血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的 探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力，并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法 收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株，采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测；采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性；采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果 102株金黄色葡萄球菌中，43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36...     

tst和pvl基因阳性金黄色葡萄球菌流行情况及分子特征

目的了解中毒性休克综合征毒素-1的tst基因和杀白细胞素的pvl基因阳性金黄色葡萄球菌(金葡菌)流行情况及其附属基因调节子(agr)和葡萄球菌盒式染色体(SCCmec)型别。方法收集上海市及浙江省共7所医院的916株金葡菌,聚合酶链反应(PCR)检测tst、pvl、mec A和mec C基因,并对tst或pvl基因阳性菌株作agr及SCCmec(针对甲氧西林耐药金葡菌,MRSA)遗传学分型。结果 916株金葡菌中tst阳性208株,阳性率22.7%;pvl阳性35株,阳性率3.8%;mec A阳性665株(MRSA),未检测到mec C基因。在665株MRSA中,tst阳性198株(29.8%),agr和SCCmec分型均以2/Ⅱ型为主,分别占97.0%和94.4%;pvl阳性14株(2.1%),agr分型以1型(85.7%)为主,SCCmec分型以Ⅲ型(42.9%)和Ⅳa型(28.6%)为主。在251株甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)中,tst阳性10株(4.0%);pvl阳性21株(8.4%)。tst阳性率在MRSA菌株中较MSSA中高,而pvl检出率则在MSSA菌株中较高,且浙江地区MRSA中pvl的阳性率高于上海菌株,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 tst基因在MRSA菌株中阳性率较MSSA高;pvl阳性率相对较低,但因其与某些严重的金葡菌感染相关,临床应予以关注。     

不同来源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌毒力基因的研究

目的对临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染状况进行分析,并通过对MRSA菌株、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株毒力基因的检测,分析比较不同金黄色葡萄球菌(SA)的毒力基因分布。方法收集衢州市人民医院2009年1月至2011年6月临床标本分离的MRSA菌株60株,MSSA菌株54株。采用聚合酶链反应(PCR)检测不同标本分离的SA的杀白细胞素(pvl)、肠毒素C(sec)、肠毒素H(seh)、α-溶血素(hla)、β-溶血素(hlb)、黏附素凝聚因子(clfA、clfB)、纤连蛋白结合蛋白(fnbA、fnbB)毒力基因。结果60株MRSA菌株主要分布在神经外科、普外科、小儿科、骨科等病区,其中17株为社区获得性MRSA(CA-MRSA),43株为医院获得性MRSA(HA-MRSA)。MRSA菌株中pvl的检出率明显高于MSSA菌株,而clfA、fnbA、sec、she的检出率明显低于MSSA。而pvl、fnbA在CA-MRSA中的检出率要高于HA-MRSA。结论临床分离的SA中,MSSA菌株毒力相对MRSA可能更高,而CA-MRSA相对HA-MRSA毒力也较强,他们之间携带毒力基因的差别可能与之侵袭的感染部位相关。     

甲氧西林耐药／敏感金黄色葡萄球菌基因分型和毒力基因检测

目的：分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（金葡菌）（MRSA）和甲氧西林敏感金葡菌（MSSA）临床分离株基因分型及毒力基因分布特征是否存在差异,了解金葡菌耐药性演变与毒力变迁之间的相关性。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）方法和多位点序列分型（MLST）方法对呼和浩特地区住院患者中分离的30株 MRSA 和30株 MSSA 进行分子分型,同步采用聚合酶链反应（PCR）方法检测菌株毒力基因。结果60株金葡菌 PFGE 分型共分19个型,MSSA 菌株分布在 I 和 H 型等16个基因型中,而 MRSA 株主要集中分布在 K 和 M 2个基因型中。20株不同 PFGE 型菌株 MLST 分型结果显示,MRSA 株主要为 ST-239型;MSSA 株呈多样性分布特征,主要以 ST-5型、ST-7型、ST-15型为主。毒力基因在 MRSA 和 MSSA 中分布差异显著。MSSA 毒力基因整体携带率明显高于 MRSA（53．9％对40．0％,χ2＝32．7,P ＜0．01）。MRSA 株 sea、cna 和 cap 8基因携带率明显高于 MSSA 携带率（P ＜0．01）,而 sec、seg 、sei、sem、sen、seo、fnbB、ebpS、cap5基因携带率明显低于 MSSA（P＜0．05）。结论呼和浩特地区金葡菌临床分离株基因型呈现多样化分布特点,MRSA 主要以 ST-239型为主。MSSA 毒力基因携带率高,特定毒力因子在 MRSA 和 MSSA 株中呈现一定聚集分布特征,金葡菌特定耐药性的获得可能伴随特定毒力特征的变化。     

