SCF或（和）GM—CSF体内基因转染对“自杀基因”疗法抗肿瘤作用的增？…

目的 通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效,探讨其相关免疫学机理。方法 采用腺病毒介导的ＳＣＦ,ＧＭ－ＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌,观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期,不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果 一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭ－ＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染,能增强“自杀基因”疗法的疗效,在肿瘤局部出     

SCF或(和)GM-CSF体内基因转染对"自杀基因"疗法抗肿瘤作用的增强效应及其相关机理的研究

目的通过增强体内抗原提呈功能提高“自杀基因”疗法疗效，探讨其相关免疫学机理。方法采用腺病毒介导的ＳＣＦ、ＧＭＣＳＦ基因体内转染联合ＣＤ／５ＦＣ“自杀基因”疗法治疗小鼠的ＣＴ２６结肠腺癌，观察肿瘤的生长和荷瘤小鼠的存活期、不同方法所诱导的ＣＴＬ杀伤活性及肿瘤局部的细胞因子表达。结果一次性低剂量腺病毒介导的ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的体内转染，能增强“自杀基因”疗法的疗效。在肿瘤局部出现新的细胞因子表达，包括ｍＩＬ４、ｍＩＬ２、ｍＩＦＮγ和ｍＴＮＦα。脾细胞对ＣＴ２６细胞的杀伤作用增强。结论ｍＧＭＣＳＦ或（和）ｍＳＣＦ基因的联合转染对“自杀基因”系统的疗效具有明显的增强作用，其与机体特异抗肿瘤免疫功能以及肿瘤局部分泌的细胞因子有关。     

腺病毒介导IL-2基因转染的瘤苗体内抗肿瘤作用

目的 :探讨重组腺病毒介导的 IL- 2基因转染的瘤苗的体内抗肿瘤作用及其免疫学机制。方法 :应用腺病毒介导的鼠 IL- 2基因转染 CT2 6小鼠结肠癌细胞 ,灭活后用作瘤苗治疗荷瘤小鼠 ,观察皮下肿瘤生长及其存活期。采用乳酸脱氢酶释放法检测荷瘤小鼠脾细胞 CTL、L AK、NK细胞的杀伤活性。结果 :鼠 IL- 2基因转染瘤苗治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤生长并明显延长其存活期 (P<0 .0 1)。体内免疫功能检测表明 ,鼠 IL- 2基因转染疫苗治疗组小鼠脾细胞 CTL 活性、L AK活性和 NK活性显著高于对照组 (P<0 .0 1)。结论 :腺病毒介导鼠 IL- 2基因转染的瘤苗体内具有较强的抗肿瘤效应 ,其机制可能是提高了荷瘤小鼠特异性和非特异性抗肿瘤免疫反应     

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理研究

本研究以腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因与小鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)基因体内联合转染,观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理.小鼠皮下接种结肠腺癌CT26细胞后3天,肿瘤局部注射表达Ltn的重组腺病毒AdLtn和表达CD的重组腺病毒AdCD,然后连续10天给予5一氟胞嘧啶(5-FC)300mg/kg进行治疗,结果表明,联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制,小鼠存活期明显长于单用AdLtn治疗组或单用AdCD/5-FC治疗组.经联合治疗后小鼠脾细胞的NK活性和对(37结肠腺癌细胞的CTL杀伤活性明显增强.瘤体细胞FACS分析结果表明,经联合基因治疗后,肿瘤组织CD4~ 、CD8~ 细胞浸润增加,结肠腺癌细胞表达H-2Kd和B7-1分子明显增加.提示经CD自杀基因和Ltn基因联合治疗后,肿瘤细胞免疫原性增加.本研究结果表明联合应用自杀基因和Ltn基因治疗可以提高机体对肿瘤细胞免疫的应答,增加机体的抗肿瘤作用,是肿瘤基因治疗中一条新的途径.     

联合自杀基因与IL-2基因转移疗法的抗肿瘤效果及其抗肿瘤免疫应答的诱导作用

单用自杀基因疗法或单用细胞因子基因疗法抗肿瘤效果不理想,本研究中我们观察了大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因与白细胞介素2(IL-2)基因联合转移对荷瘤小鼠的治疗效果及其对抗肿瘤免疫的诱导作用。复制荷瘤小鼠模型后在荷瘤部位注射表达CD基因的重组腺病毒(AdCD)及表达小鼠IL-2基因的重组腺病毒(AdIL2),并连续10天、每天1次腹腔注射5氟胞嘧啶(5FC)对荷瘤小鼠进行治疗。结果表明,AdCD/5FC/AdIL2联合基因治疗能显著抑制荷瘤小鼠皮下肿瘤的生长,并明显延长其生存期(P<0.01)。联合基因治疗组小鼠肿瘤细胞发生明显的坏死,瘤内及瘤周有大量的炎性细胞浸润,瘤内CD4~ 和CD8~ T细胞明显增加,脾细胞NK和CIL杀伤活性明显高于单用AdCD/5FC、对照病毒AdLacZ/5FC或PBS组。实验结果表明,联合应用自杀基因与细胞因子基因治疗可更有效诱导机体的抗肿瘤免疫反应,从而更显著地抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长。     

