宫颈癌组织中HPV16E6序列多态性及同源性分析

目的：探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6基因序列的多态性及同源性。方法：采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型，从舍有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E6，经DNA序列测定法检测其基因变异，进而分析其同源性。结果：50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78％．其中HPV16和HPV18型混合感染18例，单纯HPV16型感染15例。含有HPV16型的标本34例中扩增出HPV16E 625例。其中178位核苷酸变异较大，变异率为72％，其相应氨基酸均由天冬氨酸变为谷氨酸。结论：HPV16E6 DNA序列发生碱基替换的区域主要在氨基端94～241位，羧基端相对保守，未见变异。广东地区宫颈癌组织中HPV16E6的热点突变为Nt178。     

HPV16感染及其E7蛋白表达与宫颈癌关系的研究

目的：探讨人砂状瘤病毒１６型（ＨＰＶ１６）及其Ｅ７蛋白表达与宫颈癌的关系。方法：运用ＰＣＲ技术探查６７例宫颈中ＨＰＶ１６感染率,并运用免疫组化ＡＢＣ法检测ＨＰＶ１６感染吕颈癌中Ｅ７蛋白表达情况。结果：ＨＰＶ１６在宫颈癌中的检出率为５０．７５％（３４／６７）,ＨＰＶ１６感染与宫颈癌临床分期和病理组织分级无关（Ｐ〉０．０５）,在ＨＰＶ１６感染的宫颈癌中,其Ｅ７蛋白阳民生表达率为８５．３０％（２９／３４     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16型E6基因突变分析

背景与目的：高危型人乳头状瘤病毒16和18(human papillomavirus type16 and 18,HPV16,HPV18)是宫颈癌主要病因之一,尤其以HPV16最为常见,其中HPV16E6是主要癌基因之一。在一些地区,特定的E6基因突变株是宫颈癌发生的危险因素。新疆南部维吾尔族聚居区足宫颈癌高发区,我们已在前期的研究中发现该地区HPV16E6基因发生突变。本研究旨在检测该突变在新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌组织中的分布规律,并探讨其与该地区宫颈癌高发的关系。方法：从35例中国新疆南部维吾尔族妇女宫颈癌活检标本中提取组织DNA作为模板,PCR扩增HPV16E6全长基因,PCR产物直接测序或克隆后测序,分析新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16E6基因的突变。结果：PCR检测结果表明宫颈癌组织中HPV16E6阳性率为82．86％(29／35);26例中E6分离片段的测序和序列分析表明,15例(57．69％)分离株E6基因与原型相同,另有11例(42．31％)E6基因突变,其中9例(34．62％)分离株发生了L83V突变,2例(7．69％)分离株发生rL83V／D63E突变。结论：中国新疆南部地区HPV16E6基囚发生变异,其原型和变异型在该地区维吾尔族宫颈癌患者巾的分布规律可能与该地区宫颈癌高发存在一定关系。     

HPV16E7 siRNA表达载体抑制宫颈癌SiHa细胞E7基因的研究

目的：研究HPV16E7siRNA表达载体对宫颈癌SiHa细胞E7基因的抑制作用。方法：利用脂质体将HPV16E7 siRNA表达载体psiRNA-1、psiRNA-2、psiRNA-3及空载体psiRNA转染SiHa细胞,以荧光定量RT-PCR和流式细胞仪检测不同时间点E7 mRNA和蛋白的变化。结果：载体psiRNA-1、psiRNA-2和psiRNA-3均能抑制SiHa细胞E7基因 mRNA和蛋白的表达,其中载体psiRNA-1的抑制作用最强。在抗性克隆形成后1周和4周,对E7mR-NA和蛋白抑制率分别为92.15%、84.30%和65.69%、59.11%。而空载体对E7mR-NA和蛋白的表达均无明显抑制作用。结论：HPV16E7 siRNA表达载体能较长期地抑制宫颈癌SiHa细胞E7基因的表达。     

新疆维吾尔族妇女宫颈癌组织HPV16型E6基因变异分析

目的:新疆维吾尔族妇女宫颈癌的发生主要与人乳头状瘤病毒16(HPV16)感染相关,特定的HPV16 E6突变株具有更高的致癌危险性.本研究通过检测维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16 E6基因突变情况,探讨其与维吾尔族妇女宫颈癌高发的关系.方法:从140例维吾尔族妇女宫颈癌石蜡包埋组织中提取DNA作为模板,PCR 扩增HPV16 E6 全长基因,PCR 产物直接测序,进行突变分析.结果:本组维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV16的阳性率是73.6%(103/140),91例E6基因测序及分析结果表明,维吾尔族妇女宫颈癌组织中存在HPV16 E6变异株,其中49例(53.8%)分离株发生L83V突变,4例(4.39%)发生D25E突变,2例(2.20%)发生D64E/L83V突变,36例(39.6%)与野生型相同.结论:新疆维吾尔族妇女宫颈癌患者HPV16 E6基因发生变异,主要以L83V突变为主,HPV16变异株在维吾尔族妇女宫颈癌患者中的分布可能与维吾尔族妇女宫颈癌高发存在一定关系.     