重庆地区金黄色葡萄球菌临床株的分子型别与耐药性检测

目的了解重庆地区金黄色葡萄球菌临床菌株的分子型别及其对常用抗菌药物的耐药情况,为防控该地区金葡菌感染提供理论依据。方法收集2013年6月至2014年12月期间重庆地区西南医院临床分离的110株金黄色葡萄球菌,利用特征性基因扩增区分甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA),再采用多位点序列分型(MLST)、spa分型、SCCmec分型、agr分型等方法检测金葡菌的型别,采用PCR检测pvl毒力基因,药敏试验分析菌株对苯唑西林、万古霉素、四环素等13种临床常用抗菌药物的耐药性,分析菌株的耐药谱。结果 110株金葡菌中有59株为MRSA,51株为MSSA,MRSA阳性率为53.6%。59株MRSA分为11种spa型和8种ST型,优势流行克隆为ST239-MRSA-Ⅲ(57.6%,34/59),pvl毒力基因检出率为23.7%(14/59)。51株MSSA分为27种spa型和18种ST型,agrI型占68.6%(35/51),pvl检出率为7.8%(4/51)。药敏结果显示59株MRSA均为多重耐药(MDR)菌株,51株MSSA中有24株为MDR菌株。结论重庆地区流行的MRSA以ST239-MRSA-Ⅲ为主,而MSSA表现出较高遗传多样性,发现ST121等高毒力、高耐药性菌株,值得高度重视。     

乳腺炎患者脓液中金黄色葡萄球菌分离株的耐药性和流行病学分析

目的 分析急性化脓性乳腺炎患者脓液中金黄色葡萄球菌分离株的流行病学特征和耐药性,为临床治疗提供依据。方法 收集2018年10月至2020年12月在该院乳腺外科因急性化脓性乳腺炎就诊的133例门诊患者的乳腺脓液进行一般细菌培养,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)仪对菌株进行鉴定,采用BioTyper软件进行聚类分析,采用VITEK-2全自动微生物分析系统检测菌株的耐药性,采用聚合酶链反应(PCR)进行毒力基因[包括溶血素基因hla和hlb、杀白细胞毒素基因(PVL)]检测。采用多位点序列分型(MLST)技术对菌株进行分子分型。结果 共分离金黄色葡萄球菌100株,菌株对青霉素的耐药率最高(92.0%),其次为红霉素、苯唑西林和克林霉素,耐药率分别为55.0%、43.0%和23.0%,对其他抗菌药物的耐药率不超过10.0%,未检测到对万古霉素和利奈唑胺耐药的菌株。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)有43株,占43.0%。PVL的检出率为27.0%,hla和hlb分别为77.0%和10.0%。MALDI-TOF MS仪将100株金黄色葡萄球菌分成A、B、C、D...     

重症监护病房患者金黄色葡萄球菌感染的分子流行病学研究

目的通过对重症监护病房患者金黄色葡萄球菌(SA)感染的分子流行病学研究,为临床预防和研究SA感染提供科学依据。方法收集重症监护病房近3年SA培养阳性病例52例,(去除同一患者相同和不同部位标本)采用多重PCR扩增SA的毒素基因tst和sec,分析毒素基因的存在与发热的关系,通过PCR扩增耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)基因组稀有限制区旁的DNA序列,对MRSA进行基因分型。结果 52例患者中,19例为对甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(MSSA),33例为MRSA,其中有22例MRSA携带tst和sec基因(66.7%),显著高于MSSA 7例携带tst和sec基因(P0.05);37例伴有发热,其中29例含有tst和sec基因,15例不伴发热,其中5例含tst和sec基因,发热组携带两种基因比率显著高于不发热组(P0.05);稀有限制区PCR(IRS-PCR)分型表明,2012~2014年感染MRSA的33例患者有22例为同种基因型。结论 tst和sec基因的存在可能与SA引起的发热有关,近3年该病房存在MRSA暴发流行可能。     

金黄色葡萄球菌生物膜产生及相关毒力因子研究

目的 金黄色葡萄球菌引起的感染遍及临床各科,人体各部位。对临床分离的金黄色葡萄球菌进行生物膜、生物膜相关因子及毒力因子检测；方法 刚果红培养基法进行生物膜筛选；用电子显微镜观察生物膜的形成；用PCR方法检测生物膜相关基因及毒力因子。结果 100株金黄色葡萄球菌中,63株产生生物膜,产生物膜率达63.0％,均产生与生物膜高度相关的icaA基因、icaD基因；还可产生ebh、sea、seb、pvl、hla、fnbA 等毒力因子；产生物膜的菌中MRSA菌株占51.2%,MSSA占48.8%；结论 产生物膜的金黄色葡萄球菌已经成为医院感染的致病因素之一,常产生各种毒力因子。     

