siRNA沉默c-FLIP对K562/ADR耐药性的影响

目的：探讨c-FLIP siRNA干扰c-FLIP mRNA水平对阿霉素耐药细胞K562/ADR的耐药性的影响及作用机制。方法应用siRNA干扰的方法抑制K562及K562/ADR细胞c-FLIP的表达,通过荧光定量PCR的方法检测c-FLIP mRNA表达及对多药耐药基因MDR1 mRNA水平的影响。MTT法检测c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞增殖的影响,Annexin V/7-ADD双染研究c-FLIP干扰与否对K562及K562/ADR细胞凋亡的影响。结果与阴性siRNA转染组相比较,c-FLIP siRNA转染下调K562细胞中c-FLIP的mRNA后,K562细胞增殖受到一定程度的抑制(P<0.05),但是并未显著诱导细胞凋亡,c-FLIP干扰与否K562细胞48 h增殖率分别为(69.14±1.82)%和(60.69±2.23)%,凋亡率分别为(1.7±0.3)%和(1.8±0.2)%。与阴性siRNA转染组相比较, c-FLIP siRNA转染抑制K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA后,K562/ADR细胞增殖显著被抑制(P<0.05),并显著诱导了细胞凋亡增加(P<0.05),c-FLIP干扰与否K562/ADR细胞48 h增殖率分别为(-6.07±0.71)%和(-37.45±3.53)%,凋亡率分别为(5.2±0.4)%和(9.2±0.4)%。并且c-FLIP siRNA下调c-FLIP mRNA水平后,K562/ADR细胞中的多药耐药基因MDR1的mRNA表达水平也被显著下调(P<0.05)。结论 c-FLIP siRNA下调K562/ADR细胞中c-FLIP的mRNA水平抑制了多药耐药基因MDR1的表达,从而抑制了K562/ADR细胞对阿霉素的耐药性。     

人参皂苷Rg1对阿霉素诱导系膜细胞凋亡的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对阿霉素毒性诱导的人肾小球系膜细胞(HRMC)凋亡的影响及其可能的调控机制。方法:实验分为5组:正常对照组、模型组及低、中、高剂量人参皂苷Rg1与阿霉素共孵育干预组。HRMC培养24 h后采用CCK-8法检测细胞的存活率,流式细胞术Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率,Real-Time PCR检测HRMC细胞凋亡相关基因Bcl-2、caspase-3相对表达水平。结果:阿霉素可显著诱导HRMC凋亡;中、低剂量的人参皂苷Rg1可减少HRMC的凋亡率,并可上调Bcl-2基因水平下调caspase-3水平;高剂量的人参皂苷Rg1促进HRMC的凋亡,在降低Bcl-2表达的同时caspase-3呈高表达。结论:阿霉素具有直接的肾毒性作用。通过增加Bcl-2和抑制caspase-3的表达,低、中剂量的人参皂苷Rg1可有效抑制阿霉素诱导的系膜细胞凋亡,且中剂量效果显著。     

人参皂苷 Rh2抗白血病多药耐药细胞 K562/VCR作用研究

目的 通过观察人参皂苷 Rh2对人白血病多药耐药 (MDR) 细胞 K562/VCR 生长、凋亡的作用和逆转耐药的情况,探索该药在抗人白血病 MDR 方面的应用价值。方法 将人参皂苷Rh2与 K562、K562/VCR 细胞共培养 48 h 后采用 MTT法分析其对细胞生长的抑制率;将其与 K562/VCR 细胞于 37 ℃ 孵育 30 min 后,采用 Annexin V 和 PI 双染法在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况;并观察其对 K562/VCR 细胞摄取柔红霉素 (DNR) 能力及细胞表面 P-糖蛋白 (P-gp) 表达的影响;在 DNR 与 K562/VCR 培养体系中加入不同质量浓度人参皂苷Rh2,孵育 48 h 后观察人参皂苷Rh2对 K562/VCR细胞耐药的逆转情况。结果 人参皂苷Rh2 可明显抑制 K562 和 K562/VCR 细胞的生长,并呈量效关系,人参皂苷Rh2对 K562 和 K562/VCR 的半数抑制浓度 (IC50) 分别为44.5、59.4 μg/mL。K562/VCR 经人参皂苷Rh2 在 37 ℃ 作用 30 min 后,细胞的凋亡明显增加,随人参皂苷Rh2质量浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加［人参皂苷 Rh2 300 μg/mL,Annexin V+ 细胞 (51.5±6.9)%］。K562 细胞经长春新碱 (VCR) 诱导耐药后,P-gp 表达率明显提高 (从 4.28% 到 93.80%),DNR 摄取率减少,25 μg/mL 以上质量浓度的人参皂苷Rh2即可明显提高 K562/VCR 对 DNR 的摄取,但 P-gp 的表达无明显改变。同时,它可明显提高 DNR 对 K562/VCR 的杀伤率,50 μg/mL 人参皂苷 Rh2 可使 K562/VCR 对 DNR 的敏感性提高到原来的 6.30 倍。 结论 人参皂苷 Rh2 能抑制 K562/VCR 细胞生长,诱导其凋亡,还可以逆转 K562/VCR 的耐药,是一种具有广阔开发前景的抗白血病药物。     

