hTERT-siRNA抑制胆囊癌细胞端粒酶活性及增殖运动的研究

目的:了解hTERT-siRNA对GBC-SD细胞代谢、侵袭和端粒酶活性、hTERT mRNA、hTERT蛋白、β-catenin mRNA、-βcatenin蛋白的作用,并探讨其相关机制。方法:在质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT干扰后,采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western blot方法检测胆囊癌细胞GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和-βcatenin基因mRNA、蛋白质表达水平;四甲基偶氮唑蓝(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、运用Transwell小室了解癌细胞侵袭情况。结果:pGCsi-H1/GFP-hTERT对GBC-SD端粒酶活性、SDH活性、侵袭、hTERT mRNA、hTERT蛋白均有抑制作用并随浓度升高而增强。pGCsi-H1/NEGative对上述指标无明显抑制作用,与pGCsi-H1/GFP-hTERT抑制作用比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:pGCsi-H1/GFP-hTERT可以抑制端粒酶、SDH活性及其侵袭力,其机制与hTERT mRNA及蛋白表达降低有关。     

吲哚美辛对K562细胞株BCR/ABL-Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨吲哚美辛对K562细胞增殖的影响及其分子机制。方法采用不同浓度的吲哚美辛作用于K562细胞,MTT法
检测其对细胞增殖的影响,克隆形成实验检测吲哚美辛对K562细胞克隆形成能力的影响。RT-PCR分别检测bcr-abl、β-catenin
的mRNA表达变化,Western blot分别检测pBCR/ABL、总BCR/ABL、β-catenin、pGSK-3β、c-myc的蛋白表达变化。结果100、
200、400 μmol/L吲哚美辛作用细胞48 h后,以浓度依赖性方式抑制K562细胞的增殖和克隆形成能力。3种浓度的吲哚美辛处
理K562细胞后,pBCR/ABL、总BCR/ABL的蛋白表达依次减少,而bcr-abl mRNA水平没有明显变化。β-catenin mRNA和蛋白
水平依次减少;pGSK-3β、c-myc 的蛋白水平均明显降低。结论吲哚美辛可通过抑制BCR/ABL-Wnt/β-catenin 信号通路的活
性,从而抑制白血病K562细胞的增殖和克隆形成能力。
     

吲哚美辛联合X线照射对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的：观察吲哚美辛联合X线照射对人急性髓系白血病HL-60细胞的增殖抑制作用,为抗肿瘤研究提供依据。方法：将HL-60细胞培养于含吲哚美辛的培养基中,终浓度分别为0、20、40、60、80和100 μmol·L^-1。同时给予3　Gy X线照射,继续培养24　h;MTT法检测细胞增殖抑制率;台盼蓝染色法检测细胞活力;实时荧光定量PCR检测细胞增殖和凋亡相关基因PCNA和Caspase-3 mRNA表达变化。结果：与对照组比较,不同浓度吲哚美辛联合照射组HL-60细胞增殖抑制率明显增加,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组HL-60细胞增殖抑制率最高（P<0.01）。与对照组、吲哚美辛（80 μmol·L^-1）组和照射组比较,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组HL-60细胞活力抑制程度最高（P<0.05或P<0.01）。与对照组、吲哚美辛（80 μmol·L^-1）组和照射组比较,80 μmol·L^-1吲哚美辛联合照射组PCNA mRNA表达水平明显降低（P<0.01）,Caspase-3 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）。结论：吲哚美辛可显著增强照射对HL-60细胞的增殖抑制作用。
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吲哚美辛对喉癌Hep-2细胞增殖与iNOS活性的影响

目的：探讨吲哚美辛对喉癌细胞增殖与诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性的影响,为喉癌的预防和治疗提供理论依据。方法： Hep-2细胞培养于含吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）的培养基中,分别培养24 h和48 h;用MTT方法检测吲哚美辛组细胞增殖的抑制率,用台盼蓝染色法检测吲哚美辛组细胞活力的抑制作用,并与溶剂对照组进行比较;吲哚美辛（125、250和500 μmol•L^-1）与脂多糖（LPS,10 μmol•L^-1）同时处理细胞16　h,同时设只加LPS对照组,采用酶法和分光光度法检测细胞培养上清液中诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性。结果：与对照组比较,不同浓度的吲哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）组Hep-2细胞增殖的抑制率均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞增殖的抑制率显著降低（P<0.05）;与对照组比较,不同浓度的吲 哚美辛（30、60、125和250 μmol•L^-1）随剂量增加,Hep-2细胞活力的抑制程度均显著增加（P<0.05）。相同浓度的吲哚美辛,随作用时间延长,Hep-2细胞活力的抑制程度显著降低（P<0.05）;与LPS对照组比较,吲哚美辛在125、250及500 μmol•L^-1浓度时, LPS诱导的细胞培养上清液中iNOS的活性显著降低（P<0.05）。结论：吲哚美辛在30～250 μmol•L^-1浓度范围内显著抑制Hep-2细胞的细胞增殖与细胞活力,明显降低LPS诱导的细胞 iNOS的活性升高。     

