢蛋白和β-tubulinⅢ)的表达,分化后的大部分细胞呈现典型的神经元样改变,细胞伸出细长突起或网状突起,可见较多的细胞形成网络连接。免疫荧光染色鉴定结果证实,神经球高表达巢蛋白(Nestin)阳性率(65.23±0.98)%,分化细胞β-tubulinⅢ阳性率(62.35±5.71)%,微管相关蛋白2(MAP2ab)阳性率(12.87±2.63)%。结论大鼠脂肪间充质干细胞联合壳聚糖支架培养可在体外培养得到较高比例神经细胞特异性标志的Nestin及β-tubulinⅢ阳性细胞,并有一定比例MAP2ab阳性细胞出现,该特异性标志表达的细胞用于大鼠颅脑外伤模型神经修复实验。     

铜绿假单胞菌感染后人脐带间充质干细胞对A549细胞凋亡的保护作用研究

目的观察感染状态下应用人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)对A549细胞凋亡起到的保护作用。方法无菌条件下从胎儿脐带和壁蜕膜组织中采集hUCMSCs标本,接种铜绿假单胞菌(PA)于A549细胞以建立A549细胞损伤模型,分析PA对A549细胞凋亡的影响及hUCMSCs对细胞凋亡的保护。结果经PA感染后,导致A549细胞生长缓慢、老化,细胞空泡化;感染状态下A549细胞SP-A表达水平下降,与未感染A549细胞相比差异明显(t=7.745,P=0.001);感染A549细胞接种hUCMSCs后,SP-A表达水平上调,与感染组相比差异明显(t=3.872,P=0.017);PA感染后A549细胞凋亡率加快,存活率降低,接种hUCMSCs后A549细胞凋亡率下降,存活率上调。结论 A549细胞在PA感染状态下通过接种hUCMSCs,可起到修复细胞损伤,抑制细胞凋亡的作用。     

人脐血间充质干细胞分离培养方法的优化

目的探索脐血来源的间充质干细胞体外分离培养的更优方法。方法无菌条件下抽取正常足月剖宫产胎儿的脐带血,肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离脐血单个核细胞。50份脐血分为对照组和改良组,每组25份,分别以1.5×10^7/ml的细胞密度接种于25 cm^2培养瓶中。对照组贴壁3 d后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液;改良组贴壁0.5 h后弃上清,去除未贴壁细胞,更换新鲜培养液。结果对照组杂细胞较多,最终成功培养出8份脐血间充质干细胞;改良组杂细胞较少,最终成功培养出18份脐血间充质干细胞。经流式细胞仪检测脐血间充质干细胞的免疫表型,结果显示,所培养出的脐血间充质干细胞不表达或极弱表达CD34、CD106等造血细胞标志,稳定地高表达CD29、CD44、CD105等间充质细胞相关的表面抗原标记物。结论采取脐血单个核细胞贴壁0.5 h弃上清更换新鲜培养液可以明显提高脐血间充质干细胞的培养成功率,其结果优于脐血单个核细胞贴壁3 d弃上清更换新鲜培养液。     

脐带间充质干细胞移植对肠辐射损伤模型鼠治疗作用的实验研究

目的 探讨脐带间充质干细胞移植对小鼠肠道损伤的治疗作用,为人急性肠型放射病的治疗寻找可靠的供体来源。方法 体外诱导观察间充质干细胞的体外多向分化能力。对肠道放射损伤模型鼠移植CM-D iI荧光标记后的人间充质干细胞,组化染色观察肠道粘膜的病理变化,激光共聚焦显微镜观察供体细胞在模型鼠肠道粘膜的定位。结果 移植MSC5周后模型鼠的一般状况和肠道病理学表现明显改善,荧光示踪发现移植细胞分布于肠粘膜淋巴组织内和腺上皮细胞间,提示MSC可能参与了肠道粘膜的修复过程。结论 脐带间充质干细胞移植可以明显改善模型鼠的肠道病变,有望用于人急性肠型放射病的治疗。     

