云南省一株版纳病毒的分离和鉴定

目的 对2008年在云南省勐腊县采集的蚊虫进行版纳病毒(BAV)分离和鉴定.方法 2008年7月在勐腊县南嘎村人房和畜圈采集蚊虫标本,用细胞培养法进行虫媒病毒分离并鉴定,测定分离到的BAV第5、8及11节段序列,利用MEGA4软件进行系统进化分析.结果 共采集到蚊虫7种1731只,分离到1株导致C6/36细胞产生规律病变的分离物,经血清学和分子生物学鉴定为BAV,系统进化分析显示第8节段和中国分离株关系最近,而第11节段和越南分离株关系最近.结论 系统进化分析提示该BAV毒株可能与越南分离株之间发生了基因重配.     

版纳病毒及其感染

版纳病毒于1987年首次分离自我国云南省西双版纳地区采集的发热和脑炎患者脑脊液和血清标本,是呼肠孤病毒科新建立病毒属——Seadornaviru（s东南亚十二节段RNA病毒属）的模式病毒。作为一个新分离的与人类疾病关系密切的病毒,版纳病毒引起了相关学术界的广泛关注。现就版纳病毒的病原学特征、地理分布、媒介、人畜感染情况等方面的研究进展做一综述。     

基于第12节段基因序列的版纳病毒分子遗传进化分析

目的 了解自1980-2012年在世界各地分离的版纳病毒分子遗传进化特征。方法 采用多种生物信息学分析方法,对1980-2012年我国及世界各地分离的版纳病毒进行基于第12节段基因序列的系统进化、分子溯源分析。结果 版纳病毒的共同进化祖先出现时间为315（95% HPD：63～619）年前,第12节段的进化速率为2.33×10^-3（95% HPD：2.84×10^-4～8.52×10^-3）碱基替换/位点/年,提示版纳病毒属于新发快速进化的虫媒病毒。结论 版纳病毒属于快速进化的新发虫媒病毒,其地域分布范围进一步扩大且已经分化出新的病毒变种,应加强对该病毒在自然界分布及其致病性的监测。     

首次从阿拉山口口岸地区沙鼠中检测到博卡病毒

目的掌握中国-哈萨克斯坦边境阿拉山口口岸地区鼠类携带博卡病毒情况,为中哈边境口岸鼠传疾病的防控提供技术支持。方法 2016年3-11月,采用夹夜法、弓形夹法在中哈边境铁路沿线区域开展鼠类监测,利用巢式PCR法对95份鼠类样本进行博卡病毒检测。结果共捕获鼠类300只,隶属8属12种,其中大沙鼠为优势鼠种。首次从1只大沙鼠和1只红尾沙鼠的肺脏样本中检测到博卡病毒核酸,阳性率为2.11%;2个博卡病毒NS1基因序列同源性为99.5%,在遗传进化树中单独聚为一支。结论中哈边境阿拉山口铁路沿线区域鼠类存在博卡病毒感染,应加强该区域鼠类监测,保障口岸公共卫生安全。     

从我国儿童呼吸道标本中首次检出人博卡病毒

目的 调查国内儿童急性呼吸道感染中是否存在人类博卡病毒（human Boeavirus）感染。方法 采用聚合酶链反应（PCR）技术对湖南地区急性呼吸道感染儿童的鼻咽抽吸物（NPA）进行包括HBoV等12种病毒基因筛查，然后将PCR扩增阳性产物构建到Ppbs-T载体进行TA克隆及步移法测序，获取全长cDNA，登录Gen Bank作对比研究。结果 从某儿童急性肺炎的呼吸道标本中，检获到HBoV基因，该患者11种常见呼吸道病毒PCR均为阴性，唯检出HBoV。患者表现咳嗽、低热、呼吸困难等临床症状，在儿科诊断为肺炎。结论 国内儿童急性呼吸道感染中，特别是在中国南方地区的急性呼吸道感染患儿中，有部分可能系HBoV感染引起，应引起临床医护人员重视。     

天津市首次从淡色库蚊检测出基因Ⅰ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查天津市部分地区蚊虫携带流行性乙型脑炎(乙脑)病毒状况,为乙脑防治提供依据。方法 2010年7-9月,使用灯诱法,每月在天津市5个区(县)采集蚊虫2次,用RTPCR检测乙脑病毒核酸;扩增的目标片段进行序列测定;用Mega 4.0软件以邻位相连法构建进化树。结果共捕获成蚊10285只,2属3种(淡色库蚊、三带喙库蚊、中华按蚊),一组淡色库蚊样品,经分子生物学鉴定呈乙脑病毒感染阳性,命名为TJ01(HQ718463),基因分型为Ⅰ型乙脑病毒。结论天津市蚊虫中存在基因Ⅰ型乙脑病毒感染,与上海市乙脑病毒分离株进化关系较近。     