胃癌细胞株SGC-7901的Wnt／β-Catenin信号途径与Caspase-8、Caspase-3及Bcl-2的关系

目的:研究人胃癌细胞系SGC-7901中β-Catcnin与原癌基因Bcl-2及凋亡基因Caspase-8、Caspase-3表达的关系,初步探索Wnt/β-Catenin通路在肿瘤发生过程中作用机制.方法:(1)采用RT-PCR法分别检测人胃癌细胞系SGC-7901受吲哚美辛干预组和未受干预组中的β-Catenin、Bcl-2、Caspase-8及Caspase-3mRNA的表达;(2)采用MTT法检测吲哚美辛抗癌效应.结果:(1)吲哚美辛干预组较未受干预组表现为伴随β-Catenin表达水平降低,Bcl-2表达下调,而Caspase-8及Caspase-3mRNA表达上调.(2)吲哚美辛对人胃癌细胞系SGC-7901抑制率呈浓度和时间依赖性.结论:胃癌的发生、发展可能是Wnt/β-Catenin通路功能亢进,进一步激活原癌基因Bcl-2,并抑制凋亡基因Caspase-8、Caspase-3,导致细胞增殖与凋亡失衡的结果.     

吲哚美辛体外干预研究胃癌Wnt/β-Catenin信号途径与Caspase-3及Bcl-2关系

目的:研究人胃癌细胞系SGC7901中β-连环蛋白(β-Catenin)与Caspase-3凋亡基因及与Bcl-2原癌基因表达的关系,初步探索肿瘤发生过程中Wnt/β-Catenin通路对细胞凋亡的调节机制.方法:(1)MTT方法检测吲哚美辛抗肿瘤效应;(2)RT-PCR分别检测人胃癌细胞系SGC7901受吲哚美辛干预组和未受干预组中的β-Catenin与Caspase-3及Bcl-2mRNA的表达.结果:吲哚美辛在浓度为50μmol/L时作用24h对人胃癌SGC7901细胞抑制效果不明显,而作用48、72h及浓度为100和200μmol/L时作用24、48、72h的凋亡诱导作用明显,且抑制率呈浓度和时间依赖性;吲哚美辛干预组较未受干预组表现为伴随β-Catenin表达水平降低,Bcl-2表达下调.而Caspase-3的表达上调.结论:人胃癌细胞系SGC7901可能通过Wnt/β-Catenin通路激活Bcl-2原癌基因蛋白表达促进细胞增殖,同时抑制Caspase-3凋亡基因的蛋白表达抑制细胞凋亡,使细胞增殖与凋亡失衡.     

吲哚美辛对结肠癌细胞HCT116中细胞周期蛋白的影响

目的揭示吲哚美辛抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡的分子机理，探讨其抗结肠肿瘤的作用机制。方法不同浓度的吲哚美辛作用于结肠癌细胞株HCT116细胞24h，采用Western蛋白印迹技术检测CDK2、CDK4、Bcl-2、Bax及p21^WAE1/CIP1蛋白表达。结果吲哚美辛能降低CDK2、CDK4及Bcl-2的表达，同时上调p21WAE1／CIP1蛋白的表达且呈剂量依赖方式，而对促凋亡蛋白bax的表达无影响。结论吲哚美辛可通过降低CDK2、CDK4、Bcl-2蛋白，上调p21^WAF1/CIP1蛋白的表达来抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡，从而实现其抗肿瘤作用。     

吲哚美辛对骨肉瘤143B细胞增殖、迁移和凋亡的影响

目的 观察吲哚美辛对骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其可能的机制。方法 体外培养人骨肉瘤细胞143B,倒置显微镜观察骨肉瘤143B细胞的形态;CCK-8检测骨肉瘤143B细胞增殖情况;流式细胞术分析骨肉瘤143B细胞的凋亡;Transwell检测骨肉瘤143B细胞迁移情况;Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白 Bcl-2的表达。结果 CCK-8结果显示吲哚美辛能抑制骨肉瘤143B细胞的增殖,呈时间、浓度依耐性;流式细胞术结果显示吲哚美辛以浓度依赖的形式诱导骨肉瘤细胞凋亡;Transwell结果显示吲哚美辛可以抑制骨肉瘤143B细胞迁移;Western blot法检测结果表明,吲哚美辛下调抑凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论 吲哚美辛抑制骨肉瘤143B细胞增殖和迁移能力并且促进其凋亡,并呈现时间和浓度依赖性。     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外，以HL60细胞株细胞为对象，采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量；采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性；采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比，HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时，HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化；当浓度增至0．040—0．050μg／m1，hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后，hTERT mRNA表达呈下降趋势，24h后端粒酶活性明显下降，两者的下降趋势基本相似，但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下，HL60细胞凋亡率增加，而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降，且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。