腺病毒介导CD/5FC“自杀基因”疗法对人肝癌裸鼠和小鼠结肠腺癌的治疗作用研究

“自杀基因”疗法应用于肿瘤治疗时,通常是在肿瘤局部直接转染“自杀基因”,以期达到在肿瘤局部发挥抗肿瘤作用而避免全身毒性.在本实验中,我们观察了腺病毒介导的“自杀基因”疗法(CD/5FC系统)对人肝细胞癌SMMC-7721及小鼠结肠腺癌CT26的生长抑制作用,证实了腺病毒介导的CD/5FC系统在体外能杀伤人肝癌细胞SMMC-7721,并且能明显地抑制裸鼠SMMC-7721肿瘤模型的生长,对小鼠的结肠腺癌CT26也有一定的治疗作用.同时观察了以AFP启动子驱动的CD基因合并5FC的使用对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用,证实了以肝癌特异启动子驱动的CD基因能在高表达AFP的肝癌细胞HepG2中特异表达,合并5FC的使用能在体外特异地杀伤HepG2细胞.这一组织特异性的“自杀基因”系统能特异地抑制高水平分泌AFP的人肝细胞癌裸鼠模型7721AFP( )的生长,上述研究结果表明,腺病毒介导的CD/5FC系统是一个有效的治疗方案,组织特异性的表达调控更能体现该疗法的实用价值.     

过继回输腺病毒介导的白细胞介素10基因转染CTL对机体抗肿瘤免疫功能的增强效应

本研究探讨了白细胞介紊10(IL-10)对小鼠体内抗肿瘤免疫功能的影响。鉴于C26结肠癌细胞转染了IL-10基因后在体内的致瘤性明显下降，本研究构建了一株对C26结肠癌细胞具有杀伤括性的CD8^ CTL并观察了IL-10基因转染的该细胞株对肿瘤的治疗作用。携带IL-10基因的重组腺病毒能有效介导小鼠琳巴细胞的基因转染并使之分泌较高水平的IL-10。IL-10基因转染的CTL过继回输荷瘤小鼠体内能明显增强荷瘤小鼠的体内抗肿瘤免疫功能，使实验性肺转移小鼠肺部转移结节数明显减少．这表明，IL-10对于过继回输的肿瘤特异性CTL的免疫功能具有明显的增强作用。     

腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因联合IL-2基因疗法的肿瘤治疗作用及免疫机理分析

目的以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠ＩＬ－２基因联合转移，研究其体内抗肿瘤作用及免疫机理。方法小鼠皮下接种黑色素瘤Ｂ１６Ｆ１０细胞后３天，肿瘤局部注射表达ＩＬ－２的重组腺病毒ＡｄＩＬ－２和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胞嘧啶（５－Ｆｃ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗。结果联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长明显受到抑制，小鼠存活期明显长于ＡｄＩＬ－２、ＡｄＣＤ／５－Ｆｃ、ＡｄｌａｃＺ／５－Ｆｃ或ＰＢＳ组。经联合治疗后，小鼠脾细胞的ＮＫ活性和ＣＴＬ杀伤活性明显增强；肿瘤瘤体内ＣＤ４、ＣＤ８细胞浸润增加；肿瘤细胞表达Ｈ－２Ｋｂ和Ｂ７－１分子明显增加。结论联合应用自杀基因和ＩＬ－２基因治疗，一方面可以明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，另一方面可以提高机体对肿瘤细胞免疫应答，增加机体的抗肿瘤作用，是肿瘤基因治疗中一条行之有效的途径。     

CD自杀基因联合淋巴细胞趋化因子基因疗法的肿瘤治疗？…

本研究以腺病毒作为载体，将大肠杆菌胸嘧啶脱氨酶（ＣＤ）基因与小鼠淋巴细胞趋化因子（Ｌｔｎ）基因体内联合转染，观察了其抗肿瘤效应并分析了免疫机理。小鼠皮下接种结肠腺癌ＣＴ２６细胞后３天，肿瘤局部注射表达Ｌｔｎ的重组腺病毒ＡｄＬｔｎ和表达ＣＤ的重组腺病毒ＡｄＣＤ，然后连续１０天给予５－氟胸嘧啶（５－ＦＣ）３００ｍｇ／ｋｇ进行治疗，结果表明，联合治疗组荷瘤小鼠皮下肿瘤结节的生长受到明显抑制，小鼠存活期明     