活性维生素D对亚砷酸钠致SD大鼠肝纤维化损伤的保护作用

目的 探讨活性维生素D(vitamin D,VD)对亚砷酸钠(NaAsO₂)致SD大鼠肝纤维化损伤的保护作用。方法 健康初断乳SD大鼠18只,雌雄各半,按随机数字表法分为对照组(10 mL/kg生理盐水灌胃)、NaAsO₂染毒组(10 mg/kg NaAsO₂灌胃)、骨化三醇(VD₃的生物活性代谢物)干预组(10 mg/kg NaAsO₂灌胃,自第12周后NaAsO₂灌胃的同时给予1.0μg/kg骨化三醇灌胃),6 d/周,连续36周,每周称量并记录大鼠体重。采用酶联免疫吸附法检测各组大鼠血清25-羟维生素D₃ [25(OH)D₃]含量及肝纤维化相关蛋白透明质酸(hyaluronic acid, HA)、层黏连蛋白(laminin, LN)、Ⅲ型前胶原氨基端肽(procollagenⅢN-terminal peptide, PⅢNP)、Ⅳ型胶原(Ⅳcollagen, COL-Ⅳ)的分泌水平;HE染色观察各组大鼠肝...     

人外周血淋巴细胞体外乙酸铅染毒后氧化应激损伤研究

目的 研究乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞致氧化应激与DNA氧化损伤情况。
方法 分别用浓度为0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L和80 μmol/L的乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞6 h、12 h、24 h, 应用2', 7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色分析和流式细胞仪检测染毒后细胞内活性氧类(ROS)水平, 高度水溶性四唑盐(WST-1)法检测染毒后细胞内总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性, 酶联免疫吸附测定法(ELISA)试剂盒检测染毒后细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平, 并对ROS、T-SOD、8-OHdG三指标间的关系进行相关性分析。
结果 乙酸铅染毒6 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01);20 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平与对照组相比, 差异无统计学意义(P>0.05), 而40 μmol/L和80 μmol/L染毒组人外周血淋巴细胞T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。乙酸铅染毒12 h和24 h后, 各染毒组人外周血淋巴细胞ROS、T-SOD和8-OHdG水平均高于对照组, 差异有统计学意义(P < 0.01)。相关性分析显示, 细胞内ROS含量与T-SOD活性呈负相关(r_{6 h}=-0.865、r_{12 h}=-0.890、r_{24 h}=-0.801, P < 0.01), 与8-OHdG含量呈正相关(r_{6 h}=0.840、r_{12 h}=0.829、r_{24 h}=0.866, P < 0.01)。
结论 乙酸铅染毒人外周血淋巴细胞后会诱导细胞ROS生成, 抑制细胞内抗氧化酶SOD活性, 造成人外周血淋巴细胞氧化应激状态增强和DNA氧化性损伤。
     