DC-CIK细胞对K562/ADR细胞多药耐药的逆转作用

目的 探讨共培养树突状细胞(dendritic cell,DC)和细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK),即DC-CIK逆转白血病细胞多药耐药的作用及相关机制.方法 采用RT-PCR方法检测DC-CIK处理后的耐药细胞株(K562/ADR细胞)中多药耐药基因(mdr1基因)的表达;利用MTT法检测DC-CIK细胞处理后的耐药细胞株对阿霉素敏感性的变化.结果 经DC-CIK作用后的K562/ADR细胞mdr1表达明显低于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞组(P<0.05),而且其对阿霉素的敏感性也明显高于未经DC-CIK处理的K562/ADR细胞(P<0.05).结论 DC-CIK可逆转耐药细胞的多药耐药,其作用机制可能与下调耐药细胞中mdr1的表达有关.     

人参总皂苷诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：研究人参总皂苷诱导白血病细胞凋亡及其机制，为进一步开发人参总皂苷提供实验依据。方法：采用细胞体外培养，图像分析技术、流式细胞术、形态学观察与免疫细胞化学等方法，研究人参总皂苷诱导K562细胞凋亡。结果：人参总皂苷对K562细胞有增殖抑制作用，并可诱导K562细胞凋亡明显增加，同时K562细胞癌基因产物C－MYC，BCL－2表达明显降低。结论：人参总皂苷能诱导K562细胞凋亡，其机制可能与调控癌基因产物的表达有关。     

人参皂苷对K562细胞增殖与分化相关基因表达的影响

目的 探讨人参皂苷影响K562细胞增殖、分化的可能分子机制.方法 采用real-time PCR技术和SYBR Green染料法检测人参皂苷(20 μg/mL)作用于K562细胞36 h时间点Lif、Ccnd1、Mdm2、Erbb2、p53和myc等6个基因mRNA相对表达水平.结果 人参皂苷能显著促进K562细胞Li...     

人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用

目的：探讨人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3对邻苯二甲酸二丁酯（DBP）诱导的雄性生殖功能损伤模型小鼠生殖功能的改善作用,阐明人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3对生殖功能保护作用的相关机制,为其深入开发提供实验依据。方法：28只清洁级雄性C57BL/6小鼠随机分为模型组（400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg1+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,400 mg·kg^-1 DBP）、人参皂苷Rg3+DBP组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1 DBP）和联合组（20 mg·kg^-1人参皂苷Rg1,20 mg·kg^-1人参皂苷Rg3,400 mg·kg^-1DBP）,每组7只。DBP溶于玉米油于每天上午灌胃给药,人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3溶于生理盐水于每天下午皮下注射给药,每天各给药1次,连续给药35 d。采用WLJY-9000型精子质量检测系统检测各组小鼠的精子密度、精子活力和总畸形率,HE染色观察小鼠睾丸组织病理形态表现,采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测小鼠血清中睾酮（T）、卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH）水平,采用免疫荧光法检测睾丸组织缝隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达水平。结果：与模型组比较,联合组小鼠睾丸脏器系数明显升高（P<0.05）,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠精子密度和精子活力明显升高（P<0.01）;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组、人参皂苷Rg3+DBP组和联合组小鼠血清中T和LH水平明显升高（P<0.01）,FSH水平明显降低（P<0.01）,小鼠睾丸组织中Cx43蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。HE染色,模型组小鼠睾丸组织生精上皮较薄,管腔中生精细胞严重脱落;与模型组比较,人参皂苷Rg1+DBP组和人参皂苷Rg3+DBP组小鼠睾丸组织生精上皮变厚,管腔中脱落细胞较少;联合组小鼠睾丸组织生精上皮结构完整,各级生精细胞排列规则,腔内精子丰富。析因分析,人参皂苷Rg1联合人参皂苷Rg3可致小鼠精子活力（F=6.704,P=0.016）、血清中T水平（F=4.912,P=0.036）和睾丸组织中Cx43蛋白表达水平（F=6.937,P=0.018）升高。结论：人参皂苷Rg1和人参皂苷Rg3单独使用及人参皂苷Rg1与人参皂苷Rg3联合使用,可提高精子密度和精子活力,使小鼠血清中T和LH水平升高,FSH水平降低,减轻小鼠生殖功能损伤,其作用机制可能与上调Cx43表达水平发挥生精保护作用有关,可抑制DBP所致的生殖功能损伤,且人参皂苷Rg1与Rg3联合使用表现为协同作用。     