高水平莫匹罗星耐药MRSA体外生物膜形成能力及相关基因检测

目的 了解高水平莫匹罗星耐药甲氧西林耐药金葡菌(MuH MRSA)体外生物膜形成能力及介导生物膜形成相关基因的分布.方法 对分离自上海和浙江省温州地区5所教学医院的803 株临床分离MRSA进行莫匹罗星纸片扩散法检测最低抑菌浓度(MIC),mupA基因PCR扩增筛选MuH MRSA,分光光度计检测MuH MRSA菌株体外生物膜的形成能力,PCR扩增生物膜形成相关基因(icaA、icaD、agr、sarA、sasG、bap和ccpA).结果 共筛选出53株MuH MRSA,其中仅5株(9.4%,5/53)具有体外形成生物膜的能力;基因检测显示,icaD和agr基因存在于全部MuH MRSA菌株中,而icaA、sarA、sasG和ccpA基因则分别存在于83.0%、86.8%、84.9%和92.5%的菌株中,仅有1株细菌携带bap基因.结论 大部分生物膜形成相关基因广泛分布于MuH MRSA菌株中,但仅agr基因可能是该类菌株体外生物膜形成能力的主要影响因素.     

小儿呼吸道感染金黄色葡萄球菌基因分型及多重耐药分子机制研究

目的探讨小儿呼吸道感染金黄色葡萄球菌基因分型及多重耐药分子机制。方法从呼吸道感染患儿新鲜痰液或咽拭子标本中分离72株金黄色葡萄球菌,采用VITEK全自动微生物鉴定系统进行药敏试验,聚合酶链式反应(PCR)检测β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类耐药基因,并计算甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)耐药基因携带率。结果 72株金黄色葡萄球菌中共筛选出34株MRSA,检出34株mecA基因,检出率为47.2%。MSSA对阿莫西林、红霉素、庆大霉素、米诺环素的耐药率显著低于MRSA(P0.05);MRSA对非β-内酰胺抗菌药物敏感率和对1~2种非β-内酰胺抗菌药耐药率显著低于MSSA,MRSA多重耐药率显著高于MSSA(P0.05)。MRSA菌株tetM、aac(6′)/ph(2′′)、ermA、tetK基因检出率显著高于MSSA,MSSA菌株ermC基因检出率显著高于MRSA(P0.05),MSSA与MRSAaph(3′)-Ⅲ基因检出率比较差异无统计学意义(P0.05)。MRSA未携带耐药基因比例、携带1~2种耐药基因比例显著低于MSSA,MRSA携带≥3种耐药基因比例显著高于MSSA(P0.05)。结论小儿呼吸道感染金黄色葡萄球菌耐药基因型主要有mecA、tetM、aac(6′)/ph(2′′)、ermA、tetK,携带多种耐药基因可能是多重耐药发生的主要机制。     

中国安徽地区白血病患者与HLA-A、B、DRB1基因关联性研究

本研究旨在探讨中国安徽地区人群中白血病的易感性与HLA—A、B、DRB1基因多态性之间的关联。采用聚合酶链反应序列特异性引物（PCR—SSP）方法对安徽地区140例慢性髓系白血病（CML）、84例急性淋巴细胞性白血病（AIJL）、90例急性非淋巴细胞性白血病（ANLIJ）患者以及916名健康的非血缘造血干细胞捐献者作为正常对照组进行了HLA基因分型,分别比较了病人组及正常对照组的HLA—A、B、DRB1位点的基因频率,通过x。检验进行统计学分析。结果表明,CML患者A2、A11、B58、DR9基因频率较对照组明显升高,DR7基因频率较对照组明显降低：AIJIJ患者A11、B13基因频率明显高于对照组;ANLL患者A24、B58、DR9基因频率较对照组明显升高。结论：HIA—A2、A11、B58、DR9是CML的易感基因,DR7是其拮抗基因;HLA—A11、B13是ALL的易感基因;HLA—A24、B58、DR9是ANLL的易感基因。     

