阿司匹林抗动脉粥样硬化作用的机制探讨

目的 观察阿司匹林对动脉粥样硬化(AS)家兔血管壁核因子-κB(NF-κB)-DNA结合活性、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达、AS斑块面积和血管内膜厚度的影响,探讨阿司匹林的抗AS作用机制.方法 36只雄性新西兰大耳白兔被随机分为正常对照组(NC)、高脂对照组(HC)和阿司匹林组(HC+A).实验结束时,分别用酶法、固相酶联免疫吸附实验、电泳移动迁移技术、免疫组化技术、形态学方法检测3组兔的血脂、高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平、主动脉组织中NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达及各组主动脉新生内膜厚度和AS斑块面积.结果 HC与HC+A组的血脂和hs-CRP水平、NF-κB-DNA结合活性、COX-2蛋白表达、动脉新生内膜厚度和粥样斑块面积均明显大于NC组(P＜0.05～0.01);HC+A组的血脂水平与HC组相比差异无统计学意义(P＞0.05),但HC+A与HC组的hs-CRP水平[(5.14±0.32)μg/ml vs(9.39±0.79)μg/ml,P＜0.05]、NF-κB-DNA结合活性[(14.6±2.7)μg/ml vs(32.4±4.7)μg/ml,P＜0.05]、COX-2蛋白表达[(0.342±0.02 vs 0.572±0.061,P＜0.05)]、血管新生内膜厚度[(165±24)μm vs(337±64)μm(P＜0.05)]和AS斑块面积[(24.3±7.6)% vs(49.5±21.3)%,(P＜0.05)]相比差异有统计学意义.结论 阿司匹林可通过抑制NF-κB-DNA结合活性、降低hs-CRP水平、减弱COX-2蛋白表达而发挥抗AS作用.     

通心络对家兔动脉粥样硬化模型MMP-3,9及PPARγ表达的影响

目的 研究通心络对金属蛋白酶-3(MMP-3)、金属蛋白酶-9(MMP-9)和过氧化物酶体增殖激活受体γ(PPARγ)在家兔动脉粥样硬化组织中表达的影响,探讨通心络的抗AS机制.方法 将实验动物家兔分为对照组(n=8)、高脂模型组(n=8)和通心络干预组(n=8);高脂模型组用高脂饲料饲养14周,通心络干预组除高脂饲养外加用通心络;应用免疫组化方法观察MMP-3、MMP-9和PPARγ在主动脉粥样硬化组织中的表达以及通心络对其表达的影响.结果 高脂模型组和通心络组兔主动脉壁所含MMP-3和MMP-9的阳性标记物百分比均明显高于对照组(P<0.01),所含PPARγ的阳性标记物百分比也明显高于对照组(P<0.01),但是通心络干预组兔所含MMP-3和MMP-9的阳性标记物百分比低于高脂模型组(P<0.01),而所含PPARγ的阳性标记物百分比显著高于高脂模型组(P<0.01).结论 通心络抑制动脉粥样硬化病变部位MMP-3和MMP-9的表达,增加PPARγ的表达.其抗AS作用可能与抑制MMP-3和MMP-9及增加PPARγ的表达有关.     