RNA干扰在宫颈癌HPV16E6/E7中的研究进展

RNA干扰(RNAi)是一种有效的基因沉默过程,宫颈癌的重要基因型HPV16的关键致癌基因是E6和E7,目前RNAi在HPV16 E6/E7中的基因沉默作用已取得一些突破性进展.在体外研究方面,正在进一步确定稳定干扰目的 基因的载体形式和筛选更好的干扰序列,在体内研究方面,已建立相应的动物模型,为RNAi的临床研究打下...     

HPV E6癌基因诱导宫颈癌发生机制研究进展

HPV E6和E7癌基因与宫颈癌密切相关,其中E6癌基因在宫颈癌的发生、发展过程中起重要作用.HPV-16 E6蛋白能诱导端粒酶的表达,增加角质形成细胞的端粒酶活性,提示端粒酶的活性在细胞永生化和恶变过程中起重要作用,端粒酶的激活是细胞转化的起始步骤.HPV E6癌基因增加细胞端粒酶活性的机制是激活了端粒酶催化亚基hTERT的转录活性.但HPV癌基因突变导致染色体改变、杂合子丢失、原癌基因的激活在宫颈致癌作用中同样起重要作用.针对E6癌基因诱导宫颈癌发生的分子生物学机制,综述近年来E6癌基因与宫颈癌关系方面的研究进展.     

HPV与宫颈癌

人乳头瘤病毒(HPV)的感染已被证实与宫颈癌的发生有密切关系.超过2/3的宫颈癌与HPV16或HPV18感染有关.HPV预防性疫苗研制的成功则是子宫颈癌预防研究的里程碑.     

RNA干涉宫颈癌细胞抑制HPV16 E6基因表达对FHIT基因表达的影响

目的:研究HPV16 E6基因被RNA干涉抑制后FHIT基因表达的变化,探讨两者在宫颈癌组织中的相关性。方法:合成针对HPV16 E6基因的特异性si RNA,脂质体介导转染宫颈癌CaSki细胞,RT-PCR测定转染前后HPV16E6、FHIT基因mRNA表达;Western blot和流式细胞仪检测转染前后HPV16E6、FHIT蛋白表达情况。结果:将HPV16 E6 si RNA转染CaSki细胞后48h,HPV16E6mRNA表达水平较转染前降低了80.3%,P<0.01;FHIT mRNA的表达水平较转染前升高了41.7%,P<0.01。转染前后HPV16E6蛋白表达水平分别为26.7±3.3和8.2±1.1,t=14.224,P=0.005;FHIT蛋白表达水平分别为73.5±5.6和109.9±5.1,t=22.018,P=0.002。结论:抑制HPV16 E6基因的表达可使宫颈癌组织中FHIT基因的表达增加。     

宫颈癌中高危型HPV E6与端粒酶的相关性

高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要病因,宫颈癌细胞中端粒酶的高活性与高危型HPV感染关系密切.E6是高危型HPV主要癌基因,可激活端粒酶,促使P53降解和失活,还可引起其他抑癌基因的异常、癌基因的活化等.高危型HPV E6激活端粒酶使细胞永生化是宫颈癌发生的关键步骤.     

HPV负荷量与子宫颈病变关系的研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）负荷量与子宫颈病变发生、发展的关系。方法选取229例子宫颈病变患者采用第二代杂交捕获法检测HPV负荷量,观察HPV负荷量和不同程度子宫颈病变的关系。结果 229例患者中慢性子宫颈炎57例,CIN111例（其中CINⅠ33例、CINⅡ18例、CINⅢ60例）,子宫颈癌61例。不同程度子宫颈病变HPV-DNA负荷量的差别有统计学意义,且子宫颈病变的严重程度随HPV-DNA负荷量增大而增加。结论 HPV负荷量与子宫颈癌及其前期病变存在明显相关性。     

Human papillomavirus 16E6 oncogene mutation in cervical cancer

Objective: Cervical cancer (CC) is the second most common type of cancer in women worldwide, after breast cancer. High-risk human papillomaviruses (HR-HPVs) are considered to be the major causes of cervical cancer. HPV16 is the most common type of HR-HPVs and HPV16 E6 gene is one of the major oncogenes. Specific mutations are considered as dangerous factors causing CC. This study was designed to find mutations of HPV16 E6 and the relationship between the mutations and the happening of CC.Methods: The tissue DNA was extracted from 15 biopsies of CC. Part of HPV16 E6 gene (nucleotide 201-523) was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from the CC tissue DNA. The PCR fragments were sequenced and analyzed.Results: The result of PCR showed that the positive rate of HPV16 E6 was 93.33% (14/15). After sequencing and analyzing, in the 13 out of 14 PCR fragments, 4 maintained prototype (30.77%), 8 had a same 350G mutation (61.54%), and 1 had a 249G mutation (7.69%).Conclusion: This study suggest that there is a high infection rate of HPV in cervical cancer and most of the HPV16 E6 gene has mutations. Those mutations may have an association with the development of cervical cancer.     