人参皂苷Rg1对脑缺血影响的行为指标分析

目的　研究人参皂苷Rg1 对实验性脑缺血的影响 ,并对大鼠脑缺血的行为指标进行分析 ,以期初步了解Rg1 对脑缺血的保护和治疗作用。方法　制作大鼠大脑中动脉供血区梗塞模型 ,腹腔给予不同组别不同剂量的Rg1 ,根据神经功能缺失症状指标进行评分。结果　 1d组Rg1 各剂量 (5 0、10 0、2 0 0mg kg)与阳性对照组 (尼莫地平 1mg kg)和模型对照组 (0 9%生理盐水 5ml kg)之间相比 ,差异均无显著性 (P >0 0 5 ) ;3d组Rg1 各剂量与阳性对照组相比 ,差异也无显著性 (P >0 0 5 ) ,而与模型对照组相比 ,只有 10 0mg kg中剂量Rg1 差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;7d组Rg1 各剂量与阳性对照组和模型组之间相比 ,差异均有显著性P <0 0 5。结论　人参皂苷Rg1 对脑缺血有一定的治疗和保护作用 ,但从实验来看无量效关系 ,却有明显的时效关系 ,用药时间不能过短 ,(7d为宜 )。     

人参皂苷Rg1对衰老大鼠免疫系统的影响

【目的】 面临人口老化进程加快和人们寿命提高的趋势,老年人群的健康已经成为社会科学和医学科学高度关注的重大问题。免疫系统衰老是生物体衰老的关键环节,它将导致机体免疫、造血、修复功能障碍和肿瘤发生率提高。本研究阐释人参抗衰老成分Rg1对免疫系统衰老调控作用及其相关机理,为防治衰老相关疾病,促进祖国医学发展提供理论与实验依据。 【方法】 建立D-半乳糖致免疫功能衰退大鼠模型,通过体内注射人参皂苷Rg1干预衰老进程。检测以下指标:(1)外周血白细胞与淋巴细胞总数及CD4⁺/CD8⁺T细胞比例;(2)股骨骨髓有核细胞数、细胞增殖与形成CFU-GM能力;(3)脾脏、胸腺实质结构比例与衰老细胞比例,脾细胞、胸腺细胞增殖能力,分泌IL-2/6,TNF-α,GM-CSF水平和细胞产生活ROS、SOD、MDA、GSH、GSSH水平;(4)腹腔巨噬细胞吞噬功能与吞噬指数。 【结果】 连续注射D-半乳糖能成功建立免疫功能衰退大鼠模型。与衰老模型组大鼠比较,注射人参皂苷Rg1使衰老大鼠白细胞和淋巴细胞总数提高,CD4⁺/CD8⁺T细胞比例升高;股骨骨髓有核细胞数升高、细胞增殖与形成CFU-GM能力提升;脾脏与胸腺实质结构比例增加,衰老细胞比例减少;脾细胞和胸腺细胞增殖能力提高,分泌IL-2/6、TNF-α、GM-CSF水平提高,产生AGEs、ROS、MDA、GSH/GSSG水平下降,SOD活性明显回升;腹腔吞噬细胞吞噬中性红能力明显增强,吞噬指数增加。 【结论】 (1)D-半乳糖能成功建立免疫功能衰退大鼠模型;(2)人参皂苷Rg1是人参的抗衰老成分,能有效提高免疫系统功能,阻止致衰剂导致的免疫系统衰退,其机理与拮抗D-半乳糖对免疫系统的氧化损伤密切相关。     

人参皂苷Rg1促进神经干细胞增殖的实验研究

目的探讨人参皂苷Rg1是否对神经干细胞的增殖具有促进作用。方法从大鼠脑组织分离神经细胞,在培养液中加入10μg.L-1表皮生长因子（EGF）和10μg.L-1碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）,使形成富含神经干细胞的神经球。在培养液中加入人参皂苷Rg1,观察其对神经干细胞增殖的促进作用。采用大鼠缺血性中风后遗症模型,观察人参皂苷Rg1对大鼠神经功能恢复的影响。结果在表皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子培养条件下可出现明显的神经球。在2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以增加神经细胞中神经球的数量,表明人参皂苷Rg1可以促进神经干细胞的生存和增殖。2μmol.L-1浓度下人参皂苷Rg1可以显著促进神经球的形成。缺血性中风大鼠给与人参皂苷Rg1后其横木行走评分增加,在第14天实验中,中剂量和高剂量组行走评分分别为（4.09±0.49）分和（4.74±0.62）分,而模型对照组为（3.41±0.67）分,差异均有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。免疫组化显示对大脑组织的细胞增殖也有促进作用。结论人参皂苷Rg1对神经干细胞增殖的促进作用,表明其在神经系统损伤性疾病的康复中有潜在的治疗价值,值得进一步研究。     