不同剂量厄贝沙坦对兔主动脉粥样硬化中环氧合酶2的影响

目的 检测环氧合酶-2(COX-2)在兔主动脉粥样硬化(AS)中的表达,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)-1型受体拮抗剂厄贝沙坦(Irbesartan,Irb)对COX-2表达的影响及其可能的抗AS效应.方法 健康雄性新西兰兔30只,按随机数字表法分为对照组、高胆固醇组(HC)、小剂量Irb(Sirb)组(10 mg·ks-1·d-1)、中剂量Irb(Mirb)组(20 mg·kg-1·d-1)和大剂量Irb(Lirb)组(30 mg·kg-1·d-1),每组6只.喂养14周后,取各组兔主动脉,行AS斑块面积及主动脉内膜/中膜值测定,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot法分别检测主动脉AS斑块中COX-2 mRNA和蛋白的表达.结果 Lirb和Mirb组AS斑块面积均较HC组显著缩小[分别为(14.84±2.51)%和(33.77±3.53)%比(61.74±4.33)%,P＜0.01].Lirb和Mirb组内膜/中膜值较HC组明显减小[分别为(0.11±0.07)和(0.50±0.08)比(0.92±0.07),P＜0.01].HC组COX-2 mRNA的表达较对照组显著增强[(1.01±0.04)比(0.024±0.01),P＜0.01];Lirb和Mirb干预后COX-2 mRNA的表达量明显下降[分别为(0.24±0.03)和(0.47±0.05),P＜0.01].14周时HC组主动脉AS斑块中COX-2蛋白表达明显增强,Mirb和Lirb干预后显著降低[免疫组化分别是(0.81±0.06)比(0.47±0.10)和(0.14±0.02)(P＜0.01),Western blot 分别是(1.10±0.05)比(0.89±0.02)和(0.51±0.04)(P＜0.01)].结论 COX-2参与AS的发生和发展,中剂量和大剂量Irb均能降低AS斑块中COX-2的表达而抗AS,Irb对AS的有益作用可能是通过抑制COX-2表达实现的.     

阿托伐他汀对家兔动脉粥样硬化模型PPARγ及MMP-9表达的影响

目的：研究阿托伐他汀对动脉粥样硬化(AS)组织中过氧化物酶体增殖激活受体γ（PPARγ）和金属蛋白酶-9（MMP-9）表达的影响。方法：将实验动物家兔分为对照组（n=8）、高脂模型组（n=8）和阿托伐他汀干预组（n=8）。高脂模型组用高脂饲料饲养16周，阿托伐他汀干预组除高脂饲养外加用阿托伐他汀；应用免疫组织化学方法观察各组主动脉粥样硬化组织中PPARγ和MMP-9的表达。结果：高脂模型组兔主动脉壁所含PPARγ的阳性标记物百分比（14.38%±2.58%）明显高于对照组（7.82%±0.96%）（P<0.01），所含MMP-9的阳性标记物百分比（17.13%±1.58%）也明显高于对照组（2.72%±0.36%）；阿托伐他汀干预组兔主动脉壁所含PPARγ的阳性标记物百分比（16.11%±2.35%）显著高于高脂模型组（P<0.01），而所含MMP-9的阳性标记物百分比（12.11%±2.05%）低于高脂模型组（P<0.01）。结论：阿托伐他汀增加动脉粥样硬化病变部位PPARγ的表达，抑制MMP-9的表达。     

5-脂氧合酶通路在ApoE基因敲除小鼠动脉硬化中的作用

目的探讨5-脂氧合酶(arachidonate 5-Lipoxygenase,5-LO)通路在ApoE-/-小鼠动脉硬化中的作用。方法将8周龄ApoE-/-雄性小鼠24只[体质量(22.42±1.21)g]随机分为2组:对照组(n=12,普通饲料)、动脉硬化模型组(n=12,高脂饲料)。16周后,病理检测分析校正斑块面积(PA/LA);RT-PCR和Western blot法检测主动脉中5-LO的表达;酶联免疫法检测白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)和白三烯D4(leukotriene D4,LTD4)的血清水平。结果建模成功,动脉硬化模型组粥样斑块形成。动脉硬化模型组较对照组小鼠主动脉中5-LO的mRNA的表达[(0.61±0.0)vs(0.18±0.03),P<0.01]及蛋白表达[(1.53±0.18)vs(0.52±0.40),P<0.01]明显升高,血清LTB4水平[(34.79±4.47)vs(12.07±2.35),P<0.01]及LTD4水平[(2 862.48±48.77)vs(2 357.10±53.57),P<0.01]显著升高。动脉硬化模型组血清LTB4(r=0.954,P<0.01)、LTD4(r=0.946,P<0.01)水平与校正斑块面积成正相关。结论 5-脂氧合酶通路在动脉粥样硬化发病机制中起着重要作用。     

