实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒HPV 23分型的临床研究

目的：建立实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒HPV 23分型的方法。方法采用实时荧光定量 PCR检测 HPV DNA。结果在60例检测患者中,有19例患者检测出HPV人乳头瘤病毒感染阳性。结论实时荧光定量PCR方法检测人乳头瘤病毒灵敏度高、特异性强,可以为宫颈癌的预防、发展监测、手术预后等提供重要的临床指导。     

实时荧光定量PCR法在手足口病中的诊断价值

目的 探讨实时荧光定量PCR(QPCR)法在手足口病中的诊断价值.方法 回顾性分析2019年1—12月来广东医科大学附属东莞儿童医院就诊的手足口病儿童163例,将其作为试验组,选取同期161例入院体检儿童作为对照组,所有儿童均采集粪便进行QPCR检测.结果 试验组163例儿童中检测阳性144例(88.34％),对照组1...     

实时荧光定量PCR在肺结核诊断中的临床应用

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR荧光定量)对肺结核诊断的临床应用价值。方法用直接涂片检测抗酸菌法和FQ-PCR法对我院临床诊断为肺结核和疑似肺结核病人的168例痰和57例支刷物中的结核分枝杆菌菌体和基因分别同时检测,对两方法检出率进行统计学比较分析。结果痰直接涂片法阳性率为16.7%,FQ-PCR荧光法阳性率为30.4%,二者比较有显著性差异(P<0.01);支刷物涂片阳性率15.8%,TB-PCR荧光量阳性率31.6%,二者比较有差异(P<0.05)。结论FQ-PCR荧光定量法的检出率显著高于涂片法,提示FQ-PCR荧光定量法特异较强、敏感性较高,可提高诊断的阳性率,在结核的诊治中具有较好的应用价值。     

实时荧光定量PCR检测乙型肝炎血清DNA的临床观察

目的:探讨乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒DNA定量与乙型肝炎标志物关系.方法:采用荧光探针杂交技术为基础的实时荧光定量PCR检测259例乙型肝炎患者血清中DNA含量,与HBV标志物作对比分析.结果:血清HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率为98.6%,HBeAb组阳性率为61.5%;HBeAg组阳性率含量明显高于HBeAb阳性组.结论:实时荧光定量PCR检测具有较高的灵敏度和特异性,定量准确、结果可靠,为临床了解病毒复制情况,制定治疗方案及疗效观察提供了确切依据.     

探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值

目的:探讨实时荧光定量PCR在乙型肝炎病毒DNA定量检测中应用价值。方法:选择2021年4月至2023年4月我院收治的120例疑似慢性乙型病毒性肝炎患者为研究对象,分别采用实时荧光定量PCR与酶联免疫吸附法(ELISA)对所有患者HBV-DNA含量进行检测。以试纸法检测结果为标准,比较实时荧光定量PCR、ELISA检测结果的一致性;比较实时荧光定量PCR、ELISA对慢性乙型肝炎的诊断效能;比较不同HBV感染状态下HBV-DNA含量的差异。结果:120例疑似慢性乙型肝炎患者经试纸法检查确诊为慢性乙型肝炎107例。Kappa检验分析结果显示,实时荧光定量PCR检查结果与试纸法检查结果具有高度的一致性(Kappa值=0.897,P<0.05)。实时荧光定量PCR对慢性乙型肝炎的诊断灵敏度、特异性与准确率均高于ELISA(P<0.05)。大三阳HBV-DNA含量均高于小三阳与急慢性感染期(P<0.05);小三阳HBV-DNA含量与急慢性感染期比较无明显差异(P>0.05)。结论:实时荧光定量PCR在慢性乙型肝炎诊断中的应用价值较高,不但能完成疾病的准确诊断,还能通过对...     