腺病毒介导的CD／5FC自杀基因疗法对小鼠结肠腺癌的治疗？…

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶ＣＤ可以将前体药物５ＦＣ代谢为毒性产物５ＦＵ，具有抗肿瘤作用。本课题我们观察了腺病毒介导的ＣＤ／５ＦＣ自杀基因治疗对小鼠结肠癌生长的治疗作用并探讨其作用机理。结果表明，首次，ＣＤ／５ＦＣ自杀基因疗法小鼠结肠癌ＣＴ２６体内外生长均具有显著的抑制作用，４０％的荷瘤小鼠经过治疗后长期存活；其次，我们还研究了自杀基因疗法治疗肿瘤时可能涉及的免疫机理。结果发现在以ＣＤ／５ＦＣ系统治疗结肠     

表达RANTES基因的腺病毒载体构建及抗肿瘤作用研究

目的:构建表达活化T细胞表达和分泌的调节因子(regulatedonactivationnormalTexpressedandsecreted,RANTES)基因的腺病毒载体并研究其抗肿瘤作用机制和效果。方法:RT-PCR法克隆人和鼠源性(regulatedonacti-vationnormalTexpressedandsecreted,RAN-TES)基因,采用AD-easyXLAdenovirusVectorSystem试剂盒分别构建表达上述基因的腺病毒载体。通过趋化试验验证表达RANTES基因的腺病毒载体转染细胞后所具有的趋化肿瘤免疫细胞的作用。应用于体外及小鼠体内试验,包括成瘤试验及抑瘤试验,通过观察免疫效应细胞对小鼠体内肿瘤的抑制作用来评价其在肿瘤治疗方面的作用。结果:克隆了人和鼠源性RANTES基因编码序列并成功地构建腺病毒表达载体;功能试验表明由腺病毒表达的RANTES具有趋化肿瘤免疫细胞的作用。体内试验表明该病毒载体可抑制肿瘤细胞成瘤作用,应用于荷瘤小鼠可抑制肿瘤的发展,延长荷瘤小鼠的生存时间。结论:表达RANTES基因的腺病毒载体可显著地趋化免疫细胞到肿瘤局部杀伤肿瘤细胞,抑制肿瘤细胞成瘤作用并延长荷瘤小鼠的生存时间,为肿瘤的生物学治疗提供了新的研究方向。     

肿瘤自杀基因靶向治疗

肿瘤自杀基因疗法是近年来肿瘤治疗的研究热点,尤其是自杀基因的选择与重组,载体系统的优化,基因的靶向性转移表达,以及自杀基因的联合治疗等均有助于提高自杀基因特异性表达,增强杀伤肿瘤细胞的作用。现就自杀基因在肿瘤治疗中的应用现状作一综述。     

肿瘤自杀基因靶向治疗

肿瘤自杀基因疗法是近年来肿瘤治疗的研究热点，尤其是自杀基因的选择与重组，载体系统的优化，基因的靶向性转移表达，以及自杀基因的联合治疗等均有助于提高自杀基因特异性表达，增强杀伤肿瘤细胞的作用。现就自杀基因在肿瘤治疗中的应用现状作一综述。     

腺病毒介导的CD/5FC自杀基因疗法对小鼠结肠腺癌的治疗作用及相关免疫机理的研究

大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶CD可以将前体药物5FC代谢为毒性产物5FU,具有抗肿瘤作用.本课题我们观察了腺病毒介导的CD/5FC自杀基因疗法对小鼠结肠癌生长的治疗作用并探讨其作用机理.结果表明,首先,CD/5FC自杀基因疗法小鼠结肠癌CT26体内外生长均具有显著的抑制作用,4O%的荷瘤小鼠经过治疗后长期存活;其次,我们还研究了自杀基因疗法治疗肿瘤时可能涉及的免疫机理.结果发现在以CD/5FC系统治疗结肠腺癌小鼠过程中能在一定程度上诱导出机体的抗肿瘤免疫反应,包括脾脏CT6L活性的增高、肿瘤局部浸润免疫细胞表达,DEC-205、B7-2、I-A~(b,d)分子增加等.本实验结果提示虽然CD/5FC系统可以诱导机体产生一定的抗肿瘤免疫反应,但其程度不够显著.     

