骨髓间充质干细胞颈内动脉移植在血管性痴呆大鼠脑内存活迁移及对胆碱能系统的影响

目的观察颈内动脉移植骨髓间充质干细胞(MSC)透过血脑屏障在血管性痴呆(VaD)大鼠脑内存活、迁移及对海马乙酰胆碱(Ach)含量、乙酰胆碱酯酶(AchE)活性和认知能力的影响。方法选72只Wistar大鼠分为对照组、模型组和治疗组,每组又分4、8周2个时相点,每时相点12只。制作VaD大鼠模型,治疗组于术后24h颈内动脉移植0.5ml骨髓MSC。移植4、8周后检测移植细胞在VaD大鼠脑内存活、迁移及学习记忆能力,并检测海马区Ach含量及AchE活性。结果颈内动脉移植后4周骨髓MSC在VaD大鼠脑实质中广泛分布,主要聚集至海马、大脑皮质等缺血易损伤区域。与对照组比较,模型组和治疗组术后4、8周大鼠学习记忆显著降低(P<0.01);与模型组比较,治疗组术后4、8周大鼠学习记忆显著改善(P<0.01),细胞移植后治疗组Ach含量和AchE活性显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论骨髓MSC颈内动脉移植后可透过血脑屏障明显改善VaD大鼠胆碱能系统的功能,调节脑内Ach生理代谢,促进缺血损伤后脑组织的修复与再生,增强学习记忆能力。     

N-甲基-D-天冬氨酸受体和突触后致密物质95在血管性痴呆大鼠中作用机制的研究

目的观察血管性痴呆(VaD)大鼠N-甲基-D-天冬氨酸-2B亚基受体(NR2B)和突触后致密物质95(PSD-95)在VaD发生、发展中的作用。方法采用永久性结扎双侧颈总动脉方法将96只Wistar大鼠随机分为假手术组(32只)、VaD模型组(模型组,32只)和美金刚治疗组(治疗组,32只)。用免疫组织化学法检测术后4、8、12、16周大鼠海马NR2B和PSD-95的表达,并同时采用Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆水平。结果随着缺血时间的延长,与假手术组比较,模型组大鼠术后4、8、12、16周学习记忆能力下降,差异显著(P<0.01);术后4周时NR2B和PSD-95的表达明显高于假手术组(P<0.01),此后逐渐减少,显著低于假手术组(P<0.01),术后16周时表达最少。治疗组大鼠术后4周时学习记忆水平及NR2B、PSD-95的表达与假手术组比较无显著差异,术后8、12、16周时,上述指标较模型组显著好转但仍差于假手术组(P<0.05,P<0.01)。结论大鼠海马NR2B和PSD-95作为复合体参与VaD的形成和发展,适量的美金刚通过调节NR2B的表达进而改善VaD大鼠的认知功能。     

美金刚对血管性痴呆大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸-2B受体的影响

目的观察经美金刚治疗的血管性痴呆(VaD)大鼠海马N-甲基D-天冬氨酸-2B受体(NMDAR-2B)的变化,并探讨其在VaD中的作用机制。方法采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VaD大鼠模型,将128只Wistar大鼠随机分为假手术组、VaD模型组和美金刚高、低剂量治疗组,每组32只,各组分别于术后4、8、12、16周处死8只大鼠。用Morris水迷宫衡量大鼠学习记忆水平,用免疫组织化学法检测大鼠海马NMDAR-2B的表达。结果随缺血时间延长,VaD模型组大鼠的学习记忆能力下降,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);NMDAR-2B的表达在缺血4周时明显高于假手术组(P<0.01),此后逐渐减少,并显著低于假手术组(P<0.01),缺血16周时表达最少。学习记忆水平及NMDAR-2B的表达美金刚高、低剂量治疗组在缺血4周时与假手术组比较无显著性差异,在缺血8、12、16周时,美金刚高剂量治疗组较VaD模型组显著好转但仍低于假手术组(P<0.01,P<0.05),美金刚低剂量治疗组与模型组无显著差异但明显低于假手术组(P<0.05,P<0.01)。结论VaD大鼠学习记忆的改变与海马NMDAR-2B变化相关,可用适量的美金刚对NMDAR-2B调节以改善VaD大鼠认知功能。     