株洲市硬质合金生产企业工人肺功能状况调查

目的 了解株洲市硬质合金生产企业作业工人肺功能现状,探索硬质合金粉尘对作业工人肺功能的影响,对硬质合金生产企业工人在岗职业健康检查项目设置进行初步探讨。 方法 2016年选取湖南省株洲市2家硬质合金生产企业的426名作业工人作为研究对象,通过问卷调查收集作业工人的基本信息、职业史等;对作业工人进行肺功能检查。按照接尘与不接尘分为暴露组与对照组,暴露组根据暴露粉尘性质分为烧结前、烧结及烧结后两组,了解株洲市硬质合金生产企业各工种肺功能现状。 结果 暴露组与对照组肺功能检查结果均在正常值范围内;控制抽烟、年龄及工龄等混杂因素,与对照组相比,暴露组肺通气功能指标VC/预计值、FVC/预计值、FEV₁/预计值均显著下降(分别t=-5.69,P<0.001;t=-6.54,P<0.001;t=-6.24,P<0.001);FEV₁/FVC值显著增高(t=8.068,P<0.001),暴露组MEF_25%/预计值显著增高(t=2.79,P=0.005),MEF_50%/预计值、MMEF/预计值与对照组相比,差异无统计学意义(t=-0.98,P=0.327;t=0.815,P=0.416)。烧结及烧结后工种与烧结前工种作业工人肺小气道功能指标相比较,MEF_25%/预计值、MEF_50%/预计值和MMEF/预计值均显著升高(分别t=-2.177,P=0.030;t=-2.038,P=0.042;t=-2.321,P=0.021)。 结论 硬质合金生产企业钨钴粉尘及硬质合金粉尘可导致肺通气功能指标改变;肺小气道功能指标或可成为硬质合金粉尘早期肺损伤的敏感指标;肺小气道功能检查应作为在岗职业健康检查必检项目。     

blaNDM和mcr-1～ mcr-5基因在中国不同标本中的分布

目的 了解碳青霉烯类耐药基因(blaNDM)和多粘菌素耐药基因(mcr)在中国不同地区不同类型标本中的分布特征,为抗生素耐药的监督与控制提供理论依据.方法 2015-2020年在中国不同地区的城村养殖场及人烟稀少的高原牧区共采集人、家畜家禽、禽类屠宰环境和野生动物标本4324份,对标本进blaNDM和mcr基因的检测和...     

血清黑色素瘤细胞黏附分子在诊断肝细胞肝癌中的临床价值

目的评价与探讨血清人黑色素瘤细胞黏附分子(melanoma cell adhesion molecule, MCAM)在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达及其诊断HCC的价值。 方法采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorben assay, ELISA)检测2013年11月至2015年2月在上海市第十人民医院和瑞金医院住院的83例HCC患者和85名健康人血清MCAM、白细胞分化抗原(cluster of differentiation, CD)₁₆₆水平,并用Spearman分析MCAM与丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、胆汁酸(total bile acid,TBA)、总蛋白(total protein, TP)、甲胎蛋白(alpha fetal protein,AFP)诊断HCC的相关性;同时,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic, ROC)曲线评价MCAM诊断HCC的特异度和敏感度。 结果血清MCAM、CD₁₆₆、AFP在健康对照组分别为(2 776.8±25.8)ng/L、(222.6±74.9) ng/L、(21.7±9.6) μg/L,在HCC组分别为(20 453.3±110.2) ng/L、(5 702.0±99.0) ng/L、(275.7±83.4) μg/L。两组的MCAM与CD₁₆₆或MCAM与AFP均相关(r值分别为0.875、0.858,P均<0.001)。HCC组中γ-GT、TBA、ALP、ALT、AST、TP分别为(120.8±10.0)IU/L、(123.6±24.8)μmol/L、(158.2±15.4)IU/L、(69.3±8.3)IU/L、(135.7±12.8)IU/L、(67.3±8.7) μg/L。经Spearman分析,血清MCAM升高与CD₁₆₆升高和肝功能降低(ALT、AST、ALP、γ-GT、TBA)均呈正相关(r值分别为0.875、0.407、0.831、0.456、0.670、0.685,P均<0.001)。以血清MCAM的ROC曲线下面积(area under curve,AUC)0.940,确定其最佳临界值为2 397.6 μg/L时,诊断HCC的敏感度为90.4%(152/168例),特异度94.1%(158/168例);血清MCAM、CD₁₆₆和AFP联合检测HCC的ROC曲线的AUC为0.984(95%CI 0.969~1.000)、敏感度为98.8%(160/168例)、特异度为94.1%(158/168例)。AFP、MCAM单项检测和MCAM联合CD₁₆₆检测的ROC曲线的AUC、敏感度和特异度分别为0.931(95%CI 0.887~0.974)、89.2%(150/168例)、94.1%(158/168例), 0.940(95%CI 0.900~0.981)、90.4%(152/168例)、94.1%(158/168例),0.976(95%CI 0.955~0.998)、97.6%(164/168例)、92.9%(156/168例)。 结论血清MCAM诊断HCC具有高敏感度和特异度,有能可成为诊断HCC的新指标,但需扩大样本量进行严格验证。AFP、MCAM单项检测和MCAM联合CD₁₆₆检测都对辅助诊断HCC有临床应用价值。     