IL-2基因与自杀基因联合转移对小鼠红白血病的治疗作用

用腺病毒作为载体,将大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD)基因体外转染小鼠红白血病FBL-3细胞,结果CD基因转移后该细胞对5-氟胞嘧啶(5-FC)的敏感性提高了近1000倍,FBL-3细胞有明显的凋亡发生,且观察到明显的旁观者效应.小鼠体内接种FBL-3红白血病细胞后3天,肿瘤局部注射小鼠白细胞介素2(IL-2)基因的表达载体(Ad-IL-2)和Ad-CD腺病毒载体,然后连续10天给予5-FC 300mg/kg行治疗.结果FBL-3皮下肿瘤的生长明显受到抑制,部分小鼠肿瘤消失.联合治疗小鼠的存活期明显大于单用Ad-IL-2治疗组和单用自杀基因CD与5-FC治疗组.体内免疫功能检测表明,经小鼠自杀基因与IL-2联合基因治疗后小鼠脾细胞的CTL杀伤     

腺相关病毒载体及其介导的自杀基因疗法

自杀基因疗法是肿瘤治疗的方法之一.腺相关病毒(AAV)载体介导的自杀基因疗法尤其备受关注.通过对AAV栽体的选择改建,调控外源基因的有效表达,提高基因转染的效率,充分发挥自杀基因的杀伤作用及旁观者效应来达到治疗肿瘤的目的.本文就AAV栽体及其介导的自杀基因疗法方面的进展作一综述.     

肿瘤抗原触发的M-CSF和/或IFN-γ基因转染的巨噬细胞抗肿瘤转移作用及其机制研究

本部分实验中,我们将腺病毒介导的M-CSF和/或IFN-γ基因转染的巨噬细胞与肿瘤抗原共孵育,以发挥其抗原提呈功能而使巨噬细胞在回输体内前就获得诱导特异性抗肿瘤免疫功能的能力,进一步用此巨噬细胞治疗了实验性肺转移黑色素瘤小鼠,观察了其疗效并检测了经治疗后荷瘤小鼠的体内抗肿瘤免疫功能.     

重组痘苗病毒介导的IL-2基因对小鼠Lewis肺癌的体内药效学研究

目的应用重组痘苗病毒介导的IL-2对小鼠Lewis肺癌直接进行局部转染,并对其疗效进行观察和评价.方法本项研究采用缺陷型重组痘苗病毒为载体,经同源重组,筛选出IL-2基因的rW-IL-2,体外转染小鼠Lewis肺癌,对其疗效进行观察.结果短期内即可检出IL-2的表达,并且免疫原性也得到提高.用该载体以in vivo方式原位转染荷瘤小鼠局部;激活了小鼠体内的CTL、LAK及NK细胞,显著抑制了小鼠肿瘤的生长,部分小鼠未能形成肿瘤.结论提示重组痘苗病毒为载体介导的IL-2基因治疗具有良好的前景.     

腺病毒介导的肝癌自杀基因疗法的实验研究

本文观察了胞嘧啶脱氨酶(CD)基因/5-氟胞嘧啶(5FC)自杀基因疗法对肝癌模型的治疗作用。以CMV启动子调控CD基因的重组腺病毒载体AdexCMV.CD在体外能有效转染人肝癌细胞株SMMC-7721和HepG2,转染后的细胞体外生长能力无明显变化,对5FC的敏感性明显增高。当以AFP上游调控序列驱动CD基因的重组腺病毒载体AdexAFP.CD分别转染SMMC-7721和HepG2时,CD基因能在HepG2中表达,使HepG2对5FC的敏感性增高,但不能使SMMC-7721的生长受到5FC的抑制。[~3H]TdR掺入法观察体外旁观者效应时发现,当细胞总数中转染细胞数超过20％时,其生长明显被5FC抑制。将AdexCMV.CD直接注射入裸鼠接种SMMC-7721细胞形成的皮下肿瘤中,并全身应用5FC后,与对照组相比,肿瘤大小在开始治疗后第8天约缩小3倍,第18天约缩小4倍,以上结果表明,腺病毒介导的CD/5FC自杀基因系统能在体内、外有效地抑制肝癌的生长。以AFP上游调控序列驱动CD基因的腺病毒载体介导的基因转染能在AFP阳性的肝癌细胞中特异表达。     

p16基因重组质粒的构建及其对人肺癌细胞的抑制作用

表达大肠杆菌胞嘧啶脱胺酶(CD)基因的重组腺病毒AdCD体外转染小鼠黑色素瘤细胞B16F10,结果显示转染了CD基因的B16F10细胞对5-氟胞嘧啶(5FC)的敏感性显著提高.将经AdCD/5FC系统处理的B16F10细胞上清倍比稀释后.加至野生型B16F10细胞中,发现当上清仅占6.25%时即可对野生型B16F10细胞发挥明显的杀伤作用,提示AdCD/5FC介导的旁观者效应可能是通过5FC经CD酶代谢产生的毒性产物扩散而实现的.本实验还观察了CD基因体内转染后的杀伤效果,荷瘤小鼠经注射AdCD并连续10天给予5FC治疗后,与PBS、对照病毒AdLacZ/5FC治疗小鼠比较,小鼠肿瘤生长明显受到抑制,小鼠存活期明显延长.