血管性痴呆大鼠突触后致密物质变化机制的研究

目的观察血管性痴呆(VaD)大鼠N-甲基D-天冬氨酸受体(NMDAR)的2B亚基(NR2B)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的变化情况,探讨其在VaD发生、发展中的作用。方法将96只Wistar大鼠随机分为假手术组(32只)、VaD模型组(模型组,32只)和美金刚治疗组(治疗组,32只)。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制备VaD大鼠模型。用RT-PCR法检测术后4、8、12、16用犬鼠海马NR2B mRNA的表迭,用γ-~(32)P掺入法检测大鼠海马CaMKⅡ的活性。结果与假手术组比较,模型组海马NR2B mRNA水平术后4周时明显增高(P<0.05),术后8～16周显著降低(P<0.01),海马总CaMKⅡ活性术后4周时明显增高(P<0.01),术后12周、16周明显降低(P<0.01);治疗组术后4周时上述2项结果与假手术组差异无统计学意义,除治疗组8周时,在其他时间点,与假手术组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);但NR2BmRNA水平于术后8周、12周明显高于模型组(P<0.01,P<0.05);总CaMKⅡ活性与模型组差异无统计学意义。结论 CaMKⅡ活性变化主要是NMDAR介导的,美金刚通过调节NR2B表达改善VaD大鼠认知功能,但对CaMKⅡ活性的影响有限。     

促红细胞生成素对血管性痴呆大鼠认知功能及存活素和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察促红细胞生成素(EPO)对血管性痴呆(VaD)大鼠认知功能及海马CA1区锥体细胞存活素、血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法选择雄性Wistar大鼠144只,随机分为假手术组、VaD组和EPO组,每组48只。改良Pulsinelli四血管阻断法制备VaD大鼠模型。分别于术后1、2、4、8周4个时间点采用HE染色观察海马CA1区锥体细胞形态变化,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测海马CA1区存活素、VEGF的表达,Morris水迷宫对各组大鼠进行学习记忆功能的检测。结果与假手术组比较,VaD组和EPO组海马CA1区神经元结构受损,神经元密度明显减少[(18.56±3.15)102 mm2,(22.28±2.91)102 mm2 vs(28.89±4.08)102 mm2,P<0.05];VaD组和EPO组海马CA1区各个时间点存活素、VEGF蛋白表达均增加,于4周达峰值后逐渐下降,以EPO组更显著(P<0.05);VaD组和EPO组大鼠术后1、2、4、8周逃避潜伏期明显延长、跨越目标象限时间明显缩短(P<0.05)。结论腹腔注射EPO可促进海马CA1区锥体细胞存活素、VEGF的表达,从而一定程度上改善大鼠的认知功能。     

瑞舒伐他汀和美金刚对血管性痴呆大鼠内皮祖细胞的影响

目的观察瑞舒伐他汀和美金刚对血管性痴呆(VaD)大鼠内皮祖细胞的影响及学习记忆功能的改善。方法 40只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、瑞舒伐他汀组、美金刚组、瑞舒伐他汀联合美金刚组(联合组),每组各8只。采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作VaD模型。术后5周后通过Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,记录逃避潜伏期及目标象限百分率;流式细胞术检测各组大鼠外周血内皮祖细胞(EPC)、免疫组织化学方法检测海马区微血管密度(MVD)。结果与假手术组比较,模型组大鼠术后5周学习记忆能力显著下降(P<0.01)。与模型组比较,瑞舒伐他汀组、美金刚组和联合组大鼠学习记忆能力、外周血EPC及海马MVD均明显升高(P<0.05)。结论美金刚和瑞舒伐他汀均能有效的动员VaD大鼠外周血EPC、并增加海马MVD,进而改善学习记忆能力,但两药联合较单药无明显差异。     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠N-甲基-D天冬氨酸受体的影响

目的观察盐酸美金刚对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆能力及对N-甲基-D天冬氨酸受体3个亚基(NR1、NR2A、NR2B)的影响。方法将30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和美金刚组,每组10只,后2组采用永久性结扎双侧颈总动脉方法制作VaD大鼠模型。美金刚组于术后1周给予美金刚10mg/(kg·d)灌胃治疗4周,模型组给予等量生理盐水。于术后5周采用Morris水迷宫测试各组大鼠的学习记忆水平,用Western blot方法测定各组大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠术后水迷宫实验逃避潜伏期显著延长(P=0.001),跨越目标象限百分率明显减少(P=0.002),海马区NR1、NR2A、NR2B蛋白表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,美金刚组学习记忆水平明显改善(P<0.05);NR1、NR2A、NR2B蛋白的表达显著增加(P<0.05),但仍低于假手术组(P<0.05)。结论美金刚对VaD大鼠海马区NR1、NR2A和NR2B蛋白表达均具有上调作用,从而改善其学习记忆能力。     