人类博卡病毒基因组序列与进化分析

目的 对人类博卡病毒的基因组结构、系统进化以及突变规律进行分析.方法 利用生物信息学方法如BLAST、CLUSTALW等程序对已经提交到GenBank数据库中的人类博卡病毒全基因组序列进行比对分析和系统进化分析.结果 人类博卡病毒基因组短小、结构简单;与其它博卡病毒基因组同源性高,尤其是犬细小病毒;目前GenBank中的5株人类博卡病毒根据进化关系分析可分为两群(CRD2、st2、CZ643和st1组成一群,WLL-1单独成群);统计突变发现人类博卡病毒NS1基因突变频率最小,VP1/2基因突变频率高.结论 人类博卡病毒很可能是动物博卡病毒传染给人后的变种;稳定的NS1基因很可能成为开发疫苗和防治药物的重要靶点.     

辽宁省部分地区2008年虫媒病毒分离鉴定

目的在辽宁省采集蚊虫标本进行病毒分离,了解虫媒病毒分布情况。方法2008年夏季在辽宁省丹东和锦州市采集蚊虫标本,利用C6/36和BHK-21等细胞分离病毒;对新分离病毒利用血清学、分子生物学和生物信息学方法进行鉴定。结果在辽宁省丹东和锦州市共采集蚊虫标本3属5种9296只,包括库蚊属的三带喙库蚊、淡色库蚊,伊蚊属的刺扰伊蚊、背点伊蚊和按蚊属的中华按蚊。从蚊虫标本中共得到4株病毒分离物,其中1株为乙型脑炎(乙脑)病毒(丹东市的三带喙库蚊),2株为版纳病毒(锦州市的中华按蚊),1株为辽宁病毒和版纳病毒混合(锦州市的中华按蚊)。新分离乙脑病毒属于基因Ⅰ型乙脑病毒,E基因编码病毒毒力和抗原表位的位点未发生改变。结论在辽宁省再次分离到乙脑病毒,并首次证明辽宁省存在辽宁病毒。     

辽宁省部分地区2006年虫媒病毒分离鉴定

目的 调查辽宁省虫媒病毒的种类及分布.方法 2006年8月在辽宁省沈阳市、营口市、盘锦市、锦州市和丹东市采集蚊虫标本,利用组织细胞培养分离病毒,对病毒分离物进行血清学和分子生物学鉴定.结果 5个市共采集蚊虫标本5410只,分离到8株阳性分离物,经鉴定其中3株(LN0684、LN0688、LN0689)为版纳病毒,1株(LN0636)为甲病毒属盖塔病毒,另外4株尚在鉴定.新分离的版纳病毒与我国此前的分离株处于同一个进化簇,核苷酸同源性91.2%～94.7%.新分离的盖塔病毒与韩国分离株(swine)在一个进化枝上,核苷酸同源性为99.2%,与俄罗斯分离株、中国大陆分离株及台湾分离株的核苷酸同源性在95%～99%之间.结论 2006年在辽宁省分离到3株版纳病毒、1株盖塔病毒和4株未知虫媒病毒.版纳病毒、盖塔病毒为辽宁省首次分离;盖塔病毒核苷酸同源性和韩国分离株最近.     

国境口岸首次从输入性蚊虫中检测到库蚊黄病毒

目的掌握输入性蚊虫携带病原体情况,为卫生检疫执法提供技术支持,保障国境口岸卫生安全。方法采用分子生物学方法,对捕获的蚊虫进行黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)病毒检测。结果从来自日本船舶(柬埔寨籍恒利号)捕获的2只淡色库蚊(Culex pipiens pallens)中检测到库蚊黄病毒(Culex flavivirus)。结论国境口岸首次从输入性蚊虫中检测到库蚊黄病毒,应进一步强化技术手段开展检疫执法。     

Isolation and molecular characterization of Banna virus from mosquitoes, Vietnam

We isolated and characterized a Banna virus from mosquitoes in Vietnam; 5 strains were isolated from field-caught mosquitoes at various locations; Banna virus was previously isolated from encephalitis patients in Yunnan, China, in 1987. Together, these findings suggest widespread distribution of this virus throughout Southeast Asia.     