Human papillomavirus type 16 E6 variants and HLA class II alleles among Japanese women with cervical cancer

The enhanced oncogenicity of particular human papillomavirus type 16 (HPV16) E6 variants is population-dependent, implying the involvement of additional genetic cofactors. This study was designed to investigate the association between E6 variants and human leukocyte antigen (HLA) polymorphism within a Japanese population. Fifty-seven women with HPV16-positive cervical cancer were analyzed for E6 sequence variation and its relationship to HLA class II alleles. Compared with local controls (n = 138) and published controls (n = 916), DRB1*1501 and DQB1*0602 frequencies were significantly increased among patients with HPV16 E6 prototype (n = 11). Additionally, DRB1*1502 was positively associated with a particular E6 variant designated D25E (n = 25), although we could not find a significant association between HLA class II alleles and L83V variants (n = 16). Our observations suggest that a specific match between E6 variant proteins and HLA types may contribute to HPV16-related cervical carcinogenesis.     

Variants of the long control region and the E6 oncogene in European human papillomavirus type 16 isolates: implications for cervical disease

High-risk human papillomavirus types, especially type 16, are risk factors for cervical cancer. Preliminary studies suggest that HPV16 polymorphisms in the long control region or in the E6 gene may alter the oncogenic potential of the virus. This could partially explain why some lesions progress to cancer while others do not. A systematic study combining the long control region and E6 has not been undertaken. This prompted us to investigate the long control region and the E6 in northern European women infected with human papillomavirus 16. We identified the sequence variations of both regions and investigated the long control region promoter activity among various isolates. In addition, we correlated the distribution of long control region and E6 polymorphisms with disease status. We analyzed 45 samples from Swedish and Finnish women. The long control region and the E6 gene were sequenced after polymerase chain reaction long control region fragments of six European isolates covering the majority of polymorphisms in this region were ligated into the pALuc vector and used for luciferase assays. In European HPV16 isolates, polymorphisms in the long control region are more frequent than in the E6 gene. Nevertheless, the promoter function was slightly increased in only one of the tested European long control region variants. In addition, we found a specific European E6 variant, L83V, to be enriched in high-grade lesions and cancer rather than a specific European long control region variant. The difference in oncogenicity between European HPV16 genotypes is more probably due to an altered property of the corresponding E6 proteins rather than to an altered activity of the P97 promoter.     

人乳头状瘤病毒感染及病毒载量与宫颈病变的相关性研究

目的：研究高危型人乳头状瘤病毒感染及病毒载量与宫颈病变的关系。方法：对774例研究对象采用第二代杂交捕获试验（HC—Ⅱ）进行宫颈脱落细胞的HPV-DNA定量检测。分析不同程度宫颈病变的HPV感染情况,并根据HPV病毒载量将所有检测对象分为四组,阴性（RLU／CO〈1．0）、低载量（1．0≤RLU／CO〈10）、中载量（10≤RLU／CO〈100）、高载量（RLU／CO≥100）,采用非条件多项式logistic回归分析病毒载量与宫颈病变级别的关系。结果：在检测的774例研究对象中,对照组、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ和浸润性宫颈癌患者的HPV感染率分别为21．29％、82．35％、80．00％、90．16％和86．67％。对照组高危型HPV感染率明显低于CIN和浸润性宫颈癌患者,差异有统计学意义,P〈0．01;HPV阳性者患CIN的风险是阴性者的24．96倍（95％CI：13．20～47．18）,患浸润性宫颈癌的风险是HPV阴性者的24．03倍（95％CI：12．01～48．09）。在不同级别宫颈病变中,CINI组的低病毒载量患者占11．67％,高载量占41．18％,OR值为23．84（95％CI：5．96～95．33）,P〈0．001;而在CINⅢ组中62．30％的患者呈高病毒载量,OR值达64．70（95％CI：25．98～161．20）,P〈0．001。结论：高危型HPV感染与CIN和浸润性宫颈癌的发生密切相关;宫颈高危型HPV病毒载量是影响宫颈病变严重程度的危险因素。     

子宫颈鳞癌HPV16感染对错配修复基因表达的影响

目的:探讨子宫颈癌发病机制中HPV感染对错配修复(mismatchrepair,MMR)基因表达影响的意义。方法:77例子宫颈鳞癌标本采用免疫组织化学SP法检测HPV16、hMSH2与hMLH1的表达。并分析这些表达与临床病理参数的关系。结果:HPV感染与非感染组子宫颈癌hMLH1的阳性表达率分别为69.0%(29/42)和40.8%(12/28),rs=0.260,P=0.029;hMSH2的阳性表达率分别为64.2%(27/42)和46.4%(13/28),rs=0.177,P=0.143。HPV感染、hMLH1及hMSH2阳性表达率与分化程度、临床分期及淋巴结转移无显著相关。结论:HPV感染组细胞hMSH2与hMLH1蛋白表达上调的现象表明HPV16感染增加子宫颈上皮细胞DNA复制时的碱基错配。因此,这可能是HPV16的致癌机制之一。