氯沙坦对动脉粥样硬化兔斑块稳定性的影响

摘要：目的观察氯沙坦对动脉粥样硬化(AS)兔斑块中基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、巨噬细胞数量的影响,探讨其稳定AS斑块的可能机制。方法应用球囊扩张腹主动脉加高脂饮食建立AS兔模型,将16只雄性新西兰大白兔随机分为2组,每组8只。模型组:饲喂含1％胆固醇高脂饲料;氯沙坦组:饲喂含1％胆固醇高脂饲料加氯沙坦25mg/(kg·d),连续用药4个月。免疫组化法检测AS斑块中MMP-3的蛋白表达水平及巨噬细胞在AS斑块中的阳性面积;电镜观察两组AS斑块超微结构变化;实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测AS斑块中MMP-3 mRNA的表达。结果免疫组化显示,氯沙坦组与模型组相比MMP 3蛋白表达显著减少(P＜005),巨噬细胞在AS斑块中的数量明显降低(P＜0.05);MMP-3 mRNA的表达明显减少(P＜0.05)。结论氯沙坦可通过下调MMP.3的水平,减少斑块内巨噬细胞的数量来稳定AS斑块。     

巨噬细胞和组织血管紧张素Ⅱ在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄前后血管内膜的变化

目的观察巨噬细胞和组织血管紧张素Ⅱ在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄近远端血管内膜的变化情况。方法25只新西兰大白兔随机分为对照手术组(n=10)、高脂手术组(n=10)、高脂假手术组(n=5),饲养28周后,对照手术组和高脂手术组行腹主动脉缩窄术,高脂假手术组行假手术。术后继续以原来的饲养方法饲养4周,在测量狭窄近远端压力后获取标本。采用HE染色和免疫组织化学分析检测血管内膜厚度、巨噬细胞数量、血管紧张素Ⅱ水平。结果平均内膜厚度(μm):高脂手术组狭窄近端(204.7±8.3)较高脂假手术组相同位置(175.8±4.3)增厚(P=0.001);而高脂手术组狭窄远端(140.1±1.3)较高脂假手术组相同位置(166.2±5.1)厚度降低(P=0.000)。巨噬细胞数量(/μm):高脂手术组狭窄近端(0.31±0.05)较狭窄远端(0.16±0.04)显著升高(P=0.000);高脂手术组狭窄近端(0.31±0.05)较高脂假手术组相同位置(0.20±0.02)显著升高(P=0.000)。组织血管紧张素Ⅱ水平(/μm):高脂手术组狭窄近端(0.26±0.01)较狭窄远端(0.12±0.01)显著升高(P=0.000),高脂手术组狭窄近端(0.26±0.01)较高脂假手术组狭窄远端(0.17±0.01)明显升高(P=0.000),高脂手术组狭窄近端(0.12±0.01)较高脂假手术组狭窄远端(0.15±0.02)明显降低(P=0.000)。结论在动脉粥样硬化兔腹主动脉狭窄近端,压力增高,血管组织内膜厚度和巨噬细胞数量增加,血管紧张素Ⅱ水平明显升高;在狭窄远端,血管组织内膜厚度变薄,巨噬细胞数量减少,血管紧张素Ⅱ水平降低。     