非小细胞肺癌动态增强磁共振成像参数与血清PCNA、Survivin及VEGF表达的相关性研究

目的:研究分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者动态增强磁共振成像(DCE-MRI)定量参数与血清增殖细胞核抗原(PCNA)、凋亡抑制蛋白(Survivin)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的相关性.方法:选取医院收治的137例NSCLC患者纳入观察组,另选同期进行体检的137名健康者纳入健康对照组.采用磁共振扫描仪...     

1995-2017年贵州省HIV/AIDS病例死亡情况分析

  目的  了解1995-2017年贵州省艾滋病病毒感染者/艾滋病患者(human immunodeficiency virus/acquired immuno deficiency syndrome,HIV/AIDS)的死亡分布情况。  方法  通过"艾滋病综合防治信息系统",下载HIV/AIDS病例报告卡(现住址为贵州省、截止时间至2017年12月31日),对其中的信息进行统计分析。  结果  1995-2017年共报告现住址为贵州省的HIV/AIDS 43 794例,死亡11 527例,排除失访及查无此人病例,全省HIV/AIDS死亡率为29.8%;HIV/AIDS当年发病当年死亡病例数、年初存活当年死亡病例数占当年发病总病例数的比例在1995-2017年均呈现出由低到高(χ_1995-20122=139.5,P < 0.001;χ_1995-20122=109.1,P < 0.001)再降低(χ_2012-20152=28.2,P < 0.001;χ_2012-20142=57.2,P < 0.001),最终逐渐趋于平稳(χ_2015-20172=0.056,P=0.812;χ_2015-20172=0.720,P=0.396)的变化趋势;分析死亡病例的检测史,辅助T淋巴细胞(cluster of differentiation 4,CD4)检测比例(χ_趋势2=367.4,P < 0.001)及抗病毒治疗比例(χ_趋势2=319.8,P < 0.001)均呈逐年上升的趋势;死因分析发现,死因为艾滋病所占的比例呈现出先上升(χ_1995-20102=78.5,P < 0.001)后下降(χ_2010-20122=1 667.5,P < 0.001)的趋势;而死因为吸毒过量所占的比例呈现逐年下降(χ_趋势2=14.4,P < 0.001)的趋势。  结论  近年来贵州省HIV/AIDS的死亡率依然较高、下降速度缓慢,继续扩大HIV监测检测覆盖面,积极推广CD4+T淋巴细胞检测及免费抗病毒治疗以降低HIV/AIDS的死亡率仍是今后一段时间贵州省艾滋病防治工作在的重点之一。     

经鼻高流量加温湿化氧疗联合布地奈德气雾剂对急性呼吸衰竭患者呼吸动力学及氧代谢的影响

目的:观察经鼻高流量加温湿化氧疗(HFNC)联合布地奈德气雾剂对急性呼吸衰竭(ARF)患者呼吸动力学及氧代谢的影响,以指导ARF治疗方案的优化.方法:选取在医院治疗的80例ARF患者,按照随机数表法将其分为观察组和对照组,每组40例.对照组给予常规治疗+布地奈德气雾剂,观察组在对照组治疗基础上给予HFNC,均连续治疗1...     