胆碱酯酶抑制剂对血管性痴呆大鼠认知功能的影响

目的观察胆碱酯酶抑制剂对血管性痴呆(VaD)大鼠海马CA1区细胞凋亡、血管内皮生长因子(VEGF)及神经元型一氧化氮合酶(nNOS)的影响。方法将45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、治疗组,每组15只大鼠。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VaD模型,假手术组和模型组用生理盐水2 ml灌胃,治疗组用多奈哌齐进行灌胃。造模后1个月,采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,用TUNEL检测海马CA1区神经细胞凋亡,用免疫组织化学染色方法检测大鼠海马CA1区VEGF、nNOS阳性细胞表达。结果与模型组比较,假手术组和治疗组大鼠第2天起逃避潜伏期明显缩短;海马CA1区神经细胞凋亡显著减少;海马CA1区VEGF和nNOS阳性细胞表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论多奈哌齐可能通过减少VaD大鼠海马CA1区细胞凋亡,上调VEGF、nNOS的表达,从而改善VaD大鼠的认知功能。     

盐酸美金刚对血管性痴呆大鼠CREB和细胞色素c表达的影响

目的 探讨盐酸美金刚对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆功能的影响和可能机制.方法 采用双侧颈总动脉永久结扎法建市大鼠VaD模型.36只SD大鼠分为假手术组、VaD组和美金刚组(灌胃给予盐酸美金刚,1次/d,连续8周),每组12只.用Y型迷官试验观察其行为学改变,用免疫组化技术检测大鼠海马CA1区和皮质神经元环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP responsive element binding protein,CREB)和细胞色素c(cytochrome c,CytC)表达变化.TUNEL染色检测神经元凋亡情况.结果 美金刚组学习和记忆成绩分别为(50.17±5.56)次和(7.08±0.90)次,显著优于VaD组的(66.36±5.41)次和(4.64±1.03)次(P均＜0.01);海马CA1区和皮质CREB平均吸光度分别为147.51±7.11和155.37±4.52,显著高于VaD组的135.11±8.52和142.39±5.24(P均＜0.01);海马CA1区和皮质CytC平均吸光度分别为116.53±4.91和113.51±6.05,显著低于VaD组的136.65±7.43和138.09±4.88(P均＜0.01);美金刚组细胞凋亡程度也较VaD组明显改善.结论 盐酸美金刚可能通过上调CREB表达、抑制CytC释放和神经元凋亡来改善VaD大鼠的学习记忆功能.     

参附注射液对血管性痴呆大鼠认知功能的作用

目的探讨参附注射液对血管性痴呆(VaD)大鼠脑损伤的保护作用及其机制。方法将SD雄性大鼠40只,随机分为假手术组、模型组、参附注射液组(4ml/kg)和他克林组(30mg/kg),每组10只。后3组采用永久性结扎双侧颈总动脉建立VaD模型。采用Morris水迷宫实验评价大鼠的学习和记忆能力,化学法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛水平。结果与假手术组比较,模型组大鼠大脑皮质和海马丙二醛水平明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD活性明显降低(P<0.01);参附注射液组脑组织SOD活性显著升高,丙二醛水平降低(P<0.05),水迷宫实验提高VaD大鼠学习记忆成绩(P<0.05,P<0.01)。结论参附注射液对脑缺血和VaD有治疗作用,增强学习和记忆能力的机制可能与降低丙二醛水平和提高抗氧化能力有关。     

