生物素标记的核酸分子杂交

用生物素代替同位素标记探针技术、NaAc－NaOH溶液代替Tris－Nacl中和液、脱脂奶粉代替Denhardt溶液和小牛胸腺DNA进行分子杂交。结果表明：经改进后的核酸分子杂交方法具有简便、安全、稳定、成本低的优点。     

电泳印迹和分子杂交技术在肝内HBV DNA研究中的应用

应用DNA电泳转移、生物素探针Southern杂交及不同探针重复杂交等3项新技术研究肝炎肝癌的肝内HBV DNA分子状态。经过方法学比较以电泳印迹取代毛细渗吸法对65例肝炎肝癌病人的101份肝内组织DNA进行尼龙膜快速转移和HBV DNA杂交,结果检出HBV DNA分子状态里整合型15份、游离型31份、整合型合并游离型30份。其中12例乙型肝炎标本为经生物素探针杂交检测,结果全部检出游离型HBV DNA。还有3例乙型肝炎标本和2例其它肝炎标本为经重复杂交检测,即先用~(32)P探针杂交继去探针再用生物素探针杂交,结果乙型肝炎标本两次杂交HBV DNA都阳性,其它肝炎标本两次均阴性。阳性者表现为3.2kb和2.3kb电泳位置呈现杂交带,代表HBV之松弛环状和超螺旋状结构。由于两种探针各含不同序列,故结果可对待检基因进行初步序列分析。本实验表明,上述3项技术对临床医学研究有广泛的应用价值。     

生物素化HPV16DNA探针与人宫颈癌组织DNA分子杂交的研究

Biotin-labelled human papillomavirus (HPV) 16 type DNA probe was prepared by the techniques of molecular biology. And dot hybridization technique was used to detect the HPV 16 homologous sequences in the tissues DNA of human cervical carcinoma. The results indicated that 16 cases out of 28 of the human cervical carcinoma tissues were positive. The positive rate was 57%. The other 4 cases of normal uterine cervix tissues were negative. Only 1 in 4 chronic cervicitis tissues showed positive. The HPV 16 plasmid DNA, as the positive control group, showed strong positive, while lambda-phage DNA was negative. The results have shown that the genome of the HPV actually exists in the tissue of the cervical carcinoma and that there is a close relationship between the cervical carcinoma and HPV infection. This experiment adopted the Biotin-labelled HPV 16 DNA probe. And it may provide us with a quick and sensitive method for investigation of the infection of HPV and its role in the carcinogenesis of cervical carcinoma.     

应用核酸探针检测痢疾杆菌侵袭力的初步报告

采用菌落原位杂交法,用福氏5型痢疾杆菌大质粒上17Kb 基因片段,以32p 标记制备成探针,对80例痢疾志贺氏菌的侵袭力进行检测,结果带菌者菌株中侵袭力的阳性率92.8%,90.9%,病人菌株中袭力的阳性率侵P>0.05,两组菌的侵袭力差异无显著性。通过不同菌群侵袭力的分析,福氏痢疾杆菌侵袭力的阳性率似高于其他菌群,该探针特异、敏感、快速、经济,为硷测痢疾菌侵袭力的理想方法。     

钯卟啉探针与核酸相互作用的研究

目的:研究水溶性钯卟啉探针与核酸的相互作用。方法:采用室温磷光探针法研究阳离子探针Pd—TAPP和阴离子探针Pd—TSPP与小牛胸腺DNA(ctDNA)的相互作用。结果:Pd-FAPP探针结合于DNA分子的浅沟槽处,缔合常数为KPd-TAPP-DNA=4.37×105L/mol。结论:Pd—TAPP与DNA分子间具有较高的亲和力,而Pd—TSPP由于带有负电荷,所以与DNA的亲和能力远弱于Pd-TAPP。     