动脉粥样硬化兔血管平滑肌钙激活钾通道活性和α亚单位表达的变化

目的 研究动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)时血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)大电导钙激活钾通道(big conductance Ca2 -activated K -channel,BKCa)活性和α亚单位表达的变化及意义.方法 高脂饮食建立兔动脉粥样硬化动物模型,利用膜片钳单通道记录技术记录AS组和对照组VSMC BKCa开放概率(Po),平均关闭时间(Tc).应用实时荧光定量PCR技术分析Bkca α亚单位编码基因KCMA1的mRNA表达水平.结果 ①在cell-attachedpatches(膜电位 40mV)下,AS组和对照组的平均关闭时间(Tc)分别为(114.644±48.379)ms和(291.603±180.075)ms(P<0.001,n=10),开放概率(Po)分别为(0.1325±0.0555)和(0.0601±0.0433)(P<0.01,n=10);在inside-out patches(膜电位 40mV)下.二者的Tc为(69.075±37.711)ms和(396.876±177.161)ms(P<0.001,n=10),Po为(0.1676±0.1174)和(0.0409±0.177)(P<0.01,n=10);②AS组Bkca α亚单位表达减少.动脉粥样硬化兔KCMA1和GAPDH相对含量比为(0.68±0.5);对照组(3.19±2.14).结论 兔胸主动脉VSMC Bkca在AS时α亚单位表达减少,但活性显著增强;Bkca的活动可能作为AS时血管内皮源性舒张受损的一种选择性补偿机制,延缓动脉粥样硬化的进程.     

COX-2、MMP-2在人胰腺癌中的表达及其临床意义的研究

目的:研究胰腺癌组织COX-2和MMP-2的表达及其与临床病理因素的关系。方法:应用免疫组化法(Elivision二步法)检测33例胰腺癌组织和8例正常胰腺组织中COX-2、MMP-2的表达,分析COX-2与MMP-2的表达与临床病理特征的关系。结果:COX-2在胰腺癌组织中的表达率为69.7%(23/33),MMP-2在胰腺癌组织中的表达率为63.6%(21/33),8例正常胰腺组织中两者表达均阴性;胰腺癌淋巴结转移组COX-2、MMP-2表达明显强于无淋巴结转移组(P=0.049;P=0.005);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期COX-2表达明显强于Ⅰ期(P=0.020),而MMP-2的表达与UICC分期无相关关系(P=0.163);COX-2、MMP-2表达与年龄、性别、肿瘤分化程度等无相关关系(P>0.05);COX-2表达与MMP-2表达正相关(χ2=11.81,P<0.005,r=0.598)。结论:COX-2、MMP-2在胰腺癌中表达均增强,与淋巴结转移相关,且COX-2的表达与局部浸润程度相关。COX-2与MMP-2在胰腺癌淋巴转移中可能起了协同作用。     

Role of 5-lipoxygenase pathway in atherosclerosis in ApoE knockout mice

目的 探讨5-脂氧合酶(arachidonate 5-Lipoxygenase,5-LO)通路在ApoE-/-小鼠动脉硬化中的作用.方法将8周龄ApoE-/-雄性小鼠24只[体质量(22.42±1.21)g]随机分为2组:对照组(n=12,普通饲料)、动脉硬化模型组(n=12,高脂饲料).16周后,病理检测分析校正斑块面积(PA/LA);RT-PCR和Western blot法检测主动脉中5-LO的表达;酶联免疫法检测白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)和白三烯D4( leukotriene D4,LTD4)的血清水平.结果 建模成功,动脉硬化模型组粥样斑块形成.动脉硬化模型组较对照组小鼠主动脉中5-LO的mRNA的表达[(0.61±0.0) vs (0.18±o.03),P＜0.01]及蛋白表达[(1.53±0.18) vs (0.52±0.40),P＜0.01]明显升高,血清LTB4水平[(34.79±4.47) vs(12.07±2.35),P＜0.01]及LTD4水平[(2 862.48±48.77)vs(2 357.10±53.57),P＜0.01]显著升高.动脉硬化模型组血清LTB4(r=0.954,P＜0.01)、LTD4(r =0.946,P＜0.01)水平与校正斑块面积成正相关.结论 5-脂氧合酶通路在动脉粥样硬化发病机制中起着重要作用.     