急性白血病患者bcl—2和bax基因表达的临床意义及其与mdr—1基因表达的关系

细胞凋亡受抑作为肿瘤细胞的耐药机制,是急性白血病(AL)预后不良的原因之一.bcl-2家族是目前最受重视的调控细胞凋亡的基因家族,本研究为探讨bcl-2和bax基因在急性白血病表达的意义,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定70例初治AL患者及20例正常人的bcl-2,bax,mdr-1基因mRNA水平的表达,用流式细胞术检测其蛋白表达.结果表明,bcl-2和bax基因在AL患者广泛表达,bcl-2 mRNA平均表达水平明显高于正常对照(1.46 vs 0.71,P＜0.05).bcl-2和bax基因表达及bax/bcl-2比值与AL患者的年龄、性别、血小板计数、血红蛋白水平、骨髓原始细胞百分率、FAB分型和S+G2M%均未发现相关.Bcl-2蛋白表达(34.6%vs 69.2%,P＜0.05),bax/bcl-2 mRNA比值(37.1%vs 82.9%,P＜0.01)决定AL对化疗的敏感性,与AL CR率密切相关.bax/bcl-2 mRNA比值还是影响总生存期的因素.bcl-2与bax基因表达和mdr-1表达两者无相关关系.     

人白血病抑制因子和白细胞介素6融合基因的构建与表达

为了获得对白血病细胞有更强的抑制和诱导分化作用,本实验应用计算机优化设计,采用PCR扩增和分子克隆技术,分别扩增编码IL-6成熟蛋白的部分cDNA片段和编码LIF成熟蛋白的cDNA片段与人工设计的四肽接头连接到克隆载体,并将IL-6基因插入到LIF基因的N端,亚克隆到原核表达载体pBV220酶切位点之间,融合成编码单一的基因。采用30℃扩增菌体,42℃诱导,实现了在E.coli中表达预期的36kD蛋白谱带。表达量约占菌体总蛋白量的21％。经初步活性测定,重组融合因子对HL-60白血病细胞克隆生长的抑制明显地强于LIF和IL-6单独使用时的作用。     

人多药耐药基因—1及二氢叶酸还原酶基因共转导小鼠造？…

耐药基因转导骨髓细胞对化疗病人造血系统的保护作用已受到人们的重视。本研究利用多药耐药基因－１（ｍｄｒ－１）及二氢叶酸还原酶（ｄｈｆｒ）双基因转染小鼠骨髓细胞,观察造血细胞对两种耐药谱化疗药物的抵抗能力。结果表明,所用逆转录病毒载体转染率达到１５％左右,转基因骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ对ｔａｘｏｌ及ＭＴＸ的耐药能力明显增强,说明外源基因在祖细胞中的正确表达;转基因骨髓细胞回输给同系小鼠７个月后,ＦＣＭ技术     

肠球菌的耐药基因研究

目的了解肠球菌属的耐药性趋势和耐药基因分布,为临床合理用药提供依据。方法采用VITEK2COMPACT全自动微生物鉴定系统对2008年1月至2012年5月间临床送检标本中分离的319株肠球菌进行鉴定和药敏试验,采用PCR方法对ermB、mef、gyrA耐药基因进行研究。结果319株肠球菌中以屎肠球菌最多205株（64．26％）,其次为粪肠球菌63株（19．75％）,其他种类肠球菌51株（15．99％）。肠球菌常用抗生素药敏结果显示屎肠球菌和粪肠球菌耐药率最低的是万古霉素（1．0％．1．6％）,其次是利茶唑胺和替考拉宁（3．9％,3．2％）,耐药率最高的是红霉素（94．6％,79．4％）。肠球菌中ermB基因阳性率为73．4％（234／319）,gyrA基因阳性率为67．1％（214／319）,reef基因均为阴性。结论肠球菌获得gyrA基因和ermB基因是肠球菌对氟喹诺酮类药物和红霉素类药物耐药的主要原因。     

具有野生型活性和新活性的小鼠白介素12融合基因的构建与表达

天然白介素(IL)12是一种异二聚体分子,其工程产品只能在真核细胞内表达,因而产量低,造价高,限制了临床应用。根据融合蛋白的原理,结合IL-12本身的结构特点进行推断,若将IL-12的二亚基(p35/p40)适当改造和融合,其产物可能同样地表达野生型IL-12的活性,这将为在原核表达系统内表达融合蛋白提供先决条件。将p40亚基cDNA中编码Ig-样区域的序列缺失,残余部分与p35亚基的cDNA3’端通过连接序列连接,构成融合IL-12 cDNA(fmIL-12C)。当此融合基因克隆人真核表达载体pMT/EP后在CHO细胞内表达,其产物具有野生型IL-12的活性,即刺激活化淋巴母细胞增殖。与此同时,融合IL-12的cDNA的表达使CHO细胞发生十分明显的形态变化,提示融合IL-12可能具有一些新活性。对此融合基因进一步改造及在原核系统内表达的可能性也进行了讨论。     