钩端螺旋体重组DNA探针对致病性黄疸出血群钩体DNA的杂交识别

作者从建立的黄疸出血群钩端螺旋体(下称钩体)DNA基因库中筛选出重组DNA克隆PLIps01(15kb)和PLIEc34(4kb)制备成~(32)P放射性探针。以该二探针对致病性黄疸出血群所属血清型的13个菌株钩体DNA进行Southern印迹分析,结果表明,该二DNA探什对黄疸出血群各株钩体DNA具有强烈的特异性结合,能识别出简洁的DNA带型,并能区分不同血清型以至菌株的DNA带型差别。作者认为,钩体DNA重组探什结合Southern印迹分析是一种灵敏而特异的检测分析方法,可作为诊断、鉴定和分析钩体的工具。     

生物素化HPV 16 DNA探针与人宫颈癌组织DNA分子杂交的研究

作者运用分子生物学方法,制备了生物素标记人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA探针,用斑点杂交检测宫颈癌组织DNA中HPV 16 DNA相关序列。在28例宫颈癌组织中,有16例呈HPV 16 DNA杂交阳性,阳性率为57％;4例正常宫颈组织呈阴性反应;4例宫颈慢性炎症中有1例呈阳性反应。实验阳性对照HPV 16质粒DNA呈杂交强阳性,以λ-噬菌体DNA及NIH/3T3小鼠成纤维细胞DNA为实验阴性对照,均呈杂交阴性。结果证明,HPV的基因组存在于宫颈癌组织中,提示HPV的感染与宫颈癌的发生有关。本实验采用生物素标记HPV 16 DNA探针,检测特异性强,方法简便,为开展宫颈癌病毒病因的普查及其研究,提供了一个快速敏感的方法。     

核酸原位分子杂交技术在病理研究中的应用

应用生物素标记酶促显色反应的核酸原位分子杂交技术，能较好地表达组织细胞中基因的结构特征，定位性好，敏感性强。该技术是肿瘤基因形态学诊断的有效方法。     

扩增DNA片段的影像技术研究

<正> PCR(聚合酶链式反应)扩增DNA片段技术,在分子病理学研究中得到较广泛的应用。但提取、纯化、扩增后的DNA片段,经聚丙烯酰胺凝胶电泳和溴化乙锭染色后,在紫外线检测仪下作直观检查。效果虽然较好,但紫外光对人体特别是眼角膜有一定的损害作用,人不能较长时间地处于紫外光的照射之下。经影像技术处理,使其如实地转化在感光胶上,既有利于作永久性资料保存、又减轻了紫外光对人的损害作用。过去我们用常规影像技术     

生物素标记核酸探针对间期细胞行原位杂交及临床应用

采用生物素标记ＤＮＡ探针ＰＹ３·４，对正常男、女及４７，ＸＹＹ患儿的间期细胞进行原位杂交。结果显示ＰＹ３·４有高度特异性，可作为Ｙ染色体的标记探针，该方法在产前诊断、白血病及实体瘤的研究以及骨髓移植等方面均有实用价值。     

人鼻咽癌DNA对Rat-Ⅰ细胞株的转化活性及其基因表达的研究

为了解EB病毒基因组阳性人鼻咽癌DNA在转染正常细胞后可能发生的生物学作用,作者将人鼻咽癌活检组织的DNA(EB病毒基因组阳性),用磷酸钙方法转染正常Rat-Ⅰ细胞,使其恶转;用软琼脂培养的转化细胞能贴壁生长,并形成克隆;转化细胞易与PHA发生凝集;克隆接种裸鼠形成纤维肉瘤;转化细胞和裸鼠肿瘤组织用抗C_3补体免疫荧光法检测EBNA呈阳性;染色体原位杂交显示在某些细胞中期染色体上有银粒出现。     

~(35)S标记探针在核酸分子杂交上的应用

以[α-(35)~S]脱氧腺苷三磷酸(dATP)进行缺口平移制备~(35)S-cDNA_(AFP)探针,试与人肝癌染色质DNA作点状杂交实验,得到阳性结果。~(35)S具有半衰期长,使用安全的优点。[α-~(35)S]dATP已在国内试制成功,容易得到,有推广用于核酸分子杂交实验的价值。     