丁苯酞对血管性痴呆大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2表达的影响

目的观察丁苯酞(NBP)对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响,探讨NBP对VD的保护作用。方法将80只健康Wistar大鼠随机分为VD组(VD模型)、NBP治疗组(VD模型+NBP)、NBP对照组(假手术+NBP)、Sham组(假手术组),每组20只,每组又分为4个亚组:术后1、2、4、8 w,每个亚组5只。永久性双侧颈总动脉结扎法制备VD大鼠模型。NBP对照组和NBP治疗组大鼠术后1 d开始给予BNP腹腔注射,剂量为5 mg·kg~(-1)·d~(-1),Sham组和VD组给予生理盐水腹腔注射(0.2 ml/d)。各组大鼠连续腹腔注射给药7 d。术后各时间点(1、2、4、8 w)留取海马组织,免疫组化观察各组大鼠海马CA1区Bax和Bcl-2的表达。结果VD组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达灰度明显高于Sham组(P<0.05);4 w和8 w时,NBP治疗组大鼠海马CA1区Bax蛋白表达均明显低于VD组大鼠相应时间点(P<0.05)。8 w时VD大鼠海马CA1区Bax表达灰度明显高于1 w和2 w时(P<0.05)。NBP对照组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度均明显高于Sham组(P<0.05);8 w时NBP治疗组大鼠海马CA1区Bcl-2表达灰度明显高于VD组(P<0.05)。结论VD大鼠海马CA1区促凋亡蛋白Bax过度表达,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达有减弱趋势;NBP对VD大鼠海马CA1区细胞凋亡具有明显的保护作用,可以抑制缺血损伤导致的海马CA1区Bax蛋白过度表达,同时能够提高大鼠海马CA1区Bcl-2蛋白的表达水平,抑制细胞凋亡,促进细胞存活,发挥神经保护作用。     

多奈哌齐对侧脑室注射链脲菌素致痴呆大鼠的治疗作用

目的研究多奈哌齐对脑室注射链脲菌素(STZ)致痴呆大鼠的治疗作用。方法健康SD雄性大鼠24只,随机分为对照组、模型组、多奈哌齐治疗组,每组8只。模型组和治疗组在手术的第1天和第3天分别向两侧侧脑室内注射STZ 3 mg/kg,对照组给予相同体积的柠檬酸缓冲液。多奈哌齐治疗组于手术前10 d给予多奈哌齐0.45 mg/(kg·d)灌胃,术后持续8周,其余2组给予等量生理盐水。术后第10天、第8周行Morris水迷宫试验,观察大鼠学习记忆能力。术后8周处死大鼠取海马送电镜观察神经元凋亡情况。结果术后10 d水迷宫测试,与对照组比较,模型组与治疗组的潜伏期延长,过平台次数下降,差异有统计学意义(P<0.01)。术后治疗8周,与模型组比较,治疗组的潜伏期缩短,过平台次数增加,差异有统计学意义(P<0.01)。电镜下观察多奈哌齐治疗组大鼠海马细胞结构细胞凋亡程度轻。结论侧脑室注射STZ制造大鼠痴呆模型稳定性高,多奈哌齐通过减轻AD模型鼠海马神经元的凋亡,从而起到改善临床症状的作用。     

软脉灵口服液对拟血管性痴呆大鼠学习记忆和海马CA1区神经元凋亡的影响

目的观察软脉灵口服液对实验性血管性痴呆（VaD）大鼠空间学习记忆能力和海马CA1区神经元凋亡的影响。方法选用永久性结扎双侧颈总动脉（2VO）制作VaD模型,用Morris水迷宫测定大鼠学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马CA1区的形态学变化,TUNEI．染色观察大鼠海马CA1区的神经元凋亡情况。结果与模型组比较,软脉灵高剂量组逃避潜伏期缩短（P〈0．001）、1min穿越原平台所在位置次数增加（P〈0．001）;软脉灵高剂量组与低剂量组大鼠海马CA1区的凋亡细胞比模型组减少（P〈0．01）;与软脉灵低剂量组比较．高剂量组大鼠海马CA1区的凋亡细胞更少（P〈0．01）。结论软脉灵口服液能改善拟VaD尢鼠的空间学习记忆能力,减少拟VaD大鼠海马CA1区的凋亡细胞。这些作用呈一定的量效关系。     