实时荧光定量PCR分析细菌的组成及数量

目的采用实时荧光定量PCR的方法对酸奶中的乳酸杆菌和双歧杆菌进行检测。方法通过标准菌株的培养和标准曲线的构建,建立检测乳酸杆菌和双歧杆菌的实时荧光定量PCR的检测方法,对送检的4组样品进行检测。结果通过标准曲线的构建得到乳酸杆菌和双歧杆菌的标准曲线方程：乳酸杆菌：Y=-3.293x＋14.52;其r值为0.999;双歧杆菌为：Y=-3.464x＋17.42,其r值为0.998,不同品牌的酸奶中,乳酸杆菌和双歧杆菌的数量存在很大差异,由于保密原因,本文将酸奶品牌简称为1、2、3、4,1和2两个品牌的酸奶中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量均高于3和4号两个品牌,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论实时荧光定量PCR可以准确的对样品中乳酸杆菌和双歧杆菌的数量进行检测。     

数字PCR和荧光定量PCR技术在EB病毒核酸定量检测中的应用比较

目的 以微滴式数字PCR技术（ddPCR）为标准,考察实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测EBV DNA的临床检测性能,并评估ddPCR技术临床有效性和实用性。方法 收集229例疑似EBV感染相关疾病患者血浆标本,采用ddPCR和qPCR两种方法测定同一份血浆标本的EBV DNA载量。结果 疑似EBV感染人群中,采用ddPCR方法检测的阳性率为50.22%,采用qPCR方法检测的阳性率为20.96%,阳性率差异有统计学意义（P <0.05）,其中两种方法结果不一致的样本98.51%(66/67)经一代测序证实为特异的EBV DNA信号。以ddPCR为标准,qPCR检测EBV DNA的灵敏度为41.74%,当qPCR的阈值从1 000 IU/ml提升到11 IU/ml时,灵敏度可提高到87.83%。结论 采用ddPCR检测EBV DNA灵敏度更高,有利于临床EBV病毒感染的早期诊断。     

荧光定量PCR技术在骨关节结核中的诊断价值

目的探讨荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对活动性骨关节结核的诊断价值。方法选择关节炎患者52例,应用FQ-PCR技术检测患者尿液中TB-DNA的检出率,并与抗酸染色法的检出率比较。结果 52例关节炎疾病患者中,确诊结核性关节炎患者36例,TB-DNA阳性22例,全部确诊为结核性关节炎,阳性率61.11%,特异度100%,抗酸染色阳性2例,阳性率5.56%。结论应用FQ-PCR技术检测结核性关节炎患者关节腔积液中TB-DNA,具有高度敏感性和特异性,明显优于抗酸染色法,差异有统计学意义（P〈0.01）。     

实时荧光定量PCR在儿童肺炎支原体感染中的临床价值分析

目的探讨实时荧光定量PCR在儿童肺炎支原体感染中的临床价值。方法收集382例肺炎患儿的血清、支气管灌洗液、痰液、胸腔积液标本,采用实时荧光定量PCR检测肺炎支原体DNA阳性率。结果 382例患儿肺炎支原体DNA阳性为179例(46.9%),其中男患儿占96例(53.6%),女患儿占83例(46.4%);0～4岁占28例(15.6%),4～7岁占58例(32.4%),7～10岁占57例(31.8%),10～13岁占66例(36.9%)。血清标本肺炎支原体DNA阳性21份(14.6%),支气管灌洗液标本肺炎支原体DNA阳性90份(94.7%),痰液标本肺炎支原体DNA阳性51份(68.9%),胸腔积液标本肺炎支原体DNA阳性17份(24.6%)。结论采用实时荧光定量PCR检测儿童肺炎支原体感染实用、可行,其中4岁及以上患儿肺炎支原体DNA阳性的检出率较高,采用支气管灌洗液标本最为可靠,血清标本的检出率最低。     