二氧化硅扰乱P2X7离子通道介导NLRP3炎性小体依赖的巨噬细胞焦亡在矽肺发病中的作用

目的 利用稳定表达凋亡相关斑点样蛋白(ASC)的小鼠巨噬细胞系(RAW-ASC)构建巨噬细胞焦亡体外模型,深入探讨不同粒径二氧化硅(SiO₂)粉尘诱导核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体依赖的巨噬细胞焦亡机制及其在矽肺发病中的潜在作用。方法 以脂多糖(LPS,1 μg/ml)预处理RAW-ASC巨噬细胞6 h,纳米(100 μg/ml)或微米(750 μg/ml)SiO₂粉尘暴露4 h,构建巨噬细胞焦亡体外模型,同时匹配空白对照组、LPS预处理组和焦亡阳性对照组(1 μg/ml LPS预处理6 h后,3 mmol/L ATP处理4 h),检测各组细胞活性、增殖能力、破裂状况和焦亡相关蛋白表达情况。针对离子通道和焦亡通路相关靶点,分别加入NLRP3抑制剂和嘌呤能P2X7受体(P2X7)拮抗剂,评估SiO₂诱发焦亡改变。结果 与对照组相比,纳米和微米SiO₂粉尘均可减弱巨噬细胞活力并抑制细胞增殖,还可促进细胞裂解,使细胞外乳酸脱氢酶(LDH)(纳米组:t=78.906,P<0.001; 微米组:t=8.123,P<0.001)、细胞内活性氧(ROS)(纳米组:t=5.662,P<0.001; 微米组:t=11.761,P<0.001)和钙离子(Ca²⁺)(纳米组:t=13.224,P<0.001; 微米组:t =40.733,P<0.001)水平升高,加速ATP耗竭(纳米组:t =4.898,P<0.001; 微米组:t =6.029,P<0.001),上调焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、Gasdermin D(GSDMD)和白介素-1β(IL-1β)表达(纳米SiO₂组:t=5.476,P =0.008; t=5.846,P=0.017; t=8.078,P=0.006; t=8.420,P=0.004; t=5.361,P=0.003; 微米SiO₂组:t=4.411,P=0.013; t=6.154,P=0.015; t=7.188,P=0.002; t=14.265,P<0.001; t=8.574,P<0.001)。加入NLRP3抑制剂或P2X7拮抗剂后,NLRP3蛋白表达水平下调(纳米组:t=3.894,P=0.007; t=13.954,P<0.001; 微米组:t=2.470,P=0.034; t=13.263,P<0.001)。结论 纳米和微米级SiO₂粉尘暴露均可抑制巨噬细胞活性和增殖能力,扰乱P2X7离子通道对ATP的传递能力,诱发NLRP3依赖巨噬细胞焦亡,相关过程可能是矽肺发病的重要环节。     

Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用

目的 探索Gadd45β和Gadd45γ在亚砷酸钠所致的MIHA细胞周期改变中的作用,为砷中毒的人群防治提供依据。方法 收集贵州省兴仁县雨樟镇交乐病区砷中毒人群以及格沙屯正常人群分别作为砷中毒组和对照组,实时荧光定量PCR检测各组人群Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平。同时,分别以不同剂量亚砷酸钠、不同时间处理MIHA细胞,流式细胞术测定细胞周期改变情况,实时荧光定量PCR和免疫印迹法分别检测Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平和蛋白表达情况。在上述实验基础上,针对Gadd45β和Gadd45γ基因分别设计的siRNA作用于染砷的MIHA细胞,反向验证Gadd45β和Gadd45γ基因在砷致细胞周期改变过程中的影响。统计学分析采用独立样本t检验比较两组间差异,采用单因素方差比较多组间差异。结果 人群实验研究发现,与对照组相比,砷中毒患者Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA表达水平升高（t = 2.576,P = 0.011;t = 2.312,P = 0.022）;MIHA细胞中,随亚砷酸钠染毒剂量、染毒时间增加,细胞G2/M期比例明显升高（F剂量 = 340.136,P＜0.001;F时间 = 49.194,P＜0.001）;在相对较低亚砷酸钠浓度（低于20 μmol/L）、一定时间内（低于48 h）Gadd45β和Gadd45γ基因mRNA和蛋白表达水平随染砷剂量、染砷时间升高而升高,超过该浓度范围和作用时间后,出现表达下降的现象（Gadd45β:F剂量-蛋白 = 37.568,P＜0.001;F剂量- mRNA = 9.771,P＜0.001;F时间-蛋白 = 61.144,P＜0.001;F时间- mRNA = 46.366,P = 0.001;Gadd45γ:F剂量-蛋白 = 12.989,P = 0.001;F剂量- mRNA = 23.613,P＜0.001;F时间-蛋白 = 27.425,P＜0.001;F时间- mRNA = 37.969,P＜0.001）。转染siRNA分别下调Gadd45β和Gadd45γ的表达后,细胞周期都出现G2/M期比例下调（t = 3.053,P = 0.038;t = 14.47,P＜0.001）。结论 砷致Gadd45β和Gadd45γ基因表达水平升高在其诱导MIHA细胞出现G2/M期阻滞过程中发挥重要作用。     