鼻咽癌低氧放疗的前瞻性研究

探讨鼻咽癌低氧放疗的临床应用价值。方法 :1993年 7月～ 1995年 10收治的 12 0例鼻咽癌患者 ,根据临床期别区组设计 ,随机分为低氧放疗组和常规放疗组 ,均给予钴 - 6 0外照射 ,面颈联合野照射 34Gy后改面颈分野照射至鼻咽中平面剂量 70Gy ,低氧放疗组病例在放疗同时吸入 10 .5 %的低氧。结果 :两组近期疗效、长期生成率无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,而低氧放疗组严重口干反应、严重口腔粘膜反应明显低于常规放疗组 (P <0 .0 0 1) ;张口困难、放射性脑病的发生率低于常规放疗组 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :低氧放疗可减轻鼻咽癌患者放射治疗的副作用 ,降低并发症的发生率。低氧放疗能否降低鼻咽癌患者放射性脑病及严重张口困难等后遗症的发生率 ,尚难以推断。     

人鼻咽癌癌基因及其产物的研究

作者应用外源性DNA转染技术,以人鼻咽癌组DNA,在体外对NIH/3T3细胞进行转染实验。结果观察到在第1、2轮转染中,均获得明显转化灶。并以人Alu顺序为探针,经分子杂交证明1、2轮转化细胞DNA中含有人顺序。以转化细胞注入裸鼠皮下,能诱发形成纤维肉瘤。本实验表明人鼻咽癌DNA中存在具有转化活性的转化基因(癌基因),并已转移至细胞内,发生了明显的恶性转化。作者应用免疫组化技术,观察了Ha-ras基因产物p21蛋白质在人鼻咽癌中的表达。其结果表明,p21在人鼻咽癌中具有阳性表达,其阳性率为90.4％。     

核酸杂交法检测分娩期妇女血及新生儿尿中HCMVDNA

以地高辛标记人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ＤＮＡＪ序段为探针，用核酸杂交法检测南通地区７８３例分娩期妇女血标本，ＨＣＭＶ　ＤＮＡ阳性者６１８例，感染率为７８．９３％；检测６９１例出生后１周内新生儿尿标本，ＨＣＭＶＤＮＡ阳性者４５例，排毒率为６．５１％；其中３３５对母婴中ＨＣＭＶ　ＤＮＡ同时阳性者３９例，垂直传播率为１０．９９％。本文结果证明了ＨＣＭＶ感染的普遍性和严重性，垂直传播是新生儿先天性ＨＣＭＶ感染的重要途径。     

黄连及其复方对人鼻咽癌细胞杀伤动力学研究

报道黄连及其复方对人鼻咽癌细胞（ＨＮＥ１）的杀伤作用，黄连单用时作用最明显，半抑制浓度为１：７２９，具有浓度依赖性特点，与其它药配伍时，其作用稍减弱，半抑制浓度为１：２４９，兼浓度依赖性和时间依赖性两个特点。而去黄连的复方对ＨＮＥ１只有较弱的杀伤作用。半抑制浓度为１：２７，具有时间依赖性特点。     

肿节风提取物抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨肿节风提取物药物血清对体外培养的鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、TWO3、C666-1细胞增殖的影响, 探讨其作用机制.方法:将SD大鼠30只随机分为3组,实验组(肿节风)、阳性对照组(环磷酰胺)、阴性对照组(生理盐水),每天灌胃2次,间隔4 h,连续3 d,末次给药后1 h采血,分离血清,灭活、过滤制得含药血清.运用MTT法检测作用药物血清后细胞增殖的改变,并用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的改变,同时结合倒置显微镜,观察其诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用.结果:肿节风可抑制CNE1、CNE2、TWO3、C666-1细胞的增殖, 其作用具有时间和浓度依赖性;同时可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞阻滞于G1期.结论:体外实验表明,肿节风提取物具有抗鼻咽癌细胞增殖的作用,是一种具有应用前景的诱导肿瘤细胞凋亡的天然药物.     

鼻咽癌转化基因的 2.8kb EcoRI 片段在鼻咽癌中不存在点突变

用改进的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染技术对鼻咽癌活检组织进行筛查，以检测Ｔｘ基因中与转化有关的序列在鼻咽癌中是否存在突变。在被检测的１１例配对的鼻咽癌标本中均未检测到泳动速率的改变。提示在多数鼻咽癌中基因突变不是Ｔｘ基因的活化方式。