Smac和Apollon基因在胃癌中的表达及与细胞凋亡的关系

目的研究Smae、Apollon基因在胃癌组织表达及两者在胃癌发生中的作用关系。方法逆转录．聚合酶链式反应（RT-PcR）检测Smac、Apollon的mRNA在38例胃癌组织，15例癌旁组织和10例正常组织的表达情况。结果38例胃癌标本中表达Smac有20例（52．6％），而除3例癌旁组织外，其他癌旁组织和正常胃组织中均见Smae表达，可见8m8c在胃癌组织中低表达和非胃癌组织中高表达，具有统计学意义（P〈0．05）。Apollon在癌组织、癌旁组织和正常胃组织中分别有29例（76．3％）、4例（26．7％）和0例（0％）表达，Apollon在胃癌组织、癌旁组织和正常组织中Apollon的表达差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论Apollon在胃癌组织中高表达，其表达和Smac呈明显的负相关，两者的互相作用可能是导致胃癌发生、发展的重要因素。     

某地区结直肠癌患者KRAS基因及BRAF基因突变状态的检测分析

目的 检测某地区结直肠癌患者KRAS基因和BRAF基因的突变状态及其与年龄、性别的关系.方法 由某地区30例结直肠癌患者石蜡组织中提取DNA,通过直接测序法及荧光定量PCR法检测KRAS基因及BRAF基因突变状态.结果 KRAS基因突变率为43.3%,共发现6种突变类型,主要位于12、13密码子,其中以c.38G>A突变率最高(38.5%).单因素及多因素分析均提示KRAS突变与年龄或性别无相关性.BRAF基因突变率为0.结论 某地区结直肠癌患者KRAS基因突变率高,靶向治疗前进行突变状态检测具有重要临床价值.     

kir3dl1启动子表达调控载体的构建及其在K562细胞中的活性

为了分析kir3dl1基因核心启动子区域的功能并明确其表达调控机制，构建了kir3dl1基因启动子．荧光素酶报告载体，分析其在K562细胞中的活性。采用PCR方法从含有kit3dl1基因转录起始位点5’侧翼区的质粒中扩增kir3dl1基因核心启动子序列，插入经Bg1II和NcoI双酶切的荧光素酶报告载体pGL3-Basic；采用阳离子脂质体SuperFect包裹荧光素酶报告重组子转染K562细胞，应用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性；采用MTT法检测脂质体-DNA复合物对细胞存活率的影响。结果表明：成功构建了含有254bp的kir3dl1基因核心启动子序列的荧光素酶报告重组子3DL1-luc254并通过酶切及基因测序方法的鉴定；荧光素酶报告重组子在K562细胞中的荧光素酶活性明显高于阴性对照，且荧光素酶活性、相对活性持续3天无明显衰减。转染了3DLl-luc254报告质粒的K562细胞存活率在76％-92％之间。结论：成功构建了kir3dl1基因启动子-荧光素酶报告载体，本研究采用的转染系统能够有效地在K562细胞中进行基因转染，kir3dl1基因核心启动子在K562细胞中具有较高活性。     

肿瘤抑制基因p53及其拮抗癌基因mdm2在急性白血病发病机制中的作用(英文)

研究了41例急性白血病患者以及两个白血病细胞系K051与HL-60中肿瘤抑制基因p53及其拮抗基因mdm2的改变和相互关系。研究结果如下:①在可分析结果的33例急性白血病中,13例有染色体异常,但未发现与上述两个癌基因有关的12号或17号染色体异常;②41例急性白血病中8例可能有p53基因突变,发生率为19.5％,高于文献中同类报道的结果。p53基因点突变与急性白血病的FAB分型以及患者的预后无明显关系,主要发生在染色体核型正常的急性白血病患者;③在41例急性白血病患者以及K051和HL-60两个细胞系中未检出mdm2基因的扩增;④发现51.2％(21/41)的急性白血病患者有较高水平的mdm2基因的表达,其中3例同时有p53基因突变(3/21);K051细胞系mdm2基因表达水平较低,而HL-60细胞系的表达水平则较高。mdm2基因的表达水平与白血病FAB分型、染色体异常及p53基因点突变无明显关系,与急性白血病的预后有一定的关系。根据上述结果进行了讨论,认为急性白血病中,虽然p53基因的突变率较低,但是由于其拮抗基因mdm2的过高表达,p53基因的失活仍然可能是急性白血病发生和发展的机制之一。