2006至2008年英德市HPV16、18型病毒感染现状分析

目的对2006年至2008年英德市HPV（人乳头瘤病毒）16、18型病毒感染现状进行分析,探讨HPV16、18型病毒的各年度、各年龄组感染情况。方法荧光定量PCR检测6412例宫颈拭子标本,观察各年度、各年龄组中HPV16、18型病毒的感染率。结果HPV16、18型病毒三年的感染率分别为3.14%、3.67%、5.54%,总体感染率呈上升趋势,其中HPV16型的感染且呈现年轻化趋势。在6412例被检标本中,HPV16型阳性患者190例,感染率为2.9%,其中20～35年龄组阳性率2.5%（71/2817）;36～49年龄组阳性率3.2%（100/3109）;50以上年龄组阳性率为3.9%（19/486）;HPV18型阳性患者78例,感染率为1.2%,20～35年龄组阳性率1.17%（33/2817）;36～49年龄组阳性率1.09%（34/3109）;50以上年龄组阳性率为1.02%（5/486）;在英德地区HPV16型的感染率大于HPV18型的感染率。结论在宫颈癌的筛查中,荧光定量PCR检测HPV16、18型病毒感染结合巴氏染色检查、病理检查、阴道镜及临床检查,筛选出高危人群,定期复查,积极治疗,对宫颈癌的发生率、病死率的降低有很好的作用。     

荧光定量PCR技术在泌尿系统结核中的诊断价值

目的应用荧光定量PCR（FQ-PCR）技术检测泌尿系统结核患者尿液中（TB-DNA）的检出率,评估其对泌尿系统结核患者的诊断价值。方法选择泌尿系统患者66例,应用FQ-PCR技术检测患者尿液中TB-DNA的检出率,并与抗酸染色法的检出率比较。结果 66例泌尿系统疾病患者中,确诊泌尿系结核患者52例,TB-DNA阳性32例,32例全部确诊为泌尿系结核,特异度100%,抗酸染色阳性4例。结论应用FQ-PCR技术检测泌尿系统结核患者尿液中TB-DNA,具有高度敏感性和特异性,明显优于抗酸染色法。     

实时荧光定量PCR技术的研究进展

聚合酶链式反应技术（PCR）自1985年问世以来，以其灵敏性、特异性和快速性在医学和分子生物学等领域得到广泛的应用。近年来出现的核酸定量PCR技术尤其是实时荧光定量PCR（RQ—PCR）技术口。实现了PCR从定性到定量的飞跃，它以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度快、全封闭反应等优点成为分子生物学研究中的重要工具，本文就此技术的研究进展及其在核酸定量检测中的应用做一综述。     

实时荧光定量PCR法检测中药制剂中沙门菌

目的 采用实时荧光定量PCR技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法 将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量PCR法特异性检测沙门菌。结果 建立了中药制剂中沙门菌的实时荧光定量PCR检测法,检测可在24 h内完成,灵敏度达每10 g（10 mL）供试品1 cfu,特异性为100%,采用该方法检测18批次样品结果与药典方法一致。结论 采用实时荧光定量PCR法可明显缩短中药制剂中沙门菌检测周期,具有良好的灵敏度和特异性,可作为药典检测方法的有效补充。     

实时荧光定量PCR对川贝母的鉴别应用

摘 要 目的：探讨实时荧光定量PCR对川贝母鉴别的可行性。方法: 采用磁珠法从试样中提取DNA,利用实时荧光定量PCR进行引物扩增,并通过其Cq值和扩增曲线对样品进行判断。结果: 5批川贝母的Cq值均低于30,曲线有明显的指数增长期;平贝母、浙贝母和土贝母则无Cq值,曲线为一直线。结论:本方法用于鉴别川贝母操作简单,准确率高,重现性好,可行有效。     

乌梢蛇实时荧光定量PCR法的建立及与普通PCR鉴别方法的比较研究

目的 为了进一步优化乌梢蛇药材鉴别的准确性,提高鉴别速度。方法 基于CO1片段序列特征,该研究设计了乌梢蛇的特异性引物、探针,通过条件的优化建立了乌梢蛇的实时荧光定量PCR 快速鉴别方法。结果 利用该方法对正品及伪品15个物种30份样本进行了验证,结果全部8 份乌梢蛇正品均能从30 个药材样本中准确地鉴别出来。结论  该方法与药典方法比较,准确性一致,但所用设备少、检测所需要时间短,仅需40 min至1 h即可得出结果,而药典方法需要4 h左右;灵敏度高,检测限可达到1×10-3ng/反应,检测结果在0.001%~100%范围内具有良好的线性关系,相关系数R²=1,而药典方法仅为1×10-2ng/反应。该方法具有特异性强、检测速度快、灵敏度高、所需设备少的特点,适用于乌梢蛇中药材及其饮片真伪快速检测。     