人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨人参皂甙单体Rg3对人红白血病细胞株K562细胞增殖及凋亡的影响.方法 将人红白血病细胞株K562细胞传代培养至对数生长期,分组加入不同浓度的人参皂甙单体Rg3,并设置空白对照组.用MTT比色法观察Rg3对体外培养的K562细胞生长的抑制作用;在光学显微镜下观察不同浓度人参皂甙单体Rg3对K562细胞的凋亡作用及计数凋亡率(AR);硝基四氮唑(nitroblue tetrazolium,NBT)还原能力测定试验检测分化指标;DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型的DNA梯形条带图谱.结果 MTT比色法测定显示,人参皂甙单体Rg3作用于K562细胞后可以抑制其增殖并诱导其凋亡,且呈剂量依赖性.结论 人参皂甙单体Rg3能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡.     

Notch1过表达对K562细胞增殖及其周期的影响

目的 研究外源性Notch1过表达对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖和细胞周期的影响.方法 用脂质体将携带Notch1胞内段(ICN1)的质粒转染入K562细胞,倒置相差显微镜观察转染前后K562细胞形态学变化,RT-PCR 和Western blot检测Notch1 mRNA和蛋白的表达,MTT比色法检测细胞增殖,...     

三七中人参皂苷Rg1的提取及含量测定

目的：测定三七中人参皂苷Rg1含量,优化三七皂苷的超声提取工艺。方法：高效液相色谱法测定人参皂苷Rg1的含量,色谱条件为：C18柱（4.6 mm×200 mm,5μm）,以乙腈-蒸馏水（24∶76）为流动相,检测波长为203 nm,流速为1.0 ml/min。以人参皂苷Rg1为指标,正交试验优化三七皂苷的提取工艺。结果：人参皂苷Rg1进样量在0.312～2.496μg范围内呈良好线性关系,平均回收率为100.8%,三七的最佳提取条件是10倍量60%乙醇超声30 min。结论：本法提取率较高,含量测定方法准确可靠。     

人参皂苷Rg1对兔膝早期骨性关节炎软骨细胞增殖影响的体内实验研究

目的观察人参皂苷Rg1对兔膝关节早期骨性关节炎软骨细胞增殖的影响。方法将50只健康新西兰雄性大白兔随机均分为正常组、模型组和人参皂苷Rg1低、中、高剂量组。采用伸直位管型石膏固定法制备兔膝骨性关节炎早期模型,造模后立即干预,人参皂苷Rg1低(5mg/kg)、中(10mg/kg)、高(20mg/kg)剂量组5 m L/kg体积灌胃给药,正常组和模型组予以等剂量生理盐水灌胃,每周3次,干预6周后取材。采用PCR技术检测P21、Cyclin D1 mRNA表达,Western-blot技术检测相应蛋白的表达,PCNA法检测软骨细胞增殖活性。结果人参皂苷Rg1低、中、高剂量组P21 mRNA及相应蛋白的表达均低于模型组(P0.05或P0.01),而Cyclin D1 mRNA及相应蛋白的表达高于模型组(P0.05或P0.01),PCNA检测显示人参皂苷Rg1中、高剂量组软骨细胞增殖率明显高于模型组(P0.05)。各项指标中以中剂量组效果最佳,即存在一定的量效关系。结论人参皂苷Rg1可有效提高软骨细胞G1期调节蛋白Cyclin Dl的表达,抑制P21表达,从而促进软骨细胞增殖,对软骨组织有着积极的修复作用。     

HPLC法测定人参皂苷Rg3、Rh1的含量

目的：建立人参发酵品中人参皂苷Rh1、Rg3的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法测定,色谱条件：ODS色谱柱（4.6 mm ×250 mm,5μm）;检测波长203 nm;流动相（Rh1）：乙腈-水（26.5：73.5）,流动相（Rg3）：乙腈-0.05％磷酸（37：63）;柱温30℃,流速1.0 mL/min。结果人参皂苷Rh1的含量测定线性范围0.1~1.1μm,相关系数r＝0.9998,平均加样回收率96.90％,RSD 2.67％。人参皂苷Rg3的含量测定线性范围0.4~3.0μm,相关系数为r＝0.9997,平均加样回收率98.56％,RSD 2.51％。结论本方法检测灵敏度高,检测结果可靠。     