基于Vero E6细胞的抗SARS药物筛选方法的构建

目的 构建基于Vero-E6细胞的抗SARS药物筛选模型。方法 运用四唑氮化合物(MTS)方法，对由SARS病毒(BJ-01)引起的对Vero-E6细胞的细胞毒性作用进行检测。首先优化了实验条件(检测了MTS不同孵育时间和不同接种细胞数对测试结果的影响，并绘制了病毒滴度曲线)；在检测化合物的抗病毒作用时，首先将细胞接种于96孔板中，加入待测药物和BJ-01病毒，48h后用显微镜观察细胞形态变化，96h后加入MTS和电子耦联剂(PMS)的混合溶液，在490nm检测其吸光度。结果 对4000多种化合物的抗SARS病毒作用进行了检测。获得10种可能有抗SARS病毒作用的药物。结论 基于Vero-E6细胞的MTS检测方法提供了一种快速、安全和方便的抗SARS药物筛选方法。     

4-(4-甲磺酰基)苯基-3-苯基-2(5H)-呋喃酮的合成和体外抑癌活性

目的合成目标化合物4-(4-甲磺酰基)苯基-3-苯基-2(5H)-呋喃酮,并筛选其体外抑癌活性。方法采用苯硫基甲烷和乙酰氯在无水A lC l3催化下经Friedel-Crafts反应得对甲硫基苯乙酮,然后在钨酸钠存在下用30%H2O2氧化得4-甲磺酰基苯乙酮,无须纯化,再经溴化,最后用苯乙酸钠或苯乙酸在碱性条件下经“一勺烩”成酯、环合,得到目标产物,其中氧化与溴代两步无须纯化。结果采用本工艺制得了4-(4-甲磺酰基)苯基-3-苯基-2(5H)-呋喃酮,总收率可达55%。初步抑癌活性试验结果表明,目标化合物对人肝癌细胞Bel-7402和人口腔上皮癌细胞KB IC50均>10μmol.L-1。结论本工艺路线设计合理,反应简便,条件温和,适合大规模工业化生产。     

牛蒡苷元的脱甲基化研究

目的:以活性天然产物牛蒡苷元为原料,合成其脱甲基衍生物,寻找适宜的脱甲基化方法。方法:以牛蒡苷元为底物,分别以无水氯化铝或氢溴酸为脱甲基试剂进行反应,比较两者脱甲基能力,并制备了目标产物。结果:合成了两个牛蒡苷元脱甲基衍生物,其中化合物2是首次利用氢溴酸-冰醋酸系统进行脱甲基反应而制备得到,采用氢溴酸-冰醋酸系统进行脱甲基反应,收率较高,操作简单。结论:牛蒡苷元脱甲基化最佳工艺条件为:以牛蒡苷元为原料,氢溴酸作为脱甲基试剂,在110℃条件下反应8h,收率87%,并通过核磁共振碳谱和氢谱对目标产物进行了结构确证。     

2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑的合成及抑菌活性

目的研究2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑(化合物4)的合成方法及抑菌活性。方法通过2-(2-甲氧基苯基)-5-巯基-1,3,4-噻二唑(化合物1)与2-N-三苯基甲基-5-(4’-溴甲基联苯-2-基)-四唑(化合物2)在碳酸钾/丙酮体系中进行缩和反应,制得化合物3。化合物3在酸性条件下脱保护,制得化合物4。用元素分析和波谱方法确定化合物3和4的结构,用杯盘培养法测化合物4的抑菌活性。结果经检测确定化合物3和4分别为2-(2-甲氧基苯基)-5-[(2’-三苯甲基四唑-5-基)联苯-4-基]甲硫基-1,3,4-噻二唑和2-(2-甲氧基苯基)-5-[2’-(2H-四唑-5-基)联苯-4-甲硫基]-1,3,4-噻二唑。初步抑菌结果表明化合物4对大肠杆菌、链球菌显示了较好的抑菌活性。结论化合物4有望成为含有联苯四唑的新抗菌药物。     