定量荧光PCR在肺炎支原体肺炎诊断中的应用

目的研究定量荧光PCR在支原体肺炎诊断中的价值。方法选取2012年1月至2012年12月938例肺炎住院患儿,进行定量荧光PCR、支原体抗体等多检查,明确MP感染。结果 412(36.2%)例诊断为MP肺炎,278例患儿PCR阳性,高MP拷贝数的比例随着患儿的年龄增大而增大(P<0.01),高MP拷贝数组的患儿发热率高于低MP拷贝数组(P<0.01);高MP拷贝数组的患儿喘息发生率高于低MP拷贝数组(P<0.01)。高MP拷贝数组患儿血清学阳性率明显高于低MP拷贝数组(P<0.01)。低MP拷贝数组的患儿混合感染率明显高于高MP拷贝数组(P<0.01)。结论荧光定量PCR在MP肺炎的诊断中起重要的作用,高MP拷贝数更能提示MP的致病作用,而低MP拷贝数的临床意义可能不大。     

实时荧光定量PCR技术在乙型肝炎脱氧核酸检测中的应用价值

聚合酶链反应polymerase chain reuction PCR又称无细胞分子克隆系统或体外酶促基因扩增法。PCR技术是Cetus公司Kary mullist和加利福尼亚大学Henery A Erlich于1985年联合创办,自问世以来,因其对基因特定核酸序列在短时间内具有极大的扩增效率,被广泛应用于分子生物学、微生物学、医学及遗传学分子克隆、序列分析、基因突变、遗传病、传染病及法医制定和考古研究等多领域。乙型肝炎作为我国最常见的传染性疾病之一,抗病毒是常规治疗方法,为检测抗病毒治疗的疗效,需要定量检测患者的血清(浆)中的乙型肝炎的病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)…     

SYBR Green实时荧光定量PCR技术平台的建立

目的建立SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。方法通过摸索SYBRGreen工作液的配制方法,经典PCR检测HBVDNA方法转为SYBRGreen实时荧光定量PCR方法及建立大鼠TGF-bate1mRNA表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法。结果SYBRGreenⅠ工作液,40×H2O溶液稳定性好,最佳反应浓度为1∶10000。HBVDNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,最佳的MgCl2反应浓度4.0mmol,引物浓度0.5μmol,81℃时收集荧光信号。定量分析用标准曲线斜率为-3.32,相关系数为-0.994,误差为0.016。大鼠TGF-bate1表达水平的SYBRGreen实时荧光定量PCR方法,TGF-bate1和Bate-actin的最佳MgCl2反应浓度均为3.5mmol,引物浓度前者为0.8μmol,后者为0.5μmol,在87℃时收集荧光信号。靶基因TGF-bate1mRNA的相对量用下述公式计算:(1+Etgf)Ct1/(1+Eact)Ct2。结论初步建成了可检测DNA和mRNA的SYBRGreen实时荧光定量PCR技术平台。     

实时定量PCR技术在肺结核诊断中的价值

目的评估实时定量PCR法在肺结核诊断中的价值。方法对412例可疑肺结核患者送检痰液,分别应用痰涂片抗酸染色法、结核杆菌培养法和实时荧光定量PCR法进行检测,并对检测结果进行比较分析。结果痰涂片抗酸染色法、结核杆菌培养法和实时荧光定量PCR法对最终确诊的326例肺结核患者痰样本的阳性检出率分别为24．23％、31．29％、78．22％。3种检测方法差异有统计学意义（P〈0．05）。结论实时定量PCR法具有检出率高,敏感性高,特异性高等优点,在结核病实验室辅助诊断方面有重要的应用价值。