升降散治疗血管性痴呆模型大鼠的疗效及作用机制

目的探讨升降散治疗血管性痴呆模型大鼠的临床效果及作用机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组和升降散组,假手术组大鼠仅切开颈前,模型组和升降散组大鼠行2-AO法永久性结扎双侧颈总动脉得到血管性痴呆模型大鼠。应用Morris水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,免疫荧光组织化学染色检测血管内皮生长因子(VEGF)阳性细胞数和计数微血管密度(MVD),细胞凋亡检测采用TUNEL法,采用SABC免疫组织化学法检测Bcl-2,Bax蛋白阳性表达。结果给药后,升降散组和模型组大鼠的学习次数高于假手术组、正常组,正确次数均显著低于假手术组、正常组(P<0.05),升降散组大鼠学习次数低于模型组,正确次数显著高于模型组(P<0.01);正常组和假手术组大鼠仅有少量VEGF阳性细胞,升降散组阳性细胞数量最高,显著高于其他三组(P<0.01);升降散组海马CA1区凋亡细胞数显著低于模型组而显著高于正常组和假手术组(P<0.01);海马CA1区Bcl-2和Bax阳性细胞数模型组大鼠高于正常组和假手术组(P<0.01),升降散组大鼠海马CA1区Bax阳性细胞数明显低于模型组而Bcl-2阳性细胞数明显高于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论升降散可促进脑部血管再生,可通过下调Bax蛋白和上调Bcl-2蛋白表达以抑制脑细胞的凋亡,显著改善痴呆大鼠的学习、记忆能力。     

NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠海马区细胞凋亡及NMDAR1表达的影响

目的探讨神经生长因子（NGF）基因修饰的骨髓间充质干细胞（BMSCs）对血管性痴呆（VaD）大鼠海马区细胞凋亡的影响。方法以NGF和（或）绿色荧光蛋白基因转染BMSCs;两血管法制备VaD模型。将大鼠随机分为假手术组、PBS组、BMSCs组及NCF修饰组。造模1周后,尾静脉注射NCF基因修饰的BMSCs;4周后行Morris水迷宫检测,观察其行为学改变;末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记法检测海马凋亡细胞,免疫组化法检测大鼠海马区神经细胞NGF、N-甲基-D-天门冬氨酸受体1（NMDAR1）表达。结果与PBS组、BMSCs组比较,NGF修饰组逃避潜伏期明显缩短,海马区神经元凋亡率明显下降,NMDAR1表达明显降低（P〈0．05或〈0．01）。结论NGF基因修饰的BMSCs对VaD大鼠的学习记忆能力有一定改善作用;对其海马细胞有一定保护作用;可降低VaD大鼠海马区NR1表达,提高NGF表达。     

针刺耳穴对全脑缺血大鼠学习记忆能力和海马脑源性神经营养因子表达的影响

目的探讨针刺耳穴对全脑缺血大鼠的治疗机制。方法选择45只SD大鼠,随机分为对照组、模型组和针刺组,每组15只;模型组和针刺组大鼠用改良的4血管阻塞法建立血管性痴呆(VaD)大鼠模型,针刺组造模后针刺"肾"、"心"耳穴4周;对照组只做手术,但不阻断血管。用Morris水迷宫检测3组大鼠学习记忆能力,免疫组织化学SABC法检测海马神经元脑源性神经营养因子(BDNF)阳性表达。结果模型组大鼠学习记忆能力较对照组明显减退(P<0.05,P<0.01),海马神经元BDNF阳性表达较对照组明显增多(P<0.05);针刺组大鼠学习记忆能力较模型组明显提高(P<0.05),海马神经元BDNF阳性表达较模型组和对照组均明显增多(P<0.05,P<0.01)。结论针刺耳穴改善全脑缺血大鼠学习记忆能力,其机制可能与针刺上调VaD大鼠海马神经元BDNF的表达有关。     

大鼠成体干细胞食管下段移植的实验研究

目的研究成体干细胞注射至食管下段的可行性，探索利用成体干细胞[骨骼肌卫星细胞（SC）和骨髓间充质干细胞（MSC）]移植治疗胃食管反流病（GERD）的新方法。方法选取体质量160～240g的Wistar大鼠，雌雄各半，不同实验组分别于体外培养并扩增骨骼肌SC或MSC，5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）标记后，经腹腔将大鼠自体骨骼肌SC悬液植入食管下段肌层；MSC悬液植入同种异体大鼠食管下段肌层。1周和4周后分批处死动物，取食管下段组织并使用组织学方法评价植入细胞生长分化情况。结果BrdU的细胞标记率接近100％。接受干细胞移植的大鼠生长良好。干细胞移植后第1周和第4周，SC组和MSC组大鼠食管下段均可见大量分化为骨骼肌细胞的BrdU阳性细胞，SC组第4周较第1周BrdU阳性细胞核数显著增多（P〈0．01）。MSC组第4周较第1周BrdU阳性细胞核计数增多，但差异无统计学意义（P〉0．05）。SC组与MSC组比较，第1周BrdU阳性细胞核数差异无统计学意义（P〉0．05），第4周SC组较MSC组显著增多（P〈0．05）。注射局部未见炎症反应，与对照组病理学分析无差异。结论成体干细胞移植至大鼠食管下段安全、可行，能在食管下段长期存活并分化为骨骼肌。骨骼肌SC或MSC移植可能成为治疗GERD的新方法。     