50 Hz工频电磁场致职业暴露人群短时记忆力降低与外周血中Aβ1-42蛋白浓度关系的研究

  目的  研究50 Hz工频电磁场致职业暴露人群短时记忆力降低与外周血中Aβ_1-42(beta-amyloid peptide 1-42)蛋白浓度的关系。  方法  选取51名火电厂电气运行人员为暴露组,26名同厂行政办公人员为对照组,两组人员均进行短时记忆力测试,同时测定外周血中Aβ_1-42蛋白浓度,比较两组中相关指标的差异及相关性。  结果  暴露组8 h时间加权平均电场强度为1.690 kV/m,磁场强度为4.578 μT。对照组8 h时间加权平均电场强度为0.008 kV/m,磁场强度为0.026 μT。两组人员数字跨度得分暴露组低于对照组(t=3.702,P < 0.001);暴露组失眠出现率(15.69%)和记忆力减退出现率(21.57%)均高于对照组(均有P < 0.05);三项情感状态指标得分暴露组低于对照组:愤怒-敌意(t=2.239,P=0.028)、疲劳-惰性(t=2.024,P=0.047)、困惑-迷茫(t=2.489,P=0.015);外周血中Aβ_1-42蛋白浓度(pg/mL)暴露组高于对照组(t=-2.414,P=0.018)。数字跨度得分与Aβ_1-42蛋白浓度的变化并未发现相关关系(r=-0.173,P=0.133)。  结论  50 Hz工频电磁场可致职业人群短时记忆力损伤,并引起外周血中Aβ_1-42蛋白浓度变化,但两者之间是否存在因果关系尚需进一步研究确定。     

移植人脐带间充质干细胞治疗缺氧缺血性脑损伤的两种方法比较

目的比较人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)经颈静脉及经腹腔两种途径移植后在缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)新生大鼠脑内的分布、分化情况,寻找简单易行且有效的移植途径。方法 RICE法制备7日龄新生大鼠HIBD模型,随机分组:HIBD组(n=10)、腹腔移植组(n=15)、颈静脉移植组(n=15),另随机取未造模的10只为正常对照组。造模后72h后分别对颈静脉移植组和腹腔移植组移植等量的hUCMSCs(1×106个/只),而HIBD组及正常对照组不移植。于移植后36d免疫荧光染色比较Dil标记的hUCMSCs移植后在各组大鼠脑中的分布情况;神经元前体细胞标记DCX特异性染色观察hUCMSCs移植后分化成神经元前体细胞的情况。结果移植后hUCMSCs能迁徙到脑组织中,能分化成神经元前体细胞。经颈静脉移植途径优于经腹腔移植(P0.01)。结论 hUCMSCs移植后可以在HIBD新生大鼠脑内存活,并向神经元前体细胞分化,对HIBD新生大鼠脑功能有修复作用,尤以经颈静脉移植明显。