人参皂苷Rg1、Rb1对体外培养膝软骨细胞凋亡的影响

目的观察人参皂苷Rg1、Rb1对体外培养软骨细胞,IL-1诱导软骨细胞凋亡的影响,并比较其对细胞影响的差异性。方法成功培养出软骨细胞后,进行人参皂苷影响细胞代谢浓度筛选,设人参皂苷Rg1不同浓度组、人参皂苷Rb1不同浓度组,MTT法检测人参皂苷对软骨细胞代谢的影响,选取其Rg1、Rb1合适浓度作为干预细胞凋亡浓度组,设立人参皂苷Rg1、Rb1组和对照组,IL-1诱导软骨细胞凋亡,流式细胞仪检测其凋亡数量和比例,透射电镜检测细胞凋亡形态和亚微结构。结果人参皂苷Rg1m、Rb1m组对软骨细胞调亡有明显的抑制作用,在抑制软骨细胞过度凋亡无明显差异。结论人参皂苷Rg1、Rb1能明显抑制软骨细胞过度的调亡,抑制膝骨性关节炎的发生、发展,为进一步在体实验提供理论基础。     

人参皂苷Rg1对发育期癫痫大鼠认知功能的影响

[摘要] 目的 研究人参皂苷Rg1对发育期癫痫大鼠的认知功能的影响。方法 14d SD大鼠腹腔注射红藻氨酸构建慢性癫痫模型;所有实验大鼠按随机数字表法分为生理盐水对照组、癫痫模型组、人参皂苷Rg1低剂量（10mg/kg）、中剂量（30mg/kg）及高剂量组(60mg/kg);每组各10只;Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆功能;RT-qPCR法检测NRSF mRNA及miR-124的表达,Westernblot法检测NRSF蛋白的表达,尼氏染色(Nissl染色)检测海马结构的病理改变。结果 与对生理盐水组比较,红藻氨酸组大鼠逃避潜伏期延长（9.02±6.34 比39.05±8.74）,空间探索缩短（44.23±8.12比13.23±5.43）,海马内NRSF（0.31±0.04比0.71±0.11）及 miR-124（0.41±0.07比0.60±0.08）明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）,与红藻氨酸组比较,Rg1高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短（39.05±8.74比17.09±7.56）,空间探索延长（13.23±5.43比35.27±5.49）,海马内NRSF（0.71±0.11比0.50±0.06）表达减少,而miR-124（0.60±0.08比0.84±0.07）的表达量增加,差异有统计学意义（P<0.05）。Nissl染色结果显示生理盐水组大鼠海马CA3区锥体细胞排列整齐、紧密,细胞结构完整,神经元内布满深蓝色颗粒状的尼氏小体;与生理盐水组相比,红藻氨酸组大鼠海马CA3区锥体细胞排列疏松,部分神经元胞体皱缩、碎裂,核固缩,胞质内尼氏小体大量脱失;不同Rg1治疗组大鼠海马CA3区神经元皱缩、碎裂、尼氏小体减少、脱失较红藻氨酸组减轻,以人参皂苷Rg1高剂量组减轻明显。结论 人参皂苷Rg1可以改善癫痫所致的认知功能障碍,这可能与减少NRSF的表达量及增加miR-124的表达量有关,且成剂量依赖性。     

人参皂苷Rg1对小鼠生精改善作用的研究

目的 研究人参皂苷Rg1对邻苯二甲酸二丁酯（dibutyl phthalate,DBP）诱导的生精损伤小鼠的保护作用,为天然生精药物开发提供理论依据。方法 将30只C57BL/6雄性小鼠随机分为三组,对照组、DBP组（400 mg/kg）、Rg1+DBP组（Rg1 20 mg/kg,DBP 400 mg/kg）,连续给药35 d后,处死小鼠,收集血清、睾丸、附睾,对精子密度、活力及畸形率进行检测和计算,采用酶联免疫吸附试验检测血清睾酮（testosterone,T）、促卵泡激素（follicle-stimulating Hormone,FSH）和促黄体生成激素（luteinizing hormone,LH）的水平,测定小鼠睾丸组织超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）和丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）含量水平。结果 与对照组相比,DBP组小鼠精子活力及密度明显降低（P<0.01）,精子畸形率没有明显改变;血清中T、LH显著降低,FSH明显升高（P&l...