血管性痴呆大鼠PSD-95变化机制的研究

目的 研究血管性痴呆(VD)大鼠形成过程中突触后致密物质95(PSD95)的变化规律及作用机制.方法 永久性结扎双侧颈总动脉制备VD大鼠模型,用Morris水迷宫衡量大鼠的学习记忆水平,用免疫组化法检测大鼠海马PSD95的表达.结果 随术后缺血时间延长,VD大鼠的学习记忆能力下降,术后4 w后与假手术组有显著差异(P<0.01);PSD95的表达随术后时间变化,呈先升后降改变,术后2 w时表达最多,与假手术组有显著差异(P<0.01),此后逐渐减少,并明显低于假手术组(P<0.01),术后16周时表达最少.结论 PSD95的表达变化与VD的发生发展有关,PSD95将成为治疗VD的新的靶点     

温肺降浊方对血管性痴呆大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的观察温肺降浊方对血管性痴呆(VD)大鼠海马CA1区神经元凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨温肺降浊方对VD大鼠海马神经元的保护机制。方法取SD大鼠,采用双侧颈总动脉永久性结扎法制做VD模型大鼠,将造模成功的大鼠随机分为VD模型组,温肺降浊方低、中、高剂量组及石杉碱甲组,另设假手术组。灌胃给予相应药物治疗,连续给药30 d后,用TUNEL法检测大鼠海马CA1区神经元凋亡的情况,Western印迹检测海马组织Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果 TUNEL结果显示,温肺降浊方各组神经元凋亡指数较模型组明显降低(P<0.01)。Western印迹结果显示,温肺降浊方各组大鼠海马组织Bcl-2蛋白表达较模型组明显增加(P<0.01),Bax蛋白表达较模型组明显减少(P<0.01)。结论温肺降浊方可通过提高海马组织Bcl-2蛋白表达,降低Bax蛋白表达,减少VD模型大鼠海马CA1神经元的凋亡,保护神经元,改善VD大鼠学习记忆能力。     

重复经颅磁刺激改善血管性痴呆大鼠认知功能及机制的研究

目的从行为学、形态学、电生理学和分子生物学等不同层面研究重复经颅磁刺激(rTMS)对血管性痴呆(vascular dementia,VaD)大鼠学习记忆的影响。方法选择健康雄性SD大鼠20只,随机分为假手术组6只,VaD组6只,rTMS组8只。治疗后进行Morris水迷宫行为学测试,记录各组大鼠海马长时程增强效应(LTP)。应用Western blot技术及免疫组织化学技术检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)蛋白的表达。应用HE染色,观察各组大鼠海马CA1、CA3区细胞形态。结果 VaD组和rTMS组水迷宫检测均显示全时程平均逃避潜伏期较假手术组明显延长(P<0.05),rTMS组较VaD组明显缩短(P<0.05);VaD组和rTMS组在原平台象限游泳时间和在原平台象限游泳路程占总路程百分比较假手术组明显缩短[(5.50±0.83)s、(9.76±1.56)s vs(13.53±3.70)s,(19.78±3.54)%、(30.33±3.82)%vs(46.73±14.08)%,P<0.05],rTMS组较VaD组明显延长(P<0.05)。rTMS组LTP,海马BDNF、NMDAR表达较VaD组显著升高。光镜下可见,rTMS组海马CA1、CA3区神经细胞排列、层次数量、细胞受损程度均明显改善。结论 rTMS可上调大鼠海马BDNF、NMDAR的表达,从而促使LTP形成,增强突触可塑性,改善大鼠空间记忆能力及认知功能。