5-(2-羟乙基)-4-甲基-恶唑的合成及其光谱研究

本文叙述了5-(2- 羟乙基)-4-甲基-恶唑的合成及其反应机理。用3-氯-5-羟基-2-戊酮与甲酰胺为原料经环合、水解反应得到了所需要的产品,对中间体及产品进行的光谱研究,证明了1966年Lindberg UH得到的产物为酯,而不是原料甲酸胺与产品醇的混合物。     

交流示波极谱法测定甲氧苄氨嘧啶及其制剂的含量

采用示波极谱法测定甲氧苄氨嘧啶及其制荆的含量。该法不受赋形剂的干扰,终点直观,易于观察,结果准确,回收率为99.68％。变异系数为0.40％。     

新型非甾体抗早孕药抗孕唑的合成

本文报告了抗早孕药抗孕唑(DL-111lT)的合成路线及在多种动物中的抗早孕活性.抗孕唑是一种新型非甾体抗早孕菌,它是由2-乙基苯甲酰肼(6)和3-甲氧基苯甲亚胺酸乙酯(7)反应而得.中间体(7)的制备,以3-甲氧基笨甲酸(13)为起始原料,经氯化亚矾处理,后再与氨气反应,经相转移脱水反应和于乙醇中用氯化氢处理而得.另一中间体(6)的制备是以2-乙酰基苯甲酸(9)为原料,经氩化、甲酯化和肼解而得.     

5-(4-甲基苯氧甲基)-1,3,4-(口恶)二唑-2-硫酮及其配合物的合成和抑霉作用的研究

在碱性醇溶液中,用对甲苯氧乙酰肼和二硫化碳合成5-(4-甲基苯氧甲基)-1,3,4-(口恶)二唑-2-硫酮及其铜(Ⅰ)、锌(Ⅱ)、银(Ⅰ)、钴(Ⅱ)的配合物。对其配体及配合物进行了元素分析、红外光谱测定,并研究了部分化合物的抑霉活性。     

Ca^2＋对PHA促淋巴细胞分裂作用的影响

以小鼠脾淋巴细胞为实验材料,采用MTT微量自动比色法判断细胞分裂状况,观察PHA的促淋巴细胞分裂作用时Ca~(2 )的影响。结果发现:加Ca~(2 )的最大刺激组的光密度(OD)值比对照组提高了35.4％,Ca~(2 )的最大刺激浓度为4％葡萄糖酸钙.结果表明Ca~(2 )有增强PHA的有丝分裂原作用,并且存在明显的量—效关系。     

三氧化二砷对肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2抑制作用的研究

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3)对肝癌细胞株的抑制作用。方法 :用不同浓度的 As2 O3处理人肝癌细胞株 SMMC- 772 1、Hep G2及正常人肝细胞株 L- 0 2 ,应用四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )观察 As2 O3对细胞生长的影响 ,并与 3种常用抗癌药羟基喜树碱 (HCPT)、顺铂 (DDP)及 5 -氟脲嘧啶 (5 - Fu)的抑制率进行比较。结果 :低浓度的 As2 O3、HCPT、DDP及 5 - Fu对 SMMC- 772 1、Hep G2两种肝癌细胞株的抑制率分别是 86 .3% ,4 3.2 % ;4 .2 % ,4 2 .1%和 76 .7% ,4 5 .6 % ;19.8% ,18.6 % ,As2 O3的抑瘤作用最强 (P<0 .0 5 ) ,而对正常人肝细胞株的抑制较弱。浓度≥ 2 .0 μm ol/ L 的 As2 O3对 SMMC- 772 1和 Hep G2的抑制作用差异均无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :As2 O3体外试验能有效抑制肝癌细胞株的生长 ,且在一定浓度范围内 ,抑制率具有一定的浓度和时间依赖性