浙江省蚊虫中乙型脑炎病毒的分离及鉴定

目的 对2007年浙江省采集的蚊虫标本进行病毒分离与鉴定.方法 2007年在浙江省采集蚊虫标本,用金黄地鼠肾细胞(BHK-21)分离病毒,对新分离的病毒进行血清学和分子生物学鉴定.结果 采集到4735只蚊虫,分离到2株致BHK-21细胞病变的病毒,经免疫荧光和RT-PCR试验鉴定为乙型脑炎病毒(JEV),利用病毒PrM区段进行基因分型分析,新分离的2株病毒属于基因Ⅰ型JEV.对这2株病毒的E基因区段进行分析,核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.0%和98.8%.与疫苗株SA14-14-2相比,核苷酸同源性在87.7%,氨基酸同源性在96.4%以上,共有14个共同的氨基酸位点差异.结论 在浙江省采集的蚊虫标本中分离到2株病毒,经鉴定为基因Ⅰ型JEV,是浙江省近年来首次分离.     

新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员

目的 揭示新疆库蚊分离的0507JS11病毒的基本特征,明确其分类地位.方法 对0507JS11病毒进行细胞感染特点观察、负染电子显微镜(简称电镜)观察、基因组核酸电泳检测、全基因序列测定和系统进化分析.结果 0507JS11病毒可以引起Aedes albopictus C6/36细胞病变;完整病毒颗粒呈20面立体对称,直径20 nm,无包膜;病毒基因组为长3977 nt的单股正链DNA,基因组核酸电泳检测呈大小约4 kbp的DNA条带;病毒基因组编码区包括3个开放读码框(open readingframe,ORF),ORF1和ORF2编码非结构蛋白(non-structural protein,NS),ORF3编码衣壳蛋白(capsidprotein,VP);全基因序列系统进化分析显示病毒位于Brevidensovirus内一个独立进化分支.结论 新疆库蚊分离的0507JS11病毒为Brevidensovirus新成员.     

青海省凶小库蚊辽宁病毒的分离鉴定

目的对青海省蚊虫标本中新分离的QH07130病毒株进行系统鉴定分析。方法采用血清学和分子生物学方法对QH07130病毒进行鉴定,并对该病毒进行系统进化特征分析。结果QH07130病毒株对C6／36细胞产生明显细胞病变;间接免疫荧光试验显示,QH07130病毒株与辽宁病毒（LNV）单克隆抗体呈现阳性反应。聚丙烯酰胺凝胶电泳显示,QH07130病毒为12条带双链RNA病毒,与LNV的6-5-1带型一致。该病毒第10节段序列测定全长为844bp,与LNVSX0771和NE9712株核苷酸同源性分别为99．5％和98．0％;系统进化分析显示,QH07130病毒位于LNV进化分支内,并且与LNVSX0771和NE9712株的进化关系最近,确认QH07130病毒为LNV。结论青海省蚊虫中存在LNV传播,这是首次在位于青藏高原的青海省分离到该病毒。     

深圳市龙岗区蚊虫自然感染流行性乙型脑炎病毒状况调查

目的 研究深圳市龙岗区蚊虫流行性乙型脑炎病毒自然感染状况,为预测该地区乙脑发病趋势及流行强度,制定有效预防控制措施提供科学依据.方法 采用灯诱法捕捉蚊虫标本并进行分类鉴定,以JEV的NS3基因区段设计特异引物,通过实时荧光RT-PCR (real-time RT-PCR)对蚊虫中流行性乙型脑炎病毒进行检测,阳性标本经测序后再在GenBank中进行核苷酸序列的同源性比对.结果 捕获的蚊虫隶属3属5种,致倦库蚊是优势蚊种;1 533只蚊虫分成25批,从3批致倦库蚊标本中检出JEV核酸阳性,阳性率为12％.阳性标本与GenBank中报道的JEV参考株间相应的核苷酸序列同源性达99％以上,均属于JEV Ⅰ型病毒.结论 龙岗区存在着蚊虫自然感染JEV,致倦库蚊是区内乙脑传播的主要蚊媒,有流行人间和畜间流行性乙型脑炎的潜在危险,提示应进一步完善疫苗接种和免疫监测,积极开展消除蚊虫孳生地,灭蚊、防蚊工作,以控制和切断乙脑传播途径.